位点选择性8—Cl—cAMP对人肺巨细胞癌生长调控作用的研究

作者研究了两种ｃＡＭＰ类似物，双丁酰ｃＡＭＰ（ＤＢｃＡＭＰ，无位点选择性）和８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ（位点选择性）对高转移人肺癌细胞系ＰＧ细胞生长的调控作用。ＭＴＴ法检测结果显示，ＤＢｃＡＭＰ１ｍｍｏｌ／Ｌ在第８天，对ＰＧ细胞生长的抑制率为３０％，而８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ２１０－２０ｕＭ为７５％￣８０％。磷酸二酯酶抑制剂ＩＢＭＸ与８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ合用没有增加其抑制作用，而与ＤＢｃＡＭＰ合用则具有明显协同作     

肺巨细胞癌高低转移株转移能力差异相关分子的研究

目的 鉴定在肺巨细胞癌高、低转移株差异表达的转移相关分子,探讨肺巨细胞癌的转移机制。方法 以肺巨细胞癌高、低转移株(即PLA901D、PLA801C)为转移模型,通过细胞体外迁移和侵袭实验,验证高、低转移株间细胞体外迁移和侵袭能力的差异。以明胶酶谱实验,分析肿瘤细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)的活性;以Western blot技术,检测肿瘤细胞分泌的MMP-2、MMP-9、组织基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1和TIMP-2)的蛋白水平,以及p53、细胞增殖核抗原(PCNA)、p16、CD44(V6)异构体、细胞骨架蛋白(CKl8)、上皮细胞间黏附分子(E-cadherin)和肿瘤转移抑制蛋白(nm23-H1)的蛋白水平;以半定量RT-PCR技术,检测细胞内MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA水平。结果 肺巨细胞癌高转移株PLA801D的细胞体外侵袭能力显著高于低转移株PLA801C,大约为后者的4倍。PLA801D细胞株分泌的MMP-2活性高于PLA801C细胞株,其原因主要是由于分泌的MMP-2蛋白以及细胞内MMP-2 mRNA水平显著增高所致。在PLA801D细胞株内,p53、PCNA、CKl8蛋白和VEGF mRNA为显著高表达,p16、E-cadherin和nm23-H1蛋白为显著低表达,而MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和CD44(V6)蛋白的表达在高、低转移株间的差异无显著性。结论 肺巨细胞癌高、低转移株间存在转移能力和转移表型的显著差异,经鉴定的差异表达分子可能在促进或抑制肺巨细胞癌细胞的转移过程中发挥重要作用。     

养阴抗毒胶囊对兔肝VX2移植瘤射频治疗前后cAMP、cGMP及CORT影响的实验研究

目的:探讨中药养阴抗毒胶囊对兔肝VX2移植瘤射频消融(RFA)术前后CORT、cAMP、cGMP的动态变化的影响.方法:将40只新西兰大白兔采用移植法建立兔肝移植瘤模型,分为:A组中药干预组、B组RFA组、C组模型组、D组空白组,在B超引导下行RFA治疗,术前1天、术后1、3、5、7天检测血清中CORT、cAMP、cGMP动态变化.结果:RFA后普遍存在cAMP和CORT升高、cGMP降低现象,中药养阴抗毒胶囊可显著升高cAMP、降低cGMP并使CORT在适当范围内波动.结论:中药养阴抗毒胶囊可能通过升高cAMP,降低cGMP而启动人体内第二信使并激活HPA使CORT在适当范围内波动而提高RFA治疗效果.     

养阴抗毒胶囊对兔肝VX2移植瘤射频治疗前后cAMP、cGMP及CORT影响的实验研究

目的：探讨中药养阴抗毒胶囊对兔肝VX2移植瘤射频消融（RFA）术前后CORT、cAMP、cGMP的动态变化的影响。方法：将40只新西兰大白兔采用移植法建立兔肝移植瘤模型,分为：A组中药干预组、B组RFA组、C组模型组、D组空白组,在B超引导下行RFA治疗,术前1天、术后1、3、5、7天检测血清中CORT、cAMP、cGMP动态变化。结果：RFA后普遍存在cAMP和CORT升高、cGMP降低现象,中药养阴抗毒胶囊可显著升高cAMP、降低cGMP并使CORT在适当范围内波动。结论：中药养阴抗毒胶囊可能通过升高cAMP,降低cGMP而启动人体内第二信使并激活HPA使CORT在适当范围内波动而提高RFA治疗效果。     

