下咽癌FADU细胞系中CD133阳性细胞的侵袭能力

目的研究下咽癌人咽鳞癌细胞(FADU)细胞系中CD133阳性细胞侵袭能力。方法用免疫磁珠分选技术,分选CD133阳性细胞及阴性细胞,Transwell小室方法研究阳性、阴性二个细胞亚群的体外侵袭能力。结果阳性、阴性细胞在Transwell小室侵袭实验中穿过人工基底膜的数量分别为54.0±2.3,17.0±1.1,其差异有统计学意义。结论下咽癌FADU细胞系中,CD133阳性细胞具有更强的侵袭能力。     

整合素αv亚基在喉和下咽鳞状细胞癌中表达及其与肿瘤血管发生的相关性

目的探讨整合素αv亚基在喉和下咽鳞状细胞癌（简称鳞癌）组织中的表达及其临床意义，以及整合素αv亚基表达与肿瘤血管发生的相关性。方法设计制作喉和下咽鳞状细胞癌组织芯片，应用免疫组化技术在组织芯片上检测整合素αv亚基和CD105的表达，根据CD105表达计算肿瘤新生血管密度，分析整合素αv亚基表达与喉和下咽鳞癌侵袭转移的关系，以及整合素αv亚基表达与肿瘤新生血管密度的相关性。结果喉和下咽原发鳞癌组织中整合素αv亚基阳性表达率为68．0％（51／75），明显高于癌旁正常组织（10．3％，3／29，Х^2=28．68，P〈0．001）；淋巴转移癌中整合素αv亚基表达率达100．0％（20／20），明显高于原发癌（Х^2=12．69，P〈0．05）和癌旁正常组织（Х^2=38．77，P〈0．001）；有淋巴转移组表达率明显高于无淋巴转移组（Х^2=10．87，P〈0．001）；整合素αv亚基的表达与肿瘤新生血管密度有明显相关性，阳性表达组的肿瘤微血管密度明显高于弱阳性组（q=3．31，P〈0．05）和阴性组（q=6．61，P〈0．001）；整合素αv亚基的表达率按照肿瘤的原发部位、分化程度、浸润范围以及患者的年龄、性别分组，差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论整合素αv亚基的表达与喉和下咽鳞癌的淋巴转移关系密切，其过量表达可能通过诱发微血管形成而导致肿瘤发生侵袭和转移，整合素αv亚基有可能成为临床预测喉癌和下咽癌淋巴转移趋势的新型标记物。     

喉癌CD133+侧群细胞的分离及体内致瘤性分析

目的 探索能够有效富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法.方法 流式细胞仪辅助下联合应用CD133标记及侧群(side population,SP)细胞分选技术检测及分选喉癌Hep-2细胞系中的CD133+ SP及CD133 - SP细胞,将分选所得两亚群细胞以相同的数量级注入非肥胖糖尿病型/重症联合免疫缺陷( NOD/SCID)小鼠右侧腋窝皮下,比较两亚群细胞致瘤性差异,并对两亚群细胞进行细胞周期检测分析.结果 CD133+ SP及CD133 - SP细胞在喉癌Hep-2细胞系中各占(0.30±0.12)％及(17.52±1.59)％.CD133+SP在16只NOD/SCID小鼠中的15只腋窝皮下成瘤,CD133- SP细胞仅在16只NOD/SCID小鼠中的7只腋窝皮下成瘤,差异有统计学意义(Fisher精切概率法,P＜0.05).CD133+ SP细胞所成瘤体的重量平均((-x)±s,下同)为(0.36±0.15)g,而CD133 - SP细胞所成瘤体重量平均为(0.08 ±0.04)g,差异有统计学意义(t=4.64,P＜0.01).细胞周期检测发现,CD133+ SP及CD133 - SP细胞具有相似的细胞周期分布.结论 CD133+ SP比CD133 - SP具备更强的免疫缺陷小鼠体内致瘤能力;SP细胞分选法与CD133标记相结合是一种更有效的富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法.     

