~（99m）Tc标记单克隆抗体对荷肺腺癌裸鼠的放射免疫显像研究

应用~（９９ｍ）Ｔｃ直接标记还原单克隆抗体的方法，对荷人肺腺癌裸鼠进行放免显像研究。经测定，此方法的标记率为９６％，经免疫组化法及间接免疫荧光法证实，标记后抗体仍保持较好的免疫活性。在荷瘤裸鼠体内的分布实验表明，经尾静脉注射标记抗体１６小时，在肿瘤组织中出现相对较高的特异性浓聚。γ－闪烁图显示出清晰的肿瘤图像。     

特异性抗肝癌噬菌体单链抗体的应用研究

目的体外观察特异性抗肝癌(HCC)噬菌体单链抗体(ScFv)对HCC细胞生长和凋亡的影响.方法通过构建的特异性抗HCC噬菌体ScFv库在大肠杆菌HB2151中表达,制备游离ScFv,应用细胞培养、DNA凝胶电泳和流式细胞仪(FCM)技术检测抗体对HCC细胞生长和凋亡的影响.结果特异性抗HCC噬菌体ScFv处理的HCC细胞的生长速度明显减慢,克隆形成和附壁能力减弱,细胞存活率降低,DNA凝胶电泳可见典型凋亡梯状带;FCM检测发现抗体处理后HCC细胞凋亡率达32.6%,明显高于对照组(P＜0.01).结论应用噬菌体表面呈现技术和基因克隆技术构建的特异性抗HCC噬菌体ScFv具有抑制HCC细胞生长、促进HCC细胞凋亡的功能.     

基于外标记的图像配准在放射免疫显像图像融合中的应用

目的：本研究旨在验证外基准标记物在肿瘤患者单光子发射计算机断层术（single photon emission computed tomography，SPECT）放射免疫显像与CT图像融合中的临床应用价值。方法：将外标记物固定于6例肿瘤患者背部体表后，分别行SPECT放射免疫显像和cT扫描，并行图像配准融合。结果：6例患者的放射免疫显像图像能够精确地与CT图像进行融合，肿瘤病灶定位准确。结论：通过外标记物配准可以实现放射免疫显像与解剖显像图像进行融合，提高诊断定位的精确性。     

人源抗肝癌单链抗体库的构建及初步鉴定

目的构建人源抗肝癌单链抗体基因噬菌体表面呈现文库。方法利用噬菌体表面呈现技术,构建基因文库,经过panning筛选富集后,用ELISA方法检验抗原结合活性。结果从30个噬菌体克隆中筛选到8个具有肝癌细胞株SMMC7721结合活性的阳性克隆。结论从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗肝癌单链抗体的策略是可行的。     

99mTc标记的抗CEA小分子嵌合抗体的体内分布与肿瘤显像

[目的]采用99mTc标记抗人CEA小分子嵌合抗体Rch24 F(ab')2,研究其在荷人结肠癌裸鼠体内的生物学分布及放射免疫显像的特征与应用价值.[方法]采用SnC12直接还原法标记抗体,快速薄层层析法(ITLC)测定抗体的标记效率、放化纯度和体外稳定性,ELISA检测标记抗体的免疫比活性.荷人结肠癌裸鼠尾静脉注射99mTc-Rch24 F(ab')2后,研究标记抗体在裸鼠体内的生物学分布,并进行肿瘤显像.[结果] 99mTc-Rch24 F(ab')2的标记率为90％,放化纯度＞95％.99mTc-Rch24 F(ab')2的放射比活为840MBq/mg,免疫比活性为65.7％.标记抗体24h时放射性脱落小于5％.荷瘤裸鼠注射99mTc-Rch24 F(ab')2 3h后即可观察到肿瘤影像,5～24h均可获得清晰的肿瘤影像,标记抗体在体内呈肿瘤靶向性分布,12h时肿瘤的摄取和多数脏器T/NT比值均达到最高水平.[结论]99mTc-Rch24 F(ab')2在体内靶向分布于结肠癌肿瘤组织,具有较高的T/NT比值并可在肿瘤局部滞留,注射99mTc-Rch24 F(ab')25h后肿瘤成像满意.99mTc-Rch24 F(ab')2在临床肿瘤的放射免疫分子显像诊断中具有良好的应用前景.     

