可溶性CD40酶联检测试剂盒的研制及其检测的临床意义

目的 :建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD4 0 (sCD4 0 )酶标检测试剂盒及探讨其检测的临床意义。方法 :采用该室制备的鼠抗人CD4 0单抗 5C11作为包被抗体 ,另一株识别不同抗原位点的单抗 3G3经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sCD4 0酶标检测方法和对各种质控参数进行优化。在此基础上测定了健康供血员、甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿性关节炎患者的血清、肺癌患者血清和胸水及多种多发性骨髓瘤 (MM)、淋巴瘤细胞株培养上清中sCD4 0的含量。结果 :成功地研制了人sCD4 0酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 15 6pg ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 9% ,回收率为 95 %～ 114 % ,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得血清中sCD4 0含量的 95 %正常值范围 (x±s)为 10 5 0 0± 18 88pg ml,甲亢、慢性肾炎、白血病、类风湿患者的血清、肺癌患者血清和胸水中sCD4 0的含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论 :成功地研制了检测人sCD4 0酶标检测试剂盒 ,对一些与CD4 0分子表达或信号异常的疾病患者外周血检测结果显示 ,该试剂盒在临床检测中具有潜在的应用价值     

可溶性CD40的研究进展

CD40分子是属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族的Ⅰ型跨膜糖蛋白，可溶性CD40（sCD40）与膜型CD40（mCD40）共存，并具有与CD40L结合的能力，是CD40-CD40L作用的天然拮抗剂。研究显示健康人血清中存在低水平的sCD40，而肾脏疾病、肝脏疾病、血液病、神经系统疾病等患者血液和体液中异常高表达sCD40，且其水平与病程发展和预后有关，具有重要的临床意义。     

可溶性gp130酶联检测试剂盒的研制及其运用

目的 :建立灵敏、特异、稳定和简便的人可溶性gp130 (sgp130 )酶标检测试剂盒。方法 :采用本室制备的鼠抗人gp130单抗T2作为包被单抗 ,另一株识别不同抗原位点的单抗T12经生物素 (biotin)标记后作为检测抗体 ,建立双单抗夹心的人sgp130酶标检测方法 ,并分别测定了 40例健康供血员、40例甲亢及 47例慢性肾炎患者血清中sgp130的含量。结果 :成功地研制了人sgp130酶联检测试剂盒 ,其灵敏度为 10ng/ml。该试剂盒 4℃放置 3个月 ,离散度 (CV) <± 7 6 %,回收率为95 %～ 111%,提示检测方法具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。用该试剂盒测得的血清中sgp130含量的 95 %正常值范围为5 36 92～ 2 87 88(ng/ml) ,甲亢及慢性肾炎患者血清中sgp130的含量分别为 937 16± 2 17 5 9和 80 6 4 5± 138 4 7(ng/ml) ,明显高于正常对照者 (P <0 0 1)。结论 :建立的人sgp130酶标检测试剂盒 ,能够对血清中sgp130进行准确定量 ,可为临床gp130相关性疾病的辅助诊断、疗效估价和判断预后提供有价值的生物学参数 ,具有良好的运用前景。     

可溶性PD-1酶联检测试剂盒的研制及其应用

目的:建立人的可溶性PD-1(sPD-1)酶标检测试剂盒并探讨其检测的临床意义.方法:在已成功获得两株识别位点不同的鼠抗人PD-1分子单克隆抗体(1F2和5F10)的基础上,采用该室制备的鼠抗人PD-1分子单克隆抗体(1F2)作为包被抗体,应用本室制备的单抗5F10经生物素(biotin)标记后作为检测抗体,建立双单抗夹心的人sPD-1酶标检测方法,并对健康供血员、甲亢、血液病患者的血清中sPD-1的含量进行了检测.结果:成功研制了人sPD-1酶联检测试剂盒,其灵敏度为200.00pg/ml.该试剂盒4℃放置1个月,离散度(CV%)＜±5.17,回收率为95%～115%,提示该检测试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和准确性.用该试剂盒测得血清中sPD-1的正常值为1.103±0.240 ng/ml,再生障碍性贫血患者血清中sPD-1的含量明显高于正常对照组,而甲亢和器官移植病人血清中sPD-1的含量和正常值相比没有显著差异(P＜0.05).结论:成功研制了检测人sPD-1酶标检测试剂盒,并首次发现再生障碍性贫血患者血清中sPD-1的含量较高,该试剂盒在临床病人sPD-1的检测中具有潜在的应有价值.     