喉癌干细胞在放化疗抵抗中的作用机制

目的：探讨喉癌干细胞的分选方法,分析顺铂、放射线联合应用对喉癌肿瘤干细胞的杀伤效应及机制。方法：应用流式细胞仪荧光活化细胞分选技术检测并分选出喉癌Hep-2细胞系中的CD133＋细胞和CD133-细胞,并检测CD133＋细胞亚群的干细胞特性;采用CCK-8试剂盒分别检测顺铂、放射线对两组细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同干预方案对2组细胞凋亡率及细胞周期分布情况的影响。结果：CD133＋细胞在喉癌Hep-2细胞系中占（2．43±0．77）％,在细胞增殖、分化及体内成瘤试验中CD133＋细胞均表现出肿瘤干细胞特性;不同浓度剂量的顺铂、放射线对Hep-2细胞均有抑制作用,并在一定浓度范围内呈剂量依赖性;顺铂、放射线单独或联合应用时,CD133-细胞凋亡率显著高于CD133＋细胞（P〈0．01）,并产生G0／G1期阻滞。结论：CD133＋细胞较CD133-细胞更具有明显的肿瘤干细胞特性,对放化疗具有明显的抵抗作用,对凋亡诱导作用不敏感和细胞周期改变为其机制之一。     

下咽癌FADU细胞系中CD133阳性细胞侵的袭能力

目的 研究下咽癌人咽鳞癌细胞 (FADU)细胞系中CD133阳性细胞侵袭能力。方法 用免疫磁珠分选技术,分选CD133阳性细胞及阴性细胞,Transwell小室方法研究阳性、阴性二个细胞亚群的体外侵袭能力。结果 阳性、阴性细胞在Transwell小室侵袭实验中穿过人工基底膜的数量分别为54.0±2.3,17.0±1.1,其差异有统计学意义。结论 下咽癌FADU细胞系中,CD133阳性细胞具有更强的侵袭能力。     

CD44基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建CD44基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体并在下咽癌FaDu细胞株上鉴定其沉默效率,为研究目的基因沉默后下咽癌肿瘤细胞致瘤性的改变提供稳定可靠的载体。方法针对目的基因CD44mRNA的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计、合成4个CD44基因特异性小分子干扰iRNA（small interference RNA,siRNA）靶点,将其合成短发卡hRNA（short hairpin RNA,shRNA）并退火成双链DNA,与慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获取正确克隆。将筛选出的最有效重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其感染下咽癌FaDu细胞株细胞,采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率。结果对LV-CD44-shRNA载体进行双酶切鉴定,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入序列正确,CD44基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度为8E＋8TU/ml。RNA干扰下咽癌FaDu细胞CD44基因后,CD44 mRNA水平显著下降,干扰效率大于70%。结论成功构建了CD44基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在细胞水平有效沉默靶基因,为CD44基因沉默后下咽癌肿瘤细胞生物学改变的研究打下了较坚实的基础。     

下咽鳞状细胞癌中FHIT基因异常表达的研究

目的：分析下咽鳞状细胞癌中脆性组氨酸三联体FHIT基因转录本的表达，探讨FHIT基因与下咽鳞状细胞癌生物学行为的相关性。方法：应用nested RT-PCR及DNA测序技术检测24例下咽鳞状细胞癌组织及对应的正常组织标本中FHIT基因的表达情况。结果：24例正常配对下咽组织中23例有FHIT基因完整表达，1例未见任何转录本，9例（37．5％）下咽癌标本中检测出FHIT基因mRNA转录本的异常表达。高分化鳞状细胞癌FHIT基因转录本异常率为28．6％（2／7），中分化鳞状细胞癌为50．0％（4／8），低分化鳞状细胞癌为33．3％（3／9），各个病理分级之间的差异无统计学意义（r=-0．0198，P〉0．05）；无淋巴结转移下咽癌FHIT基因转录本异常率为33．3％（4／12），伴淋巴结转移癌组41．7％（5／12），差异无统计学意义（P〈0．01）。2例原发性下咽癌经测序发现，分别缺失exon8，exon7～9，所有缺失的起始处均为外显子之间的连接部位。结论：位于3P14．2的FHIT基因在下咽鳞状细胞癌中存在较高的缺失率，提示FHIT基因为下咽鳞状细胞癌的候选抑制基因，在下咽癌的发生、演化和进展中起着重要作用。     

