Tollip参与Src家族酪氨酸激酶Fyn在人食管鳞状细胞癌中负调控机制

目的 探讨人食管鳞状细胞癌中Tollip对Src家族酪氨酸激酶Fyn表达的负调控机制.方法 收集3例新鲜食管鳞状细胞癌组织(ESCC)和食管正常黏膜上皮组织(UNR),采用免疫印迹法分析Tollip蛋白表达水平的变化.同时转染人Tollip质粒DNA人TE1细胞株中观察其对Fyn表达的影响.结果　免疫印迹结果　显示食管鳞癌组织Tollip蛋白表达低于食管正常黏膜组织.转染Tollip质粒DNA可以降低人食管鳞状细胞癌TE1细胞中Fyn的表达.结论 Tollip可能是人食管鳞状细胞癌中Src家族酪氨酸激酶ryn的负调控因子,在食管鳞状细胞癌的发生发展过程中起重要作用.

Abstract：

Objective To determine the relationship between Src family tyrosine kinases Fyn expression and Toll-interacting protein ( Tollip ) in human esophageal squamous cell carcinoma ( ESCC ).Methods The Tollip expression was detected in 3 cases of ESCC and compared to the unremarkable epithelium by Western blotting. Tollip plasmid DNA ( 1 μg) was transfected into TE1 cells and the Fyn/Tollip expression was examined by Western blotting. Results The Tollip expression level was lower in ESCC group than in UNR group. Tollip decreased Fyn protein expression in TE1 cells. Conclusion Tollip may act as a negative regulator of Fyn in human ESCC, and play an important role in human ESCC progress.     

水通道蛋白4在食管鳞癌中的表达

目的 观察水通道蛋白4(AQP4)在食管鳞癌组织中的表达并探讨其在食管癌发病中的作用.方法 取食管鳞癌组织、癌旁正常鳞状上皮组织各16例,应用免疫组织化学,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测AQP4的表达及分布.结果 免疫组织化学显示,AQP4表达于正常食管黏膜鳞状上皮细胞,在食管鳞癌组中主要表达于肿瘤上皮细胞和癌巢中.RT-PCR法结果 显示,AQP4在癌旁正常组织和食管癌组织中的mRNA表达平均相对A值分别为0.45±0.12、0.70±0.23,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AQP4在正常食管黏膜鳞状上皮细胞以及食管鳞癌组中均有表达,而且在癌组织中表达增加;AQP4可能对人食管癌的发生、发展起促进作用.     

不同位点磷酸化Src酪氨酸激酶与食管鳞状细胞癌的关系

目的 探讨不同位点磷酸化Src酪氨酸激酶与食管鳞状细胞癌(ESCC)发生的关系.方法 收集30例食管鳞状细胞癌石蜡包埋组织块及3例新鲜食管鳞痛组织标本,培养人食管鳞癌TE1细胞株,分别采用免疫组织化学法、免疫印迹法和免疫荧光法分析食管鳞状细胞癌组织不同位点磷酸化Src酪氨酸激酶蛋白表达水平的变化.结果 免疫组织化学染色、免疫印迹和免疫荧光均显示食管鳞状细胞癌组织中Py416Src蛋白表达水平高于Py527Src,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 食管鳞状细胞癌组织中Py416Src蛋白高表达,Py527Src蛋白低表达,提示Src酪氨酸激酶不同位点磷酸化水平在食管鳞状细胞癌的发生发展过程中起重要作用.

Abstract：

Objective To determine the relationship between phospholation of Src tyrosine kinase at different sites and esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). Methods Thirty cases of ESCC paraffin-embedded tissue blocks and 3 cases of fresh ESCC tissue samples were collected, and human ESCC TE1 cells were cultured. The protein expression level of phosphorylation of Src tyrosine kinase at different sites was detected by using immunohistochemical staining, Western blotting and immunofluorescence. Results Py416Src protein expression level was higher than Py527Src in ESCC (P＜0.05). Conclusion Phosphorylation of Src tyrosine kinase at different sites plays a critical role in pathogenesis of ESCC.     

