白细胞介素-10对肝星状细胞增殖及表达Fas/Fas配体的影响

研究拟通过观察外源性血小板衍生生长因子(PDGF)和白细胞介素-10(IL-10)干预后肝星状细胞(HSC)增殖及凋亡相关基因Fas/FasL表达的变化,进一步探讨PDGF致纤维化和IL-10抗肝纤维化的机制。     

酒精性肝病白细胞介素6的检测及意义

探讨酒精性肝病患者IL - 6的活性改变与酒精性肝病肝纤维化的临床意义。测定了12 0例酒精性肝病患者和30例健康成年人(对照组)的IL - 6、HA、LN、PC -Ⅲ、Ⅳ-C。酒精性肝病患者,血清IL - 6明显高于对照组,有显著性差异(P <0 .0 5～0. 0 1)。酒精性肝病患者血清中HA、LN、PC -Ⅲ、Ⅳ-C的改变明显高于对照组(P <0. 0 1～0 .0 0 1)。IL - 6的活性改变与酒精性肝病的肝纤维化呈正相关性。     

白细胞介素10对肝星状细胞激活的调节

目的 探讨白细胞介素10(IL-10)通过血小板衍生生长因子(PDGF)和丝裂原活化激酶(MAPK)信号通路蛋白对肝星状细胞(HSC)激活的影响。 方法 将培养的HSC随机分为4组:1组:对照组;2组:加入1 ng/ml IL-10;3组:加入5 ng/ml IL-10;4组:加入25 ng/ml IL-10。培养2d后,逆转录-聚合酶链反应法检测各组细胞中PDGF mRNA的表达;western blot法检测各组细胞PDGF、MAPK信号通路蛋白细胞外信号调节激酶(ERK)和p38以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。 结果 1、5、25 ng/ml的IL-10作用后,与对照组相比HSC的ERK、p38以及α-SMA的表达显著降低(F值分别为240.47、21.39、28.86,P值均<0.01),并呈量效依赖关系;5、25 ng/ml的IL-10可以使PDGF表达显著降低(P值均<0.01),并呈量效依赖关系。 结论 IL-10可通过PDGF/MAPK信号通路抑制肝星状细胞激活。     

白细胞介素-1激活肝星状细胞信号转导机制的研究进展

肝星状细胞(hepaticstellatecellular,HSC)为肝脏细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)产生的主要细胞,其活化、增殖是肝纤维化发生的中心环节[1].     

非酒精性脂肪性肝病患者血清IL-18、IL-8水平变化及意义

目的探讨IL-18、IL-8在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发生、发展中的作用。方法分别用ELISA法及放射免疫分析（RIA）法检测60例NAFLD患者[NAFLD组,其中非酒精性脂肪肝（NAFL）30例,非酒精性脂肪性肝炎（NASH）30例]和30例健康人（对照组）血清IL-18、IL--8水平;常规方法检测ALT、AST、TG、TC水平。结果NAFLD组血清上述指标均明显高于对照组（P〈0．01）,NASH患者明显高于NAFL患者（P〈0．05）。结论IL—18、IL-8水平随肝细胞受损程度加重而升高,并与ALT、TG水平呈正相关。IL-18、IL-8水平可用于判断NAFLD患者肝损伤的程度。     

抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠肝星状细胞活化的影响

目的观察抗纤复方Ⅰ号对酒精性肝病大鼠肝星状细胞活化的影响,以探讨中药治疗酒精性肝病的机制.方法给予Wistar大鼠乙醇8～10g·kg-1·d-1,分3次灌胃,12周制备酒精性肝病大鼠模型,对照组给予等量生理盐水,中药组在给予同酒精组等量乙醇的基础上,给予抗纤复方Ⅰ号水煎剂4.0ml·kg-1·d-1,分2次灌胃,共12周.实验4、8、12周末分批处死动物,HE及VG染色观察肝脏组织学改变,电镜下观察肝星状细胞形态学改变并检测肝内透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)含量.结果造模12周时,酒精组大鼠肝脏呈现重度脂肪变性,点片状肝细胞坏死及炎性细胞浸润,纤维条索形成;而中药组大鼠仅呈现轻度脂肪变,无纤维条索形成.电镜下酒精组大鼠肝细胞失去正常结构,星状细胞增多、变形,细胞外可见较多胶原纤维.中药组大鼠肝细胞及星状细胞形态基本正常,基质内亦可见少量胶原纤维.实验8周末酒精组LN浓度开始升高,12周末达到最高,与正常组及中药组比较差异有显著性意义[(37.69±5.01)vs(22.34±3.51)、(28.07±4.11),P＜0.05];肝内HA浓度8周末各组间比较无统计学差异,12周末酒精组明显升高,与正常组及中药组比较,差异有显著性意义[(74.85±9.23)vs(41.26±8.34)、(53.62±4.85),P＜0.01].结论抗纤复方Ⅰ号能降低肝内HA和LN,抑制酒精性肝纤维化形成,这与其抑制肝星状细胞活化有关.     

白细胞介素-10抑制肝星状细胞核因子-κB活化的研究

肝星状细胞(HSC)在肝纤维化方面起重要作用，阻止HSC活性过强是治疗肝纤维化重要环节之一。核因子-κB(NF-κB)的活化能产生细胞间粘附分子(ICAM)-1、白细胞介素(IL)-6等，加重肝组织炎症和损伤。IL-10能抑制HSC产生Ⅰ型胶原和增加基质金属蛋白酶13(MMP-13)的表达，但这种作用的机制仍不清楚。我们旨在探讨IL-10是否通过HSC内NF-κB的作用产生各种效应。     

慢性酒精性肝病大鼠肝脏白细胞介素10的表达及茶多酚的影响

茶多酚(TP)是从天然植物茶叶中分离提纯的多酚类化合物复合体，具有护肝、抗氧化和免疫调节等多方面的作用。拟通过观察茶多酚对酒精性肝损伤动物模型的保护作用及白细胞介素-10(IL-10)在动物肝脏中的表达，探讨IL-10在酒精性肝病发病中的作用以及茶多酚防治酒精性肝病的机制。     

激活素A对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响

目的观察激活素A对人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)系LX-2细胞增殖的影响。方法体外培养人HSC LX-2。设正常对照组和激活素A干预组,其中激活素A干预组分为9个浓度梯度,药物终浓度分别为1、2.5、5、10、20、40、80、160、320μg/L,采用CCK-8法检测激活素A对细胞增殖的影响;再选取25、50、100、200、300μg/L5个浓度分别作用24、48、72 h,观察激活素A对细胞增殖的影响。结果激活素A可刺激LX-2细胞增殖,1～2.5μg/L浓度范围内作用轻微(P>0.05),而80～320μg/L的激活素A作用明显增强(P<0.01),且在细胞指数生长期对刺激细胞增殖有时间浓度依赖性。结论激活素A可通过刺激HSC增殖,参与肝纤维化的形成。     

白细胞介素9促进日本血吸虫感染小鼠肝星状细胞激活

目的 探讨小鼠感染日本血吸虫后,白细胞介素-9(interleukin-9, IL-9)在小鼠肝星状细胞活化中的作用。方法采用肝脏原位灌注消化结合密度梯度离心法,分离日本血吸虫感染7周后小鼠原代肝星状细胞（hepatic stellate cells, HSCs）并进行体外培养。将HSCs分为PBS对照组和IL-9刺激组（浓度20 ng/mL）。分别于刺激后48、72 h收集细胞,采用免疫印迹试验检测HSCs中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（typeⅠcollagen,ColⅠ）和Ⅲ型胶原蛋白（typeⅢcollagen, ColⅢ）表达水平。结果 经20 ng/mL IL-9刺激48 h后,IL-9刺激组HSCs中α-SMA [(0.87±0.02)vs.(0.69±0.01);t=17.39,P <0.01]、ColⅠ[（0.74±0.02）vs.(0.65±0.01);t=9.56,P <0.01]、ColⅢ蛋白[（0.94±0.04）vs.(0.75±0.03);t=6.15,P <0.01]表达水平...     

