CD4+T细胞细胞因子测定及在SLE治疗中的意义

目的　研究外周血CD4+ T细胞细胞因子测定对SLE患者治疗及疗效监测的意义。方法　 37例SLE患者和15例对照组应用流式细胞仪测定外周血IFN γ、IL 2和IL 4在CD4+ T细胞内的分泌。结果　活动期SLE患者IFN γ和IL 2在CD4+ T细胞的表达率较正常对照组显著降低 (P <0 .0 1) ,IL 4在CD4+ T细胞的表达率与对照组比较无明显差异 (P >0 .0 5 )。静止期SLE患者IFN γ、IL 2和IL 4在CD4+ T细胞的表达率与对照组比较无明显改变 (P >0 .0 5 )。IFN γ和IL 2降低的SLE患者发病年龄小 ,病情较重。结论　CD4+ T细胞细胞因子的测定可用于指导SLE患者的治疗及疗效监测。     

转染外源性FasL的CD34+细胞诱导同种抗原特异性T细胞凋亡的实验研究

为探讨通过Fas/FasL途径选择性去除移植物中成熟T细胞的可能性 ,本研究借助反转录病毒途径 ,以FasL基因转染骨髓CD34+ 细胞 ,与经过富集的T细胞进行单向混合培养 (刺激细胞 /效应细胞比例为 5∶1) ,加入或不加入IFN γ ,IL 2 ,应用原位末端标记法 (TUNEL)和流式细胞术 (FCM)检测培养 5天后的细胞凋亡率 ,并比较两种细胞因子对移植物中CD34+ 细胞的影响。以转染外源FasL的CD34+ 细胞为刺激细胞 ,T细胞凋亡率为 (12 .1±1.5 ) %〔对照组为 (3.2± 1.1) % ,P <0 .0 1〕 ;经IFN γ或IL 2作用后 ,转染细胞诱导T细胞的凋亡率分别上升至(2 0 .1± 2 .3) % ,(17.6± 1.3) % (P <0 .0 1) ;且IL 2对CD34+ 细胞Fas抗原的表达无明显影响。上述结果表明 ,转染外源FasL的骨髓CD34+ 细胞可诱导同种抗原特异性T细胞凋亡 ,IFN γ和IL 2增强上述致细胞凋亡作用 ,且IL 2更有利于临床应用 ;提示该方案可选择性清除移植物中同种抗原特异性T细胞 ,可望为临床上防治移植物抗宿主病 (GVHD)提供新的途径     

白细胞介素2激活骨髓抗骨髓瘤活性的研究

目的　探讨重组白细胞介素2(rIL 2)激活的骨髓(ABM)抗骨髓瘤活性的免疫学机制。方法　应用rIL 2体外分别激活多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓及正常对照骨髓,同时设未激活骨髓(NBM)为对照。用MTT比色分析法测定正常对照组的ABM对U266细胞的杀伤活性,应用流式细胞仪检测培养72h后MM组骨髓瘤残余病变标志(CD45-CD38+CD138+细胞百分率)的变化,ELISA法检测MM组及正常对照组不同时间段ABM、NBM培养液中TNF α、IFN γ的水平,并进行比较和相关性分析。结果　正常对照组NBM 72h对U266细胞的杀伤率为( 43. 20±12. 39 )%, 24h杀伤率为(26. 53±5. 48)%,ABM 72h对U266细胞的杀伤率为( 69. 70±26. 57 )%, 24h杀伤率为( 34. 25±11. 93)%, 24h及72h的ABM细胞杀伤活性均较NBM增高,其中72hABM与NBM对U266细胞杀伤率的差异有统计学意义(P<0. 05);MM患者骨髓经rIL 2激活72h后CD45-CD38+CD138+细胞的百分率明显下降[激活前为(8. 46±3. 66)%,激活后为(4. 79±1. 56)%, P<0. 05];正常骨髓及MM患者骨髓经rIL 2激活后,随着培养时间的延长,培养液中TNF α、IFN γ的含量增加,无论24h或72h,两组ABM中TNF α、IFN γ的水平均较NBM明显增高(P<0. 05);正常对照组ABM 24h及72h培养液中TNF α、IFN γ的水平分别与本组同时相的细胞杀伤     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞与CD34+CD59-细胞生物学性能的研究