喉癌下咽癌患者一级亲属染色体对致突变物的敏感性观察

为探讨遗传因素与喉癌下咽癌的关系，检测了几组不同人群淋巴细胞染色体对致突变物诱发畸变的敏感性，结果：喉癌组、下咽癌组及对照组每细胞染色单体断裂率（ｂ／ｃ值）分别为０．６１±０．２７，０．６６±０．３１和０．２８±０．１２。喉癌和下咽癌的一级亲属组（亲属组）的ｂ／ｃ值为０．４５±０．２６。把健康一级亲属的喉癌、下咽癌患者从喉癌组和下咽癌组中抽出另列为患者组，其ｂ／ｃ值为０．５９±０．２９。亲属组与患者组比较ｂ／ｃ值差别无显著性（Ｐ＞０．０５），但明显高于健康对照组（Ｐ＜０．００１），明显低于喉癌组和下咽癌组（Ｐ＜０．０１）。结果显示喉癌和下咽癌患者及其健康一级亲属对致突变物敏感性均高于健康人，因此喉癌下咽癌患者的一级亲属应列为患癌高风险人群，注意预防癌肿的发生。     

64例下咽癌病人临床疗效的回顾分析

目的：探讨下咽癌外科切除与修复手术的治疗效果。方法：分析1989年1月－1995年9月64例下咽癌切除患者的手术方法,并发症,生存率等,其中保留喉功能的下咽癌切除患者26例,未保留喉功能的下咽癌切除患者38例,结果：64例下咽癌患者手术后全部恢复了吞咽功能,并发症发生率40．6％（26／64）,以咽瘘最常见。26例保留喉功能的下咽癌切除术后拔管率53．8％（14／26）,3年和5年生存率分别为65．4％（17／26）和50％（13／26）,38例喉全切除下咽癌患者3年和5年生存率分别为52．6％（20／38）和44．7％（17／38）,保留喉功能和未保留喉功能两者3,5年生存率比较没有显著差异（P＞0．05）,结论：保留喉功能下咽癌手术适用T1,T2期的肿瘤及经过仔细选择部分T3期肿瘤患者,不影响患者的长期生存,同时可有效的提高患者的生存质量。     

CD133与喉癌肿瘤干细胞的实验研究

目的探讨CD133在人喉癌细胞系Hep-2中的表达，观察纯化的CD133阳性肿瘤细胞、CD133阴性肿瘤细胞及未分选Hep-2细胞在重症联合免疫缺陷小鼠中的成瘤性，筛选Hep-2细胞系肿瘤干细胞的表型。方法流式细胞仪检测CD133在Hep-2细胞系中的表达，免疫磁珠分选技术纯化CD133阳性肿瘤细胞，分选所得各细胞亚群细胞以及未分选细胞以一定的数量级注人重症联合免疫缺陷小鼠腹部皮下，比较其成瘤差异性。分选后的细胞进行了细胞周期的分析和HE染色观察生长形态，以排除成瘤差异由细胞周期分布不同及异源细胞引起。结果流式细胞仪示CD133在Hep-2细胞系中呈微量恒定表达，表达概率（3．15±0．83）％。免疫磁珠富集的CD133阳性肿瘤细胞并不处于细胞周期生长旺盛时相或优势分裂时相，而是与分选前周期分布相似且均匀的一类细胞；HE染色示细胞形态亦符合恶性肿瘤细胞的病理生长特性。体外成瘤试验显示16／20个CD133阳性细胞注射部位、7／20个CD133阴性细胞注射部位、10／20个未分选细胞注射部位可见肿瘤生长，统计学分析表明CD133阳性肿瘤细胞较CD133阴性细胞（χ^2=8．286，P=0．004）、未分选细胞（X2=3．956，P=0．047）在重症联合免疫缺陷小鼠体内具有很强的成瘤性。结论喉癌Hep-2细胞系中，CD133阳性癌细胞具有强的体内增殖能力，CD133为喉癌肿瘤干细胞的标志之一。     