内皮细胞特异性分子在肾透明细胞癌组织中的表达及意义

目的观察不同临床分期肾透明细胞癌的内皮细胞特异性分子(ESM-1)的表达差异,以探讨ESM-1与肿瘤发生及恶性程度的相关性。方法收集肾透明细胞癌组织、正常肾组织以及癌旁组织标本,进行免疫印迹和免疫组化染色,并根据蛋白条带的灰度值和免疫组化结果进行定量评分,同时监测患者血清中ESM-1的表达水平。结果免疫印迹显示肾透明细胞癌标本中ESM-1表达灰度为2.12±0.23,免疫组化显示肾透明细胞癌中ESM-1阳性染色评分为2.1±0.94,相比癌旁组织组和正常肾组织组,差异均有统计学意义(P0.05);且ESM-1血清中表达量较正常组升高。结论检测ESM-1的表达有助于判断肾透明细胞癌的预后。     

STAT3在食管鳞状细胞癌中的表达和意义

目的研究STAT3蛋白表达与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系,探讨其在食管癌变中的可能作用。方法应用免疫组织化学S-P法检测60例食管鳞状细胞癌及其癌旁组织中STAT3蛋白的表达,结合临床资料进行分析。结果STAT3蛋白阳性反应主要定位于胞质。食管鳞状细胞癌组织中STAT3蛋白表达阳性率86.7%(平均灰度值为36.05±13.74)明显高于正常组织阳性率17.6%(平均灰度值为16.92±5.43)(P<0.05)。STAT3蛋白在低分化、中分化、高分化鳞癌组的阳性表达率分别是100%、95%、73.08%,平均灰度值分别是51.22±7.09、42.18±7.21、23.16±6.94,3组间差异有统计学意义(P<0.01)。肿瘤分化程度越高STAT3蛋白表达越低。有淋巴细胞转移的食管癌组织中STAT3表达的阳性率100%(平均灰度值45.36±10.36),明显高于无淋巴细胞转移的食管癌组织阳性率78.38%(平均灰度值30.26±12.41)(P<0.05)。结论STAT3蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的高表达可能与食管鳞癌的发生有关系。     

食管鳞状细胞癌组织中酪氨酸激酶受体B和脑源性神经生长因子蛋白及mRNA的表达及意义

目的 探讨酪氨酸激酶受体B( TrkB)和脑源性神经生长因子(BDNF)蛋白及mRNA在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学及原位杂交法检测59例ESCC、27例癌旁不典型增生组织及36例正常食管黏膜组织中TrkB和BDNF蛋白及mRNA的表达.结果 ESCC组织中TrkB蛋白及mRNA的阳性表达率分别为71.2％和64.4％,显著高于癌旁不典型增生组织(阳性率分别为48.1％和33.3％)及正常食管黏膜组织(阳性率均为0.0％),组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);此外,BDNF蛋白和mRNA在ESCC组织中的阳性表达率分别为76.3％和69.5％,也显著高于癌旁不典型增生组织(阳性率分别为55.6％和40.7％)及正常食管黏膜组织(阳性率均为0.0％),组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).TrkB和BDNF蛋白及mRNA的表达均与ESCC的分化程度、浸润深度和淋巴结转移密切相关(P＜0.05).进一步相关分析结果显示,TrkB mRNA和蛋白的表达均与BDNF mRNA和蛋白的表达呈正相关(P＜0.05).结论 TrkB和BDNF蛋白及mRNA表达与ESCC的发生、发展和转移密切相关.     

食管癌发生发展过程中COX-2蛋白表达的研究

目的研究环氧合酶-2(COX-2)蛋白在食管癌及癌前病变组织中的表达,探讨其在食管癌发生、发展过程中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测43例鳞状细胞癌及22例增生性病变(单纯增生8例,轻、中、重度不典型增生分别6、4、4例)和6例正常食管黏膜鳞状上皮的食管组织中COX-2蛋白的表达情况。结果正常食管黏膜上皮、单纯性增生和轻/中度不典型增生未发现COX-2蛋白表达;25%(1/4)重度不典型增生、74%(32/43)食管鳞状细胞癌中COX-2蛋白表达阳性。COX-2蛋白表达I-II期强阳性率为40%(4/10),III-IV期为73%(10/22);COX-2蛋白的表达与淋巴转移、浸润深度、肿物大小无关。结论 COX-2蛋白的表达与食管癌的发生发展关系密切,是食管癌发生发展中的一个重要指标。     

Srcasm负调控Src家族酪氨酸激酶Fyn在人食管鳞状细胞癌TE1细胞株中的表达

目的 观察人食管鳞状细胞癌TE1细胞株中Srcasm对Src家族酪氨酸激酶Fyn表达的影响.方法 分别转染0、0.25、0.5、1.0、2.0 μg人Srcasm质粒DNA入TE1细胞株中观察其对Fyn表达的影响.结果 转染Srcasm质粒DNA可以降低人食管鳞状细胞癌TE1细胞中Fyn的表达,且呈剂量依赖性.结论 人食管鳞状细胞癌中Srcasm可能是Src家族酪氨酸激酶Fyn的负调控因子,在食管鳞状细胞癌的发生发展过程中起重要作用.     

