mAFP基因转染树突状细胞免疫对小鼠诱发性肝癌发生的影响

目的:探讨用mAFP基因转染的树突状细胞(dendritic cells,DC)瘤苗免疫对小鼠诱发性肝癌发生的影响.方法:诱导、扩增C57BL/6J小鼠DC.将表达小鼠AFP基因(mAFP)的重组腺病毒转染DC.80只C57BL/6J雄性小鼠随机分为A、B、C、D组,每组20只.以单纯DC为A组;将表达mAFP基因的重组腺病毒转染DC(pAdBM5-mAFP-DCs)为B组;表达mAFP基因的质粒DNA(pAdBM5-mAFP)为C组;以单纯PBS(磷酸缓冲液)注射为对照组D组.免疫方法:实验组在每只小鼠的左胁部注射5×105个细胞(0.1ml/资),连续免疫3天,以后每7天接种疫苗1次,继续免疫4次.正常对照组,仅注射0.1ml PBS.在接种免疫的同时,给以二乙基亚硝胺(DEN)、四氯化碳(CCl4)和乙醇联合诱癌.诱癌20周后处死小鼠,检查成瘤情况.同时对肝脏标本进行组织病理学检查.结果:80只免疫小鼠中,A组肝细胞癌发生率为70%;B组肝细胞癌发生率仅为25%;C组肝癌发生率为65%;D组肝癌发生率为75%.B组与其它对照组比较有显著性差异(p＜0.05),其他各组比较无显著性意义.结论:转基因pAdBM5-mAFP-DC瘤苗免疫自然诱癌的C57BL/6J小鼠,能激发较强的抗肿瘤免疫反应,降低肝癌的发生率.     

甲胎蛋白基因转染树突状细胞瘤苗对诱发性小鼠肝癌发生发展的免疫抑制作用

目的 构建小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因转染的树突状细胞(DC)瘤苗,评价其在C57BL/6J小鼠自然肝癌诱发过程中的免疫保护作用.方法 诱导、扩增DC.将表达mAFP的重组腺病毒颗粒转染DC,检测转染前后DC细胞表面分子MHC Ⅰ、MHC Ⅱ、CDl8a(LFA)、CD54(ICAM)、CD80(B7.1)和CD86(B7.2)等的变化.80只C57BL/6J雄性小鼠随机分为单纯接种DC组、接种转mAFP基因DC(pAdBM5-mAFP-DC)组、单纯接种重组质粒(pAdBM5-mAFP)组和正常对照组,每组20只.实验组在每只小鼠的左肋部注射5×105个细胞,连续免疫3 d,以后每7 d接种疫苗1次,继续免疫4次;正常对照组仅注射0.1 ml PBS.在接种免疫的同时,给以二乙基亚硝胺(DEN)、四氯化碳(CCl4)和乙醇联合诱癌.诱癌20周后处死小鼠,检查成瘤情况,并对肝脏标本进行组织病理学检查.结果成功构建了转基因pAdBM5-mAFP-DC瘤苗;mAFP基因转染后的DC表面高表达MHC Ⅰ、MHC Ⅱ、CD18a、CD54、CD80和CD86等共刺激分子,其分子表达率分别为69.3%、41.0%、42.1%、63.2%、39.4%和38.6%,与转染前差异有统计学意义(P＜0.05).单纯接种DC组、pAdBM5-mAFPDC组、pAdBM5.mAFP组和正常对照组的肝癌发生率分别为65.0%、25.0%、70.0%和75.0%,pAdBM5-mAFP-DC组与其他组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 pAdBM5-mAFP-DC瘤苗免疫自然诱癌的C57BL/6J小鼠,可降低肝癌的发生率,对肝癌的发生有免疫保护作用.     

肝癌患者外周血树突状细胞免疫状态的琛

研究荷瘤宿主免疫无能与其树突状细胞免疫功能间相关性。结论肝癌患者ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达低下致ＤＣ的免疫功能低下，而ＤＣ的免疫功能低下则可能是肝癌逃避宿主免疫监视的重要原因。     

肝癌患者外周血树突状细胞免疫状态的研究

目的研究荷瘤宿主免疫无能与其树突状细胞（ＤＣ）免疫功能间相关性。方法以健康成人（ｎ＝１０）作为对照，检测１０名临床确诊的肝癌患者外周血ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达水平及其免疫诱导能力。结果发现肝癌患者ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达水平（６．７±１．６及６．１±１．１）明显低于对照组（１０．７±１．４及９．６±１．２，Ｐ＜０．０５）；其ＤＣ体外诱导Ｔ细胞增殖的能力（６２００±９０ｃｐｍ）明显低于对照组（３１００±１２０ｃｐｍ，Ｐ＜０．０５）；以抗ＨＬＡ－ＤＲ单抗及抗Ｂ７单抗封闭正常人ＤＣ后，其诱导Ｔ细胞增殖能力亦明显低于对照组。结论肝癌患者ＤＣ表面ＨＬＡ－ＤＲ及Ｂ７表达低下致ＤＣ的免疫功能低下，而ＤＣ的免疫功能低下则可能是肝癌（或许包括其他肿瘤）逃避宿主免疫监视的重要原因     

