8-异戊烯基柑橘素促进体外骨髓基质干细胞成骨性分化的研究

目的研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养于含体积分数为10%FBS的DMEM-F12培养液中。以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为指标,96孔板梯度筛选作用最佳浓度。增殖分析采用MTT法。以1×10-6 mol.L-1的最佳浓度作用并成骨性诱导(1×10-7mmol.L-1地塞米松、10 mmol.L-1β-甘油磷酸钠和50 mg.L-1抗坏血酸)培养的d 4、8、12、16测ALP活性、钙盐沉积量,d 16进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RT Real-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的基因表达情况。结果 8-异戊烯基柑橘素不能促进BMSCs增殖,但8-异戊烯基柑橘素在1×10-6 mol.L-1时能促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA表达水平。结论 8-异戊烯基柑橘素可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值。     

人工培养冬菇菌丝体中抗血栓形成成分的分离和生物学性质

从人工培养冬菇菌丝体中用阳离子交换纤维素层析分离,获得一种具有抗血栓形成作用的蛋白质,分子量为1.75×10~4u,等电点为4.3,给大鼠iv10~(-6)mol1/kg,能完全预防体外血栓形成,IC_(50)为4.4×10~(-7)mol/kg。无论是体内或体外,都具有对抗胶原引起的血小板聚集作用,体外全对抗浓度为7.5×10~(-5)mol/L,其IC_(50)为4×10~(-5)1/L,体内剂量1.25×10~(-5)mol/kg(iv)时,血小板聚集抑制率可达60%,抗血凝的最低浓度为3 ×10~(-6)mol/L。     

CCK-8对大鼠肺间质巨噬细胞cAMP-PKA信号通路的激活作用

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)cAMP-PKA信号通路的激活作用。方法分离纯化大鼠PIMs,采用放射免疫分析法测定细胞内cAMP含量,放射激酶法测定PKA活性,受体拮抗剂的IC50值由对数-几率单位法求得。结果正常对照组大鼠静息状态下PIMscAMP含量和PKA活性分别为(2.04±0.13)nmol·g-1和(118.3±11.2)nmol·min-1·g-1。低浓度CCK-8[(10-12～10-10)mol·L-1]对细胞内cAMP含量和PKA活性没有影响(与正常对照组比较:P>0.05);高浓度CCK-8[(10-9～10-5)mol.L-1]可明显提高细胞内cAMP含量和PKA活性(与正常对照组比较:P<0.05)。10mg·L-1脂多糖(LPS)刺激大鼠PIMs,可明提高细胞内cAMP含量和PKA活性,分别为(5.15±0.12)nmol·g-1和(188.6±13.5)nmol·min-1·g-1。不同浓度的CCK-8与LPS共同孵育PIMs,细胞内cAMP含量和PKA活性的变化趋势与CCK-8作用于静息状态下大鼠PIMs的变化趋势完全相同。CCK受体拮抗剂丙谷胺、CR-1409、CR-2945可呈剂量依赖性地抑制CCK导致的cAMP含量的升高,它们的IC50值分别为(0.5×10-6、4.1×10-6、7.2×10-4)mol·L-1。丙谷胺、CR-1409、CR-2945也可明显减弱CCK-8所导致的PKA活性的升高;其中,丙谷胺的抑制作用最强,CR-1409次之,CR-2945的抑制作用最小。结论CCK-8可剂量依赖性地激活静息状态和LPS诱导的大鼠PIMscAMP-PKA信号转导途径,这可能是CCK抗炎作用的分子机制之一。CCK激活cAMP-PKA通路是通过CCK受体来实现的,且CCK-AR的作用比CCK-BR的作用更为明显。     

前列腺素E_2及硝苯吡啶对某些免疫功能的影响

PGE_23×10~(-7)～3×10~(-6)mol/L及硝苯吡啶5×10~(-6)～1×10~(-5)mol/L对ConA诱导的淋巴细胞增殖有明显抑制作用。药物作用48h后洗去药物,加入致裂原后继续培养细胞,结果发现硝苯吡啶的抑制作用已完全逆转,而PGE_23×10~(-6)mol/L的抑制作用则部分逆转。当低浓度PGE_2(3×10~(-3)mol/L)与硝苯吡啶(1×10~(-6)mol/L)同时作用于脾细胞时,可见两者作用正巧相加,无明显拮抗与协同作用。PGE_26×10~(-6)mol/L及硝苯吡啶1×10~(-5)mol/L对巨噬细胞移动有直接抑制作用。用~(51)Cr标记调理的绵羊红细胞方法证明低浓度PGE_2对巨噬细胞吞噬功能有增强,而硝苯吡啶预培养对吞噬功能影响不大。     