用^99mTc标记大肠癌单克隆抗体的放射免疫定位研究

目的：Ｈｂ３是一株针对大肠癌相关抗原ＣＡ－Ｈｂ３的ＩｇＭ型单克隆抗体，免疫组织化学民大肠癌组织反应的阳性率为８６．４％，与正常大肠组织无反应。为确定Ｈｂ３用于放射免疫定位诊断大肠癌的可能性和实用价值进行了本研究。方法：采用羟基磷灰石层析法纯化抗体，冷消化法制备片段Ｆ（ａｂ‘）２，标记方法采用ＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ为还原剂、直接法标记＾９９ｍＴｃ，所用放射性剂量为１５－４０ｍＣｉ，显像用ＳＰＥＣＴ，显     

188Re标记CEA嵌合人源化抗体在荷人结肠癌裸鼠的放射免疫显像研究

背景与目的：癌胚抗原（carcinoembbryonic antigen,CEA）在多种肿瘤,尤其是结肠癌中高表达,抗CEA抗体在人结肠癌的诊断治疗中具有良好的应用前景。本研究采用^188Re标记CEA嵌合抗体,研究其在荷人结肠癌裸鼠体内的生物分布及放射免疫显像。方法：用氯化亚锡还原法标记CEA嵌合抗体及其亲本鼠单抗C50,薄层层析法鉴定标记抗本的标记率、放化纯度及体外稳定性,ELISA鉴定标记后的免疫活性,研究^188Re-CEA嵌合抗体在荷人结肠癌裸鼠体内的分布及放射免疫显像效果,并与C50鼠单抗的显像效果进行比较。结果：^188Re-CEA嵌合抗体的放化纯度大于95%;比活为36MBq/mg;免疫活性为61%;薄层层析示其在体外稳定。^188Re-CEA嵌合抗体的生物学分布显示：注射后24h,肿瘤与肾脏、血液的放射性比值分别为0.75、0.99,与其余各脏器的放射性比值均大于1.78;48h,肿瘤与肾脏、血液的放射性比值分别为1.02、1.12,与其余各脏器的放射性比值均大于2.08。20h后,肿瘤显影清晰。CEA嵌合抗体的放射生物学特性及显像效果与C50鼠单抗基本相同。结论：^188Re-CEA嵌合抗体在裸鼠体内放射免疫显像显示出良好的肿瘤特异性,且显像速度较快,可显示的肿瘤最小可达0.5cm。CEA嵌合抗体降低了免疫原性,在人体内显像更优于其亲本鼠单抗C50。     

~(99m)Tc(Ⅴ)-DMSA在肿瘤诊断中的应用

五价锝标记的二巯基丁二酸 (99m Tc( ) -DMSA)是近年来研究较多的肿瘤阳性显像剂 ,其在甲状腺髓样癌、软组织肿瘤、头颈部肿瘤、骨转移瘤等多种恶性肿瘤的显像诊断中显示了较高的灵敏度和特异性 ,在恶性肿瘤诊断中有着广泛的应用前景。现对 99m Tc( ) -DMSA在肿瘤显像诊断中的应用予以综述     

