乙型肝炎病毒基因型分布及临床意义

乙型肝炎病毒(HBV)基因型呈一定的地理区域性分布,但是由于分析的标本有限,其结果并不完全一致。各地区优势基因型不同,故预后也不相同吐因此,本研究应用聚合酶链反应(PCR)微板核酸杂交一酶联免疫吸附(ELISA)技术}2_,调查了新疆地区HBV其I天l犁的钋布两苴I瞧廉音口     

定量PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及其临床意义

目的:了解不同临床类型乙型肝炎患者HBV DNA含量并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测163例乙型肝炎患者血清HBV DNA含量,应用ELISA法检测上述患者HBV感染血清免疫学标志物(HBV-M),并对两者进行比较。结果:血清HBV DNA水平在不同乙型肝炎临床类型中无显著性差异(P>0.05);与HBV-M对比,HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性病人的检出率为87.76％,HBsAg、抗-HBe、抗HBc病人的检出率为45.71％,HBsAg、抗-HBc病人的检出率为42.86％,抗-HBc单项阳性病人的检出率亦达40.00％;血清HBVDNA含量与黄疸的程度及转氨酶水平的高低未见相关。结论:提示HBV DNA的复制状态与不同乙型肝炎临床类型无明显相关关系;HBV DNA含量高低与肝功能受损程度亦无相关关系。     

两种检测乙肝血清学标志物方法的临床对比

目的 探讨时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)定量检测乙型肝炎病毒血清学标志物(HBV-M)与ELISA定性检测HBV-M的临床应用价值及关系.方法 采用TRFIA和ELISA法分别检测216份血清标本HBV-M,对结果进行分析,比较两种检测方法的结果异同.结果 TRFIA法的HBeAb检测结果与ELISA法比较差异有统计学意义(P<0.05),而其他单个HBV-M检测项目比较差异均无统计学意义(P>0.05).另外,TRFIA法和ELISA法两种检测方法在HBsAg、HBeAb、HBcAb三种血清学标志物,HBsAg、HBcAb二种血清学标志物组合模式中阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 TRFIA检测HBV-M比ELISA法敏感,可作为HBV指标定量的一种常规方法.     

不同方法检测乙型肝炎病毒血清标志物的差异

目的 分析不同方法及试剂检测乙型肝炎病毒血清标志物（HBV—M）的差异。方法我院门诊及住院患者48例,经雅培12000配套试剂检测为乙型肝炎表面抗原（HbsAg）阳性,乙型肝炎e抗原（HbeAg）测定值COI〈50。依据HBsAg定量．将患者分为：A组,HBsAg≥250IU/L,共16例;B组,HBsAg介于20～250IU／L,共10例;C组,HBsAg≤20IU／L．共12例。HBVM检测采用3种方法：（1）ARCHITECT12000型仝自动免疫分析仪及配套试剂;（2）ROCHEE1711型全自动免疫分析仪及配套试剂;（3）酶联免疫分析（ELISA）试剂。结果两种进口发光方法检测HBsAg全部吻合．但ELISA检测C组有4份为阴性。三种方法检测HBeAg与抗HBe差异明显．国产ELISA试剂对HBeAg与抗HBe检出率远远为低于发光法．对A组26份标本HBeAg全部漏检。三种方法检测48份血样抗-HBc的符合率为100％。结论 在HBV—M的5项指标中如有低值,使用不同试剂检测出现不同模式的机会升高。建议接受抗病毒药物治疗的患苕尽量选择存同一家医院并使用同一种试剂作长期观察。     

靶向核糖核酸酶对乙型肝炎病毒复制的作用

通过定量检测上清液中的乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)，进一步研究靶向核糖核酸酶对HBV复制的影响。     

DNA芯片技术检测乙型肝炎病毒及丁型肝炎病毒的初步研究

现分别针对乙型肝炎病毒（HBV），丁型肝炎病毒（HDV）基因保守区域设计多对聚合酶链反应（PCR）引物，打印制备成芯片，并用限制性显示（RD）技术标记样品，探索此方法制备基因芯片的可行性。     

PCR检测血清中HBV—DNA及其临床意义

应用聚合酶链反应(PCR)结合Southern blot核酸杂交和DNA直接杂交技术,检测50例乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同血清学标志的血清标本及5例无任何HBV血清学标志的血清标本中的HBV DNA,并与血清学检查结果比较。结果发现PCR结合Southern blot核酸杂交的灵敏度明显高于DNA直接杂交技术,而且还能直接反映患者血液是否有感染性。此外,前者还能直接反映病毒在体内的复制情况,澄清模棱两可的血清学结果。     