葛根素通过NO信号通路促进体外培养大鼠骨髓间充质细胞成骨性分化

目的 观察葛根素促进体外培养大鼠骨髓间充质细胞成骨性分化过程中是否激活NO信号通路。方法 一氧化氮合成酶阻断剂（nitric oxide synthase inhibitors,LNMA）预处理大鼠骨髓间充质细胞12 h后,使用葛根素处理骨髓间充质细胞不同时间,观察其对骨钙素（osteocalcin,OC）含量,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性和钙化结节染色,Runx-2、OSX、BMP-2和Collagen-1 mRNA表达水平的影响,以及NO和3''-5''-环鸟苷一磷酸（cGMP）含量的影响。结果 葛根素对骨髓间充质细胞增殖活性存在浓度的依赖性,其中1×10^-6 mol·L^-1促进其增殖活性最高,并显著提高了该细胞中ALP活性。预先使用LNMA处理大鼠骨髓间充质细胞后,葛根素提高该细胞中ALP活性、OC含量、钙化能力和Runx-2、OSX、BMP-2和Collagen-1 mRNA的表达水平作用均受到抑制,以及葛根素提高NO和cGMP含量能力受到抑制。结论 葛根素能有效促进体外培养大鼠骨髓间充质细胞成熟与矿化,并需要NO信号通路的参与。     

苦杏仁苷对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响

目的 研究苦杏仁苷(AD)对骨质疏松(OP)大鼠骨折愈合的影响及其可能的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和低、中、高剂量实验组及抑制药组,每组12只。用双侧卵巢切除手术构建OP大鼠模型,造模成功后,低、中、高剂量实验组大鼠腹腔注射0.1、0.5、1.0 mg·kg^-1 AD,抑制药组腹腔注射5.0 mg·kg^-1H-89[环腺苷酸/蛋白激酶A/环腺苷酸反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)通路抑制药]+1.0 mg·kg^-1AD,假手术组和模型组腹腔注射等量的0.9%NaCl,每天1次,连续90 d。用显微计算机断层扫描技术观察大鼠股骨微结构;通过骨科生物力学测试评估大鼠股骨生物力学状况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清骨钙素(OC)和Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX-Ⅰ)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、cAMP的含量;用试剂盒检测大鼠血清中氧化应激产物的水平;用蛋白质印迹法检测大鼠骨组织中碱性磷酸酶(ALP)及cAMP/PKA/CREB信号通路蛋白(p-PKA/PKA、p-CRE...     

甘草酸单铵对体外培养人和大鼠淋巴细胞前列腺素和DNA合成的影响

本文测定了不同浓度的甘草酸单铵(AG)对体外培养人和大鼠淋巴细胞的~3H胸腺嘧啶核苷(~3HTdR)参入抑制率及PGI_2和TXA_2合成的影响。结果表明:AG在1.5×10~(-7)和3×10~(-7)时增加~3HTdR参入抑制率。利用RIA方法测定了AG对淋巴细胞PGI_2和TXA_2的影响,发现在4×10~(-7)mol/L、4×10~(-8)mol/L和4×10~(-11)mol/L的AG作用下,可显著降低TXA_2的释放,而对PGI_2的释放无显著影响。     

新类型酸性色素定量胺类化合物的研究:羊毛罂粟蓝测定胺类药物

前报报道了自70种色素中研究选出测定胺类的两种色素之一:二甲苯蓝(XC),本文报道另一种色素:羊毛罂粟蓝(EG)。经研究得出:EG对亲脂性较大的胺,苯乙托品(Ⅰ)的检出限为15ng/ml,苯乃辛(Ⅱ)为20 ng/ml,其吸收系数(E_(1cm)~(1%))(Ⅰ为36.89×10~2,Ⅱ为24.36×10~2)为溴百里酚蓝(BTIJ)的4.6～5.9倍。EG—胺配合物的氯仿液呈绿蓝色,λ_(max)635.5nm。测定时色素浓度应为2×10~(-3)mol/L。检量线在0～7(Ⅰ)与0～10(Ⅱ)μg/ml为直线。EG—胺配合物的分子比在EG浓度为2×10~(-3)mol/L时,EG:Ⅱ=1:1;2×10~(-4)mol/L时则为0.5:1。Ⅰ则在EG浓度不同时分子比基本不变,为1.3:1。用EG测定Ⅰ或Ⅱ0.2μg/ml时,CV在±5%以内;2.5,5.0,10.0μg/ml时为±1～2%。EG与XC一样,为文献上尚未用来测定胺类的新类型酸性色素,属同一类,其基本构造为:■     