目的 探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患CD34^ CD59^ 细胞的特性及PNH克隆呈优势造血的可能原因，以探索PNH发病的内在机制。方法 用免疫磁珠吸附法富集纯化CD34^ 细胞，再用流式细胞仪分选出PNH患的CD34^ CD59^ 细胞、CD34^ CD59^ 细胞及正常对照CD34^ 细胞。分别进行体外扩增液体培养2周，并对扩增前、后的细胞进行半固体培养。结果 ①PNH患CD34^ CD59^ 细胞与正常对照CD34^ 细胞形成集落形成单位(CFU)均在第7天达到扩增高峰，并且扩增后的细胞仍能保持CD59抗原，无GPI锚连蛋白的丢失。②正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于FHN患的CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^-细胞.③PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养，其形成CFU的能力无明显差异。④PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞在SCF IL3 IL6 FL Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo组合下液体培养，其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异。但在SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo GM-CSF组合下液体培养，CD34^ CD59^ 细胞的生存、增殖、扩增能力均明显强于CD34^ CD59^ 细胞。结论 ①正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于PNH患的CD34^ CD59^ 细胞。②PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养，以及在SCF IL3 IL6 LF Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Ep组合下液体培养，其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异，说明CD34^ CD59^ 细胞在造血能力上并无内在的优势。GM—CSF或许是使PNH克隆呈造血优势的原因之一。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者外周血T淋巴细胞亚群及活化分子表达的研究

目的　探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)患者T淋巴细胞的功能及活化状态与PNH临床的关系。方法　应用流式细胞术及免疫磁珠分选术 ,测定了 18例PNH患者外周血单个核细胞 (PBMNC)及CD59+ 和CD59-PBMNC中CD3 + 、CD4+ 及CD8+ 细胞表型 ,并测定了新诊断的未经治疗的 6例PNH患者外周血中NK细胞及CD4+ CD2 8+ /CD4+ 、CD8+ CD2 8+ /CD8+ 、CD4+ HLR DR+ /CD4+ 、CD8+HLR DR+ /CD8+ 及CD8+ CD3 8+ /CD8+ 淋巴细胞表面分子表达比值。结果　PNH患者PBMNC中CD3 +CD8+ /CD3 + CD4+ 细胞比值增加 ,为 1.2 2± 0 .5 1,对照组为 0 .86± 0 .2 7,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。分选后PNH患者CD59-PBMNC中CD3 + CD8+ /CD3 + CD4+ 细胞比值增加 ,为 2 .31± 1.5 6 ,CD59+PBMNC为 0 .6 2± 0 .2 7,两者比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。CD3 + CD8+ /CD3 + CD4+ 细胞比值与骨髓衰竭 (BMF)的级差相关分析呈正相关。PNH患者CD4+ CD2 8+ /CD4+ 细胞比值明显减少 ,为 0 .5 2±0 .11(对照为 1.0 0± 0 .0 6 ) ,而CD8+ HLR DR+ /CD8+ 增加 ,为 0 .4 5± 0 .2 6 (对照为 0 .10± 0 .0 6 )。结论　PNH患者CD3 + CD8+ /CD3 + CD4+ 细胞比值增加 ,病变表型细胞更易发生在CD8+ 细胞群中。CD4+ 细胞中CD2 8+ 辅助刺激因     

肺癌患者外周血有核细胞IL-2R、TNF-α及IFN-γ表达的检测及其临床意义

目的　探讨肺癌患者外周血有核细胞IL 2R(CD2 5 )、TNF α和IFN γ的表达规律及其临床意义。方法　用流式细胞术对 118例肺癌患者外周血表达IL 2R、TNF α和IFN γ有核细胞的检出率进行检测和分析。结果　肺癌患者IL 2R、TNF α和IFN γ的表达率显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,但其中未化疗者与正常对照组无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;化疗者表达率均显著高于未化疗者 (P <0 .0 1) ;在未化疗的患者中 ,伴转移者外周血有核细胞的IL 2R、TNF α和IFN γ的检出率均显著低于未转移者 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。结论　肺癌患者外周血有核细胞的IL 2R、TNF α和IFN γ表达的检测有助于化疗机制的解释和病人预后的判定     

