阿魏酸对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

<正>阿魏酸化学名称为3-甲氧基4-羟基丙烯酸,是当归等抗骨质疏松中药复方制剂的组方中药所含的一种水溶性单体成分,是其主要活性物质之一,具有降低胆固醇、抗氧化、抗血小板聚集等功能~([1])。目前阿魏酸对心肌细胞、淋巴细胞活     

中药调节成骨细胞增殖、分化的研究进展

目的:系统了解中药对成骨细胞增殖、分化的影响。方法:以"成骨细胞""中药""细胞增殖""细胞分化""Osteoblast""Chinese medicine""Proliferation""Differentiation"等为关键词,在中国知网、Pub Med、万方数据等数据库中组合查询2010年1月1日-2020年5月31日发表的相关文献,对中药促进成骨细胞增殖、分化的研究进行汇总,梳理中药单体、提取物、方剂对成骨细胞增殖、分化的影响。结果与结论:共检索到相关文献75篇,其中有效文献42篇。具有促进成骨细胞增殖与分化作用的中药单体主要有皂苷类化合物、黄酮类化合物、香豆素类化合物以及一些多糖类、酚苷类、生物碱、萜类、木脂素等化合物,如黄芩甲苷,淡豆豉异黄酮、佛手柑内酯等;中药提取物有飞天蜈蚣七水提物、骨碎补醇提物、菟丝子醇提物等;中药方剂则以补肾活血方、骨康方为代表。目前,有关中药单体和中药提取物对成骨细胞影响的研究较多,而中药方剂较少。虽然现有研究已经明确了中药在促进成骨细胞增殖、分化方面的作用,然而各类中药促进成骨细胞增殖、分化的作用机理尚未得到完全揭示,导致中医药的优势和特色未能...     

氟化物对大鼠颅骨成骨细胞DNA损伤的研究

我国是地方性氟病发生率较高的大国，由于氟过量摄入导致了许多患者心、脑、肝和肾等器官病变。骨骼是氟在体内主要蓄积的部位，长期过量摄入可导致骨代谢紊乱，引起全身性骨骼病变，即氟骨症。已有研究表明高氟可影响骨细胞的生长和功能，且能引起成骨细胞(OB)凋亡，而氟能否直接引起OB的DNA损     

经典Wnt信号通路对成骨细胞增殖和分化的影响

成骨细胞中存在经典Wnt信号通路（即Wnt/β-catenin信号通路[1]）,其成分包括LRP5、β-catenin和GSK-3β等。这些成分在细胞中的改变可以影响成骨细胞的增殖和分化,进而影响骨的形成和重建。LRP5失活,β-catenin缺失时,经典Wnt信号通路受到抑制,成骨细胞的分化受到抑制,从而减少骨的形成。GSK-3β受到抑制时,可使成骨细胞中的特异性基因表达增加,从而增加成骨细胞的发生,促进骨的形成。经典Wnt信号通路对骨的生理活动具有重要意义,本文就经典Wnt信号通路对骨的增殖和分化的调节作一综述。     

补骨脂对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的观察由补骨脂乙醇提取物中分离得到的单一化学成分对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响。方法在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同化合物,检测细胞内碱性磷酸酶含量,并用MTT法检测细胞增殖活性。结果由补骨脂乙醇提取物中分离出的化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ能提高大鼠颅骨成骨细胞ALP活性及促进其增殖。结论化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ可促进成骨细胞分化、增殖,为补骨脂治疗骨质疏松的有效成分。     

大黄素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的　观察大黄素(emodin)对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化作用特点及量效关系,并观察大黄素对骨保护蛋白(Osteoprotegerin,OPG)mRNA表达的影响。方法　在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的大黄素,加药后 1、2、3d用MTT法检测细胞增殖, 3、5、7、9d用PNPP法检测细胞内碱性磷酸酶含量,加药后 7d检测细胞内OPGmRNA表达的量, 24d检测细胞上清中钙和细胞内羟脯氨酸含量。结果　大黄素能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性,实验中最佳作用浓度为 1×10-6 mol·L-1,最佳作用时间是 7d。大黄素能增加细胞内羟脯氨酸含量,促进OPGmRNA的表达。结论　大黄素可促进成骨细胞分化,增加OPGmRNA的表达。     