西地那非促进体外培养大鼠骨髓间充质干细胞的成骨性分化

目的研究西地那非对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bone marrow stromal stem cells,rBMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,贴壁筛选法培养rBMSCs,每3天换液1次,9d后传代培养。采用终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1的西地那非进行药物干预,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养后9d的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出最佳浓度。以最佳药物浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较西地那非组和不加药的对照组之间的钙化结节数量及阳性克隆数(colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP);提取Total RNA,Real-Time PCR检测Runx-2与Osterix mRNA的表达情况;Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果西地那非剂量依赖性抑制细胞的增殖,但可强烈促进成骨性分化,最佳药物浓度为1×10-5mol·L-1。该浓度下的西地那非可明显增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨相关的转录因子Runx-2与Osterix mRNA的表达,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌。结论浓度为1×10-5mol·L-1的西地那非可明显促进rBMSCs的成骨性分化,提示西地那非在具备其他药理作用的同时,也有较强的抗骨质疏松活性,具备开发为抗骨质疏松药物的潜力。     

变价态唐松草新碱—PVC膜离子选择电极的研制及解离常数的测定

本文研制了以四苯硼—唐松草新碱缔合物为电活性物质的变价态唐松草新碱—PVC膜电极。电极膜按电活性物质:PVC:DBP为1:8:8组成。该电极在pH 5.0～6.0,Ⅰ=0.05的NaCl—HCl溶液中Nernst响应范围为1×10~(-3)～1×10~(-5)mol/L。电极斜率为58.2 mV/logc。检测限为2.5×10~(-6)mol/L。用直接电位法考察了TDH~+,TDH_2~(++)共存时溶液pH和电极斜率S的关系。用S—pH关系,测定了25℃,Ⅰ=0.05时的Ka_1值为(2.5±0.2)×10~(-4),用E—pH关系,测定了25℃,Ⅰ=0.05时的Ka_2值为(8.1±0.9)×10~(-8)。     

二甲双胍对晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨二甲双胍对晚期糖基化终产物( AGE)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法 采用传代细胞培养法培养VSMC细胞;将100、200、400mg/L的AGE分别作用于VSMC,且设200 mg/L BSA组与空白对照组;10-5、10-3、10-3mol/L的二甲双胍+200 mg/L的AGE分别作用VSMC,于加药后12、24、48及72 h观察增殖变化;后用四氮唑蓝法测定其吸光度值.结果 各浓度AGE组在不同时间均能促进VSMC增殖;其中,100 mg/L AGE组12 h时对VSMC就有增殖作用,而200 mg/L AGE组增殖作用最明显,且在24h作用最强;400mg/L组同200 mg/L组相比无统计学差异(P＞0.05);各浓度二甲双胍组在24h、48 h、72 h各组均能抑制VSMC增殖,相比均有统计学意义(P＜0.05);各浓度二甲双胍组相比,10-4mol/L、10-3 mol/L组24h抑制作用最强,经比较有统计学意义(P＜0.05).结论 二甲双胍对AGE诱导的VSMC增殖有抑制作用.     

蛇床子素对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3d后首次换液,9d后传代培养。培养基中蛇床子素终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养d4、8、12、16测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量,d15进行钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix与Runx-2的基因表达情况。结果蛇床子素剂量依赖性抑制BMSCs增殖,但能明显促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进骨钙素分泌、钙盐沉积量、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA表达水平。结论终浓度为1×10-5mol·L-1蛇床子素能明显促进BMSCs的成骨性分化,证明蛇床子素是中药蛇床子抗骨质疏松的有效成分。     

5-Aza-CdR与低浓度CDDP联合用药对胃癌细胞系生长及DAPK1的影响

目的研究5-Aza-CdR与低浓度CDDP联合用药对胃癌细胞系生长及DAPK1的影响。方法选择CDDP(1×10-6 mol/L)与1×10-6 mol/L的5-Aza-CdR分别处理体外培养的BGC823细胞与SCG7901细胞,5-Aza-CdR与CDDP联合处理体外培养的细胞后,用MTT法检测药物处理后的细胞增殖活性;RT-PCR法检测用药前后细胞中DAPK1的mRNA表达的变化。结果与单独用药组比较,胃癌细胞在药物联合作用组生长增殖活性明显被抑制。联合用药组DAPK-1基因的mRNA表达明显增加。结论 5-Aza-CdR与CDDP联用对胃癌细胞的生长抑制具有协同作用。     

17β-雌二醇对人成骨细胞株HOS TE85细胞增殖及胞内cAMP,cGMP,iNOS影响

目的观察１７β－雌二醇（Ｅ２）对ＨＯＳＴＥ８５细胞增殖及胞内ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ，ｉＮＯＳ影响。方法［３Ｈ］－ＴｄＲ参入，放射免疫及Ｌ－３Ｈ－精氨酸转化法。结果Ｅ２１．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１处理４８ｈ，细胞计数为（９４．３×１０７±７．５×１０７）个·Ｌ－１，对照组为（６５．０×１０７±５．９×１０７）个·Ｌ－１，［３Ｈ］－ＴｄＲ参入量增加４５．０％；细胞ｉＮＯＳ活性为（７３．０±６．６）ｐｍｏｌ·Ｌ－１·ｇ－１·ｍｉｎ－１（比对照组增加４６１．５％），ｃＧＭＰ为（０．６９±０．０３）ｐｍｏｌ·Ｌ－１·１０－８ｃｅｌ（比对照组增加３０５．９％）；抑制ｈＰＴＨ诱导胞内ｃＡＭＰ升高。结论Ｅ２能刺激成骨细胞增殖。Ｅ２可能通过影响胞内ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ，ｉＮＯＳ含量和活性而发挥作用。     