CD40和CD40配体的研究进展

ＣＤ４０是一种存在于Ｂ淋巴细胞、树突状细胞、造血前体细胞、上皮细胞及某些癌细胞表面的跨膜糖蛋白。由２７７个氨基酸组成，分子量为４５～５０ＫＤａ，是ＴＮＦ－Ｒ超家族成员。人ＣＤ４０基因定位于２０号染色体ｑ１１－３，小鼠基因位于２号染色体上。ＣＤ４０配体（ＣＤ４０Ｌ）由２６１个氨基酸构成，分子量为３４ＫＤａ，是ＴＮＦ超家族成员。基因位于ｘｑ２４。主要存在于活化的ＣＤ４＋Ｔ细胞表面，在ＣＤ８＋、嗜碱／肥大细胞表面也有表达。ＣＤ４０与ＣＤ４０Ｌ间的反应与Ｂ细胞活化、增殖、抗体的产生、生发中心的形成有关。反应的中断可导致免疫耐受，ＣＤ４０Ｌ缺陷可造成性联高ＩｇＭ综合征（ＨＩＭ）。     

CD40和CD40配体的研究进展

ＣＤ４０是一种存在于Ｂ淋巴细胞、树突状细胞、造血前体细胞、上皮细胞及某些癌细胞表面的跨膜糖蛋白。由２７７个氨基酸组成，分子量为４５－５０ＫＤａ，是ＴＮＦ－Ｒ超家族成员。人ＣＤ４０基因定位于２０号染色体ｑ１１－３，小鼠基因位于２号染色体上，ＣＤ４０配体（ＣＤ４０Ｌ）由２６１个氨基酸构成，分子量为３４ＫＤａ，是ＴＮＦ超家族成员。基因位于ｘｑ２４。主要存在于活化的ＣＤ４＾＋Ｔ细胞表面，在ＣＤ８＾＋、ＫＦ     

动脉粥样硬化研究新进展：CD40—CD40配体

CD40 CD40配体广泛存在于动脉粥样硬化病变的各个阶段 ,并且与内皮细胞、平滑肌细胞和单核 /巨噬细胞的功能密切相关 ;阻断CD40 CD40配体的相互作用可以抑制动物动脉粥样硬化的发生与进展。     

CD40配体与性联高免疫球蛋白M综合征相关性研究近展

性联高免疫球蛋白M综合征（x-1inkedhyyr－IgMsyndrome，HIGMX1）是一种罕见的免疫缺陷病，近年来，由于CD40配体（CD40ligand，CD40L）基因的发现及CD40L结构功能的研究，使人们对HIGMX1的发病机制、诊断及治疗等方面有一个新的认识，本文就此作一综述。     

IL-35对可溶性CD40配体诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的 探索深静脉血栓(DVT)患者外周血可溶性CD40配体(sCD40L)和白细胞介素(IL)-35浓度,并研究IL-35对sCD40L诱导血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 收集深静脉血栓急性期患者30例(DVT组)、健康对照者30名(HC组)外周静脉血3 mL。ELISA检测外周血清IL-35、sCD40L、IL-1β、IL-18的水平;体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)并分为3组,对照组(磷酸盐缓冲液)、sCD40L组(25μg/mL sCD40L)、IL-35组(20 ng/mL IL-35和25μg/mL sCD40L);CCK8法检测HUVECs的活力;ELISA检测细胞培养上清IL-1β、IL-18的水平;Western blot检测细胞GSDMD-N、cleaved caspase-1蛋白的表达。结果 DVT患者外周血IL-35水平显著低于对照者,sCD40L、IL-1β、IL-18的水平显著高于对照者(P<0.05)。DVT患者外周血IL-35与sCD40L呈负相关。体外实验表明：IL-35能抑制sCD40L诱导内皮细胞活力的损伤,降低sCD40L组细胞...     