葛根素通过NO信号通路促进体外培养大鼠骨髓间充质细胞成骨性分化

目的 观察葛根素促进体外培养大鼠骨髓间充质细胞成骨性分化过程中是否激活NO信号通路。方法 一氧化氮合成酶阻断剂（nitric oxide synthase inhibitors,LNMA）预处理大鼠骨髓间充质细胞12 h后,使用葛根素处理骨髓间充质细胞不同时间,观察其对骨钙素（osteocalcin,OC）含量,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性和钙化结节染色,Runx-2、OSX、BMP-2和Collagen-1 mRNA表达水平的影响,以及NO和3''-5''-环鸟苷一磷酸（cGMP）含量的影响。结果 葛根素对骨髓间充质细胞增殖活性存在浓度的依赖性,其中1×10^-6 mol·L^-1促进其增殖活性最高,并显著提高了该细胞中ALP活性。预先使用LNMA处理大鼠骨髓间充质细胞后,葛根素提高该细胞中ALP活性、OC含量、钙化能力和Runx-2、OSX、BMP-2和Collagen-1 mRNA的表达水平作用均受到抑制,以及葛根素提高NO和cGMP含量能力受到抑制。结论 葛根素能有效促进体外培养大鼠骨髓间充质细胞成熟与矿化,并需要NO信号通路的参与。     

大黄素对大鼠体外颅骨成骨细胞的影响

目的观察大黄素对体外大鼠颅骨成骨细胞细胞周期、骨钙素含量、骨结节数目和面积、Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法在成骨细胞体系中加入不同浓度的大黄素,应用流式细胞术、放射免疫测定法、茜素红染色法及RTPCR的方法观察大黄素对大鼠颅骨成骨细胞的增殖、骨钙素含量、骨结节数目和面积、Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。结果大黄素可刺激成骨细胞分泌骨钙素。低浓度的大黄素可上调Ⅰ型胶原基因的表达,高浓度时则降低Ⅰ型胶原的基因表达。结论大黄素可以刺激成骨细胞分泌骨钙素和增加Ⅰ型胶原mRNA的表达。     

唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

目的:观察唑来膦酸对大鼠成骨细胞生物学功能的影响。方法:体外培养的新生大鼠颅盖骨来源的成骨细胞,观察不同浓度(10-4M~10-11M)唑来膦酸对细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和矿化结节形成的影响。结果:唑来磷酸浓度≥10-5M时抑制细胞增殖,10-6M~10-11M则不影响细胞增殖;10-7M~10-11M对ALP活性没有影响,10-7M对矿化小结形成有抑制作用,10-11M则促进矿化功能。结论:唑来磷酸在低浓度时不影响骨形成,选择恰当的剂量和给药方案可助于发挥双磷酸盐抑制破骨作用的同时促进骨形成。     

葛根对大鼠成骨细胞增殖分化影响的血清药理学实验

目的：观察葛根含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响。方法：将32只SD大鼠随机分为实验组与对照组，在同等条件下制备葛根处理大鼠含药血清和对照血清，观察不同采血时间及血清添加量对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶（ALP）的影响。结果：葛根末次灌胃后1～2小时采血的含药血清对成骨细胞增殖和ALP的作用明显（P〈0．01），随着含药血清添加量的增加，对成骨细胞增殖和ALP的作用明显增强（P〈0．01）。结论：含葛根处理大鼠血清可促进成骨细胞增殖和分化。     

丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞bcl-2和bax表达的影响

目的：探讨丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及 bax、bcl-2表达的影响。方法取浓度为1.5＆#215;10-5个/ml的 RSC-364成纤维样滑膜细胞悬液100μl加入细胞培养板,培养24 h,加入含不同浓度丹参的培养液,采用 MTT法分析丹参对成纤维样滑膜细胞增殖抑制作用及其时效关系;免疫组化法检测 bcl-2、bax表达情况。结果丹参可明显抑制大鼠成纤维样滑膜细胞增殖,并显示出一定的量效和时效关系。丹参可显著上调大鼠成纤维样滑膜细胞 bax表达,下调 bcl-2表达,与空白对照组比较差异有统计学意义（ P 〈0.05）。结论丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖具有抑制效应,其作用机制可能与调控 bax、bcl-2表达有关。     

SLC34A2通过JAK-STAT信号通路调节肺癌肿瘤干细胞侵袭和增殖作用研究

目的 探讨SLC34A2对肺癌肿瘤干细胞(carcinoma-initiating cells,CICs)侵袭和增殖作用的影响及机制.方法 采用流式细胞仪分选技术从肺癌细胞株H1650中分选出CD44 +/CD133+的CICs;LV3-SLC34A2组沉默SLC34A2基因,LV3-NC组为对照.使用绿色荧光蛋白及免疫印迹法检测SLC34A2沉默效率及沉默效果;沉默SLC34A2后,免疫印迹法检测SLC34A2编码蛋白NaPi-Ⅱb的表达,使用Transwell侵袭实验检测对CICs侵袭能力的影响,肿瘤细胞成球实验检测对CICs增殖能力的影响,免疫印迹法检测JAK/STAT信号通路相关蛋白的表达情况.结果 与LV3-NC组比较,LV3-SLC34A2组中NaPi-Ⅱb蛋白的表达水平下降(P＜0.05).沉默SLC34A2可以有效抑制肺癌CICs的侵袭和增殖能力(P＜0.05),并使JAK/STAT信号通路中的P-JAK和P-STAT蛋白表达相应降低(P＜0.05).结论 沉默SLC34A2基因可能通过调控JAK/STAT信号通路来抑制肺癌CICs的侵袭和增殖作用.     

芍药苷调控环磷酸腺苷 /蛋白激酶 A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路对脑卒中大鼠的影响

目的探讨芍药苷调控环磷酸腺苷( cAMP)/蛋白激酶 A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白( CREB)通路对脑卒中大鼠的影响。方法该研究起止时间为 2019年 12月至 2020年 12月。 40只 SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、药苷组(灌胃 30 mg/kg芍药苷)、 H89组［腹腔注射 1 mg/kg H89(PKA抑制剂)］、芍药苷 +H89组(灌胃芍药苷后腹腔注射 H89)芍,除假手术组仅进行动脉分离,其余各组均构建缺血性脑卒中模型,模型构建成功后进行药物干预,持续给药 2周,模型组、假手术组以生理盐水代替。根据 Zea Longa评分法对各组大鼠进行神经功能缺损评分, Morris水迷宫测定大鼠记忆行为学能力,酶联免疫吸附测定( ELISA)试剂盒检测大鼠血清炎性因子水平,苏木精 -伊红( HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化,蛋白质印迹法检测大鼠脑组织 cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组脑组织受损严重,大鼠神经功能缺损评分、血清中炎性因子水平显著升高( P<0.05)记忆行为学能力、脑组织中 cAMP［( 0.31±0.05)比( 1.03±0.23)］、 PKA［( 0.30±     

青蒿琥酯抑制人喉癌细胞株Hep-2增殖及对MEK／ERK与NF-kB通路的影响

目的观察青蒿琥酯（Art）对人喉癌细胞株Hep-2增殖及MEK／ERK、核转录因子-KB（NF-KB）信号通路的影响。方法培养人喉癌细胞株Hep-2，四甲基偶氮唑蓝（MTF）比色法、克隆形成实验及流式细胞术测定不同浓度Art对细胞增殖的抑制作用；Western-blot测定p-ERK1／2、NF-KB（p65）及NF-KB抑制物（I-KBα）的表达。结果MTT实验、克隆形成实验及流式细胞术均显示，Art明显抑制Hep-2细胞增殖，Western-blot显示Art明显抑制p-ERK1／2及NF-KB（p65）表达及增强I-KBα表达。结论青蒿琥酯可抑制人喉癌Hep-2细胞株增殖，其途径与下调MEK／ERK、NF-KB信号通路有关。     