大麻素受体2介导的N-花生四烯酸氨基乙醇对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 观察内源性大麻素N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)及大麻素受体(CBR)2对肝星状细胞(HSC)增殖活化的影响,以探讨内源性大麻素及其受体系统在肝纤维化发展中的作用.方法 采用免疫荧光观察血小板衍生生长因子(PDGF)刺激前后HSC中CBR1和CBR2的表达.Western blot、PCR法观察不同浓度AEA及CBR2拮抗剂AM630对PDGF刺激下HSC增殖及活化的影响,同时用四甲基偶氮唑盐、流式细胞仪分析AEA对HSC活力及凋亡的影响.结果 HSC中CBR2的表达较CBR1高(F=116.797,P<0.01),且PDGF刺激后CBR2的表达明显增强(F=7.878,P<0.05).AEA可剂量依赖地抑制HSC的增殖,在浓度为10,20、50μmol/L时抑制率分别为7.12%±0.34%、12.52%±0.78%、80.13%±1.57%,差异有统计学意义(F=533.41,P<0.01);但对HSC凋亡的影响不明显.同时AEA可抑制HSC的活化指标α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶抑制因子等的表达,但这种抑制作用在给予CBR2拮抗剂AM630后明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CBR2在AEA引起的HSC增殖及活化抑制中起关键作用,AEA和CBR2可望成为肝纤维治疗的新靶点.     

选择性COX-2抑制剂塞来昔布对肝星状细胞增殖及活化的影响

目的通过观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对肝星状细胞增殖及活化的影响,以探讨COX-2在肝纤维化中的作用。方法用不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用于体外培养的人肝星状细胞株LI-90,采用MTT法和半定量RT-PCR法检测塞来昔布对肝星状细胞增殖及活化的影响。结果塞来昔布可显著抑制体外培养的肝星状细胞LI-90的增殖和活化,随着药物剂量的增加和时间的延长,肝星状细胞LI-90的增殖和活化明显抑制,呈剂量和时间依赖性。结论塞来昔布对肝星状细胞增殖和活化的抑制作用是研究肝纤维化预防和治疗的重要方向之一。     

锌α2糖蛋白抑制肝星状细胞活化和增殖的体外研究

目的探讨锌α2糖蛋白(AZGP1)在肝星状细胞活化和肝纤维化发生和发展中的作用机制。方法采用转化生长因子-β1刺激诱导人肝星状细胞株LX2活化和构建四氯化碳小鼠肝纤维化模型,观察细胞和肝组织中AZGP1的表达情况。应用质粒转染法过表达和抑制表达AZGP1后,分别检测LX2细胞的活化、增殖和凋亡功能及相关因子的改变。多组间比较采用单因素方差分析。结果免疫荧光染色结果显示在活化的LX2细胞中,AZGP1蛋白减少而α-平滑肌肌动蛋白增多,二者呈负相关。AZGP1基因和蛋白在活化的LX2细胞和四氯化碳肝纤维化小鼠的肝组织内显著低表达。过表达AZGP1后,LX2细胞中Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶-2和α-平滑肌肌动蛋白基因和蛋白明显下调;细胞荧光显示过表达AZGP1的细胞活化和α-平滑肌肌动蛋白减少。此外,过表达AZGP1后,LX2细胞的增殖活性和G1/S-特异性周期蛋白D1蛋白显著降低;细胞周期实验显示过表达AZGP1的细胞停滞在G0/G1期比例显著增多、而S期比例显著减少。AZGP1对LX2细胞凋亡无明显影响。结论AZGP1可通过抑制肝星状细胞活化和增殖而逆转肝纤维化;过表达AZGP1有望成为肝纤维化治疗的新靶点。     

Arg-gly-asp-mannose-6-phosphate inhibits activation and proliferation of hepatic stellate cells in vitro