小鼠骨髓来源的树突状细胞体外诱导分化的实验研究

目的　研究小鼠骨髓树突状细胞体外诱导分化、成熟及对T细胞增殖的影响 ,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤治疗的应用提供技术方法。方法　应用IL 4、GM CSF培养小鼠骨髓细胞 5～ 7d ,镜下观察细胞形态学变化 ;培养至第 5～ 6d ,加入黑色素瘤 (B16 )冻融抗原继续培养 1～ 2d ,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86 ,并与同种异体T细胞混合培养 72h ,终止培养前 16h加入 3H TdR(0 .5 μCi 孔 ) ,γ 液体闪烁仪测定cpm值。 结果　IL 4、GM CSF培养 3d可见细胞形态发生改变 ,细胞形状不规则 ,培养 5～ 6d时 ,有刺状突起、拉长 ,为典型树突状细胞形态学特征 ;抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达 ,IL 4 +GM CSF +TNF α组 (6 1.6 8% ,71.2 5 % )及IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组 (6 3.11% ,76 .88% )明显高于对照组 (2 .4 1% ,3.88% )及单纯IL - 4 +GM -CSF培养组 (2 1.86 % ,2 8.6 9% ) (P <0 .0 0 1) ,IL - 4 +GM -CSF +TNF -α组与IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组比较CD83、CD86表达没有显著性差异 ;液闪仪检测结果显示 ,IL - 4 +GM -CSF +冻融抗原组刺激T细胞增殖的能力明显强于其他组 ,且有显著性差异(P <0 .0 0 1,P <0 .0 5 )。结论　小鼠骨髓细胞体外培养可以成功诱导扩增出足够量树突状细胞     

白血病患者外周血IL-2、sIL-2R和IFN-γ测定的临床意义

目的　观察白细胞介素 2 (IL 2 )、可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)及γ 干扰素 (IFN γ)与白血病发病的关系及临床意义。方法　采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定 2 0例正常对照和 6 0例白血病患者治疗前后外周血单个核细胞 (PBMC)产生的IL 2、IFN γ和血清中sIL 2R的水平。结果　白血病患者治疗前IL 2、IFN γ水平低于正常对照组 ,而sIL 2R水平高于正常对照组 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;治疗后IL 2、IFN γ水平高于治疗前 ,而sIL 2R水平低于治疗前 ,二者差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　IL 2、sIL 2R和IFN γ的测定在白血病的治疗监测中有较好的应用价值。     

树突状细胞介导CIK细胞抗恶性肿瘤效应的实验研究

目的 研究人脐血来源树突状细胞（DC）和同源细胞因子激活的杀伤细胞（CIK）,共孵育后,获得的DC CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应.方法 获取脐血单个核细胞,用不同细胞因子分别诱导DC及CIK细胞.按1：5比例将DC和CIK细胞一起培养.且以单独培养的脐血CIK细胞为对照.采用流式细胞技术分析检测细胞免疫表型,细胞扩增倍数用台酚蓝染色方法计算,杀伤率测定采用MTT法,细胞因子IL 12,IFN γ,TNF-α用ELISA方法检测.结果 来源于脐血CIK细胞扩增倍数低于同源DC CIK细胞（P＜0.05）;混合培养物DC CIK细胞中,CD3 CD8,CD3＋ CD56＋双阳性免疫细胞数量较单纯CIK细胞明显增高（P＜0.05）;脐血DC,CIK细胞共培养3天,其上清液中细胞因子（IL 12,IFN γ及TNF-d）含量比CIK细胞上清液中高（P＜0.01,＜0.05,＜0.05）;当效靶比为2.5∶1-20∶1时,DC-CIK细胞对HL60,K562白血病细胞、U266多发性骨髓瘤细胞株及SMMC 7721肝癌细胞杀伤率均高于CIK细胞（均P＜0.05）.结论 脐血DC可增强同源CIK细胞的增殖活性和抗肿瘤效应.该研究为脐血DC CIK细胞的免疫治疗提供了实验和理论依据.     

胃肠道癌患者外周血CD8＋T细胞功能相关标志物的检测及意义

目的　探讨胃肠道癌患者外周血T细胞亚群和CD8 T细胞CD2 8共刺激分子等功能相关性标志物的表达及意义。方法　用三色或四色荧光标记流式细胞术检测 2 7例胃肠道癌患者及 16例正常对照的外周血淋巴细胞。结果　与正常对照组相比 ,肿瘤患者外周血T细胞标志如CD3 、CD4 、CD8 表达水平及CD4 /CD8 比值差异无显著性 ;CD8 CD2 8-T细胞显著增加 (P <0 .0 1) ,而CD8 CD2 8 T细胞显著降低 (P <0 .0 5 )。表达HLA DR的活化CD8 T细胞显著增加 (P <0 .0 1) ,分泌IFN γ的CD8 T细胞 (Tc1)明显增多 (P <0 .0 1) ,而分泌IL 4的CD8 T细胞 (Tc2 )则正常人和肿瘤患者均很低。患者CD8 T细胞CD2 8及IFN γ的表达变化与肿瘤分期无关。结论　胃肠道癌患者中CD8 T细胞存在系统性活化的表现 ,其机制可能与CD2 8/B7以外的信号传递有关。胃肠道癌患者体内Tc1细胞的增加与肿瘤的分期缺乏明确关系。     