树突状细胞诱导抗人肝癌细胞系的肿瘤免疫

目的 以树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导抗肝瘤免疫。方法 自肝癌患者外周血中分离ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）联合刺激ＤＣ;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒素性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ对ｅｐＧ２细胞,ＢＥＬ－７４０２细胞、ＳＧＣ－７９０１细胞、ＬＯＶＯ细胞及ＨＯＳ－     

树突状细胞体外诱导肝癌免疫抑制裸鼠人肝癌细胞系Hep …

为研究树突状细胞（ＤＣ）体外诱发抗肿瘤免疫能否预防裸鼠发生及抑制裸鼠移植生长，联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ－４）直接从肝癌患者外周血中培养出ＤＣ；以源于人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２的肿瘤抗原粗提物刺激ＤＣ，ＤＣ激活同源的Ｔ淋巴细胞；以被激活的Ｔ淋巴细胞预防性接种于裸鼠皮下，观察进一步接种的人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２移植瘤发生；观察被激活的Ｔ淋巴细胞抑制已接种于裸鼠的人肝癌     

树突状细胞、甲胎蛋白和肝癌靶向性调控治疗

树突状细胞(dendriticcells，DC)是由抗原递呈细胞家族组成。分布于除脑和睾丸以外身体各部的任何组织。DC能捕获细菌、病毒等抗原，并递呈给次级淋巴器官的T细胞，是天然免疫和适应性免疫连接的一个重要纽带。DC既能诱导初级免疫反应，又能诱导次级免疫反应，是启动、调控、并维持免疫应答的中心环节，是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞。DC通过受体的方式摄取外来抗原，     

树突状细胞诱导抗人肝癌细胞系的肿瘤免疫

 目的 以树突状细胞(DC)在体外诱导抗肝癌免疫.方法 自肝癌患者外周血中分离DC;以粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)联合刺激DC;以人肝癌细胞系HepG2细胞和BEL-7402细胞的肿瘤相关抗原(TAA)激活DC;DC诱导自体T淋巴细胞增殖、分化为细胞毒素性T细胞(CTL);检测CTL对HepG2细胞、BEL-7402细胞、SGC-7901细胞、LOVO细胞及HOS-8603细胞的细胞毒作用.结果 肝癌患者外周血DC能够诱导自体T淋巴细胞增殖分化为CTL,该CTL对HepG2细胞和BEL-7402细胞有强大的杀伤力(杀伤率分别为90%±10%,86%±11%),对SGC-7901细胞、LOVO细胞及HOS-8603细胞则无明显的细胞毒作用(杀伤率分别为11%±6%,8%±4%,6%±4%).结论 肝癌患者外周血DC体外能够诱导高效而特异抗肝癌免疫.提示DC可能在治疗肝癌及预防肝癌术后复发和转移中发挥重要作用.     

肿瘤疫苗的研究进展

近年来随着分子生物学的发展和基因工程技术的出现,肿瘤疫苗的研究有很大飞跃,成为肿瘤主动性免疫治疗的重要手段之一。本文从转基因瘤苗、树突状细胞（ＤＣ）与瘤苗、抗独特型瘤苗、瘤苗制备和修饰的其它手段等几个方面综述肿瘤疫苗的部分研究进展。     

IL-27基因转染对树突状细胞表型和功能的影响

目的 探讨转染IL-27基因体外对人外周血单个核细胞来源树突状细胞表型和功能的影响。方法 采集健康成人外周血,密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用GM-CSF、IL-4诱导树突状细胞（Dendritic cell, DC）,第5天后将DC分为3组：IL-27基因转染组、TNF-α组和阴性对照组。倒置显微镜观察DC形态;流式细胞术检测DC表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况;MTT法检测DC刺激T细胞增殖的能力;ELISA法检测细胞培养上清中IL-12和IFN-γ的含量。结果 转染IL-27基因后外周血单个核细胞来源DC呈现典型的成熟DC形态学特征。IL 27基因转染组DC表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较阴性对照组均明显上调（P<0.05）。IL-27基因转染组DC诱导T细胞增殖的能力较对照组DC明显增高（P<0.05）。IL-27基因转染组DC培养上清中IL-12和IFN-γ的含量均明显高于对照组DC（P<0.01）。结论 转染IL-27基因可以上调成熟DC的细胞表型,增强DC的免疫学活性。     