乳腺癌单链抗体制备及其在荷人乳腺癌裸鼠中的放免显像

目的：制备抗乳腺癌单链抗体,用于荷瘤裸鼠的放免显像研究。方法：提取乳腺癌膜抗原,制备抗乳腺癌单克隆抗体M4G3,用Pharmacia噬菌体单链抗体制备系统得到可溶性具有抗乳腺癌活性的ScFv抗体,利用环DTPA法标记核素99^mTc,进行体外培养的乳腺癌细胞系MCF-7和荷瘤小鼠体内定位显像。结果：免疫组化显示单链抗体与乳腺癌膜抗原有较强的亲和力,并在体外培养的乳腺癌细胞及荷瘤小鼠体内显像成功,且在抗体注射第3-5天显像最清晰。结论：提示M4G3的ScFv可在乳腺癌的放射免疫显像和定位诊断研究中发挥作用,值得进一步研究。     

^99mTc-HL91与^99mTc-MIBI在鼻咽癌显像中的对比研究

[目的]对比鼻咽癌^99mTc—HL91与^99mTc-MIBI显像的差异。[方法]对24例鼻咽癌患者面罩固定．用GE配置2．5mA X-线球管Hawkeye SPECT分别进行^99mTc-HL91与^99mTc-MIBI断层显像，观察鼻咽肿瘤以及转移淋巴结对HL91和MIBI的摄取情况并计算肿瘤与后颈肌肉摄取比值，采用卡方检验比较两者在显示鼻咽肿瘤和转移淋巴结方面的差异，采用t检验比较两者肿瘤与后颈肌肉摄取比值的差异。[结果]24例鼻咽肿瘤HL91显像均显示，而MIBI仅显示20例（x^2=4．36，P=0．037）。15例有淋巴结转移的患者中．HL91显示14例，MIBI仅显示10例（x^2=3．33．P=0．068）。鼻咽肿瘤与后颈肌肉摄取HL91和MIBI的比值分别为2．25±0．54，2．02±0．81（t=3．46，P=0．001）；而淋巴结转移病灶分别为2．44±0．30，1．92±0．69（t=2．62，P=0．029）。T1-2与T3-4期肿瘤与后颈肌肉摄取HL91以及MIBI的比值均无统计学差异；N1和N2-3期淋巴结与后颈肌肉摄取HL91以及MIBI的比值也无统计学差异。[结论]^99mTc—HL91显像显示鼻咽肿瘤的价值优于^99mTc-MIBI。T分期和N分期不影响肿瘤摄取HL91和MIBI。     

结肠癌单抗MC5的噬菌体呈现型单链可变区片段的制备

背景与目的：MC5是一种特异性良好的针对人结肠癌的鼠源性单克隆抗体,而将鼠源性抗体小型化可使其用于在体研究时引起人抗鼠抗体反应的可能性大大降低。本研究的目的是制备MC5的噬菌体呈现型单链可变区片段（ScFv)。方法：从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体的重,轻链可变区DNA（VH和VL DNA）,两者经linker DNA连接形成ScFvDNA,将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7辅助噬菌体感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv,以高表达MC5结合抗原的细胞株SW480对重组噬菌体抗体ScFv进行两轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现MC5 ScFv的噬菌体单克隆,经竞争ELISA对阳性克隆结合抗原的能力进行鉴定。结果：VH,VL和ScFvDNA分别约为340bp,320bp和750bp,在随机筛检的25个克隆中得到10个呈现MC5ScFv的噬菌体单克隆,其中结合抗原能力强的克隆有3个,结论：用噬菌体呈现技术成功地制备了单抗MC5的ScFv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。     

抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体的生物学活性研究

背景与目的目前,常规疗法已难以提高卵巢癌患者的生存率,已有实验数据及临床前试验结果表明,双特异性抗体能有效介导效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究旨在通过检测抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-I)的生物学活性,为其临床前试验及应用提供实验依据。方法观察BHL-I介导的外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)与靶细胞SKOV3结合、MTT法检测外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)增殖及PBL对靶细胞SKOV3杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBL分泌hIFN-γ、hTNF-α变化。结果BHL-I介导的花环形成率(15.7%)显著高于对照组(11.1%)(P<0.01);在抗原存在下,BHL-I显著促进PBMC增殖和PBL对靶细胞的杀伤(P<0.01),且杀伤率与花环形成率呈正相关(r=0.946);杀伤过程中上清液中hIFN-γ、hTNF-α显著增高(P<0.01)。结论BHL-I能介导PBL和SKOV3结合并活化PBL特异杀伤效应,杀伤可能与其hIFN-γ、hTNF-α表达增高有关。     

