3种MAPK抑制因子对HepG2细胞中Smad2/3磷酸化的影响

目的研究3种MAPK抑制因子对TGF-β1活化的HepG2细胞中Smad2／3磷酸化的影响。方法采用MTT方法检测TGF-β1（9pmol）与HepG2共培养0．5、1、2、4、8、16h后，HepG2细胞增殖，TGF-β1（9pmol，0．5h）诱导HepG2细胞活化，在细胞活化前2h分别加入p38、ERK及JNK抑制因子（PD163169、SP600125、PD98059）与HepG2细胞共培养，Western blot方法检测3种抑制因子对HepG2细胞内Smad2和Smad3磷酸化的影响。结果TGF-β1（9pmol）作用0，5、1h时无明显促进HepG2细胞增殖作用，但作用2、4、8、16h均明显促进HepG2细胞增殖。TGF-β1（9pmol，0．5h）均可诱导Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化；JNK抑制因子（3、10μmol）与p38抑制因子（1、3、10μmol）可明显抑制Smad2C、Smad3L磷酸化，ERK抑制因子（1、3、10μmol）对Smad2／3磷酸化无明显影响。结论在HepG2细胞中，TGF-β1可能通过JNK、p38途径促进Smad2／3磷酸化。     

姜黄素对大鼠肝星状细胞中TGF-β调节的NADPH氧化酶4的激活及Smad信号通路的影响

目的：研究姜黄素潜在的抗纤维化作用,以及转化生长因子β( TGF-β)诱导大鼠肝星状细胞( HSC-T6)激活的机制。方法不同浓度的姜黄素(0、5、10、20、40μmol/L)处理HSC-T6后,用MTT法测定其对HSC-T6增殖作用的影响;用RT-PCR法检测其mRNA水平的表达;用Westem blot法检测表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分α1I胶原(Col1α1)、NADPH氧化酶4(NOX 4)、 Smad 2、Smad 3及其磷酸化的水平。结果40μmol/L的姜黄素组刺激HSC-T648 h后,其抑制率达到最大,显著低于仅TGF-β1刺激组、5、10及20μmol/L姜黄素组( P<0．05)。姜黄素可显著降低激活型HSC-T6的α-SMA、α1I胶原mRNA与蛋白表达,从而可以降低细胞外基质的沉积;有效降低了NOX 4的蛋白水平,减少了活性氧的水平;还明显降低Smad 2、Smad 3的磷酸化程度,呈浓度依赖性。结论姜黄素在体外能够明显地抑制HSC-T6激活,对肝纤维化的发生发展具有一定抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β诱导的NOX4的激活及Smad信号通路有关。     

Smad 2/3和Smad 4在子宫内膜癌中的表达及其相关性

目的 研究Smad2/3和Smad4在子宫内膜癌组织中的表达情况及二者的相关性.方法 采用免疫组化S-P法检测Smad2/3和Smad4在正常子宫内膜组织、非典型增生子宫内膜组织及子宫内膜癌中的表达.结果 Smad2/3和Smad4在子宫内膜癌中的表达阳性率均明显低于正常子宫内膜组织和非典型增生子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05).子宫内膜癌中Smad2/3的表达与手术-病理分期无关(P>0.05),与组织学分级有关,随组织学分级的增加其表达减少(P<0.05);Smad4的表达与手术-病理分期及组织学分级均无关(P>0.05).子宫内膜癌中Smad2/3与Smad4的表达呈正相关(P<0.05).结论 Smad2/3与子宫内膜癌的分化有关,Smad4与子宫内膜癌的恶性程度无直接相关,在已发生癌变的组织中可能不参与子宫内膜癌的侵袭及演进.Smad2/3与Smad4可能协同参与了子宫内膜癌的发生发展,联合检测Smad2/3与Smad4蛋白可能有助于评价子宫内膜癌的恶性程度及预后.     

虫草多糖对实验性大鼠Smad2/3 Smad7表达的影响

目的：探讨CCL4诱导的肝纤维化模型鼠肝组织Smad2／3，Smad7的表达及虫草多糖（Cordyceps Polysaccharide CP）抗肝纤维化的作用机制。方法：将40只大鼠随机型。行苏木素染色（HE）和特染2教员纤维染色（VG），判断肝组织炎症和纤维化的程度，免疫组化方法检测各组Smad2／3和Smad2／3的表达。结果：CP预防组和治疗组的肝组织炎症和纤维化程度明显低于模型组；Smad2／3在CP预防组和治疗组的阳性表达均明显低于模型组（P＜0．05）；Smad7在CP预防组和治疗组的阳性表达高于模型组（P＜0．05）：Smad2／3，Sinad7在CP预防组和治疗组的阳性表达高于模型组（P＜0．05）。Smad2／3，Smad7在CP预防组和治疗组的表达无差异性（P＞0．05）。结论：CP抗肝纤维化作用可能与抑制Smad2／3和促进Smad7的表达有关。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏Smad2/3表达的影响

