木蝴蝶挥发性成分对H_(22)荷瘤小鼠实体瘤抑制作用及其机制初步研究

目的探讨木蝴蝶挥发性成分抗肝肿瘤作用及其可能的作用机制。方法本研究采用H22实体瘤模型,随机分为空白组、模型组、阳性对照组(环磷酰胺100 mg·kg~(-1))、木蝴蝶挥发性成分低、中、高剂量(17.5、35、70 mg·kg~(-1))组,灌胃给药12 d,计算肿瘤抑制率、胸腺及脾指数及血清中IL-2、IL-6的含量。HE染色法观察小鼠实体瘤生长情况。采用0~1.0 g·L~(-1)的木蝴蝶挥发性成分处理人肝癌SMMC-7721细胞,分别采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,TUNEL法检测其对肝癌细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测其对Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表达的影响。结果木蝴蝶挥发性成分高剂量的抑瘤率为42.08%;与模型组相比,木蝴蝶挥发性成分能明显提高小鼠的胸腺指数、IL-2及IL-6水平。木蝴蝶挥发性成分体外能明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导细胞凋亡,减少Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax、caspase-3 mRNA的表达。结论木蝴蝶挥发性成分具有明显的体内、体外抗肝肿瘤作用,其作用机制可能与增强机体免疫力、促进肿瘤细胞凋亡有关。     

基于人肝癌细胞HepG2的仙鹤草挥发性成分体外抗肝肿瘤活性评价研究

目的研究仙鹤草挥发性成分物质组成及其体外抗肝肿瘤活性,为其作为天然抗肝肿瘤药物的开发利用奠定实验基础。方法采用GC-MS法对仙鹤草挥发性成分进行化学成分分析,采用MTT比色法对仙鹤草挥发性成分及其主要单体成分棕榈酸、反式角鲨烯、α-亚麻酸作用于人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制率进行研究;采用AnnexinV-FITC/PI双染法对仙鹤草挥发性成分作用HepG2细胞后凋亡率的变化进行研究。结果仙鹤草挥发性成分中共鉴定出23种化合物,其中主要包括醇类成分(26.54%)、脂肪酸类成分(15.70%)、甾醇类成分(13.96%)、烃类成分(7.49%)和酯类成分(13.82%);仙鹤草挥发性成分能显著抑制HepG2细胞的增殖、促进HepG2细胞凋亡,其主要单体成分棕榈酸、反式角鲨烯、α-亚麻酸均表现出显著体外抗HepG2细胞增殖活性。结论仙鹤草挥发性成分通过抑制癌细胞增殖、促进其凋亡发挥抗肝肿瘤作用,其发挥药效的单体成分有棕榈酸、反式角鲨烯、α-亚麻酸,该研究为仙鹤草挥发性成分作为天然抗肝肿瘤药物的开发利用及进一步的抗肿瘤单体研究等提供理论依据。     

染料木素MePEG-PLGA共聚物胶束体内外抗肿瘤作用

目的：初步探讨染料木素MePEG-PLGA共聚物胶束对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抗肿瘤作用。方法：采用MTT法、Annexin V-FITC/PI染法分别考察染料木素MePEG-PLGA共聚物胶束对人肝癌SMMC-7721细胞的细胞毒性、细胞凋亡、细胞周期的影响;通过荷肝SMMC-7721瘤裸鼠体内抗肿瘤实验,考察染料木素胶束的体内抗肿瘤效应。结果：染料木素胶束对肝癌SMMC-7721细胞的抑制率均高于染料木素,最高抑制率分别可达83.26％、78.25％。流式细胞仪检测结果显示：染料木素胶束组能够提高染料木素组对SMMC-7721细胞凋亡的诱导能力,并且呈浓度依赖性。5μg.mL^－1、10μg.mL^－1、20μg.mL^－1的染料木素组和染料木素胶束组药物作用于SMMC-7721细胞48h时,染料木素胶束能够明显提高染料木素对细胞G2/M期细胞的阻滞,并且呈现浓度依赖性。体内抗肿瘤实验结果表明相同浓度的染料木素胶束组的抑瘤效果显著强于染料木素乳剂组,呈浓度依赖性,最高抑瘤率可达55.41％。结论：染料木素MePEG-PLGA共聚物胶束在体内和体外均有显著地抗肝癌作用。     