Radioimmunoscintigraphy of Intracranial Glioma Xenograft with a Technetium-99m-Labeled Mouse Monoclonal Antibody Specifically Recognizing Type III Mutant Epidermal Growth Factor Receptor

The type III mutant epidermal growth factor receptor (EGFR) is expressed on the cell surface of a subset of glioma, but not of normal tissues. In this study, we investigated the in vivo kinetics of 3C10 mouse monoclonal antibody (mAb), specifically recognizing the type III mutant EGFR (EGFRvIII), using athymic nude mice bearing the intracranial glioma xenograft overexpressing the EGFRvIII.Human glioma cell line, U87MG, expressing the wild type EGFR and the transfectant, named U87MGEGFR, expressing the EGFRvIII, were transplanted subcutaneously or intracranially to nude mice. 3C10 mAb labeled with a technetium-99m (^99mTc) was intravenously injected into these nude mice and then the mice were sacrificed at 24h later, and the ^99mTc-uptake by xenografts and major normal organs was measured to determine the biodistribution of mAb. Furthermore, at 3, 6 and 24h after injection of ^99mTc-labeled 3C10 mAb, whole-body scintigraphy was obtained with a gamma camera to localize the tumor site.3C10 mAb significantly accumulated to U87MGEGFR xenografts transplanted subcutaneously or intracranially in nude mice, showing high tumor-to-blood ratio of 10.30 and 4.01, respectively. In contrast, uptake of control antibody in the intracranial tumor was as low as 0.43. In scintigrams, intracranially transplanted U87MGEGFR xenografts were detectable at 3h after injection of ^99mTc-labeled 3C10 mAb.These results suggest that intravenously injected 3C10 mAb specifically accumulated to the subcutaneous or intracranial glioma xenograft expressing the EGFRvIII and 3C10 mAb is a potential diagnostic and therapeutic agent for patients with gliomas expressing the EGFRvIII.     

抗肝癌单链免疫毒素hdsFv-RC-RNase的导向治疗作用

目的：观察抗肝癌重组单链免疫毒素hdsFv-RC-RNase对荷人肝癌裸鼠移植瘤的导向治疗作用，并探讨其临床应用价值。方法：将原核表达载体TIG-hdsFv-RC-RNase转化E.coli BL21（DE3）plys中，利用IPTG大量诱导表达抗肝癌hdsFv-RC-RNase重组单链免疫毒素。表达产物在非变性条件下经Ni-NTA Agarose亲合层析法纯化并体外复性，利用细胞ELISA法检测其特异性结合体外培养的人肝癌细胞的免疫活性。建立荷人肝癌裸鼠移植瘤动物模型，初步评估其对荷人肝癌裸鼠移植瘤的导向治疗作用。结果：工程菌经IPTG诱导后，出现一条相对分子质量约为41000的新生蛋白带，且主要以可溶性形式表达。纯化后表达产物的纯度达到基本均一。细胞ELISA检测结果显示，纯化产物复性后能够与体外培养的人肝癌细胞特异性结合，而对正常肝细胞的结合能力非常弱，两者具有非常显著的差异（P〈0．01）。导向治疗结果表明，其对荷人肝癌裸鼠移植瘤治疗有效率为100％，与生理盐水组相比具有非常显著的差异（P〈0．01），抑瘤率达到79．38％。结论：成功获得了特异性强的有活性的抗肝癌重组单链免疫毒素hdsFv-RC-RNase，其对荷人肝癌裸鼠移植瘤具有一定的导向治疗作用，可能成为抗肝癌导向治疗药物。     