目的观察银杏叶提取物(GbE)对肝组织Smad2/3表达的影响,探讨GbE抗肝纤维化的作用机制。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化,同时分别以200、100、50mg/(kg.d)的GbE进行干预,并设复方鳖甲软肝片为对照组,6周后取肝组织,原位杂交及免疫组化技术分别检测肝组织Smad2/3mRNA及蛋白的表达。结果模型组大鼠肝组织Smad2/3mRNA及蛋白的表达正常组明显增高,应用不同剂量的GbE及复方鳖甲软肝片干预后肝组织Smad2/3mRNA及蛋白较模型组显著下降。结论 GbE降低Smad2/3mRNA及蛋白表达可能是其抗肝纤维化作用的重要机制之一。     

退变颈椎椎间盘髓核中磷酸化p38 MAPK的表达

目的观察不同退变程度颈椎病患者椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)的病理改变及磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38mitogen activated protein kinase,p-p38MAPK)的表达差异,探讨颈椎椎间盘退变可能的分子机制。方法收集2008年10月至2009年5月在我院行手术治疗的35例颈椎病患者的NP组织,获取术前相应颈椎MRI(T2像正中矢状位)资料。其中男性25例,女性10例,年龄27~82岁,5例来自单间隙,18例来自两间隙,12例来自三间隙;4例为C3/4、12例为C4/5、14例为C5/6、5例为C6/7。19例NP组织用于普通病理和免疫组织化学染色,16例用于蛋白质印迹分析。采用颈椎椎间盘MRI退变分级系统评定术前NP组织标本相应MRI退变程度。观察不同退变程度时NP组织的病理改变及p-p38MAPK在NP组织中的定位;分析退变椎间盘中p-p38MAPK含量与其MRI退变程度间的关系。结果随着颈椎椎间盘退变程度加重,NP内胶原纤维逐渐增多、增粗、变性,甚至聚合成团,NP逐渐纤维化;p-p38MAPK定位于NP细胞胞核;NP细胞p-p38...     

NOX4/ROS/STAT3通路对肝星状细胞活化增殖的影响

目的 研究肝星状细胞活化及增殖过程中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)和信号转导与转录激活因子3(STAT3)表达的变化,并探讨NOX4抑制剂GKT137831是否可通过抑制NOX4,减少活性氧(ROS)的产生,抑制STAT3信号通路,抑制肝星状细胞活化与增殖。方法 将大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)分为4组：对照组、TGF-β1组、TGF-β1+GKT137831组、GKT137831组。DCFH-DA荧光探针法检测HSC-T6细胞内ROS水平,CCK-8法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR法检测NOX4、STAT3 mRNA的表达;细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测NOX4、STAT3、p-STAT3及α-SMA蛋白的表达。结果 与对照组相比,TGF-β1组HSC-T6细胞中NOX4 mRNA和蛋白表达上调,细胞内ROS水平升高,p-STAT3蛋白表达增加,细胞活化增殖能力升高(P<0.05);给予GKT137831处理后,HSC-T6细胞中NOX4 mRNA和蛋白表达下调,细胞内ROS水平下降,STAT3蛋白磷酸化减少,细胞活化增殖能力下降(P<0.05)...     

愈肝颗粒抗肝纤维化及其对Smad4、Smad7影响的实验研究

目的观察愈肝颗粒抗实验性大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。方法二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,以愈肝颗粒浸膏灌胃进行治疗。HE染色观测肝组织病理学变化并进行肝脏炎症活动度和纤维化程度计分,免疫组化检测Smad4和Smad7在肝内的表达及分布的变化,并用图像分析软件对它们表达的阳性区域面积及光密度进行半定量分析。结果愈肝颗粒组与模型对照组比较：组织病理学显示肝脏炎症及纤维化减轻。炎症活动度和纤维化程度计分明显降低。免疫组化中Smad4表达减少,阳性染色面积（PA）及光密度值（OD）降低,Smad7表达明显增多,PA及OD值增加,P值均〈0.01。结论愈肝颗粒能明显减轻肝脏炎症、坏死及肝纤维化,其作用机制与其下调Smad4,上调Smad7,重建R-Smad/I-Smad平衡有关。     