抗原致敏DC联合CIK在原发性肝癌治疗中的应用

目的:探讨负载自身肝癌裂解物的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养对CIK体外杀伤活性的影响,并观察抗原致敏DC(Ag-DC)联合CIK治疗原发性肝癌后患者的免疫状态、临床疗效及毒副反应.方法:选择24例原发性肝癌患者,分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经GM-CSF和IL-4诱导产生DC,并负载自体肿瘤裂解物;悬浮细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1α体外诱导产生CIK.将Ag-Dc与CIK共培养,观察CIK在体外对肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤活性;24例患者接受Ag-DC+CIK的过继免疫治疗,观察疗效.结果:1)Ag-DC与CIK共培养后,CIK体外肿瘤杀伤活性明显提高;2)Ag-Dc联合C1K治疗原发性肝癌可明显改善患者细胞免疫功能,提高临床疗效;3)除一过性发热、畏寒外未见其它不良反应.结论:负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK可作为原发性肝癌常规治疗的有效辅助手段.     

Anti-tumor Efficacy of a Hepatocellular Carcinoma Vaccine Based on Dendritic Cells Combined with Tumor-derived Autophagosomes in Murine Models

The majority of hepatocellular carcinoma (HCC) patients have a poor prognosis with current therapies, andnew approaches are urgently needed. We have developed a novel therapeutic cancer vaccine platform based ontumor cell derived autophagosomes (DRibbles) for cancer immunotherapy. We here evaluated the effectivenessof DRibbles-pulsed dendritic cell (DC) immunization to induce anti-tumor immunity in BALB/c mouse HCCand humanized HCC mouse models generated by transplantation of human HCC cells (HepG2) into BALB/c-numice. DRibbles were enriched from H22 or BNL cells, BALB/c-derived HCC cell lines, by inducing autophagyand blocking protein degradation. DRibbles-pulsed DC immunization induced a specific T cell response againstHCC and resulted in significant inhibition of tumor growth compared to mice treated with DCs alone. Antitumorefficacy of the DCs-DRibbles vaccine was also demonstrated in a humanized HCC mouse model. Theresults indicated that HCC/DRibbles-pulsed DCs immunotherapy might be useful for suppressing the growthof residual tumors after primary therapy of human HCC.     

树突状细胞对肿瘤浸润淋巴细胞抗小鼠肝癌活性影响的研究

目的探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性,并将H22-DC-TIL过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用。方法从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性、血清TNF活性、抑瘤作用以及瘤体病理改变,并与对照组相比较。结果①H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性[杀伤率为(71.31±3.11)%],明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性[杀伤率分别为(50.11±3.03)%,(30.31±2.89)%],也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-脾淋巴细胞和未经DC激活的脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性[杀伤率分别为(49.80±3.21)%,(48.76±3.60)%和(19.23±2.71)%]和对Hepal-6细胞杀伤活性[杀伤率分别为(39.40±3.21)%,(38.62±2.87)%和(18.73±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤率分别为(26.38±2.51)%,(25.82±2.70)%和(18.34±3.01)%],同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。②H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性[活性为(30.43±1.35)%、(31.40±1.80)%、(35.30±1.20)%],并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/ml],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-脾淋巴细胞组、未经DC激活的脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。该组瘤体内淋巴细胞浸润程度也高于对照组,其瘤体生长明显受到抑制。结论①H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。②H22-DC-TIL具有很强的特异性抗小鼠肝癌作用。     

GM—CSF基因转染瘤苗预防性免疫保护作用的实验研究

为了观察低肿瘤负载时ＧＭＣＳＦ 基因转染瘤苗抗肿瘤作用及其效果。应用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因转染的、６０Ｃｏγ射线照射后制成的瘤苗,进行预防性免疫保护作用的研究;对荷瘤小鼠,手术切除肿瘤结节,研究该基因疗法对预防术后肿瘤复发的影响。结果表明, ＧＭＣＳＦ 基因转染瘤苗预防性免疫治疗后,能诱导小鼠产生特异性免疫反应,抵抗随后野生型亲本肿瘤细胞的攻击,并能有效地预防手术后肿瘤复发。以上结果揭示了应用该疗法进行肿瘤基因治疗的可行性。     

蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用

目的探讨蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响及其抗血管生成作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察蜂毒素对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法,检测肿瘤组织微血管密度（microvessel density,MVD）及碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和核转录因子κB（nuclear factorκB,NF-κB）的水平。结果蜂毒素低、中、高剂量组相对肿瘤增殖率分别为48.78%、38.33%和33.82%。与生理盐水组比较,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小（P〈0.01）。免疫组化结果显示,蜂毒素可降低肿瘤组织MVD,且蜂毒素处理组bFGF、HIF-1α和NF-κB蛋白水平明显低于生理盐水组（P〈0.01）。结论蜂毒素可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,其作用机制可能是降低NF-κB活性,抑制HIF-1α转录,进而下调bFGF表达,最终阻碍肝癌血管生成。     

