全反式维甲酸对骨肉瘤细胞OS732生长的影响

目的 观察全反式维甲酸（all—trails—retinoic acid，ATRA）对骨肉瘤细胞OS732生长的影响，并探讨其作用的分子机制。方法 用10^-5 MATRA作用骨肉瘤细胞OS732，6d后，进行细胞形态学观察、活细胞计数、流式细胞仪分析细胞周期、半定量RT—PCR检测细胞周期调控蛋白CyclinD（D1、D2、D3）、CD比、P21^WAF1 mRNA表达的改变。结果 ATRA作用后，OS732细胞胞浆展开，细胞核变小，核浆比例变小；瘤细胞生长减慢，细胞计数为正常对照组的39．5％；G0／G1期细胞明显增多，S期细胞减少，细胞阻滞于G0／G1期；CyclinD1、CyclinD2、CDK4mRNA表达均下降，尤以CycfinD2、CDK4下降最明显，CyclinD3、P21^WAF1mRNA未见明显改变。结论 10^-5M全反式维甲酸可明显抑制骨肉瘤细胞OS732的增殖，并使细胞周期出现G1／G0期阻滞，该作用可能与维甲酸处理后OS732细胞中CyclinD2、CDK4表达的下调以致低磷酸化pRb积累有关。     

Cyclin D1／CDK4在ω-3脂肪酸和视黄酸抑制HL-60细胞增殖中的作用

目的研究Cyclin D1／CDK4在ω-3脂肪酸和视黄酸抑制HL-60细胞增殖过程中的作用。方法HL-60细胞经全反式视黄酸(ATRA)和二十二碳五烯酸(EPA)处理一定时间后，MTr比色法测定细胞增殖功能；RT—PCR分析ATRA和EPA对HL-60细胞Cyclin D1、CDK4、CDK2mRNA表达的影响；Western blot分析CDK4和P15蛋白质表达水平。结果ATRA或EPA单独处理均能抑制HL-60细胞生长，下调节HL-60细胞Cyclin D1、CDK4mRNA和CDK4蛋白的表达，上调P16蛋白的表达，二者联合处理时上述变化更明显，而ATRA和／或EPA对CDK2 mRNA表达无明显影响。结论ATRA和EPA可能通过下调节Cychn D1、CDK4的表达，上调节P16的表达，导致Cyclin D1／CDK4复合物的活性下降，细胞生长被阻断在G1／G0期，从而发挥它们对HL-60细胞增殖抑制作用。     

全反式维甲酸对前列腺癌PC-3细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖的抑制作用及其Bel-2和Bax表达的影响。方法以不同浓度的ATRA处理PC-3细胞，甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖抑制情况；流式细胞仪和免疫细胞化学法检测PC-3细胞Bax和Bcl-2的表达。结果ATRA浓度为（10^-6～10^-4）mol／L时，可明显抑制PC-3细胞的增殖（P〈0．01），并具有时间-剂量依赖性。ATRA处理后PC-3细胞Bcl-2表达下调，Bax表达上调。随ATRA浓度增加，Bcl-2／Bax的比值不同程度地下降（P〈0．05）。结论ATRA对PC-3细胞具有明显的增殖抑制作用，并且与ATRA下调Bcl-2表达、上调Bax表达有关。     

IGFBP-6在维甲酸诱导的软骨细胞凋亡中的表达

目的：对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡病理过程中胰岛素样生长因子结合蛋白-6（IGFBP-6）的表达规律进行研究。方法：1×10^-6mol／L的全反式维甲酸（ATRA）作用体外培养兔的软骨细胞株，观察软骨细胞中Ⅱ型胶原的合成变化，检测软骨细胞株细胞凋亡率。采用实时定量PCR和Western印迹杂交分析软骨细胞中IGFBP-6mRNA和蛋白质的表达。结果：ATRA（1×10^-6mol／L）作用软骨细胞24h，ATRA抑制了软骨细胞中Ⅱ型胶原的合成，并使软骨细胞凋亡率增加了250％（P〈0．05）。ATRA使软骨细胞中IGFBP-6mRNA和蛋白质的表达分别增加了140％和195％（P〈0．05）。结论：维甲酸可能通过负性调控靶基因IGFBP-6的基因转录和翻译，发挥对软骨细胞的促凋亡作用。     

