清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1 PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达变化。结果:病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升为3倍、TGF-β1下降为1/3,清肺口服液含药血清组可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5、升高TGF-β1至RSV感染细胞的2倍。利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1,PDGF-BB表达有一定的影响。结论:(1)RSV感染可使HELF细胞PDGF-BBmRNA表达水平显著升高,TGF-β1mRNA表达水平显著下降;(2)清肺口服液可调节TGF-β1、PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA基因表达的影响

目的 探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法测定各组HELF TGF-β1表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组TGF-β1下降至1/3,清肺口服液含药血清组可显著升高TGF-β1水平至RSV感染细胞的2倍.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞TGF-β1 mRNA表达水平显著下降;清肺口服液可调节TGF-β1 mRNA表达,减缓RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的 观察清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升3倍,清肺口服液含药血清可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对PDGF-BB表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞PDGF-BB mRNA表达水平显著升高;清肺口服液可调节PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的观察清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1（TGF—β1）、血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）mRNA基因表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测TGF—β1、PDGF—BB mRNA基因的表达,进行各组间比较。结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达均明显升高（P〈0．01）,含药血清组对3I、7b型攻击后的TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达均有显著降低作用（P〈0．01）。结论清肺口服液可下调TGF—β1、PDGF—BB mRNA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA基因表达的影响

目的采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响.方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA基因表达,并进行比较.结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P＜0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P＜0.01).结论腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR-NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一.     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1和血小板衍生生长因子-BB蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGF-β1、PDGF—BB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGF-β1、PDGF-BB含量均明显增多(P<0．01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGF-β1、PDGF—BB含量显著降低(P<0．01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF—BB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGF-β1、PDGF—BB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强（P <0．01）,含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达（P<0．01）。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA表达变化。结果:病毒感染后ICAM-1、IL-8以GAPDH为内参的△Ct值明显小于正常细胞组及生理盐水血清对照组,而清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清作用后△Ct值显著增大。结论:(1)RSV病毒作用后ICAM-1及IL-8 mRNA表达水平显著升高;(2)清肺口服液可以降低ICAM-1、IL-8的表达,缓解RSV感染后细胞的异常变化,起到间接预防RSV肺炎的作用。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞肿瘤坏死因子-α转化生长因子-β_1蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)、转化生长因子(TGF-β1)蛋白表达的影响。方法:用呼吸道合胞病毒Long株感染人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,并设空白血清、和正常细胞做对照,24h后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液TNF-α、TGF-β1蛋白水平。结果:清肺口服液含药血清组两种细胞因子明显升高(P0.01)。结论:清肺口服液含药血清可以在病毒感染早期升高TNF-α、TGF-β1蛋白表达,从而增加病毒清除,抑制过度的免疫反应,这可能是该药治疗呼吸道合胞病毒感染的机理之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1和血小板衍生生长因子-BB蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGFβ1、PDGFBB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGFβ1、PDGFBB含量均明显增多(P<0.01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGFβ1、PDGFBB含量显著降低(P<0.01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGFβ1、PDGFBB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGFβ1、PDGFBB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

补中益气汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞中拓扑异构酶Ⅱα表达的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人肺腺癌A549细胞上皮间质转化过程中耐药标志物TopoⅡα表达的影响。方法:制备最佳浓度补中益气汤含药血清作用于TGF-β1诱导的A549细胞,实验分组为空白血清组、最佳浓度补中益气汤含药血清+TGF-β1组、以及空白血清+TGF-β1组。采用免疫组化、western-blot和realtime PCR法分别检测TopoⅡα在蛋白和基因水平表达的变化。结果:最佳浓度的补中益气汤含药血清能使上皮间质化的A549细胞中TopoⅡα蛋白表达增加,mRNA表达水平升高。结论:补中益气汤含药血清能增加TGF-β1介导的A549细胞上皮间质化过程中TopoⅡα表达。     

清肺口服液对腺病毒3I、7b感染人胚肺成纤维细胞bcl-2mRNA表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞(HPF)bcl-2mRNA表达的影响。方法:细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3I、7b型腺病毒分别攻击,并分别加入相应药物至各组细胞中,用原位杂交方法比较各组细胞bcl-2mRNA的表达。结果:病毒对照组较正常细胞组细胞中bcl-2mRNA表达降低(P<0.01),含药血清组比病毒对照组细胞bcl-2mRNA表达明显上升(P<0.01)。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞bcl-2mRNA表达降低。清肺口服液可增强bcl-2mRNA表达,从而抑制由腺病毒引发的细胞凋亡。这可能是其抗病毒作用机制之一。     