紫杉醇诱导喉咽癌耐药细胞株的生物学特性

目的 研究人喉咽癌细胞株FaDu与其耐药株FaDu/T在生物学特性方面的异同及内在联系.方法 以喉咽癌FaDu细胞为亲本,通过紫杉醇(Taxol)递增法筛选出其耐药细胞株FaDu/T.MTT法检测其耐药性,流式细胞术检测其周期,吖啶橙和Hoechest 33342/PI染色法检测细胞凋亡情况;RT-PCR和Wester...     

螨变应原特异性免疫治疗1年后免疫学变化

目的探讨标准化尘螨变应原疫苗进行集群免疫治疗过程中的免疫学机制。方法将60例螨过敏变应性鼻炎（AR）患者分为集群免疫治疗组（n=30）和药物治疗组（n=30）。检测基线和治疗1年后受试者血清中总IgE、螨特异性IgE、特异性IgG4水平,通过流式细胞术检测外周血单核细胞中Th1、Th2、天然调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋ T细胞）和I型调节性T细胞（Tr1细胞,CD4^＋IL-10^＋IL-4^-T细胞）在CD4^＋T细胞中百分比。结果经过1年治疗后,总IgE和螨特异性IgE水平未见明显改变,但免疫治疗组患者血清中螨特异性IgG4水平明显升高（P〈0．0001）。Th1、Th2型细胞和天然调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞）占CD4^＋T细胞的百分比在治疗前后均无明显变化（P=ns）,而Tr1细胞在免疫治疗1年后明显增高（P〈0．001）。结论特异性IgG4和Tr1细胞增高可作为产生免疫耐受的免疫学指标。     

D型细胞周期蛋白在喉咽癌中的表达及临床意义

目的 探讨D型细胞周期蛋白(Cyclin D)与喉咽癌临床生物学行为之间的关系.方法 取喉咽鳞状细胞癌组织标本56例,正常喉黏膜14例,应用免疫组化方法检测Cyclin D在喉咽癌组织和正常黏膜中的表达,RT-PCR检测其mRNA表达.结果 CyclinD1在喉咽癌组织中的阳性表达率78.57％,显著高于正常黏膜,与T...     

补气固表制剂对小鼠CD4^＋CD25^＋Treg的增殖作用体外实验研究术

目的观察补气固表中药制剂对小鼠胸腺CD4^＋CD25^＋Tregs增殖活性的促进作用。方法取小鼠胸腺，分离种植细胞，体外培养，以不同浓度的补气固表中药制剂进行处理后，进行CD4^＋CD25^＋Treg抗体双标记，流式细胞仪检测Tregs增殖活性，比较不同组别的增值活性差异。结果检测结果显示，应用不同浓度补气固表中药制剂干预处理后，对CD4^＋CD25^＋Treg增值活性均有明显的促进作用（P〈0．01），尤以中浓度组的效应更为显著（P〈0．01）。结论体外实验证实，补气固表中药制剂对小鼠胸腺CD4^＋CD25^＋Tregs的增殖活性有刺激作用，为从调控Tregs增值活性角度治疗变态反应性疾病提供了实验依据。     