和厚朴酚通过抑制Smad2/3磷酸化对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的调控作用

目的 研究和厚朴酚通过抑制Smad2/3磷酸化对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的调控作用。方法 培养子宫内膜癌RL95-2细胞株并分组给药,对照组用不含药物的培养基处理,不同剂量和厚朴酚组分别用含有5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml和厚朴酚的培养基处理,15μg/ml和厚朴酚+20 ng/ml TGF-β1组用含有15μg/ml和厚朴酚和20 ng/ml TGF-β1的培养基处理。检测细胞迁移率,侵袭数目,迁移基因E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及侵袭基因MMP2、MMP9、MMP14的mRNA表达水平,p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平。结果 5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml和厚朴酚组RL95-2细胞的迁移率、侵袭数目、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、MMP14的mRNA表达水平、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平均低于对照组,E-cadherin的表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且和厚朴酚剂量越高、上述变化越显著;15μg/ml和厚朴酚+20 ng/ml TGF...     

Smurf2对肝纤维化中TGF-β/Smad通路的影响

转化生长因子β1(TGF-β1)在肝纤维化的发生、发展中起重要作用,它作为TGF-β1/Smad信号通路的起始因子激活下游信号,使处于非活性状态下的肝星状细胞分化为肌成纤维细胞,促进并维持了肝纤维化的发生。泛素化是体内蛋白质翻译后修饰并降解的重要途径之一,泛素-蛋白酶体途径中的泛素连接酶Smurf2通过多种途径抑制TGF-β1/Smad通路表达。Smurf2作为一种抗肝纤维化发生的酶受到广泛关注,但机制并未深入系统地被阐述。     

信号传导蛋白Smad2和Smad3的研究进展

Smad蛋自家族是近年来发现的新的细胞内信号转导蛋白,哺乳类中共发现了有8种不同的Smad蛋白.可分为3个不同的亚族:R-Smad、Co-Smad和I-Smad.Smad2和Smad3属于R-Smad,本文从Smad2和Smad3的结构、功能以及相关蛋白等多个方面探讨Smad2和Smad3在TGF-Bl信号转导中的不同作用.     

深低温停循环对大鼠额叶皮质Smad2和Smad4表达的影响

目的探讨深低温停循环对缺血缺氧大鼠额叶皮质信号转导分子2（Smad2）和信号转导分子4（Smad4）表达的影响.方法 40只SD大鼠经随机分组（其中4只为预灌注血液供体）后采用体外插管法建立大鼠闭胸式体外循环模型,三组动物分别经深低温停循环（DHCA,n=12,脑温〈20℃,停循环10 min）、常温停循环（NTCA,n=12,脑温36.5℃～37.5℃,停循环10 min）和常温不停循环（NC,n=12,脑温36.5℃～37.5℃）处理后,快速断头取额叶皮质,液氮保存.免疫组化染色后图像分析系统处理判断Smad2和Smad4在缺血早期大鼠额叶皮质的表达情况.结果 Smad2和Smad4在DHCA组中较NTCA组和NC组表达均有明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;Smad2和Smad4在NTCA组中较NC组表达有升高,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论缺血缺氧可诱导大鼠额叶皮质Smad2和Smad4的表达,而深低温可以进一步促进额叶皮质内Smad2和Smad4的表达,反应性地增强脑损伤保护因子TGF-β1的作用,从而发挥脑保护作用.     

Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的：研究细胞信号传导分子Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生发展的关系及意义。方法：选取53例乳腺导管癌和50例癌周正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织和癌周正常组织中Smad2和Smad4蛋白的表达水平,并评估二者的表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果：乳腺癌组织中Smad2蛋白表达水平明显高于癌周正常组织（Z=-2.08,P < 0.05）;乳腺癌组织中Smad4蛋白表达水平明显低于癌周正常组织（Z=-5.01,P < 0.01）。乳腺癌组织中Smad2和Smad4蛋白的阳性表达率与患者年龄无关（r=0.035,P > 0.05;r=-0.077,P > 0.05）,与肿瘤大小无关（r= 0.128,P > 0.05;r=0.133,P > 0.05）,与淋巴结转移无关（r=0.163,P > 0.05;r=0.006,P > 0.05）,与是否有远处转移无关（r=0.113,P > 0.05;r=0.126,P > 0.05）,与ER的表达无关（r=0.056,P > 0.05;r=0.047,P > 0.05）,与PR的表达无关（r=0.129,P > 0.05;r=0.107,P > 0.05）;但与HER2的阳性表达率呈负相关关系（r=-0.388,P < 0.01;r=-0.360,P < 0.01）,与乳腺癌病理分级呈负相关关系（r=-0.331,P < 0.05;r=-0.388,P < 0.01）;乳腺癌组织中Smad2与Smad4的表达呈正相关关系（r= 0.830,P < 0.01）。结论：Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为评估乳腺癌恶性程度及预后的重要生物学指标。     