转化生长因子β1正反义基因对人肺巨细胞癌细胞体内外增殖的影响

探讨人转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）正反义基因对人肺巨细胞癌细胞（ＰＬＡ－８０１Ｄ）增殖的影响及调控。方法通过基因转染方法,将ＴＧＦβ１正、反义基因分别导入ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞,观察转染和未转染细胞体内外增殖变化、ｎｍ２３基因和ｃ－ｍｙｃ基因表达以及细胞凋亡特征。结果与未转染细胞比较,正义ＴＧＦβ１基因转染细胞培养上清中ＴＧＦβ１活性增加,体外生长速度减慢,软琼脂细胞培养集落形成能力降低,裸鼠体内成瘤率下降约４７％,肿瘤的转移受到抑制。其机制可能与正义ＴＧＦβ１基因转染细胞ｎｍ２３基因表达增加,ｃ－ｍｙｃ基因表达减少以及诱发细胞凋亡有关。而反义ＴＧＦβ１基因转染细胞则出现相反结果。结论ＴＧＦβ１对ＰＬＡ－８０１Ｄ细胞的体内外生长具有负调控作用     

二甲双胍对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的调控

背景与目的:二甲双胍作为一种胰岛素增敏剂被用于Ⅱ型糖尿病的一线治疗。近来的临床研究发现二甲双胍可降低糖尿病患者的肿瘤发生率,提示它可能具有抗肿瘤的作用。本研究观察二甲双胍对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:二甲双胍干预人肺腺癌A549细胞48h后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,实时PCR法检测p53、Bcl-2和Bax mRNA的转录情况。结果:经二甲双胍干预48h后,人肺腺癌A549细胞的增殖受到明显抑制,且该抑制作用呈药物浓度依赖性增加。当二甲双胍浓度为0.5、2和8mmol/L时对细胞生长的抑制率分别为(29±5)%、(68±3)%和(84.1±2.6)%。流式细胞术检测提示中、高浓度(2、8mmol/L)二甲双胍可促进A549细胞凋亡;其中,药物作用48h后,8mmol/L组细胞的早期凋亡率为(2.1±0.5)%,中、晚期凋亡率为(9±4)%,均显著高于对照组。二甲双胍干预后细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2和BaxmRNA表达均上调,且Bcl-2/Bax比值下调。结论:二甲双胍能显著抑制人肺腺癌A549细胞增殖,促进细胞凋亡增加;其机制可能与上调细胞凋亡相关基因p53的表达及Bcl-2/Bax比值下降有关。     

8－氯腺苷的抗肿瘤作用研究

采用国内合成的８－氯腺苷经体内、外实验研究，结果表明，用１００ｍｇ·ｋｇ￣（－１）·ｄ￣（－１）×７剂量，可使小鼠肝癌实体瘤Ｈ＿２２抑制率达７１．７％±１３．３％腹腔注射（ｉｐ）和６６．１％±４．４６％静脉注射（ｉｖ），使白血病Ｌ１２１０荷瘤小鼠的生命延长率达１２４．Ｏ％±２２．１％（ｉｐ）和１０４．２％±２０．１％（ｉｖ）。体外实验显示，８－氯腺苷对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ＿５６２以及人胃癌细胞系ＭＧＣ８Ｏ－３均有明显抑制生长作用，其ＩＣ＿５０值分别为：１．８μｍｏｌ／Ｌ、４．２μｍｏｌ／Ｌ和１．５６μｍｏｌ／Ｌ。该药采用腹腔一次注射测定小鼠的ＬＤ＿５０为：１０２５．０±５２．４ｍｇ／ｋｇ；大鼠的ＬＤ＿５０为：７９３．４±７０．７ｍｇ／ｋｇ，表明其急性毒性很低。     

人肺巨细胞癌高(95D)低(95C)转移株中细胞周期调控因子的表达水平与细胞增殖能力的关系

目的:探讨人肺巨细胞癌高(95D)低(95C)转移株中细胞周期调控因子的表达水平与细胞周期/细胞增殖的关系。方法:MTT法检测两株细胞的增殖能力,流式细胞仪检测两株细胞的细胞周期差异,Western印迹检测两株细胞的周期调控因子的表达情况。结果:95D的细胞增殖能力显著高于95C细胞,与此一致,处于S期的95D细胞数目明显高于95C细胞;在蛋白质水平,95D细胞p27的表达低于95C细胞,而CDK2,磷酸化Rb的表达不同程度的高于95C细胞。结论:p27表达的不同,以及下游CDK2,Rb及Rb磷酸化水平的差异,最终引起两株细胞在细胞周期和细胞增殖能力的差异。     