Impaired growth and elevated fas receptor expression in PIGA(+) stem cells in primary paroxysmal nocturnal hemoglobinuria

The genetic defect underlying paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) has been shown to reside in PIGA, a gene that encodes an element required for the first step in glycophosphatidylinositol anchor assembly. Why PIGA-mutated cells are able to expand in PNH marrow, however, is as yet unclear. To address this question, we compared the growth of affected CD59(-)CD34(+) and unaffected CD59(+)CD34(+) cells from patients with that of normal CD59(+)CD34(+) cells in liquid culture. One hundred FACS-sorted cells were added per well into microtiter plates, and after 11 days at 37 degrees C the progeny were counted and were analyzed for their differentiation pattern. We found that CD59(-)CD34(+) cells from PNH patients proliferated to levels approaching those of normal cells, but that CD59(+)CD34(+) cells from the patients gave rise to 20- to 140-fold fewer cells. Prior to sorting, the patients' CD59(-) and CD59(+)CD34(+) cells were equivalent with respect to early differentiation markers, and following culture, the CD45 differentiation patterns were identical to those of control CD34(+) cells. Further analyses of the unsorted CD59(+)CD34(+) population, however, showed elevated levels of Fas receptor. Addition of agonist anti-Fas mAb to cultures reduced the CD59(+)CD34(+) cell yield by up to 78% but had a minimal effect on the CD59(-)CD34(+) cells, whereas antagonist anti-Fas mAb enhanced the yield by up to 250%. These results suggest that expansion of PIGA-mutated cells in PNH marrow is due to a growth defect in nonmutated cells, and that greater susceptibility to apoptosis is one factor involved in the growth impairment.     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓造血细胞对粒细胞集落刺激因子反应的研究

目的　观察阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓造血细胞对粒细胞集落刺激因子(G CSF)的反应并研究其机制。方法　①用半固体培养基体外培养17例PNH患者和12名正常人骨髓单个核细胞(BMMNC),观察加与不加G CSF两组粒单核细胞集落(CFU GM)和集簇(cFU GM)形成情况。PNH患者骨髓GPI+CD34+和GPI-CD34+细胞表达粒细胞集落刺激因子受体(G CSFR、CD114)和干细胞生长因子受体(C KIT、CD117)的差异。②用流式细胞术检测20例初发PNH患者和12名正常对照BMMNC和CD34+细胞表面GPI锚定蛋白CD59以及CD114和CD117的表达。结果　①无G CSF及加G CSF培养PNH组cFU GM数量分别为( 112. 41±22. 74 )和( 133. 82±25. 85 ) /105BMMNC,均较正常对照的(190. 33±36. 05)和(309. 42±92. 94) /105 BMMNC少(P<0. 05);无G CSF及加G CSF培养PNH组CFU GM数量分别为(24. 29±9. 05)和(27. 53±10. 65) /105 BMMNC,也较正常对照的(77. 42±36. 01)和(98. 00±43. 14) /105 BMMNC少(P<0. 05 )。PNH组加G CSF后,cFU GM增加率为(20. 29±6. 82)% (P<0. 05),CFU GM增加率为(16. 45±3. 28)% (P>0. 05)。正常对照加G CSF后,cFU GM增加率为(56. 11±37. 59)%,CFU GM增加率为(48. 03±13. 60)% (P值均<0. 05),PNH组增加率均低于正常对照(P<0     