薏苡附子败酱散方抗肝癌细胞SMMC-7721有效组分配伍研究

目的通过均匀设计方法筛选出薏苡附子败酱散方有效组分抗肝癌细胞最佳配伍比例,并对其各有效组分及最佳配伍进行体外初步作用机制研究。方法采用MTT法测定各有效组分对肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值,通过U_8(8~5)均匀设计对有效组分配伍进行优化,确定最佳配伍比例;同时测定最佳配伍作用于人正常肝细胞L-02和肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值;运用流式细胞仪将最佳配伍组及有效组分单用组分别作用于肝癌细胞SMMC-7721,测定细胞周期与凋亡,并用Flowjo及Modifit软件进行分析。结果薏苡附子败酱散方有效组分最佳配伍比例为:败酱草总皂苷-薏苡仁挥发油-败酱草总黄酮-附子总生物碱=0.40∶2.06∶1.06∶1.70。最佳配伍对肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值比对人正常肝细胞L-02显著降低;与空白对照组比较,各组分单用组及最佳配伍组作用于肝癌细胞SMMC-7721后,细胞凋亡率均增加;细胞分裂周期G_0/G_1期、S期比例升高,G_2/M期比例降低。最佳配伍组作用优于各有效组分单用组。结论通过本实验筛选出的薏苡附子败酱散方有效成分最佳配伍对肝癌细胞SMMC-7721有明显的增殖抑制作用,为该方的进一步研发奠定了基础。     

川陈皮素对肝癌细胞的抑制作用

目的 研究川陈皮素对肝癌细胞的抑制作用.方法 不同浓度的川陈皮素作用于人肝癌细胞SMMC-7721细胞,用MTF法、细胞生长曲线实验研究其对SMMC-7721细胞的生长抑制作用,Giemsa染色观察细胞形态变化,初步研究其体外抑瘤作用;建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型,研究川陈皮素对肝癌的体内抑制作用.结果 MTT法提示川陈皮素为2～128mg·L-1时,对SMMC-7721的48 h抑制率为3%～80%,IC50为26.2 mg·L-1;生长曲线提示,川陈皮素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;Giemsa染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化;体内实验表明,川陈皮素500 mg·kg-1,ig给药10 d,对小鼠移植性肿瘤H22抑制率为48.35%(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论 川陈皮素对人肝癌细胞SMMC-7721具有明显体外抗增殖作用,对小鼠移植性肿瘤H22有一定的抑制作用.     

基于SMMC-7721肝癌细胞生长抑制的两种败酱草药效比较及提取方法研究

目的中药败酱草临床常出现在治疗肿瘤的复方中,但来源较杂,药效难以保证,明确对肝癌细胞生长抑制较好的败酱草品种并优化其提取工艺。方法采用以肝癌细胞抑制率及总黄酮含量为评价指标,筛选两种不同来源的败酱草,正交试验法确定提取工艺,对结果进行分析,结合SPSS17.0软件对考察指标进行相关性分析。结果白花败酱体外抗肿瘤抑制作用高于黄花败酱;白花败酱以SMMC-7721细胞抑制率为指标的提取工艺与以总黄酮含量为指标的提取工艺结果一致均为:10倍量70%乙醇回流提取3次,每次2h,且两种指标相关性良好。结论通过体外药效学比较,白花败酱抑制SMMC-7721肝癌细胞生长优于黄花败酱,中药白花败酱草提取工艺科学合理,为合理利用败酱草奠定了基础。     

蛇莓中齐墩果酸对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的:探讨蛇莓中齐墩果酸(OA)对人肝癌SMMC-7721细胞增值的抑制作用.方法:建立人肝癌SMMC-7721细胞体外培养模型.MTT法检测不同浓度OA对人肝癌SMMC-7721细胞的影响.结果:与对照组比较,药物组在24h对肝癌细胞具有明显的抑制作用(P<0.05),并在48h内随着浓度的增加,抑制率增加.结论:O...     

20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞体内外作用的研究

目的观察不同剂量的20(S)-原人参二醇(Protopanaxadiol,PPD)在体内外对人肝癌细胞株SMMC-7721抗肿瘤作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察20(S)-原人参二醇的肿瘤抑制作用。MTT比色法检测20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,Ho-echst33342核染色观察细胞凋亡形态学改变,采用FITC-An-nexinⅤ/PI双染流式细胞术分析凋亡情况,同时检测Caspase-3活性。结果在体内,PPD可抑制SMMC-7721细胞裸鼠异种移植瘤生长;在体外,PPD对SMMC-7721细胞的增殖具有明显的抑制及诱导其凋亡作用,呈时间和剂量依赖性,Hoechst33342核染色可见凋亡小体,同时伴有Caspase-3活性的增加。结论20(S)-原人参二醇在体内外均可抑制SMMC-7721细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能通过活化Caspase-3诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

中药复方H3C-1对肝癌细胞SMMC-7721基因表达的影响

检测中药复方H3C-1对肝癌细胞SMMC-7721细胞生长,及肝癌相关基因表达的影响.利用MTT比色法检测复方H3C-1对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖方面的影响;利用以肝癌cDNA抑制性消减文库构建的肝癌相关基因微阵列.检测复方H3C-1作用肝癌细胞SMMC-7721 36 h后基因的表达变化.结果显示中药复方H3C-1作用肝癌细胞SMMC-7721后36h.观察到有31个基因表达下凋,1个基因上调.中药复方H3C-1对肝癌肿瘤细胞的作用是通过影响多基因的表达改变实现的;该研究为复方H3C-1的抑癌分子机理提供了重要线索.     