尿素合并放疗对大白鼠walker－256癌肉瘤的治疗作用

本实验以大白鼠ｗａｌｋｅｒ－２５６癌肉瘤为实验模型，分成四组进行不同方式处理：（１）尿素放疗联合组（ｕ＋Ｒ）：（２）单纯尿素组（ｕ）；（３）单纯放疗组（Ｒ）；（４）空白对照组（Ｃ）。从大体病理学、组织学及超微结构等不同水平，观察尿素合并放疗的疗效。结果显示，ｕ＋Ｒ组的肿瘤生长速度明显较其它组缓慢，其瘤重小于其它三组（Ｐ＜０．０１），抑瘤率为８９．８８％，较ｕ组及Ｒ组高（Ｐ＜０．０１），形态学观察结果示，ｕ＋Ｒ组肿瘤组织坏死，肉芽组织丰富。ｕ组瘤组织部分坏死，肉芽组织增生呈退行性变。Ｒ组细胞大部分坏死，血管周围少许肿瘤细胞存活，血管损伤较明显。结果提示尿素合并放疗较单纯放疗疗效为好，可有效地抑制ｗａｌｋｅｒ－２５６癌肉瘤的生长。     

传染野生型p53基因对人肺腺癌细胞作用的研究

目的 研究外源性野生型p53基因对人肺腺癌细胞系GLC-82的生物学作用。方法 将含有野生型p53基因的pDOR-neo逆转录病毒载体,通过Lipofectin转染GLC-82细胞,采用流式细胞分析、电镜下观察、^3H-TdR掺入试验、软琼脂培养集落形成率测试及裸小鼠成瘤性实验,观察野生型p53基因对GLC-82细胞的生物学效应。结果 电镜下观察可见,转染野生型p53基因可使GLC-82细胞出现一些病理现象,如细胞质中有明显的空泡及线粒体肿胀;流式细胞仪分析结果显示,野生型p53基因可阻止GLC-82细胞周期停止于G1-S区域;^3H-TdR掺入试验结果提示野生型p53基因能够抑制GLC-82细胞的DNA合成,软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤减慢。结论 转染野生型p53基因可抑制GLC-82细胞恶性增殖。     

紫杉醇对人膀胱移行上皮细胞癌的体外作用

目的:观察紫杉醇对人膀胱移行上皮癌细胞系增殖、细胞凋亡以及p53、bax、bcl-2和caspase3基因表达的影响。方法:体外培养膀胱移行细胞癌细胞系BIU-87、5637、T24、EJ细胞;用MTT法检测紫杉醇对各种癌细胞生长抑制的影响;用流式细胞技术(碘化丙啶)检测紫杉醇对癌细胞周期影响;流式细胞仪Annexin-V法测定细胞凋亡率;流式免疫荧光检测用药前后p53、bax、bcl-2、和caspase3基因表达变化。结果:紫杉醇对体外培养的膀胱移行细胞癌细胞系均有抑制作用,具有时间和浓度依赖性;低分级肿瘤和倍增时间长的细胞系对紫杉醇敏感性高;紫杉醇作用5637和EJ细胞24小时,导致细胞G_2期71.29%与64.57%的阻滞;1μg/ml作用5637细胞12、24、48小时,凋亡率分别为5.0%、12.9%、及27.6%;免疫荧光显示p53、bcl-2表达没有显著性变化,而bax、caspase3却随紫杉醇时间延长表达升高。结论:紫杉醇对膀胱移行细胞癌具有抑制作用,细胞分级低、倍增时间长的癌细胞系对紫杉醇更敏感。紫杉醇阻滞细胞于G_2/M,诱导bax表达上调可能是产生膀胱癌细胞凋亡的原因。     

姜黄素对耐顺铂人肺腺癌细胞Survivin表达及其化疗敏感性的影响

目的:探讨姜黄素(Cur)对耐顺铂(DDP)人肺腺癌细胞A549/DDP Survivin表达及其化疗敏感性的影响。方法:以非毒性剂量(10μmol/L)的姜黄素作用于A549/DDP细胞,采用RT-PCR和免疫组化SABC法分别检测Survivin mRNA和蛋白的表达,MTT法检测A549/DDP细胞对DDP的半效抑制浓度IC50、耐药指数和细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:Cur能使A549/DDP细胞Survivin mRNA相对表达水平由(79.17±5.96)%下调至(57.8±9.8)%,P=0.014;而蛋白表达强度也由1.174±0.059降至1.009±0.072,P=0.023。A549/DDP细胞对DDP IC50及耐药指数分别由(206.77±9.19)μmol/L和10.90降低至(160.80±3.91)μmol/L和7.42,P值分别为0.041和0.035;细胞凋亡率由7.1%增至17.7%,Cur和DDP联合应用后凋亡率达40.61%,P=0.012。结论:Cur下调A549/DDP细胞Survivin表达,可能与部分解除Survivin导致的细胞凋亡抑制有关。     