食管癌发生发展过程中p53蛋白表达的研究

目的研究p53蛋白在食管癌及癌前病变组织中的表达,探讨其在食管癌发生、发展过程中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测43例鳞状细胞癌及22例增生性病变(单纯性增生8例,轻、中、重度不典型增生分别为6例、4例、4例)和6例正常食管黏膜鳞状上皮的食管组织中p53蛋白的表达情况。结果在正常食管黏膜上皮,单纯性增生,轻、中度不典型增生中,未发现p53蛋白的表达;在75%(3/4)重度不典型增生、56%(24/43)食管鳞状细胞癌中p53蛋白表达阳性。p53蛋白表达在I～II期为18%(2/11),III～IV期为77%(10/13)。p53蛋白表达,与淋巴转移、浸润深度、肿物大小无关。结论 p53蛋白的表达与食管癌发生发展关系密切,是食管癌发生发展中的一个重要指标。可作为食管癌可疑病例定期随访的指标之一,以便发现早期食管癌,做到早诊断早治疗。     

膀胱移行细胞癌中Survivin与Ki-67、p53的表达及临床意义

目的 探讨膀胱移行细胞癌中Survivin、p53及Ki-67的表达与膀胱移行细胞癌临床病理特征的关系及其临床意义. 方法 用免疫组织化学方法 检测88例膀胱移行细胞癌与10例正常膀胱黏膜组织中Survivin、p53及Ki-67的表达,并用RT-PCR方法 验证其中30例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜组织中Survivin的表达. 结果 免疫组织化学方法 显示在膀胱移行细胞癌中Survivin、p53阳性表达率分别为63.6%(56/88)和45.5%(40/88),正常膀胱黏膜组织中均无表达,差异有统计学意义(P<0.01),且Survivin的表达与膀胱癌的临床分期密切相关(P<0.05).膀胱癌组织中Ki-67增殖指数(PI)为20.4士10.7,正常膀胱黏膜组织中为0.RT-PCR方法 显示在30例膀胱移行细胞癌中Survivin阳性表达率为100%,而正常膀胱黏膜组织中均无表达.结论 Survivin与膀胱癌的恶性程度有关,与p53及Ki-67共同参与了膀胱移行细胞癌的发生、发展及进程.     

细胞分裂周期蛋白42mRNA和蛋白在食管鳞癌中的表达及其病理生物学意义

目的 探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及其与临床病理参数间的关系.方法 应用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹和免疫组织化学方法,从mRNA和蛋白两个水平检测ESCC中Cdc42的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果 22对新鲜ESCC与癌旁正常组织中,Cdc42 mRNA在ESCC中的表达量(0.21±0.14)显著高于其在癌旁正常组织中(0.16±0.12)的表达(P＜0.05);Cdc42蛋白在ESCC中的表达量(0.83±0.35)高于其在癌旁正常组织中(0.75±0.24)的表达;在175对ESCC中,Cdc42蛋白的阳性表达率为73.7%(129/175),高于其在配对的癌旁正常组织中的表达62.9%(110/175,P＜0.05).此外,Cdc42的表达与ESCC患者的年龄、淋巴结转移及分化程度明显相关(P＜0.05).结论 Cdc42可能参与ESCC发生及转移的过程.