有色脂溶性化合物的MTT实验中关键影响因素的分析与方法改进

目的对MTT法测定有色脂溶性化合物对癌细胞抑制作用的关键影响因素进行分析改进,并观察7种新型化合物对SMMC-7721人肝癌细胞的抑制作用。方法以SMMC-7721人肝癌细胞为目标,对MTT法测定有色脂溶性化合物的关键影响因素进行实验分析并改进;用改进后的方法测定7种新型化合物对该细胞系的抑制作用。结果药液的溶解、溶剂毒性、化合物的颜色及关键步骤的操作,对有色脂溶性化合物的MTT实验结果影响较大,应当合理进行实验设计,减弱或避免上述因素的不利影响;7种新型化合物对SMMC-7721人肝癌细胞具有不同程度的抑制作用,且随着药物浓度降低,抑制率呈下降趋势。结论本研究结果为有色脂溶性化合物的MTT实验提供了方法参考。     

小檗胺对肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究小檗胺对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移作用的影响及其可能的机制。方法 在体外用不同浓度小檗胺处理肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞活力的变化;采用细胞划痕试验、Transwell迁移和侵袭试验检测肿瘤细胞侵袭转移能力;采用Western blot法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达。结果 MTT结果显示浓度<20 μmol·L^-1的小檗胺对SMMC-7721细胞存活率无显著影响。划痕试验和Transwell结果显示,小檗胺呈浓度依赖性抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程。Western blot结果表明,小檗胺显著增强SMMC-7721细胞中E-cadherin表达,而减弱Vimentin表达。结论 人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力可被小檗胺抑制,其机制可能与其调控上皮间质转化相关蛋白的表达有关。     

A new elemanolide sesquiterpene lactone from Elephantopus scaber

A new elemanolide sesquiterpene lactone, named elescaberin (1), together with two known compounds, namely, isodeoxyelephantopin (2) and deoxyelephantopin (3), was isolated from the whole plant of Elephantopus scaber. The structure of 1 was elucidated on the basis of spectroscopic analysis. All three compounds exhibited significant inhibitory activities against human SMMC-7721 liver cancer cells in vitro (IC₅₀ 8.18–14.08 μmol/l).     

苯氧基磷酰氮芥取代的槐定碱衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的 设计合成苯氧基磷酰氮芥取代的槐定碱衍生物,并对其进行体外抗肿瘤活性研究。方法 以槐定碱为起始原料,经开环、酯化、磷酰化等反应合成目标化合物2a ～2e ,采用MTT法测定其对S180、H22、K562、MCF-7、SMMC-7721、LoVo肿瘤细胞的抑制活性。结果 设计并合成了5个目标化合物,其结构经¹H-NMR和ESI-MS确证。体外细胞测试结果显示所有化合物对S180和H22细胞株活性较强,且对正常细胞L929毒性小,部分化合物活性高于阳性对照药多柔比星。结论 目标化合物具有较强的抗肿瘤活性,化合物2b 为有潜力的候选化合物。     

Studies on cytotoxic constituents from the skin of the toad Bufo bufo gargarizans

To study the chemical composition of the skin of Bufo bufo gargarizans, many kinds of chromatography methods were used in the isolation procedures, while the structures of isolated compounds were determined on the basis of their NMR and MS spectral analysis. As a result, two new compounds were isolated from its ethanolic extract and characterized as cinobufotalin 3-nonanedioylarginine ester (8) and bufotalin 3-pimeloylarginine ester (14). Furthermore, 13 known compounds were obtained. Isolated bufadienolides showed significant inhibition effect against SMMC-7721 cell lines in vitro.     