自泌性白细胞介素—6对人肺腺癌细胞系PAa生长的影响

目的　探讨白细胞介素 - 6( interleukin- 6,IL- 6)对人肺癌细胞体外生长的影响。方法　应用逆转录 PCR技术检测人肺腺癌细胞系 PAa IL- 6受体 m RNA、Northern杂交技术检测 PAa细胞IL- 6m RNA;用生物活性检测法测定 PAa细胞所分泌的 IL- 6,并用抗体中和法检测内源性 IL- 6对PAa细胞体外生长的影响。结果　PAa细胞表达 IL- 6受体 m RNA,重组人 IL- 6刺激 PAa细胞生长 ;PAa细胞表达 IL- 6m RNA且分泌有生物活性的 IL- 6,抗 IL- 6抗体抑制 PAa细胞生长。结论　 IL- 6对 PAa细胞生长具有调控作用 ,IL- 6为 PAa细胞自分泌生长刺激因子。     

超氧化物歧化酶及二乙基二硫氨基甲酸钠对诱发性大鼠肺鳞状细胞癌的作用

应用超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及其抑制剂二乙基二硫氨基甲酸钠（ＤＤＣ）分别给用甲基胆蒽（ＭＣＡ）碘油溶液诱发Ｗｉｓｔａｒ大鼠肺鳞状细胞癌的过程中用药。在３５、４０天诱癌中，发现ＤＤＣ组５０只大鼠３例发生肺鳞癌，４例支气管上皮呈不典型增生，ＳＯＤ组５２只未发生肺癌，１例发生不典型增生；对照组４２只１例发生肺鳞癌，２例不典型增生。肺癌发生情况ＤＤＣ组与ＳＯＤ组比较差别有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。结果表明：ＤＤＣ与化学致癌物质ＭＣＡ诱癌有协同作用，使诱发性肺鳞癌提前发生。ＳＯＤ可能有抑制肺癌发生的作用。作者还对其作用机理进行了讨论。     

人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群生物学特性的体外实验研究

目的:探讨人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群体外培养的生物学行为特征.方法:免疫组化方法检测A549细胞系AB-CG2蛋白的表达;流式细胞仪分选A549细胞系SP细胞和非SP细胞亚群,用RT-PCR方法检测两亚群细胞ABCG2基因的表达;并通过两亚群细胞的生长曲线、细胞分裂指数、细胞周期各时相分布以及平板克隆形成实验、迁移和侵袭研究两亚群细胞的生物学行为.结果:A549细胞系ABCG2蛋白表达的阳性率约为2%;SP细胞表达ABCG2,而非SP细胞则不表达;两亚群细胞的增殖和迁移能力相似(P＞0.05);SP细胞的克隆形成率和侵袭能力则大于非SP细胞(P＜0.05).结论:A549细胞系SP细胞亚群体外成瘤能力及侵袭能力强于非SP细胞亚群,SP细胞亚群可能富集了肿瘤干细胞.     

美加明对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨烟碱型胆碱能受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)拮抗剂美加明对人肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响。方法:应用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法和FCM法检测美加明对人肺腺癌A549细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响;划痕实验检测美加明对细胞迁移能力的影响;激光共聚焦显微镜下观察美加明对A549细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达的影响。结果:美加明可抑制A549细胞的增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制作用随着药物浓度的增加而增强。FCM检测结果显示,美加明作用后,G0/G1期细胞比率增多,S期和G2/M期细胞比率下降,而细胞凋亡未发生明显变化。划痕实验结果显示,美加明可降低A549细胞的迁移能力。激光共聚焦显微镜下观察发现,美加明可上调A549细胞E-cad的表达。结论:美加明可能通过阻滞细胞周期于G0/G1期而抑制A549细胞增殖,并通过上调E-cad的表达而降低细胞迁移。     