重组人可溶性CD40配体对树突状细胞体外分化、成熟及功能的影响

用Ficoll密度离心及贴壁法获得外周血单个核细胞 (PBMC ) ,PBMC经细胞因子组合诱导分化成树突状细胞 (DC ) :GM CSF (10 0ng/ml)与IL 4 (5 0ng/ml)诱导 5d后 ,分别加入TNF α (10ng/ml)或rhsCD4 0L (2 μg/ml)继续培养 4d ;倒置显微镜下观察DC形态 ,免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型 (CD1a、CD80、CD83、HLA DR、CD14、CD16、CD19)及摄取FITC Dextran抗原的能力 ;3 H TdR掺入法检测DC刺激自体混合淋巴细胞体外增殖反应 (MLR )能力 ;ELISA法分析DC培养上清中IL 12的水平 ;Trans well细胞趋化实验检测DC对自体外周T淋巴细胞的趋化能力。发现经rhsCD4 0L刺激的DC表面分子 (CD1a、CD80、CD83、HLA DR )的表达水平高于经典的细胞因子组合组 (GM CSF +IL 4 +TNF α ) ,同时rhsCD4 0L刺激后的DC摄取FITC Dextran的能力下降而刺激自体MLR和分泌IL 12的能力明显提高 ;而且rhsCD4 0L诱导的DC表面趋化因子受体CXCR4的表达水平及对自体外周T淋巴细胞的趋化能力均强于TNF α或FL激发的DC。rhsCD4 0L在体外不仅具有显著的诱导DC分化 ,促进DC成熟的功能 ,而且经rhsCD4 0L作用的DC能更有效地激发T淋巴细胞     

急性冠脉综合征患者血清可溶性CD40L水平的临床研究

目的:探讨可溶性白细胞分化可溶性抗原40配体(sCD40L)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)在急性冠脉综合征(ACS)患者发病及预后中的临床意义及机制。方法:根据急性冠脉综合征诊断标准选择86例患者,分为两组:正常对照组(NCHD)17例,ACS组69例,其中不稳定心绞痛(UA)58例,急性心肌梗死(AMI)11例,入院当天采用ELISA测定血清sCD40L浓度和hs-CRP水平。随诊2个月,观察急性心血管事件发生率。结果:ACS组明显高于对照组(P<0.01);AMI组略高于UA组但无统计学意义(P>0.05);sCD40L和或hs-CRP升高组心血管事件较正常组增多。结论:急性冠脉综合征患者早期外周血清sCD40L和hs-CRP水平明显升高,提示CD40/CD40L系统与ACS的发生有关,并与炎症因子C反应蛋白协同,对动脉粥样硬化斑块不稳定性起着重要作用。     

AMI患者PCI前后sCD40L的水平及临床意义

目的:探讨急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)前后血清可溶性CD40L的水平变化及临床意义.方法:应用酶联免疫吸附法对40例AMI患者进行了PCI治疗前后血清sCD40L、cTnI及CK-MB的检测,并与40例对照组患者进行比较.结果:AMI组sCD40L水平在PCI术前及术后即刻及术后2h均高于对...     

Decreased serum levels of sCD40L and IL-31 correlate in treated patients with Relapsing-Remitting Multiple Sclerosis

The CD40/CD40L system is a binding key for co-stimulation of immune cells. Soluble form of CD40L has been widely studied as marker of inflammatory and autoimmune diseases. Here we analyze serum concentrations of sCD40L, as well as 14 cytokines, in patients with Multiple Sclerosis (MS) treated with Glatiramer acetate or Interferon beta. In the healthy control group, we found in serum a highly positive correlation between sCD40L and Interleukin (IL)-31, an anti-inflammatory Th2 cytokine. Additionally, an important reduction in IL-31 and sCD40L serum levels, as well as a significant reduction in CD40 mRNA expression and complete depletion of CD40L mRNA, detected from peripheral blood cells, was found in treated patients with MS. Therefore, sCD40L and IL-31 must be taken into account as possible prognostic markers when analyzing the disease progress of MS in order to provide more personalized treatment.     