黄水枝不同部位挥发性成分的GC-MS研究

目的在使用GC-MS技术的基础上采用直观推导式演进特征投影法(HELP)研究云南产黄水枝根、茎、叶3个不同部位的挥发油成分。方法以黄水枝根部位为例详细介绍了HELP的解析过程,应用总体积积分法测定各成分的质量分数。结果3个不同部位(根、茎、叶)提取的挥发油中分别鉴定出58、37、38个化合物,分别占挥发油总量的92.48%、99.16%、93.51%。结论黄水枝不同部位的挥发油化学成分有明显差异;利用GC-MS分析法结合化学计量学分辨方法鉴定挥发油化学成分,比单独使用GC-MS法结果更准确、可靠。     

葱子化学成分的研究(Ⅱ)

目的研究百合科葱属植物葱Allium fistulosum L.的干燥成熟种子的化学成分。方法采用多种柱色谱方法进行分离纯化,通过理化常数和1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行化合物的结构鉴定。结果从葱子水提取物的50%乙醇大孔树脂洗脱部位中分离得到了6个化合物,分别鉴定为,壬二酸（Ⅰ）,阿魏酸（Ⅱ）,香草酸（Ⅲ）,对羟基苯甲酸甲酯（Ⅳ）,（R）-（＋）-2-羟基-3-苯基丙酸（Ⅴ）,对羟基苯甲酸（Ⅵ）。结论以上化合物均为首次从葱子中分离得到。     

基于人肝癌细胞系SMMC-7721的三维培养条件研究

目的 基于人肝癌细胞系SMMC-7721考察合适的海藻酸钠、氯化钙浓度,形成良好的海藻酸钙凝胶,优选三维条件下肿瘤细胞的培养条件。方法 在96孔板中培养SMMC-7721细胞,基于L₉（3⁴）正交表设计实验,以MTT法检测并计算氯化钙溶液、柠檬酸钠溶液不同浓度与作用时间下的细胞存活率;结合正交优选结果,考察适宜的海藻酸钠浓度,筛选适合的成胶、溶胶条件,并在三维培养模式下进行细胞活力确证。结果 最佳凝胶应用条件为1%氯化钙溶液与1%海藻酸钠溶液作用15 min内用于成胶,10%柠檬酸钠溶液作用凝胶10 min内用于溶胶,MTT法检测细胞存活率为94.97%。该三维培养条件下的肝癌细胞72 h内生长状态良好,存活率可达92.10%,细胞堆积紧密,出现肿瘤细胞球样聚集体。结论 本实验筛选出适合肿瘤细胞三维培养的成胶、溶胶条件。在该条件下培养肝癌细胞SMMC-7721,细胞生长状态良好,且细胞生长与聚集形态与传统二维培养存在差异,更接近细胞体内生存环境。基于该方法进行肿瘤细胞三维培养,可为深入研究肿瘤细胞生长状态,为抗肿瘤药物筛选提供更有利的方式。     

青风藤中挥发油成分的分析

目的 建立气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法分析青风藤中的挥发油成分。方法 采用水蒸气蒸馏法提取青风藤挥发油,运用GC-MS技术,结合数据库检索对其挥发油进行分离鉴定。对青风藤中的挥发油进行分析。结果 实验共鉴定出80个化合物,通过与软件中的质谱标准谱图库进行比较,获得匹配的有63个化合物,主要成分为脂肪酸、甾醇、烯烃以及少量的醛类等物质,含量最多的为十八烷酸和十六烷酸。结论 该实验丰富了青风藤的物质基础研究,为青风藤质量控制提供了更多的参考依据。     

台湾金线莲多糖的分离纯化及其体外抑瘤活性研究

目的研究台湾金线莲(Anoectochilus formosanus)的水溶性多糖(AFP)分离纯化条件,检测单一组分多糖的细胞活性及其结构。方法采用DEAE-Cellulose Fast Flow阴离子交换色谱和Sephadex G-200分离AFP,得到AFP-1和AFP-2两个水溶性单一多糖组分;采用红外光谱检测结构;检测AFP、AFP-1和AFP-2对SMMC-7721肝癌细胞,Hela宫颈癌细胞,spc-A1肺腺癌细胞和Bcap37人乳癌细胞进行细胞杀伤活性。结果AFP-1和AFP-2均为β-D型的吡喃糖环。AFP、AFP-1和AFP-2对癌细胞均具有较好的杀伤作用。结论台湾金线莲多糖(AFP、AFP-1和AFP-2)是非常有前景的抗肿瘤药物或辅助抗肿瘤药物。     

Cytotoxic constituents from the skin of the toad Bufo bufo gargarizans

To study the chemical composition of the skin of Bufo bufo gargarizans, various chromatographic methods were used in the isolation procedures and the structures of isolated compounds were determined based on NMR and MS analysis. As a result, two new compounds were isolated from its ethanolic extract and characterized as N-[2-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]-N-methylurea (1) and 19-oxocinobufotalin 3-adipoylarginine ester (2), together with 11 known compounds. Isolated bufadienolides showed significant inhibition effect against human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721 in vitro.