IL-32在慢性鼻窦炎组织中的表达及机理研究

目的探讨白介素-32（interleukin-32,IL-32）在慢性鼻窦炎组织中的表达及其致病机理。方法收集40例慢性鼻窦炎患者,同期选取20例行鼻部手术患者的正常组织作为对照者,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测两组鼻组织中IL-32蛋白;采取即用型EnVisionTMSuper/HRP检测试剂盒检测两组鼻黏膜组织中CD3＋和CD68＋表达。结果慢性鼻窦炎鼻黏膜组织中IL-32表达高于对照组（P〈0.01）,慢性鼻窦炎鼻黏膜组织中CD3＋细胞计数（55.36±23.53）个/mm2显著高于正常对照组（28.27±11.43）个/mm2（P〈0.01）;慢性鼻窦炎鼻黏膜组织中CD68＋细胞计数（7.65±2.27）个/mm2高于对照组（5.98±2.10）个/mm2（t=2.741,P〈0.01）。且慢性鼻窦炎鼻黏膜组织中IL-32与CD3＋和CD68＋表达呈正相关（P〈0.05）。结论 IL-32可能通过招募炎症细胞,参与慢性鼻窦炎的发病。     

整合素β1在下咽鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的研究下咽鳞状细胞癌中整合素β1（Integrinβ1）表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在下咽鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组化PV-9000二步法,检测50例下咽鳞状细胞癌及20例癌旁黏膜组织中的Integrinβ1表达水平,应用Image-ProPlus图像分析软件测定免疫组化图像的平均光密度（mean optical density,MOD）。结果 Integrinβ1蛋白在下咽鳞状细胞癌及癌旁黏膜组织中的阳性表达率分别为78.00%和35.00%,两者比较差异具有统计学意义（P=0.001）,两组MOD值差异具有统计学意义（P〈0.05）;Integrinβ1的表达与不同临床分期、组织学分级和是否伴淋巴转移相关（P〈0.05）;Integrinβ1与年龄、性别、吸烟史和原发部位的下咽鳞癌组别间的表达无关（P〉0.05）。结论 Integrinβ1在下咽鳞状细胞癌组织中高表达可能介导了癌组织黏附和浸润,检测Integrinβ1可能对评估下咽鳞癌的生物学特性和临床特点有一定意义。     

鼻一鼻窦恶性肿瘤患者T细胞亚群的检测

目的：检测鼻-鼻窦恶性肿瘤Th1/Th2水平的变化,探讨T淋巴细胞亚群功能紊乱与鼻-鼻窦恶性肿瘤的关系。方法取鼻-鼻窦恶性肿瘤80例,以80例鼻中隔偏曲患者作为对照组,用流式细胞仪测定恶性组与对照组的外周血单个核细胞（PBMC）,经佛波酯PMA诱导培养后测定Th1细胞内IFN-γ和Th2细胞内IL-4的水平。结果恶性肿瘤组的CD3＋CD8-IL-4＋细胞高于对照组（P〈0.05）,而CD3＋CD8-IFN-γ＋细胞水平低于对照组（P〈0.05）,且Th1/Th2比值降低（P〈0.05）。结论外周血处于Th2优势分化状态,细胞免疫功能不能有效地激活,从而不利于机体组织以细胞免疫为主的抗肿瘤免疫反应,使鼻-鼻窦恶性肿瘤细胞得以生存发展。     

缺氧诱导因子-1a反义寡核苷酸对喉鳞癌荷瘤裸鼠化疗的增敏作用

目的 探讨应用缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸对荷瘤裸鼠化疗(顺铂)的增敏作用及可能的途径.方法 将肿瘤最大直径长至8～10 mm的裸鼠,选择20只随机分为四组:A组(正义+化疗),B组(反义+化疗),C组(化疗),D组(空白对照),每次注射反义寡核苷酸100μg/只(按脂质体:AS-ODN=1∶1进行包...     

常年性持续性变应性鼻炎患者外周血单个核细胞CD45RA及CD45RO表达

目的 探讨常年性持续性变应性鼻炎(AR)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中CD45RA及CD45RO的表达及其与AR发病的关系.方法 应用荧光抗体标记、流式细胞仪检测30例AR患者PBMC中CD45RA及CD45RO的表达.结果 与对照组比较,①AR...