TORCH-IgM捕获法ELISA试剂盒的研制和应用

目的 为了发展TORCH近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法 以抗人IgM McAb包板，加待检血清、TORCH抗原，接着加酶标记的抗TORCH—McAb，最后加3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TNB)显色。用这种自制的捕获法ELISA(C—ELISA)试剂盒和HOPE公司的间接法ELISA(I—ELISA)试剂盒平行检测1196份孕妇血清TORCH-IgM。结果C—ELISA试剂盒检出阳性血清67份，并经其他试验证实为阳性。其中4份用I—ELISA试剂盒检测为阴性。由乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的2份血清，经I—ELISA试剂盒检测为阳性，但经C—ELISA试剂盒检测为阴性。结论 在检测孕妇TORCH—IgM方面，C—ELISA比I-ELISA有更强的敏感性和更高的特异性。C—ELISA试剂盒是诊断TORCH近期感染的良好工具。     

Short-term hormone therapy improves sCD40L and endothelial function in early menopausal women: potential role of estrogen receptor polymorphisms

Objective

Hormone therapy (HT) has been suggested to improve vascular function and inflammation in menopausal women, although not consistently. We aimed to investigate the effects of HT on endothelial function and inflammation, especially sCD40L, in early menopausal women, and the effect of common estrogen receptor (ER) polymorphisms on vascular responses to HT.

Study design

Eighty-four early menopausal women (<3 years in menopause) with menopausal complaints eligible for HT. Forty women received transdermal 17β-estradiol plus cyclical micronized progesterone for 3 months while 44 did not (controls).

Main outcome measures

Brachial artery flow-mediated dilation (FMD) and vascular inflammation markers (sICAM, sP-Selectin and sCD40L). Genetic polymorphisms of ERα (PvuII 454-397T>C and XbaI 454-351A>G) and ERβ (AluI 1730A>G) were also assessed.

Results

The two groups did not differ at baseline. Following HT, vasomotor complaints’ severity, blood pressure, LDL, sCD40L, sICAM and sP-Selectin decreased and FMD increased compared to controls (P < 0.05 for all). ERβ AluI A allele presence was the most important independent predictor of HT-induced increase in FMD while ERα XbaI A allele was the only independent predictor of decrease in sCD40L.

Conclusions

Short-term HT in early menopausal women improved endothelial function and inflammation. Specific ER polymorphisms that were found to be main determinants of HT-induced effects on endothelium could identify subgroups of women who may benefit the most from HT.     

CHD患者血清可溶性CD40L检测的临床意义

目的:探讨冠心病(CHD)患者血清可溶性CD40L(sCD40L)水平变化的临床意义.方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)对入选的90例CHD患者[急性心梗(AMI)患者28例,不稳定型心绞痛(UAP)患者35例,稳定型心绞痛(SAP)患者27例]的外周血sCD40L进行检测,并与30例正常对照者血清sCD40L的浓...     

两株新的鼠抗人OX40L单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究

目的:鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人OX40L分子的基因转染细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人OX40L分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Westernblot、Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法和MTT增殖试验等对单抗的生物学特性进行鉴定。结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人OX40LmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4D6和5C2。对mAb生物学功能的研究结果表明,2株mAb均能识别成熟DC细胞以及Jurkat、SHI-1、U937等白血病细胞株表面的OX40L分子。对其中SHI-1白血病细胞株增殖影响的实验显示,这2株抗体对SHI-1的增殖都具有一定的抑制作用。结论:成功地获得了2株鼠抗人OX40L功能性mAb杂交瘤,其所分泌的抗体能特异地识别人OX40L分子,并影响表达OX40白血病细胞株的体外增殖,为进一步研究OX40/OX40L的生物学功能奠定了基础。