人腱细胞Smad2、Smad4基因MH2结构域的克隆和序列鉴定

目的从人腱细胞内克隆转化生长因子－β特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ２、４的功能性结构域－ＭＨ２结构域。 方法　原代培养人腱细胞,从培养的细胞中提取总 ＲＮＡ,逆转录合成单链 ｃＤＮＡ;设计引物进行 ＰＣＲ,扩增 Ｓｍａｄ２、４基 因ＭＨ２结构域的基因片段,将其定向插入ｐＧＥＭ－Ｔ载体,转化大肠杆菌ＤＨ５α。挑选阳性克隆并进行核苷酸序列测定 分析。结果测序结果与 Ｇｅｎｅｂａｎｋ中克隆的基因序列完全一致。结论从人腱细胞中克隆成功 Ｓｍａｄ２、４基因的 ＭＨ２结 构域,证实了 Ｓｍａｄ２、４基因在人腱细胞中的表达;提示人腱细胞内存在 ＳＭＡＤ２、４信号转导途径,ＴＧＦ－β对人腱细胞 分化的调节可能是通过ＳＭＡＤ２、４信号转导途径实现的。     

Smad3对MDPC-23细胞矿化功能的影响

目的：探讨TGF-β1通路中信号分子Smad3对小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23细胞矿化能力的影响。方法：瞬时转染、酶动力学方法和放射免疫法检测。结果:在TGF-β1的作用下,Smad3可以发生转位表达,由细胞浆转入细胞核内。过表达野生型Smad3时,细胞裂解液和培养液中碱性磷酸酶活性均高于对照组( P < 0. 05),骨钙素分泌高于对照组( P < 0. 05)。结论：TGF-β1促进MDPC-23细胞矿化这一生物学效应的输出受Smad3信号分子的调节。     

Smad4及Smad7在胃癌组织中的表达研究

目的:研究Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达及作用.方法:病理学证实的胃癌根治术切除的胃癌组织标本78例,胃癌旁组织78例,采用SP免疫组织化学染色技术,检测Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达.结果:qDSmad4蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为69.23%,在胃癌组织中的阳性表达率为44.87%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率降低;有淋巴结转移者阳性表达率为23.25%,无淋巴结转移者的阳性表达率为71.43%,差别亦有统计学意义(P<0.01).②Smad7蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为17.95%,在胃癌组织中的阳性表达率为89.74%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率升高;有淋巴结转移者阳性表达率为97.67%,无淋巴结转移者的阳性表达率为80.00%,有淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者(p<0.05 .结论:①smad4蛋白在胃癌组织中低表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.②Smed7蛋白在胃癌组织中高表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P〈0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.     

Runx3和Smad4在胃癌中的表达及其临床意义

目的：研究Runx3、Smad4蛋白在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达差异及其与胃癌生物学行为的关系。方法：应用免疫组织化学法检测Runx3、Smad4蛋白在56例胃癌组织及40例癌旁组织中Runx3、Smad4的表达。结果（：1）胃癌组织中Runx3和Smad4阳性表达率分别为37.5%和44.6%,在癌旁组织分别为92.5%和87.5%。两种蛋白在胃癌组织表达差异具有显著性（P〈0.05）。Smad4的表达与胃癌不同分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期相关（P〈0.05）;Runx3的表达与胃癌不同分化程度、浸润深度、淋巴结转移（P〈0.05）相关,与临床分期无关（P〉0.05）。（2）Runx3与Smad4在胃癌组织中的表达呈正相关（P〈0.05,r=0.4264）。结论：Runx3、Smad4的低表达与胃癌的浸润和转移有密切的关系,在胃癌的发生、发展中起着不同程度的作用。     

Smad2,3,4,7蛋白在大鼠5/6肾切除肾衰模型中的定位和表达变化

目的　研究Smad2 ,3 ,4,7蛋白在 5 6肾切除模型中的定位和表达变化。方法　Wistar大鼠行 5 6肾切除 ,分别于模型 4、8、12周处死大鼠。用免疫组化检测Smad2、Smad3、Smad4和Smad7蛋白的定位和表达 ;纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量来判断。结果　Smad2、Smad3和Smad4主要在肾小球和肾小管上皮细胞内有表达 ,而Smad7主要在肾小球表达。随着肾功能衰竭的加重 ,肾小球Smad2、Smad3和Smad4蛋白表达逐渐增加 ,而Smad7蛋白表达却逐渐下降 ,并伴有肾组织羟脯氨酸含量的明显增高。结论　TGF β Smad信号通路参与了肾间质纤维化进程 ,Smad2 ,3 ,4高表达和Smad7负调控不足是本模型TGF β高表达导致肾小球硬化加重的主要原因之一。