DADS活化HL-60细胞G2/M检查点与cyclinB1亚细胞分布的关系

目的研究二烯丙基二硫（DADS）诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制。方法采用MTT法检测DADS对细胞增殖活性的影响、流式细胞术检定细胞增殖周期、蛋白印迹法检测细胞内cyclinB1表达水平。结果DADS呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖活性，且DADS（20μmol／L）与ATRA（10^-6mol／L）对HL-60细胞增殖活性影响相近（P〈0．01），DADS（20μmol／L）作用12h后能引起G2，M期细胞百分数增高并达到最大值，上调cyclinBl的表达水平并诱导cyclinB1细胞质定位。结论DADS能启动HL-60细胞G2/M检查点，它的激活与cyclinB1细胞质定位有关。     

二烯丙基二硫与全反式维甲酸合用对HL-60细胞的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）与全反式维甲酸（ATRA）联合用药对HL-60细胞生长抑制及诱导分化的影响。方法采用M1Tr、流式细胞术检测细胞周期及生长抑制，用HL-60细胞表面分化抗原CD11b及NBT实验检测HL-60的诱导分化作用。结果DADS与ATRA联合使用可以增加HL-60细胞的生长抑制率，并将HL-60细胞阻滞在G0/G1期。CD11b的表达和NBT实验结果表明两者合用对HL-60细胞的诱导分化作用与任何一种药物单独使用差异无显著性，但当两者剂量各自减少一半时，其诱导分化作用却增加，与任何一种药物单独使用时的诱导分化作用相似。结论DADS与AT—RA联合使用可以协同抑制HL-60细胞的生长，剂量减半合用时可协同对HL-60细胞的诱导分化作用。     

全反式维甲酸对急淋白血病骨髓基质细胞粘附能力的影响

目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）对急性淋巴细胞白血病（ALL）骨髓基质细胞（BMSC）粘附能力的影响。方法 将ATRA加进骨髓基质细胞培养体系，培养18h后用流式细胞仪检测6例ALL骨髓基质细胞表达粘附分子ICAM－1和VCAM－1阳性率，用MTT方法检测ALL骨髓基质细胞对正常骨髓造血细胞或淋巴瘤Raji细胞的粘附率。结果 药理浓度的ATRA（1．0μmol/L）使ALL骨髓基质细胞ICAM－1表达明显增高（P＜0．05），使ALL骨髓基质细胞对正常骨髓造血细胞或肿瘤细胞的粘附率均明显增高（P＜0．05）。结论 药理浓度的ATRA可增强ALL骨髓基质细胞对正常造血细胞和肿瘤细胞的粘附能力。     

全反式维甲酸对HL-60细胞核因子-κB、NO 表达的影响与细胞周期的关系

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞分化的机制.方法分为对照组(NS)、维甲酸组(ATRA)、增强组(ATRA SNP)、抑制组(ATRA L-NMMA),分别加入HL-60细胞培养液中共同培养48h后收集细胞,用流式细胞仪检查HL-60细胞核因子-kB荧光强度、细胞周期比例,硝酸还原酶法测定NO.结果与对照组相比,各组HL-60细胞核因子-kB活性均降低,以增强组最低,差异均有显著性(P＜0.05),NO表达水平升高,其中维甲酸组、增强组差异均有显著性(P＜0.05),而抑制组差异没有显著性(P＞0.05);与对照组相比,各组G1期细胞比例均升高,差异有显著性(P＜0.05);与维甲酸组相比,抑制组G1期细胞比例降低但差异没有显著性(P＞0.05),增强组G1期比例升高且差异有显著性(P＜0.05).结论全反式维甲酸通过下调核因子-kappaB活性,同时增强NO合成是其抑制HL-60细胞增殖抗肿瘤机制之一.     