Plumbagin对人大细胞肺癌NL9980细胞系抑癌作用的研究

 【摘要】　目的　研究Plumbagin对人类大细胞肺癌NL9980细胞系的抗肿瘤作用并探索其机制。方法　不同浓度Plumbagin处理NL9980细胞系,采用MTT法观察其对肿瘤细胞增殖的影响,确定药物IC50,采用流式细胞术检测对细胞系诱导凋亡的作用,采用Boyden小室侵袭实验检测对体外侵袭力的抑制作用;以IC50 Plumbagin处理NL9980细胞系,于处理后6、24及48 h收获细胞,以实时定量PCR方法检测bcl-2、bax、VEGF和CYCD1等基因的mRNA表达变化。结果　MTT法显示Plumbagin明显抑制NL9980细胞系的细胞增殖,IC50为7.5 μmol／L;Plumbagin对NL9980细胞系具有体外诱导凋亡作用,且明显抑制其体外侵袭能力,Bodyen小室侵袭实验检测对照组和Plumbagin组平均穿膜细胞数分别为161.59±47.32和26.58±9.07。Plumbagin处理NL9980细胞系后不同时间点检测结果显示,bcl-2、VEGF和CYCD1基因表达均逐渐减低,bax基因表达逐渐增高,组间差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论　Plumbagin对大细胞肺癌NL9980细胞系具有明确的抗肿瘤作用。Plumbagin可能通过多种作用机制发挥其抑癌作用,显示了其成为抗大细胞肺癌药物的前景。     

神经降压素对人结肠癌细胞株生长调控及其机制

目的　研究神经降压素对人结肠癌细胞株的生长调控作用及其的信号传导途径。方法　以不同浓度的神经降压素处理人低分化结肠癌细胞系Clone A细胞,用MTT法观察细胞的生长情况;分别应用液体闪烁测量法、γ-闪烁记数仪测定细胞内三磷酸肌醇(IP3)及环磷酸腺苷(c AMP)含量。结果　不同浓度的神经降压素(10 - 9～10 - 5m ol/ L)能显著地促进Clone A细胞的生长(P<0 .0 1) ,且呈剂量依赖关系(r=0 .94 2 ,P<0 .0 1) ,这种促生长作用可以被神经降压素受体拮抗剂所阻断。神经降压素能显著促进Clone A细胞内IP3、c AMP含量增加,这些作用也可以被神经降压素受体拮抗剂所抑制。结论　神经降压素能促进Clone A细胞生长,且可被神经降压素受体拮抗剂所抑制,其受体后信息传递途径,可能是通过磷酸肌醇和腺苷环化酶途径。     

原花青素诱导人肺癌细胞A549凋亡作用研究

目的研究原花青素对人肺癌细胞株A549凋亡的影响并探讨其抗癌机制。方法以不同浓度的原花青素与人肺癌细胞株A549细胞共同培养,MTT法测定细胞增殖;Hoechst 33258/PI染色荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特异性梯状DNA条带;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果原花青素可体外抑制肺癌A549细胞生长,抑制率呈浓度、时间依赖性,药物浓度达25 mg/L时作用48小时,A549细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型凋亡改变;琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带;Western blot检测结果显示,Caspase-9、Caspase-3蛋白表达量与药物浓度的增加呈增加趋势,Bcl-2与药物浓度呈负相关。结论原花青素能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肺癌细胞增殖,其凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

Plumbagin对人类大细胞肺癌NL9980细胞系抑癌作用的研究

目的研究Plumbagin对人类大细胞肺癌NL9980细胞系的抗肿瘤作用并探索其机制。方法不同浓度Plumbagin处理NL9980细胞系,采用MTT法观察其对肿瘤细胞增殖的影响,确定药物IC50,采用流式细胞术检测对细胞系诱导凋亡的作用,采用Boyden小室侵袭实验检测对体外侵袭力的抑制作用;以IC50 Plumbagin处理NL9980细胞系,于处理后6、24及48h收获细胞,以实时定量PCR方法检测bcl-2、bax、VEGF和CYCD1等基因的mRNA表达变化。结果MTT法显示Plumbagin明显抑制NL9980细胞系的细胞增殖,IC50为7．5μmol／L;Plumbagin对NL9980细胞系具有体外诱导凋亡作用,且明显抑制其体外侵袭能力,Bodyen小室侵袭实验检测对照组和Plumbagin组平均穿膜细胞数分别为161．59±47．32和26．58±9．07。Plumbagin处理NL9980细胞系后不同时间点检测结果显示,bcl-2、VEGF和CYCD1基因表达均逐渐减低,bax基因表达逐渐增高,组间差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论Plumbagin对大细胞肺癌NL9980细胞系具有明确的抗肿瘤作用。Plumbagin可能通过多种作用机制发挥其抑癌作用,显示了其成为抗大细胞肺癌药物的前景。