负载肺癌抗原DC疫苗抗肿瘤免疫实验

 目的探讨负载人肺癌细胞株A549冻融抗原DC疫苗体外抗肿瘤免疫效应。方法自脐血分离单核细胞，经rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α诱导树突状细胞（DC），负载人肺癌细胞株A549冻融抗原、LPS诱导成熟，利用免疫磁珠分选获得功能性肺癌DC疫苗（UbDC／AgL），ELISA测定UbDC／AgL培养上清中细胞因子浓度、LDH法测定特异性细胞杀伤（CTL）活性及MTT法检测自身混合淋巴细胞反应（AMLR）。结果UbDC／AgL细胞组IL-1、IL-12、IL-6和IFN-β含量明显高于UbDC／Ag和UbDC组（P〈0．01）；UbDC／AgL疫苗细胞能有效诱导肿瘤特异性CTL活性，对A549细胞有特异性杀伤作用（P〈0．01），并能有效促进淋巴细胞增殖。结论负载肿瘤冻融抗原DC疫苗，能有效激活T淋巴细胞进而诱导肿瘤特异性杀伤效应。     

多抗甲素对树突状细胞瘤苗体外抗肿瘤活性的影响

 目的 研究多抗甲素（Polyactin A,PA）对树突状细胞（Dendritic cell,DC ）瘤苗体外抗肿瘤活性的影响。 方法 用GM-CSF、IL-4、TNF-α体外诱导扩增脐血单个核细胞（CBMCs）中的DC,24h后将凋亡、坏死的HeLa、HepG2细胞分别加入CBMCs共孵育,使DC接受肿瘤细胞全抗原刺激,成为DC瘤苗,之后再加入PA刺激活化DC瘤苗,3天后以CBMCs为效应细胞（另设未加PA组为对照）,以相应的肿瘤细胞为靶细胞,用MTT法测定不同效靶比下效应细胞对HeLa、HepG2细胞的杀伤率。 结果加入PA后,CBMCs对HeLa、HepG2细胞的杀伤率显著提高,明显高于未加PA组。 结论PA可增强DC瘤苗对相应肿瘤的杀伤率。     

不同时期应用细胞瘤苗对红白血病荷瘤小鼠抗瘤作用的研究

目的：探讨不同时间应用细菌瘤苗对红细胞病荷瘤小鼠的抗瘤作用。方法：在不同时间内应用瘤苗免疫治疗红白血病荷瘤小鼠，观察小鼠生存期，皮下肿瘤大小及肿瘤，注射部位病理变化。结果：3天，7天瘤苗治疗的小鼠生存期延长，皮下肿瘤生长缓慢，病理可见瘤组织坏死及大量以单个核细胞为主的炎细胞浸润，与PBS组及10天瘤苗组相比，有显著性差异。结论：3天，7天瘤苗比10天瘤苗组抗肿瘤作用强。     

Incidence of Hepatocellular Carcinoma in Children in Khon Kaen before and after National Hepatitis B Vaccine Pogram

Background: Hepatitis B virus infection is one of the most important risk factors for hepatocellular carcinoma.Hepatitis B vaccination has been obligatory in the Expanded Program on Immunization (EPI) in Khon Kaensince 1990. Objective: To compare the incidence of hepatocellular carcinoma in children in Khon Kaen provincebefore and after the introduction of national hepatitis B vaccination program. Methods: Cases of liver tumors inchildren under 18, diagnosed during 1985-2007, were retrieved from the population-based cancer registry ofKhon Kaen. Patients were divided into 2 groups, vaccinated and non-vaccinated with hepatitis B vaccine regardingthe year of birth before or after 1990. Patients with diagnosis of liver cancer from any basis of diagnosis inpopulation-based registration, except hepatoblastoma, were included. Patients without verified histology wereassumed as having hepatocellular carcinoma if the age at diagnosis was over 10. Age-standardized incidencerates (ASRs) were analyzed and expressed as numbers per 1,000,000 population. Results: Fifteen patients aged13 to 18 years were included to this study. The mean and median ages at diagnosis were 15.7 and 15 yearsrespectively. Four children had a verified histology (age 14 to 18 years, median and mean = 16). The remaining11 patients were diagnosed based on history & physical examination, radiology and death certificate, at theaged of 13 to 18 years. The ASRs for liver cancer in children over 10 years of age of non-vaccinated and vaccinatedchildren were 0.88 and 0.07 per million respectively (p = 0.039). When calculated by including children at orolder the 5 years of age, the ASRs for non-vaccinated and vaccinated cases were 0.97 and 0.24 per millionrespectively (p = 0.007). Conclusions: The incidence of hepatocellular carcinoma is significantly lower in Thaichildren who receive hepatitis B vaccine at birth.