Abstract：

Objective To explore the expression of cell division cycle 42 (Cdc42) in human esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and investigate the association between Cdc42 and clinicopathological parameters. Methods The expression levels of Cdc42 mRNA and protein in ESCC and corresponding adjacent normal tissues were detected by real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction ( qRT-PCR), Western blotting and immunohistochemistry, respectively. The correlations between Cdc42 expression and clinicopathological parameters were analyzed. Results The expression of Cdc42 mRNA was significantly higher in ESCC tissues (0. 21 ± 0. 14 ) than that in corresponding controls (0. 16 ±0. 12) (t test,P ＜0. 05). The protein expression of Cdc42 was significantly higher in ESCC tissues (0. 83 ± 0. 35 ) than that in corresponding controls ( 0. 75 ± 0. 24). Immunohistochemistry revealed that 73.7% (129/175) of the ESCC samples had higher expression of Cdc42 protein than the corresponding controls[62. 9% (110/175) (χ2 test, P ＜ 0. 05 )]. Cdc42 expression level was correlated with age,lymphoid node metastasis and differentiation ( P all ＜ 0. 05 ), but not with the clinicopathological features,such as gender, ethnicity and macroscopical types (P ＞ 0. 05 ). Conclusion The higher expression of Cdc42 played a certain role in the carcinogenesis and metastasis of ESCC.     

食管鳞癌与细胞因子信号转导负调控因子3及其DNA甲基化的关系

目的 检测食管鳞癌(ESCC)组织中细胞因子信号转导负调控因子3(SOCS3)的DNA甲基化、mRNA及蛋白表达水平,探讨其在食管鳞癌发生、发展、浸润和转移中的作用.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)、Real-Time聚合酶链反应(PCR)和Western blot法分别检测43例食管鳞癌组织中SOCS3的DNA甲基化、mRNA和蛋白表达水平,并与相应的癌旁正常食管组织进行对照研究,分析其与临床病理参数的关系.结果 (1)食管鳞癌组织SOCS3 DNA甲基化的阳性率(79.1%)明显高于癌旁组织(14.0%,P＜0.01);(2)食管鳞癌组织SOCS3 mRNA相对表达强度比值(0.53±0.30)明显低于癌旁组织(1.15±0.44,P＜0.01),食管鳞癌组织中甲基化组的SOCS3 mRNA表达(0.45±0.24)显著低于非甲基化组(0.86±0.29,P＜0.05);(3)食管鳞癌组织SOCS3蛋白表达(1.66±0.22)显著低于癌旁组织(1.83±0.15,P＜0.01),食管鳞癌组织中甲基化组SOCS3蛋白表达(1.61±0.21)显著低于非甲基化组(1.87±0.15,P＜0.01);(4)在TNM分期中Ⅲ期组表达均低于Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.05),伴有淋巴结转移组表达也都低于无淋巴结转移组(P＜0.05),未发现其在性别、年龄、家族史、吸烟史中有明显差异(P＞0.05);(5)食管鳞癌组织中SOCS3mRNA表达及其蛋白表达水平与肿瘤分化级别呈正相关(0.301＜r＜1,P＜0.05),与TNM分期、淋巴结转移呈负相关(-1＜r＜-0.301,P＜0.05).结论 食管鳞癌组织中SOCS3 DNA甲基化阳性率高,导致SOCS3基因表达下调,与食管鳞癌的分化、浸润和转移密切相关.     

CD105和细胞周期蛋白D1协同表达与食管鳞癌淋巴结转移及预后的关系

目的 探讨食管鳞癌中CD105和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的协同表达与淋巴结转移和预后的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测南通市第一人民医院收治的80例食管鳞癌患者食管鳞癌组织中CD105和cyclin D1的表达,分析两者协同表达与食管鳞癌淋巴结转移及预后的关系.选取80例正常食管组织作对照.采用方差分析或t检验、x2检验、Pearson相关分析,生存分析采用Kaplan-Meier法,CD105的表达用微血管密度(MVD)值以-x±s表示.结果 食管鳞癌组织和正常食管组织CD105表达分别为36±8和11±3;Cyclin D1阳性表达率分别为61%(49/80)和23%(18/80),两者比较,差异有统计学意义(t=25.129,x2=4.972,P<0.05).按照食管鳞癌中CD105标记的MVD均值36为界,分为LCD105(MVD≤36)和HCD105(MVD＞36),其中LCD 44例,HCD 36例.LCD105淋巴结转移9例,HCD淋巴结转移26例.Cyclin D1阳性表达者有淋巴结转移28例,阴性表达者淋巴结转移7例.经Pearson列联相关分析显示CD105高表达、cyclin D1阳性表达与淋巴结转移有关(x2=21.562,9.217,P<0.05).HCD105+cyclin D1阳性28例,生存时间为(31±6)个月;LCD105+cyclin D1阳性21例,生存时间为(47±7)个月;HCD105+cyclin D1阴性8例,生存时间为(51±9)个月;LCD105+cyclin D1阴性23例,生存时间为(61±5)个月,4者比较,差异有统计学意义(F=11.76,P<0.05).结论 CD105和cyclin D1两者协同表达可作为判断食管鳞癌预后的指标.     