Cyclin D1和CDK4在哮喘大鼠气道重塑中的表达和盐酸氨嗅索的干预研究

目的探讨哮喘大鼠气道重塑的机制和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）在哮喘气道重塑中的表达以及盐酸氨嗅索的干预效果。方法应用卵蛋白激发大鼠建立哮喘气道重塑模型。60只SD大鼠分为3组：正常组,哮喘组和干预组,每组20只。采用免疫组化技术和计算机图象分析系统对大鼠气道Cyclin D1、CDK4的表达和气道重塑进行研究。结果哮喘纽气道壁均可见明显炎症细胞浸润,气道壁厚度增加,Cyclin D1、CDK4阳性表达增加,与正常组和干预组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论Cyclin D1、CDK4参与哮喘气道重塑的发生,盐酸氨嗅索可减少气道壁炎症细胞浸润,预防气道重塑。     

人白血病细胞 HL-60凋亡启动时相的亚细胞蛋白质组学研究

目的：建立全反式维甲酸（ ATRA）诱导HL-60细胞凋亡启动模型,分析凋亡启动时细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白的表达情况。方法：体外培养HL-60细胞,氮唑蓝（ MTT）比色法检HL-60细胞测增殖活性,流式细胞术（ FCM）检HL-60细胞测细胞凋亡和细胞周期分布;高速离心法分离对照组与凋亡启动时相的HL-60细胞核、膜和细胞器以及细胞质等组分蛋白;双向电泳（2-DE）HL-60细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白,图像分析软件分析2-DE图谱,筛选差异表达蛋白,并进行液相色谱串联质谱（ LC- MS/MS）鉴定。结果：ATRA明显抑制HL-60细胞增殖,并随浓度、时间的增加,抑制作用也越显著;以1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞48 h早期凋亡比例为13.21％,细胞形态也存在明显变化;筛选出22个差异表达蛋白点,其中5个蛋白在凋亡启动时表达上调,15个蛋白表达下调,2个蛋白只在凋亡启动时表达;它们的功能主要涉及与细胞凋亡相关的蛋白,与细胞分化、增殖相关的蛋白和其它蛋白。结论：1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞生长48 h,成功建立细胞凋亡启动模型;凋亡启动时相的HL-60细胞质、膜和细胞器以及细胞总蛋白的表达都存在差异,这些差异表达蛋白可能在细胞凋亡启动时起重要作用。     

戊四氮点燃大鼠海马区NF-kB mRNA、IL-6 mRNA动态表达及地塞米松的影响

目的 探讨戊四氮慢性致痫大鼠海马区NF-kB mRNA、IL-6 mRNA动态表达及地塞米松的抗痫机制。方法 将Wistar大鼠随机分为对照组（C），非用药组（P），用药组（D），应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）对不同时间点（4、7、11、15d）海马区NF-kB mRNA、IL-6 mRNA进行检测，同时根据行为学和脑电图确定大鼠痫性发作。结果 用药组与非用药组NF-kB mRNA、IL-6 mRNA海马区表达同对照组相比明显升高（P〈0．05），并于点燃前达到高峰；同时用药组较非用药组相同时间点表达减少（P〈0．05），且用药组点燃时大鼠痈性发作程度明显轻于非用药组，发作潜伏期也明显延长。结论 NF—kB、IL-6参与了癫痫发病的整个过程，地塞米松通过抑制海马区NF-kB mRNA、IL-6 mRNA表达起到抗痫作用。     