PNH患者骨髓CD34^＋CD59^＋细胞体外扩增及植入体内重建造血的活性研究

本研究应用BALB／c裸鼠为移植模型探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobin—uria，PNH）患者CD34^＋CD59^＋的增殖和重建造血的能力，为实现PNH患者自体骨髓移植或自体外周血造血干细胞移植提供实验依据。利用免疫磁珠双阳性分选法，从正常人及PNH患者骨髓中分离出两组CD34^＋CD59^＋细胞，分别进行体外扩增，并将体外扩增的正常人和PNH患者骨髓CD34^＋CD59^＋细胞分别输注给接受亚致死剂量照射的BALB／c裸鼠。应用流式细胞技术和DNA检测技术检测受鼠骨髓、脾脏和外周血中人CD45^＋细胞。结果表明：PNH组的CD34^＋CD59^＋细胞在体外生存、扩增能力似弱于正常人对照组。但CD34^＋CD59^＋细胞输注给受鼠后6周，在受鼠骨髓、脾脏和外周血中可检测到人CD45^＋细胞，PNH组受鼠CD45^＋细胞水平与正常人对照组相比，无统计学差异。结论：PNH患者CD34^＋CD59^＋细胞仍具有同正常人CD34^＋CD59^＋细胞相同的生物特性，能体外扩增并能保持正常干／祖细胞的特性。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓正常及异常造血细胞增殖…

探讨阵发性睡眠性蛋白尿症患者正常及异常造血细胞增殖及生存特性。方法：用ＣＤ５９单抗及单抗鼠ＩｇＧ免疫磁珠将６例者骨髓单个核细胞分选为ＣＤ５９＾＋及ＣＤ５９＾－两群,分别进行体外培养并与正常对照比较。结果：ＰＮＨＡ患者ＣＤ５９＾＋及ＣＤ５９＾－ＢＭＭＮＣ的体外增殖及生存能力增弱于正常ＢＭＭＮＣ;     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓中正常及异常造血干/祖细胞含量分析

OBJECTIVE: To explore the contributive role of CD34+ cell amount in pathogenesis of clonal dominance in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH). METHODS: Bone marrow nuclear cells (BMNCs) were doubly labeled by PE-conjugated anti-CD59 monoclonal antibody (McAb) and FITC-conjugated anti-CD34 McAb, and CD34+ cells contained in different cell populations were determined by flow cytometry. RESULTS: 1. CD34+ cells mainly appeared in window A (containing mainly of lymphocytes) and window D (composed of blasts, other immature cells and monocytes) in both normal controls and PNH patients. 2. The numbers of CD34+ cells in normal controls were (3,701 +/- 896)/10(5) cells and (11,373 +/- 1,574)/10(5) cells in window A and window D, respectively. Compared with normal controls, PNH patients possessed significantly decreased number of CD34+ cells [(1,215 +/- 749)/10(5) cells and (6,420 +/- 2,337)/10(5) cells in window A and window D, respectively]. 3. In normal controls, nearly all CD34+ cells in windows A and D expressed CD59 antigen (99.2% +/- 1.0% in A and 98.7% +/- 0.8% in D), whereas in PNH patients, the CD34+ cells clearly showed two immunophenotypes of CD34+CD59+ and CD34+CD59- with the latter being predominant in both window A and window D(CD59- cells constituting 79.3% +/- 15.5% and 85.9% +/- 7.8% of CD34+ cells, respectively). 4. The amounts of CD34+ cells in CD59+ populations [(463 +/- 276)/10(5) cells in window A and (3,841 +/- 1,188)/10(5) cells in window D] reduced to a greater extent than that in CD59- population [(2,603 +/- 2,084)/10(5) cells in window A and (7,105 +/- 2,739)/10(5) cells in window D]. CONCLUSION: Hematopoietic stem/progenitor cells in BMNCs of PNH patients are markedly decreased. Reduction of CD34+ cells in CD59+ cell population is even more obvious than that in CD59- population. The dominance of the abnormal clone in hematopoiesis might be a relative one in the setting of severely impaired normal hematopoiesis.     

裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓CD34+CD59+细胞的研究

应用BALB／c裸鼠为移植模型，将在体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）病人的CD34^＋CD59^＋细胞进行移植。研究其增殖能力和重建造血的情况，为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植（ABMT）或自体外周血干细胞移植（APBSCT）奠定基础。本研究利用免疫磁珠双阳性分选法。从PNH患者骨髓中分离出足够数量的CD34^＋CD59^＋细胞进行体外扩增，并将体外扩增的细胞输注给接受亚致死剂量照射的BALB／c裸鼠。结果显示：移植6周后，用流式细胞术和DNA检测方法均检测到裸鼠骨髓、脾脏和外周血中人的CD45^＋细胞，而接受PNH病人CD34^＋CD59^＋细胞移植后的裸鼠，其血常规指标有一定恢复，但并未完全恢复。结论：PNH病人骨髓CD34^＋CD59^＋细胞体外扩增后仍能保持造血祖细胞的生物特性，在照射的裸鼠中能重建造血。     