99mTc-甲氧异腈显像在分化型甲状腺癌转移灶诊断中的临床应用

目的:探讨99mTc-甲氧异腈(MIBI)显像在分化型甲状腺癌(DTC)转移灶诊断中的临床应用价值.方法:72例接受131I治疗的分化型甲状腺癌随访患者,以甲状腺球蛋白增高阈值＞10ng/ml为标准分为实验组(n=35)和对照组(n=37),常规行131I全身扫描(WBS),同时以99mTc-MIBI作为显像剂行核素肿瘤显像.以核素显像感兴趣区(ROI)技术,测定放射性(T/NT)比值,进行半定量分析;比较99mTc-MIBI显像及131I全身显像在诊断甲状腺癌转移灶灵敏性、特异性、准确性上的差异.结果:实验组,99mTc-MIBI显像和131 I全身显像T/NT比值分别为3.24 ±0.43和5.35 ±0.32,有明显差异;对照组T/NT比值分别为1.31 ±0.18和1.26±0.25,无明显差异;两种方法诊断分化型甲状腺癌转移灶的灵敏性、特异性、准确性分别为24.52％、64.28％、32.83％和92.45％、57.14％、85.07％.结论:99mTc-MIBI显像诊断分化型甲状腺癌转移灶灵敏性及准确性均低于131I全身显像,特异性无明显差异,但99mTc-MIBI显像可作为131I全身显像阴性分化型甲状腺癌随访方法的有益补充.     

^99mTc-HL91乏氧显像在肺部肿瘤应用中的研究进展

乏氧显像剂^99mTc-HL91能选择性地浓集于肿瘤的乏氧组织或细胞中,通过核医学显像能直接提供肿瘤组织乏氧程度和分布,对肿瘤的鉴别诊断及治疗有重要意义。本文介绍了^99mTc-HL91乏氧显像机制,阐述了其在肺部肿瘤中的应用研究进展,并对显像方法进行评价。     

Immunohistological evaluation of single small hepatocellular carcinoma with negative staining of monoclonal antibody Hepatocyte Paraffin 1

BACKGROUND AND OBJECTIVES: The sensitivity and specificity of the monoclonal antibody Hepatocyte Paraffin 1 (Hep Par 1) for hepatocellular carcinoma (HCC) are very high, and the usefulness for differential diagnosis of hepatic tumors has been reported. However, there are some cases of HCC with negative staining for Hep Par 1. We examined the histopathological features of HCC with negative staining for Hep Par 1. METHODS: We examined 69 samples of single nodular HCC less than 2 cm in greatest dimension, resected from 1985 to 1994 in our hospital, with immunohistological staining for Hep Par 1, cytokeratin 19 (CK 19), MUC-1 glycoprotein (MUC-1), and epithelial membrane antigen (EMA). RESULTS: Hep Par 1 staining was positive in 64 cases (93%) and negative in 5 cases (7%). With regard to the histological structure, 3 of the 5 negative cases were scirrhous HCC. With regard to the grade of histological differentiation, 2 cases were poorly differentiated HCC, 3 cases were moderately differentiated HCC, and no well-differentiated HCC was found in the negative cases. CK 19, MUC-1, and EMA staining were negative in all cases. CONCLUSIONS: It is necessary to recognize the existence of Hep Par 1 negative HCC, in particular scirrhous HCC. This may be due to a different mechanism in the earlier stage of hepatocarcinogenesis.     