Ras、CyclinD1在宫颈癌中的表达及黄芩素对其表达的影响

目的：观察通过使用不同浓度黄芩素干预宫颈癌细胞后， Ras及CyclinD1 mRNA及蛋白水平表达变化。方法体外培养Hela细胞株，分为空白对照（control）组、100μmol/L干预组、200μmol/L干预组。培养24 h后，相差显微镜下观察细胞形态及数量的变化；流式细胞技术检测细胞周期的变化；RT-PCR法检测Ras及CyclinD1 mRNA水平的表达变化。Western Blot法检测Ras及CyclcinD1蛋白水平的表达变化。结果黄芩素干预24 h后，与空白对照（control）组相比较，各黄芩素干预组细胞周期G1期受到阻滞，阻滞程度随黄芩素浓度增加而增强（P〈0.05）；Ras及CyclinD1的mRNA及蛋白表达与黄芩素干预浓度浓度相关，呈逐渐降低的趋势（P〈0.05）。结论黄芩素可通过抑制Ras信号通路，阻滞细胞周期G1期，影响细胞周期D1（CyclinD1）的表达，致宫颈癌Hela细胞凋亡。     

Apoptotic effect and mechanisms of AHPN on human skin malignant melanoma cell A375

Objective： To study apoptotic effects of synthetic retinoic acid 6-[3-（1-adamantyl）-4-hydroxyphenyl]-2-naphthalene carboxylic acid（AHPN） on human skin malignant melanoma A375 cells in comparison with the natural ligand all-trans-retinoic acid（ATRA） in vitro and the mechanisms related to the actions of AHPN. Methods：MTT assay was used to determine the anti-proliferative effects of AHPN and ATRA on A375 cells. Flow cytometry was performed to investigate the influence of AHPN and ATRA on cell cycle and cell apoptosis. In addition, transfection and luciferase activity assays were employed to explore the mechanisms of how AHPN executes its proapoptotic function. Results：Firstly, AHPN promoted apoptosis and GI arrest in A375 cells compared with ATRA. Secondly, the activity of NF-K B in A375 cells treated with AHPN increased 2-3 times compared with solvent DMSO treatment. Conclusion：AHPN, in comparison with ATRA, is a more effective alternative for therapy of malignant melanoma. The potentially proapoptotic function of AHPN requires activation of NF-K B.     

全反式维甲酸对人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）对体外培养人视网膜色素上皮（RPE）细胞增生的抑制作用及机制。 方法：采用传代培养的人RPE细胞,分成不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6和10^-5 mol•L ^-1的ATRA）和不同时间点（6、12、24、48、72和96 h）给药组,通过活细胞计数法、MTT比色法和流式细胞术分别检测ATRA对人RPE细胞增生的影响。 结果：ATRA给药组细胞生存率低于非给药组（P<0.01）。细胞增生的抑制率与药物剂量及时间呈正相关 (r₁=0.9926,P<0.05; r₂=0.9647,P<0.05)。与非给药组比较,ATRA给药组 RPE细胞周期中G₁期细胞增加（P<0.05),而G₀/G₁期细胞数明显减少(P<0.05）。结论：ATRA可能通过阻滞人RPE细胞周期对RPE细胞增生具有剂量依赖和时间依赖的抑制作用。     

双酚A及玉米赤霉烯酮对神经母细胞瘤细胞周期蛋白表达的影响

目的 探讨两种环境内分泌干扰物双酚A(bisphenol A,BPA)与玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞细胞周期素CyclinD1、CDK4、p21表达的影响.方法 SK-N-SH细胞经培养扩增后分为7组:组1,无干预(对照组);组2,加17β-雌二醇(E2);组3,加...     

HL—60细胞内一种新的全反式维甲酸应答基因的克隆

利用差示ＰＣＲ技术从ＨＬ－６０细胞内克隆出一个新的,差异表达的ｃＤＮＡ片段,并并其命名为Ｗ－１基因,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交证实,用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导ＨＬ－６０细胞分化时,Ｗ－１基因的转录水平在诱导早期增加而在诱导２４ｈ后关闭,推测Ｗ－１基因可能在ＨＬ－６０细胞早期分化中有一定作用。     