人脐带问充质干细胞体外培养、鉴定及其诱导分化的研究

目的通过体外分离、培养及鉴定人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）,探讨其多向分化潜能。方法取正常足月新生儿脐带,采用组织贴壁培养法分离原代hUCMSCs,观察细胞生长形态。采用流式细胞仪技术检测hUCMSCs细胞表型及细胞周期。通过成神经细胞诱导和成脂肪细胞诱导,鉴定hUCMSCs的多向诱导分化能力。结果成功分离和培养hUCMSCs原代细胞,经流式细胞仪鉴定高表达间质细胞标志CD44和CDl05,阳性率为96．73％和96．10％,整合素受体CD29阳性率为99．53％;低表达造血系标志CD34和CD45阳性率为0．80％和1．91％,人白细胞抗原HLA-DR阳性率为1．41％。细胞周期检测hUCMSCs主要处于G0／G1期。hUCMSCs成神经细胞诱导,出现神经元样细胞;免疫组化检测神经巢蛋白（Nestin）呈阳性表达。hUCMSCs成脂肪细胞诱导,出现空泡样脂肪滴,油红O染色可见脂质沉积。结论hUCMSCs具有多向分化潜能,可跨胚层诱导分化为多种组织类型的细胞。     

Notehl对人脐带问充质干细胞增殖、黏附及迁移影响的体外研究

目的探讨Notchl基因的重组腺病毒转染对人脐带间充质干细胞（humanumbilicalcordmesenchymalstemcells,hUCMSCs）增殖、黏附及迁移能力的影响。方法按照不同腺病毒感染hUCMSCs分为实验组（Ad-Notchl）、阴性对照组（Ad—GFP）与空白对照组。以最佳MOI转染hUCMSCs,观察细胞形态变化以及GFP蛋白的表达。比较3组细胞增殖能力、细胞周期、黏附能力及迁移能力。WesternBolt检测3组细胞Notchl蛋白的表达水平。结果荧光下观察腺病毒成功感染细胞,阴性对照组和实验组均出现了GFP的表达,且随培养时间的延长表达量增高,可见光下观察实验组细胞增殖速度较快。实验组细胞的增殖能力（48、72、96h）、黏附能力（12、16、20h）及迁移能力均较阴性对照组及空白对照组增强（P〈0．05）。WesternBolt检测实验组细胞Notchl蛋白的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论Notchl能明显促进hUCMSCs的增殖、黏附和迁移。     

金雀异黄酮促进体外培养大鼠骨髓间充质干细胞成骨性分化的机制研究

目的 探讨金雀异黄酮促进体外培养原代大鼠骨髓间充质干细胞(rats bone marrow mesenchymal stem cell,rBMSC)成骨性分化的机制.方法 体外分离培养rBMSC传代3次后,采用碱性磷酸酶(ALP)活性筛选金雀异黄酮最佳浓度,采用终浓度为1×10-5 mol/L的金雀异黄酮对体外培养原代rBMSC进行干预;药物干预后48和72 h采用甲基噻唑基四唑(MTT)测定细胞增殖情况;在干预后3、6、9、12和15 d测定ALP活性、钙盐沉积量;干预后24、48和96 h检测OPG和RANKL mRNA表达水平.结果 金雀异黄酮组处理rBMSC 48和72 h后光密度值高于对照组(P＜0.05);干预rBMSC 12和15 d后金雀异黄酮组ALP活性高于对照组,干预6、9、12和15 d后钙盐沉积量高于对照组,干预24、48和72 h OPG mRNA水平高于对照组,干预72 h RANKL mRNA高于对照组,干预48 h OPG/RANKL高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论 1×10-5 mol/L金雀异黄酮可促进体外培养rBMSC成骨性分化,其作用可能是通过OPG/RANKL途径实现的.