褪黑素对类风湿关节炎病人外周血淋巴细胞增殖反应的影响及其G蛋白-cAMP信号转导机制的研究

目的研究褪黑素（ＭＴ）对类风湿关节炎（ＲＡ）病人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）增殖反应的影响及其Ｇ蛋白 ｃＡＭＰ信号转导机制。方法淋巴细胞增殖法、ｃＡＭＰ放免测定及Ｇ蛋白功能分析。结果ＲＡ病人ＰＢＬ增殖能力低于正常人１０倍左右，ＭＴ在１×１０－８～１×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１能明显促进ＲＡ病人ＰＢＬ的增殖反应；ＲＡ病人ＰＢＬ的ｃＡＭＰ水平明显高于正常人，ＭＴ（１×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１）可部分使其降低，且ＭＴ的这一作用能被百日咳毒素（ＰＴ）取消。结论ＭＴ可促进ＲＡ病人ＰＢＬ的增殖反应，ＰＴ敏感的Ｇｉ蛋白 ｃＡＭＰ信号转导机制参与了ＭＴ上调ＰＢＬ的作用     

木犀草素对K562细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的　探讨木犀草素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期K562细胞分别加入0、10、25、50、100 μmol/L木犀草素培养24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;K562细胞分别加入0、25、50 μmol/L木犀草素培养48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;K562细胞分别加入0、10、50、100 μmol/L木犀草素培养48 h,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Cleaved-PARP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、断裂点簇集区蛋白（BCR）、c-abl癌基因1（c-ABL）BCR-ABL蛋白表达。结果　CCK-8检测结果显示,随木犀草素浓度增加及作用时间的延长,K562细胞增殖抑制率均呈增长趋势（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果显示,木犀草素0、25、50 μmol/L组K562细胞的凋亡率依次升高（分别为8.21%±0.55%、23.43%±1.50%和40.47%±2.97%）。Western blot结果显示,Bax、Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase3表达水平随木犀草素浓度的增加而升高（P＜0.05）。木犀草素0、10、50 μmol/L组PARP蛋白表达水平依次升高（P＜0.05）,100 μmol/L组与50 μmol/L组差异无统计学意义。100 μmol/L组Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平均低于其余组（P＜0.05）。50、100 μmol/L组p-AKT蛋白表达水平低于0、10 μmol/L组,100 μmol/L组低于50 μmol/L组。50 μmol/L组BCR-ABL融合蛋白表达水平高于0 μmol/L组,100 μmol/L组低于0、50 μmol/L组（P＜0.05）。结论　木犀草素可抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控BCR-ABL蛋白表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

Expression and function of β-arrestin 2 stimulated by IL-1β in human fibroblast-like synoviocytes and the effect of paeoniflorin

The aim of this study was to explore the expression and function of β-arrestin 2 in human fibroblast-like synoviocytes (FLS) stimulated by IL-1β and the effect of paeoniflorin (Pae). We isolated and cultured human FLS, which were stimulated by IL-1β. The FLS proliferations were detected by [3H] thymidine incorporation. The level of cAMP stimulated by IL-1β on different times was investigated by radioimmunoassay, and the activity of PKA was measured by luminescent kinase assay. The expression of β-arrestin 2 was measured by western blot. We found that the human FLS proliferation increased apparently in 24 h, and the activities of PKA and cAMP accumulation increased significantly in 6 h after stimulated by IL-1β, while cAMP accumulation and the activities of PKA decreased especially in 24 h when the expression of β-arrestin 2 increased significantly. Decreased cAMP accumulation and the increased expression of β-arrestin 2 may reveal a positive correlation with the FLS proliferation. Pae (10^- 5, 10^- 6, 10-7 mol?L^- 1) in vitro could suppress the FLS proliferation and the high expression of β-arrestin 2. The expression of β-arrestin 2 may have a positive correlation with the human FLS proliferation, while the activities of PKA and cAMP accumulation have a negative correlation with the proliferation. The increased β-arrestin 2 may down-regulate cAMP-PKA signaling pathway and promote FLS proliferation. Pae may suppress the expression of β-arrestin 2 and up-regulate cAMP-PKA signaling, which may be one of the mechanisms for the effects of Pae on inhibiting human FLS proliferation.