五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用及其机制

目的：探讨五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用,阐明其作用机制。方法：培养大鼠脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组及50、100和200mg·L^-1五味子甲素组,采用MTT法检测C6细胞增殖率,流式细胞术分析细胞周期百分率,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养上清中CyclinD1、Bax、Bcl-2和Casepase-3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,24和48h时50、100和200 mg·L^-1五味子甲素组细胞增殖率均明显降低（P < 0.01）,72h时100和200 mg·L^-1五味子甲素组细胞增殖率明显降低（P < 0.05或P < 0.01）。与对照组比较,200 mg·L^-1五味子甲素组SubG₁期细胞百分率升高（P < 0.05）,S期细胞百分率降低（P < 0.05）。与对照组比较,100和200mg·L^-1五味子甲素组细胞CyclinD1蛋白表达水平降低（P < 0.01）,不同浓度五味子甲素组Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05或P < 0.01）,200mg·L^-1五味子甲素组Bcl-2蛋白表达水平降低（P < 0.01）,不同浓度五味子甲素组Bax/Bcl-2比值明显升高（P < 0.01）,200 mg·L^-1五味子甲素组Caspase-3蛋白表达水平升高（P < 0.01）。结论：五味子甲素通过下调CyclinD1蛋白表达水平、上调促凋亡因子Bax和Bcl-2表达水平而抑制C6细胞的生长。     

1,25（OH）2D3和ATRA对HO8910生长的协同抑制作用

目的：通过单独或联合使用1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxy vitaminD3,1,25（OH）2D3]和全反式维甲酸（all trans rinoic acid,ATRA）,研究其对人卵巢癌细胞HO8910生长、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及维生素D受体（vitamin D recept VDR）及维甲酸α受体受体（retinoic acid receptorα,RARα）mRNA的表达变化,探讨其作用的分子机制。方法：选用人卵巢癌细株HO8910在体外进行培养,培养时分别添加1,25（OH）2D3、ATRA或二者联合,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率,流式细胞术（flow cytometry,FCM）进行细胞周期和细胞凋亡分析,用RT-PCR检测VDR及RARαmRNA的表达。结果：结果是单独或联合使用1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸诱导后,HO8910细胞生长均受到不同程度的抑制（P〈0.05）,并呈时间依赖关系;能够引起细胞周期时相的改变,G1细胞增多（P〈0.05）;能够诱导细胞产生细胞凋亡（P〈0.05）;能够上调VDR及RARαmRNA的表达（P〈0.05）,进而抑卵巢癌细胞增殖,其中以联合用药组最为显著。结论：说明1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸能抑制人卵巢癌细胞株HO8910生长;诱导细胞周期发生G1期阻滞,同时产生细胞凋亡作用;通过上调VDR及RARαmRNA的表达,从而抑制癌细胞增当1,25-二羟维生素D3与全反式维甲酸联合用药时,能够对HO8910细胞生长产生协同抑制作用。     

MicroRNA-494对胃癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的?探讨microRNA-494（miR-494）对胃癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法?选取2015年1月—2018年1月被陕西省肿瘤医院收治并行手术切除的60例患者的胃癌组织及对应癌旁组织（距肿瘤边缘>2?cm）标本。将胃癌细胞MGC803分为miR-494组和对照组。采用PCR检测胃癌组织及体外培养细胞中的miR-494表达水平。在MGC803细胞中过表达miR-494,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。PCR及Western blotting检测miR-494潜在靶点Cyclin D1的表达变化。结果?癌旁组织miR-494相对表达量较胃癌组织高（P?<0.05）。不同肿瘤直径、TNM分期miR-494相对表达量比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。对照组MGC803细胞miR-494相对表达量较miR-494组低（P?<0.05）。miR-494组OD值较对照组低（P?<0.05）。对照组CyclinD1 mRNA和蛋白相对表达量较miR-494组高（P?<0.05）。miR-494与CyclinD1免疫组织化学评分呈负相关（r?=-0.469,P?<0.05）。结论?胃癌组织中miR-494表达水平降低,过表达miR-494能通过下调Cyclin D1的表达发挥抑制胃癌细胞增殖和细胞周期进展的作用。