Application of 99mTc labeled chimeric Fab fragments of monoclonal antibody A7 for immunoscintigraphy of pancreatic carcinoma

BACKGROUND: One of the reasons for the poor prognosis of pancreatic carcinoma is the difficulty of obtaining an early diagnosis of pancreatic carcinoma. One possibility is the application of radioimmunoscintigraphy using radiolabeled monoclonal antibodies (Mabs). METHODS: We labeled chimeric (human/mouse) Fab fragments of Mab A7 (chA7Fab) with (99m)Tc and examined the distribution of (99m)Tc-labeled chA7Fab in nude mice bearing human pancreatic carcinoma. RESULTS: The tumor accumulation of (99m)Tc-labeled chA7Fab was larger than that of (99m)Tc-labeled A7 from 2 to 6 hr after injection. (99m)Tc-labeled chA7Fab disappeared from blood more rapidly than (99m)Tc-labeled A7. For all resected normal tissues except kidney, the accumulation of (99m)Tc-labeled chA7Fab was low and similar to that of (99m)Tc-labeled A7. CONCLUSIONS: Because the half-life of (99m)Tc is short (6 hr), chA7Fab, which accumulates rapidly in tumors, may be a better carrier of (99m)Tc than intact Mab A7.     

鼻咽癌人源抗独特型单链抗体的制备及筛选

背景与目的:抗独特型抗体作为肿瘤抗原替代物可用于肿瘤治疗,这已在临床试验中得到证实。但由于目前所使用的抗独特型抗体多为鼠源性,用于人体可产生人抗鼠抗体反应,从而影响疗效。本实验拟构建噬菌体人源抗独特型抗体库,并从中筛选出能模拟鼻咽癌相关抗原的β型抗独特型单链抗体scFv(Ab2βscFv),以解决鼠源性抗独特型抗体用于临床所产生的人抗鼠抗体反应。方法:体外致敏并用EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)转化鼻咽癌患者的外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC),用RT-PCR分别扩增VH和VL基因并连接成scFv基因,将scFv基因与载体fUSE5连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型scFv库。在用单抗FC2对文库进行4轮筛选后,用SandwichELISA和结合抑制法从中筛选出β型Ab2scFv。结果:用单抗FC2体外致敏并经EBV转化的10例鼻咽癌患者的PBMC中,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经PCR分别扩增出5种VH(γ、μ)和7种VL(κ、λ)基因,经连接组成14种scFv基因。在与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061,得到库容为1.5×108的初级噬菌体抗独特型抗体库。经富集筛选后,从中随机挑取270个克隆进行ELISA筛选,得到91个Ab2scFv单克隆,阳性率为33.7%。再用结合抑制法从中初步筛选出5个可能为β型的Ab2scFv。结论:联     

抗人大肠癌单链抗体基因的克隆与表达

背景与目的：单链抗体相对于完整抗体具有免疫源性低、对肿瘤组织穿透力强的特点,日益成为肿瘤诊断和治疗的良好导向载体。本研究的目的是将抗人大肠癌单克隆抗体ND－1的重链可变区VH和轻链可变区VL基因借助一短肽序列（Gly4Ser)3进行重组,构建单链抗体基因ND－1scFv,并使其在大肠杆菌中表达。方法：采用RT－PCR技术从能够分泌ND－1单抗的鼠杂交瘤细胞中扩增VH和VL基因,通过重叠延伸拼接PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,体外构建ND－lscFv基因,经过常规转化和筛选,将其克隆至PET－28a( )表达载体,由IPTG诱导在大肠杆菌BL21中表达为ND－lscFv与His-Tag的融合蛋白。表达产物用Ni-NTA resin亲和层析方法纯化,并采用ELISA方法检测其免疫活性。结果：序列分析表明,ND－lscFv基因全长732bp,VH354bp位于上游;VL330bp位于下游。SDS－PAGE显示,重组蛋白相对分子量30kDa,与预期结果一致。scFv表达产物以不溶性包涵体形式存在,经亲和层析纯化后蛋白纯度达94％。ELISA结果显示scFv保留了与亲本抗体ND－1相似的免疫活性。结论：成功地构建了抗人大肠癌单链抗体ND－lscFv,并在大肠杆菌中获得了较高水平的功能性表达。