补中益气汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞中Twistl表达的影响

目的:观察补中益气汤含药血清对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人肺腺癌A549细胞上皮间质转化过程中Twistl表达的影响。方法:制备最佳浓度补中益气汤最佳浓度含药血清作用于TGF-β1诱导的A549细胞,实验分组为空白血清组、空白血清+TGF-β1组、以及补中益气汤最佳浓度补中益气汤含药血清+TGF-β1组。采用免疫组化、western-blot和realtime PCR法分别检测Twistl在蛋白和基因水平表达的变化。结果:最佳浓度的补中益气汤含药血清能使上皮间质化的A549细胞中Twistl蛋白表达下降,mRNA表达水平降低。结论:补中益气汤含药血清能抑制TGF-β1介导的A549细胞上皮间质化过程中Twistl表达。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞之肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响.方法:以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组,病毒对照组,利巴韦林组,采用ELISA法检测不同组细胞上清液中TNF-α的含量,并进行比较.结果:病毒对照组较正常细胞组之TNF-α含量明显增多,清肺口服液含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TNF-α的浓度.结论:清肺口服液可低腺病毒感染所致人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白的高表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一.     

开肺化痰解毒法对人胚肺成纤维细胞Fas表达的影响

目的：研究开肺化痰法对腺病毒作用后的人胚肺成纤维细胞Fas表达的影响。方法：用31、7b型腺病毒攻击人胚肺成纤维细胞后，分别加入清肺口服液含药血清及利巴韦林注射液，用流式细胞仪检测各组细胞FAS蛋白的表达。结果：经31、7b型腺病毒攻击后，病毒组Fas(CD95)的表达较正常组明显降低，含药血清组、利巴韦林组与病毒组比较，Fas(CD95)的表达均明显升高，空白血清组与病毒组比较无显著性差异，含药血清组与利巴韦林组比较无显著性差异。腺病毒31型攻击后，含药血清组、利巴韦林组与正常细胞组比较有显著性差异。腺病毒7b型攻击后，含药血清组、利巴韦林组与正常细胞组比较无显著性差异。结论：31、7b型腺病毒对人胚肺成纤维细胞Fas的表达有一定的影响，腺病毒可能通过此机制延长其在细胞内的存活时间，以利于自身复制。清肺口服液含药血清对Fas的表达具有一定的调节作用，此作用可能是其清除病毒在体内的感染，对机体起保护作用的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞之肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞;另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用ELISA法检测不同组细胞上清液中TNF-α的含量,并进行比较。结果病毒对照组较正常细胞组之TNF-α含量明显增多(P<0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TNF-α的浓度(P<0.01,P<0.05)。结论腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达增高;清肺口服液可降低TNF-α的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

止消通脉宁对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad 2、3、7 mRNA表达的影响

目的：探讨止消通脉宁对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、Smad 3、Smad 7的影响。方法：将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1：1)培养基培养;实验分为6组：空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、中药含药血清低剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清中剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、中药含药血清高剂量组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测Smad 2、smad 3、Smad 7的mRNA表达。结果：HK-2细胞经TGF-β1诱导后, Smad 2、smad 3的mRNA表达显著上升,Smad 7的mRNA表达下降,与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05),但经止消通脉宁含药血清干预后, Smad 2、smad 3的mRNA表达逐步下降,Smad 7的mRNA表达上调,与单纯TGF-β1诱导组相比有显著性差异(P＜0.05)。而空白血清无此作用。结论：止消通脉宁能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路mRNA表达的作用,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

清肺口服液对人喉癌细胞感染呼吸道合胞病毒后ICAM-1表达水平的影响

目的探讨清肺口服液对人喉癌细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后细胞间黏附分子-1（I-CAM-1）表达水平的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h时及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）测定各组人喉癌细胞ICAM-1表达变化。结果 48h时及72h后病毒模型组ICAM-1的表达明显高于清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组;空白血清组与病毒模型组无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异。72h后各组ICAM-1的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后ICAM-1的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响

目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF-β1诱导组(5ng/mL)、干预1组(TGF-β1 5ng/mL+复.肾颗粒100 μg/mL)、干预2组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒500 μg/mL)、干预3组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒1 mg/mL).培养12、24、48h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清IV型胶原蛋白(Col IV)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western-bloting法检测TAK1蛋白表达.结果:TGF-β1组细胞的增殖及Col IV含量、TAK1蛋白及mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),复肾颗粒含药血清干预后细胞增殖和Col IV的含量、TAK1表达显著低于TGF-β1组(P<0.05,P<0.01).结论:在体外试验中,复肾颗粒含药血清对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达.     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞Fas、FasL蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞Fas、FasL表达的影响。方法:细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3I、7b型腺病毒分别攻击,并分别加入相应药物至各组细胞中;用流式细胞仪检测比较各组细胞Fas、FasL蛋白的表达。结果:病毒对照组较正常细胞组细胞中Fas、FasL表达升高,含药血清组比病毒对照组细胞Fas、FasL表达降低。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞Fas、FasL蛋白表达增高;清肺口服液可降低Fas、FasL蛋白表达,从而抑制由腺病毒引发的细胞凋亡,这可能是其抗病毒作用的机制之一。