乙型肝炎病毒血清标志物EIA测定与定量定性PCR测定结果的比较

目的:探讨乙肝病毒血清标志物EIA测定法与定量定性PCR测定结果的关系。方法:从临床标本筛选300例HBsAg阳性血清,100例HBsAg阴性血清,50例抗HBs阳性血清,并采用定量定性PCR方法对其分别进行检测。结果:HBsAg阳性血清定性PCR阳性率为29.3％,定量PCR阳性率为56.0％,HBsAg阴性血清定性PCR阳性率为2.0％,定量PCR阳性率为8.0％,抗HBs阳性血清定性PCR阳性率为2.0％,定量PCR阳性率为12.0％。结论:PCR检测乙肝病毒的方法比血清标志物EIA法有更高的临床检出率,定量PCR比定性PCR有更高的临床检出率。     

慢性乙型肝炎病毒基因型与临床病理的关系

乙型肝炎病毒（HBV）在逆转录过程中由于不对称复制和缺乏校对酶的作用，突变率较高。根据HBV DNA全基因核苷酸序列的异质性≥8％为一种基因型，目前HBV可分为A～H8个基因型。临床上有关HBV基因型与病情轻重关系的研究较多，但是有关HBV基因型与临床病理关系的研究甚少。为此我们应用聚合酶链反应（PCR）微板核酸杂交酶联免疫吸附试验（ELISA）对86例慢性乙型肝炎（CHB）患者进行了HBV基因分型，并从血清HBV DNA水平、生化、肝组织病理学等方面来探讨HBV基因型与临床病理的炎系。     

乙型肝炎病毒全长基因的扩增及克隆

目的 建立血清标本经聚合酶链反应(PCR)扩增乙型肝炎病毒(HBV)全长基因的新方法,并初步进行克隆分析,从而为HBV分子生物学及致病机理研究奠定基础.方法 针对位于整个HBV基因序列中的两个缺口区设计含酶切位点的引物,扩增3.2 kb HBV全长DNA,经酶切及连接后克隆人PUC18载体.结果 用PCR方法成功获得了3.2 kb HBV DNA,经Sal Ⅰ酶切克隆入PUC18载体,获得重组质粒PUC18/HBV3.2,酶切鉴定和PCR扩增证实重组质粒中含有3.2 kb HBV全长DNA,成功构建了HBV全基因克隆.结论 成功建立了从患者血清中克隆HBV全基因组的方法,为从全基因水平深入研究乙型肝炎病毒变异与致病机理的关系奠定了基础.     

乙型肝炎病毒载量与抗原抗体模式的关系

目的探讨乙型肝炎病毒载量与抗原抗体模式的关系,为乙型肝炎的诊治、预防提供科学依据. 方法用实时荧光定量聚合酶链反应和ELISA检测HBV DNA和抗原抗体,统计分析不同抗原抗体模式的HBV DNA量. 结果在HBsAg和HBeAg阳性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml者占87.3%,其中＞107/ml者占66.7%;在HBsAg阳性,抗-HBe阳性模式中,HBV DNA拷贝数＜103/ml者占74.5%,＞107/ml者占8.3%;在HBsAg阳性,抗-HBc阳性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml者占48.0%,＞107/ml者占29.1%.HBeAg阳性模式HBV 载量显著高于HBeAg阴性模式(P＜0.01).抗-HBe阴性模式HBV载量显著高于抗-HBe阳性模式(P＜0.01).在HBsAg阴性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml占7.9%,1例拷贝数高达1.59×109/ml. 结论 HBeAg阳性模式HBV 载量显著高于HBeAg阴性模式,抗-HBe 阴性模式病毒载量显著高于抗-HBe阳性模式,HBeAg阳性模式中的少数人HBV载量很低,HBeAg阴性模式中少数人HBV载量很高,HBsAg阴性模式中少数人存在病毒复制,因此,对于一具体患者来说,根据抗原抗体模式,难以准确地判断病毒复制程度及其传染性的强弱.     

聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义

应用ＰＣＲ对１７１例肝病血清检测结果，ＨＢＶＤＮＡ阳性率５９．１％，ＥｌｉＳＡ检测ＨＢｓＡｇ阳性率４３．２７％，二者比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ阳性率７９．５％，而ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）组主５７．９％，ＨＢｓＡｇ（－）／抗－ＨＢｓ（＋）组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率３６．８％。     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA套式-实时荧光定量聚合酶链反应的建立