磁珠双阳性分选法在阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞体外扩增的应用

应用磁珠双阳性分选法在体外扩增阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患的CD34 CD59 细胞，为实现PNH患进行临床自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)奠定基础。流式细胞术分选虽然经常用于细胞纯化，但难于满足大规模临床细胞分选的需要。本研究利用免疫磁珠系统，应用隔夜孵育法去除第一次分选时CD34 细胞吸附的磁珠，经过两次磁珠双阳性分选，从PNH患骨髓中分离出足够数量的CD34 CD59 细胞，用于体外培养扩增。结果显示：磁珠双阳性法分选的CD34 CD59 细胞与磁珠—流式细胞术二步分选法比较，在细胞生存、增殖、扩增及形成造血集落形成单位(CFU)的能力上均无显性差异。结论：磁珠双阳性分选法可能推广应用于其它双阳性或多阳性细胞的分离纯化，尤其是造血干／祖细胞的分离纯化。     

三七皂苷对人骨髓CD34+造血干/祖细胞的增殖分化作用

为了探讨三七皂苷 (PNS)对人骨髓CD34+ 造血干 /祖细胞的刺激增殖和诱导分化的作用 ,用DynalM 4 5 0CD34+ 免疫磁珠阳性选择法获取高纯度的人骨髓CD34+ 细胞 ,采用多向祖细胞 (CFU Mix)体外集落培养和流式细胞术检测细胞增殖与分化。结果显示 :经免疫磁珠阳性选择 ,从骨髓细胞收获的CD34+ 细胞获得率为 (1.0 3±0 .74 ) % ,流式细胞术分析纯度达到 86 % - 93%。PNS 10mg/L和 2 5mg/L能刺激CD34+ 细胞增殖 ,使CFU Mix集落生成增加 ,2 5mg/L的PNS对CFU Mix产率提高 (34.7± 16 .0 ) % (P <0 .0 1) ,是促进造血的最适浓度 ;PNS2 5 ,5 0和 10 0mg/L时 ,能诱导CD34+ 细胞向粒系细胞分化 ,粒系表面标记CD33+ 和CD15 + 的细胞百分比均明显高于无PNS的对照组 ,而红系细胞表面标记CD71+ 和G A+ 细胞百分比则无明显变化。结论 :PNS对CD34+ 造血干 /祖细胞不但具有显著的刺激增殖作用 ,而且能够诱导其向粒系细胞定向分化的效应     

人参二醇促骨髓CD34+细胞增殖和分化的研究

本研究探讨人参二醇（PDS）对正常人骨髓CD34^＋细胞的促进增殖和诱导分化作用。用吸附单克隆抗体的免疫磁珠技术从正常人骨髓分离出CD34^＋细胞,采用琼脂半固体多向祖细胞集落（CFU-Mix）培养方法观察PDS对CD34^＋细胞的增殖作用;用液体培养使CD34^＋细胞增殖,并向红系、粒系定向生长,用流式细胞仪分析PDS诱导后细胞表面标记变化。结果显示：免疫磁珠分离CD34^＋细胞的获得率占骨髓有核细胞（MNC）的（1.0±0.15）%;活细胞比例占（95.6±1.2）%,CD34^＋细胞富集度达（86.8±2.8）%。中浓度PDS（25mg/L）能够有效地促进CD34^＋细胞增殖,生成CFU-Mix集落,提高率为（56.3±3.5）%,与对照相比较有显著差异（p〈0.01）。液体培养生成粒系、红系细胞的数量明显增高,与对照相比差异有显著性,提高率分别为（35.6±3.2）%和（22.3±2.1）%,与对照相比差异有显著性（p〈0.01）,且呈剂量依赖性。经PDS诱导14天后,细胞表面分化标记明显增高,CD33^＋细胞在PDS50mg/L时最高,CD71^＋细胞在25mg/L时最高,G-A^＋细胞在10mg/L时最高,而CD15^＋细胞数量无明显变化。结论：PDS不但促进CD34^＋细胞增殖,且能诱导其定向分化,提示PDS具有类似造血生长因子和协同生长因子的效应。