AIM: To investigate the effect of arg-gly-asp-mannose-6 phosphate (RGD-M6P) on the activation and proliferation of primary hepatic stellate cells in vitro. METHODS: Hepatic stellate cells (HSCs) were isolated from rats by in situ collagenase perfusion of liver and 18% Nycodenz gradient centrifugation and cultured on uncoated plastic plates for 24 h with DMEM containing 10% fetal bovine serum (FBS/DMEM) before the culture medium was substituted with 2% FBS/DMEM for another 24 h. Then, HSCs were cultured in 2% FBS/DMEM with transforming growth factor beta1, M6P, RGD, or RGD-M6P, respectively. Cell morphology was observed under inverted microscope, smooth muscle alpha-actin (alpha-SMA) was detected by immunocytochemistry, type III procollagen (PC III) in supernatant was determined by radioimmunoassay, and the proliferation rate of HSCs was assessed by flow cytometry. RESULTS: RGD-M6P significantly inhibited the morphological transformation and the alpha-SMA and PC III expressions of HSCs in vitro and also dramatically prevented the proliferation of HSCs in vitro. Such effects were remarkably different from those of RGD or M6P. CONCLUSION: The new compound, RGD-M6P, which has a dramatic effect on primary cultured HSCs in vitro, can inhibit the transformation of HSCs in culture caused by TGFbeta1, suppresses the expression of PC III and decreases proliferation rate of HSC. RGD-M6P can be applied as a selective drug carrier targeting at HSCs, which may be a new approach to the prevention and treatment of liver fibrosis.     

去甲肾上腺素对大鼠肝星状细胞作用的实验研究

目的 探讨交感神经系统在肝纤维化发生和发展中的作用. 方法采用免疫荧光和RT-PCR检测体外培养的肝星状细胞(HSC)中α1、β2-肾上腺素能受体的表达;用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的去甲肾上腺素(NE)对HSC增殖活性的影响.同时用RT-PCR检测受NE作用后HSC的活化指标胶原蛋白-1、转化生长因子β(TGF β)及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达.用高效液相色谱-电化学法测定活化的HSC中交感神经递质NE的水平. 结果α1和β2-肾上腺素能受体表达于HSC的胞膜和胞质内;NE可呈剂量依赖性地促进HSC增殖,在浓度为100μmol/L时达到最大效应,F=140.464,P<0.05,差异有统计学意义.以NE 100 μmol/L作用细胞24h后,可显著促进反应HSC活化的指标上升,胶原蛋白-1表达为0.3022±0.0610,TGF β表达为2.2080±0.2151,α-SMA mRNA表达为0.5469±0.0108,与对照组胶原蛋白-1(0.1040±0.0556)、TGF β(1.1190±0.0070)、α-SMA mRNA表达(0.0759±0.0449)比较,t值分别为-4.160、-8.763和-17.651,P值均<0.05,差异均有统计学意义.HSC可以合成并释放NE,且受血小板衍生生长因子(10ng/ml)刺激后HSC中NE含量为(14.24±0.21)ng/ml,对照组为(11.34±0.15)ng/ml,两组比较,t=-32.907,P<0.05,差异有统计意义.结论 抑制交感神经系统使HSC活性降低对临床上治疗肝纤维化有一定的指导意义.     

小柴胡汤对体外培养LX-2细胞增殖的影响及机制初探

目的观察小柴胡汤对人肝星状细胞(LX-2细胞)增殖的影响。方法体外培养LX-2细胞,用不同浓度的小柴胡汤(2%,1%,0.5%,0.2%,0.1%)处理24 h,对照组不做处理。显微镜下观察药物作用后细胞形态改变,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(Edu)法检测细胞增殖,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测I型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达情况。结果对照组细胞,贴壁生长良好,形态未见明显异常。经不同浓度小柴胡汤(2%、1%、0.5%、0.2%、0.1%)处理24 h后,LX-2细胞均出现皱缩,变圆,界限不清,细胞核固缩等不同程度形态改变,MTT检测显示其增殖抑制率分别为100%、54.9%、41.2%、14.8%、12.4%。经1%、0.5%、0.1%小柴胡汤作用24 h后,Edu法检测LX-2细胞增殖率分别为0.1%、5.3%、10.1%;RT-PCR检测其COL-ⅠmRNA的表达量,与对照组1.04±0.35相比,均显著下降,分别为0.45±0.15(P<0.05)、0.27±0.16(P<0.01)和0.38±0.24(P<0.01)。MTT和Edu结果表明小柴胡汤能够抑制体外培养LX-2细胞的增殖,并呈剂量依赖效应。结论小柴胡汤通过抑制LX-2细胞增殖,并抑制COL-ⅠmRNA的表达,从而发挥抗纤维化活性。     

sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及bcl-2、c-myc蛋白表达的影响

肝星状细胞（HSC）的活化与增殖是肝纤维化发生的关键环节。乙醛刺激HSC活化与增殖，是导致酒精性肝纤维化发生的关键因素。研究表明，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK），包括细胞外信号调节激酶（ERK）、JNK、P38是HSC活化与增殖导致肝纤维化发生的主要信号传导通路之一。乙醛刺激HSC中JNK磷酸化水平随sp600125（JNK信号传导通路特异性阻断剂）浓度增加而减少。本实验用sp600125处理乙醛刺激的HSC，观察sp600125对HSC增殖以及bcl-2、c-myc蛋白表达的影响，以探讨酒精性肝纤维化的发生机制。     

MicroRNAs在肝星状细胞活化过程中表达差异谱的研究

目的 应用MicroRNAs基因芯片技术筛选静止和活化肝星状细胞差异表达的MicroRNAs.方法 用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSCs,并进行体外培养,借助荧光倒置显微镜观察细胞形态,MicroRNAs基因芯片技术和荧光定量PCR检验MicroRNAs在HSCs静止期(2天)和活化期(14天)的表达.结果 HSCs的miRNAs表达谱中差异表达miRNAs共21个,其中上调12个,下调9个(P＜0.01);荧光定量RT-PCR证实其表达水平在静止和活化期肝星状细胞中均有差异(P＜0.01).结论 MicroRNAs基因芯片筛选差异表达miRNAs可望为肝纤维化的基因治疗提供全新的靶标和策略,为肝纤维化的发病机制和诊断治疗研究提供了新的思路.     

MicroRNA-194 inactivates hepatic stellate cells and alleviates liver fibrosis by inhibiting AKT2

BACKGROUND Activation of hepatic stellate cells(HSCs)is a pivotal event in the onset and progression of liver fibrosis.Loss of microRNA-194(miR-194)has been reported in activated HSCs,but the actual role of miR-194 in liver fibrosis remains uncertain.AIM To explore the role and potential mechanism of miR-194-mediated regulation of liver fibrosis in vitro and in vivo.METHODS The expression of miR-194 was examined in human fibrotic liver tissues,activated HSCs,and a carbon tetrachloride(CCl4)mouse model by qPCR.The effects of AKT2 regulation by miR-194 on the activation and proliferation of HSCs were assessed in vitro.For in vivo experiments,we reintroduced miR-194 in mice using a miR-194 agomir to investigate the functions of miR-194 in liver fibrosis.RESULTS MiR-194 expression was notably lacking in activated HSCs from both humans and mice.Overexpression of miR-194(OV-miR-194)inhibitedα-smooth muscle actin(α-SMA)and type I collagen(Col I)expression and suppressed cell proliferation in HSCs by causing cell cycle arrest in G0/G1 phase.AKT2 was predicted to be a target of miR-194.Notably,the effects of miR-194 knockdown in HSCs were almost blocked by AKT2 deletion,indicating that miR-194 plays a role in HSCs via regulation of AKT2.Finally,miR-194 agomir treatment dramatically ameliorated liver fibrosis in CCl4-treated mice.CONCLUSION We revealed that miR-194 plays a protective role by inhibiting the activation and proliferation of HSCs via AKT2 suppression.Our results further propose miR-194 as a potential therapeutic target for liver fibrosis.     

干扰素β对肝星状细胞活化调控机制的影响

以往的研究已经证实干扰素β（IFNβ）不仅具有抗肝炎病毒的作用，还具有抗肝纤维化的作用，但其作用机制尚不明确。本研究旨在探讨能否经过调控转化生长因子β1（TGFβ1）、Smad4、Smad7、血小板衍生生长因子（PDGF）-BB等细胞因子的表达而影响肝星状细胞（HSC）的激活。