目的 建立检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的套式一实时荧光定量PCR法.方法 根据HBV cccDNA与松环DNA(rcDNA)结构上的差异,设计2对跨缺口的特异引物及1条位于负链缺口下游的特异TaqMan荧光探针.根据Plasmid-SafeTM ATP-Dependent Dnasc(PSAD)对rcDNA与cccDNA作用的不同,对模板DNA进行酶切纯化,降解reDNA,再进行套式PCR扩增,先用外引物和模板进行第一轮常规PCR,再用内引物、荧光探针和第一轮PCR产物进行实时荧光定量PCR,根据阳性参照标准品,得出待检标本定量值.结果 检测阳性参照标准品.得出该方法灵敏度可达2 lg拷贝/mL.用上述方法检测34份乙型肝炎患者血清HBV DNA阳性标本,25份血清HBVcccDNA阳性,28份外周血单个核细胞HBV cccDNA阳性.27份健康对照者血清HBV DNA阴性标本,6份HBV cccDNA阳性.对5份HBV cccDNA阳性标本扩增产物进行克隆测序,无碱基缺失、突变.与HBV不同基因型序列(A～G)比较,同源性为90.6%～99.1%,其中,与B、C基因型同源性为95.3%～99.1%,验证了方法的特异度.结论 套式-实时定量PCR法可检测乙型肝炎患者血清、PBMC中的HBV CCCDNA,且具有敏感、特异性.     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶ ＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢属于无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１     

分级定量PCR检测血清HBV DNA

目的利用竞争ＰＣＲ法建立分级测定ＨＢＶＤＮＡ含量的定量方法．方法设立３个标准竞争模板（１０２ｃｏｐ,１０４ｃｏｐ,１０６ｃｏｐ）,分别和恒量的待测模板混合,分别进行４０,３０,２０次循环的ＰＣＲ扩增,最后凝胶电泳分离待测模板和竞争模板的ＰＣＲ产物,测定两者的荧光强度的比值,计算待测模板的初始量．结果对乙型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ定量表明,１２份ＨＢｅＡｇ阳性血清,ＨＢＶＤＮＡ的血清浓度在６×１０７～１×１０１１ｃｏｐ／Ｌ,而１２份ＨＢｅＡｂ阳性血清只有７份可检出ＨＢＶＤＮＡ,它们的血清浓度均在３×１０８ｃｏｐ／Ｌ以下,其余５份用该ＰＣＲ方法,检测不到．结论该方法可用于ＨＢＶＤＮＡ以及其他病原体ＤＮＡ的定量     

乙型肝炎病毒血清标志物少见模式患者转氨酶及HBV DNA的结果分析

采用微粒子化学发光法定量检测住院和门诊患者的乙肝病毒血清标志物,筛选出特殊模式者52例,对这些样本用RT-PCR法检测HBV病毒的载量、速率法检测其丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨基转移酶和γ-谷氨酰转肽酶等。结果 发现共有有5种少见模式（③⑤、①②④⑤、①②③④⑤、①②③⑤、①③④⑤）的血清转氨酶水平均高于正常对照（77.0±15.2）,其中③⑤组的ALT、AST和GGT均值均明显高于正常对照组,而在52例患者中HBV-DNA〉103占总例数的61.54%,①②③④⑤和①②③⑤组HBV-DNA明显高于其他组别,①②③④⑤和①②③⑤组平均病毒载量均低于对照组。     

母亲血清乙型肝炎病毒载量及新生儿外周血游离母亲DNA与新生儿乙型肝炎病毒感染的关系

目的 探讨慢性HBV感染母亲血清HBV DNA载量及新生儿外周血中游离母亲DNA与新生儿HBV感染的关系.方法 等位基因特异性PCR及半套式PCR技术检测慢性HBV感染母亲及其新生儿外周血中游离母亲DNA.荧光定量PCR对母亲外周血血清中HBV DNA定量检测.数据采用阳性率、X2检验、Fisher精确概率等进行统计学分析.结果 筛选出36对母儿信息病例对,有26个新生儿外周血中检测到游离母亲DNA,占72.2%.母-胎DNA转移与新生儿HBsAg、HBV DNA阳性均无关(Fisher精确概率分别为0.278、1.000,均P>0.05),而与新生儿外周血单个核细胞(PBMC)HBV感染有关(Fisher精确概率＝0.026,P<0.05).母-胎DNA转移与母亲血清HBV DNA载量无关(X2=2.097,P>0.05),随着母亲血清HBV DNA载量的增加,其发生新生儿血清HBV DNA阳性的危险性呈增高趋势(总X2=62.21,P<0.05;趋势X2=58.46,P<0.05),而母亲血清HBV DNA载量与新生儿PBMC HBV DNA阳性无关(总X2=4.82,P>0.05).结论 母胎DNA转移与新生儿PBMC HBV感染有关,可能是新生儿HBV感染的一个因素.随着母亲HBV DNA载量增高,新生儿血清HBV DNA阳性的危险性越高.     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者心肌组织中HBV DNA

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１８例乙型肝炎（乙肝）患者石蜡包埋心、肝组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ，并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明：在肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ复制。心肌组织中ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率为５５．６％，不存在ＨＢＶ的复制。心脏病理检查可见一些非特异性改变，如脂变、水肿和纤维素样坏死等。病理变化与心电图、临床症状、体征及ＰＣＲ检测结果无相关性