STAT3及其磷酸化在食管鳞癌组织中的表达及其意义

目的 检测食管鳞癌组织中信号转导子和转录激活子3( STAT3)在mRNA、蛋白质和蛋白质磷酸化3种水平的表达,探讨其在食管鳞癌发生、发展、浸润、转移中的作用。方法 检测43例食管鳞癌组织中的STAT3 mRNA、STAT3和磷酸化STAT3( pSTAT3)的表达,并与相应癌旁正常食管组织作对照研究,分析STAT3 mRNA、STAT3和pSTAT3的表达与临床病理参数的关系。结果 43例实验样本中(1)食管鳞癌组织中STAT3 mRNA相对表达强度比值(1.43±0.59)较癌旁组织的比值(0.98±0.47)明显增高(P＜0.05);(2)食管鳞癌组织中STAT3、pSTAT3表达(2.16±0.39、1.40±0.15)也都显著高于癌旁组织(1.87±0.29、1.25±0.13,P＜0.05);(3)食管鳞癌组织中STAT3mRNA、STAT3和pSTAT3在肿瘤不同分化级别中表达差异有统计学意义,分化级别越低,表达水平越高(P＜0.05),并与肿瘤分化级别呈负相关(-1 ＜r＜-0.301,P＜0.05);它们在TNM分期中Ⅲ期组的表达均高于Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.05),伴有淋巴结转移组表达也都高于无淋巴结转移组(P＜0.05),并与两者呈正相关(两者均为0.301 ＜r＜1,P＜0.05);但未发现它们在性别、年龄、家族史、吸烟史中差异有统计学意义(P＞0.05)。结论 食管鳞癌组织中STAT3磷酸化异常激活后,导致STAT3mRNA、STAT3和pSTAT3的高表达,与食管鳞癌的分化、浸润、转移相关。     

PTEN和p53在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨抑癌基因PTEN、p53在食管鳞癌中的表达及意义。方法应用免疫组化S-P法检测食管鳞癌组织、癌旁正常食管组织中PTEN和p53的蛋白表达情况,分析其在食管鳞癌发生发展过程中的作用以及两者之间的作用关系。结果PTEN、p53在食管鳞癌组织中的阳性表达率分别是53.33%(32/60)、61.67%(37/60),对照组阳性表达率分别是91.67%(55/60)、3.33%(2/60)。PTEN阳性表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移、浸润深度、TNM分期有关(P<0.05),与年龄、性别无关(P>0.05)。p53阳性表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移、浸润深度有关(P<0.05),与TNM分期、年龄、性别无关(P>0.05)。PTEN与p53在食管鳞癌中的表达呈负相关关系(P<0.05)。结论PTEN低表达p、53高表达在食管鳞癌的发生发展中起重要的作用,二者相互作用,诱导食管鳞癌的发生发展。联合检测PTEN、p53对食管鳞癌的诊断、治疗有指导意义。     

WWOX表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞;采用荧光定量逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达;流式细胞仪(FCM)法检测转染前后各细胞凋亡率的变化;JC-l染色法检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化;荧光定量RT-PCR和Western blot法检测胆管癌细胞bcl-2表达的变化;将未转染和转染空质粒的细胞作为对照组接种到裸鼠皮下以检测荷瘤,TUNEL方法原位检测移植瘤的凋亡.结果 建立了稳定表达WWOX基因的QBC939/WWOX细胞株,mRNA及蛋白表达明显增加.FCM显示QBC939/WWOX组的细胞凋亡率明显增高[(1.24±0.35)％比(1.73±0.48)％比(21.40±2.35)％,P＜O.01],JC-l显示转染组的线粒体膜电位下降[(4.27±0.64)％比(4.96±0.52)％比(28.60±3.94)％,P＜O.01],bcl-2 mRNA及蛋白的表达均显著降低(P＜0.05).转染组的皮下肿瘤较对照组生长速度明显减慢(P＜0.05),TUNEL实验证实转染组的皮下肿瘤凋亡指数为(13.6±1.5)％,较对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.O1).结论 WWOX基因能促进胆管癌细胞的凋亡,其机制可能与下调bcl-2的表达,激活线粒体凋亡通路有关.