利用小鼠感染模型筛选与鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白抗原

目的:利用小鼠感染模型筛选与鉴定幽门螺杆菌SS1株的外膜蛋白抗原。方法:提取SS1株的外膜蛋白进行双向电泳,用幽门螺杆菌感染的小鼠血清作免疫印迹实验,将阳性反应蛋白点进行质谱鉴定分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果:获得32种抗原相关蛋白。通过与已有报道的幽门螺杆菌感染人抗原比较分析,发现大部分典型的保护性抗原在本实验中都可以检测到。结论:幽门螺杆菌感染的小鼠模型适用于人用保护性幽门螺杆菌抗原的筛选;而且此研究中得到的相关抗原蛋白对于寻找与鉴定幽门螺杆菌未知保护性抗原也有参考价值。     

布鲁氏菌DNA疫苗的发展:过去、现在和未来

布鲁氏菌病(Bmcellosis)是目前世界上流行最广,危害最大的人畜共患病之一,其致病菌为胞内寄生的革兰氏阴性杆菌,感染机体后主要激发细胞保护性免疫反应。新兴的DNA疫苗将表达的目的蛋白以肽的形式递呈给MHCI后能激活抗原特异性T细胞,诱发细胞介导的免疫反应,为控制布鲁氏菌病提供了一条可行途径。1997年第一种布鲁氏菌DNA疫苗pCDNA3-L7/L12构建成功并在动物实验中表现出了潜在的应用前景。本文介绍了现有的目前几种较为成功的布鲁氏菌DNA疫苗,分析其优、缺点,并探讨了未来提高其免疫效果的可能途径。     

布鲁氏菌DNA疫苗的发展：过去、现在和未来

布鲁氏菌病(Brucellosis)是目前世界上流行最广，危害最大的人畜共患病之一，其致病菌为胞内寄生的革兰氏阴性杆菌，感染机体后主要激发细胞保护性免疫反应。新兴的DNA疫苗将表达的目的蛋白以肽的形式递呈给MHCI后能激活抗原特异性T细胞，诱发细胞介导的免疫反应，为控制布鲁氏菌病提供了一条可行途径。1997年第一种布鲁氏菌DNA疫苗pCDNA3-L7／L12构建成功并在动物实验中表现出了潜在的应用前景。本文介绍了现有的目前几种较为成功的布鲁氏菌DNA疫苗，分析其优、缺点，并探讨了未来提高其免疫效果的可能途径。     

SARS冠状病毒S蛋白表位合成肽抗原性的研究

目的　研究SARS病毒合成肽疫苗。方法　根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质 ,选择了SARS病毒编码的spike蛋白抗原表位蛋白质序列 ,运用计算机抗原表位预测技术 ,筛选抗原表位 ,以合成肽抗原表位。通过对SARS病人血清进行筛选确定与血清高交叉反应的 3个短肽 ,再合成多重抗原肽 (multipleantigenicpeptide ,MAP) ,与KLH偶联后免疫小鼠。结果　筛选的 3条与SARS病人血清反应强的肽 ,免疫小鼠均产生了高效价的抗体。结论　以合成肽为免疫原研究SARS病毒肽疫苗有着广阔前景。     

HCV包膜蛋白的免疫与疫苗研究进展

近年来使用重组蛋白及合成肽的研究表明，在ＨＣＶ膜区存在着多个Ｂ细胞表位，抗外膜蛋白抗体的检出率高度依赖于抗原获得的方法，不同的感染阶段以及检测模式。随着噬菌体呈现技术，转细胞技术、核酸免疫技术等用于ＨＣＶ感染的致病机理及疫苗研究，对进一步完善和发展有效的ＨＣＶ疫苗提供了新的途径。     

幽门螺杆菌18kD外膜蛋白的基因克隆、重组载体的构建

近年来 ,由于抗生素广泛的、大剂量的应用 ,导致耐药菌株的产生 ;鉴于此 ,不少研究工作者正致力于开发研究新的有效控制幽门螺杆菌引发疾病的疫苗。研制Ｈｐ疫苗至关重要的问题有三种 :(1)必须发现能干扰粘附和毒性且存在于所有菌株的保护性抗原 ;(2 )临床前试验需要能模仿感染和疾病的动物模型 ;(3)需要适合人体的粘膜佐剂。因此首先要寻找有效的保护性抗原。细菌的外膜蛋白是一种里外不对称、半通透性、完整的膜 ,具有刺激机体产生细胞和体液免疫以及逃避机体清除的能力。Ｈｐ18ｋＤ外膜蛋白属于Ｈｐ其他蛋白家族类 ,是Ｈｐ特异性蛋白 ,具…     

用亲和层析处理的抗体鉴定布鲁氏菌致病株与疫苗株差异抗原的研究

目的 建立用亲和层析处理的抗体鉴定布鲁氏菌致病株与疫苗株差异抗原的方法.方法 以羰基二咪唑(CDI)活化载体sepharose CL 4B,制备布鲁氏菌抗原亲和层析柱.致病株M28抗体先经疫苗株M5抗原柱吸附、中和,洗出液再经致病株M28抗原柱纯化、浓缩,分别与M28、M5抗原进行免疫印迹反应.结果 处理后的M28抗体与M28抗原间存在两条特异的反应条带,此两条条带没有出现在与M5抗原的反应条带中.结论 通过亲和层析处理的致病株M28抗体能够用于布鲁氏菌致病株与疫苗株差异抗原的鉴定.     

感染人单核细胞THP-1前后钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达差异性

目的 了解感染人单核细胞THP-1前后钩端螺旋体(简称钩体)外膜蛋白表达变化,为选择钩体基因工程疫苗候选抗原提供依据.方法 采用Triton X-114法提取感染THP-1细胞前后问号钩体黄疸出血群赖型赖株外膜蛋白.采用双向电泳技术分离钩体外膜蛋白,银染色法检测感染前后钩体外膜蛋白表达量及其差异.感染细胞后4个表达显著上调和4个表达显著下调的钩体蛋白点胰酶水解后,采用LC-MS/MS方法进行鉴定.应用生物信息学软件分析靶蛋白跨膜区和信号肽,采用实时荧光定量RT-PCR检测感染细胞前后靶基因mRNA水平变化.构建靶基因原核表达系统,采用钩体感染豚鼠模型了解重组靶蛋白的免疫保护作用.结果 感染THP-1细胞60 min后,问号钩体赖株外膜蛋白中Loa22、GroEL、F0F1 ATP合成酶α和β亚单位表达水平均显著升高(P＜0.05),FluB2、LigB、OmpA和OmpA家族蛋白表达显著下降(P＜0.05),实时荧光定量RT-PCR检测结果与之基本一致.生物信息学分析结果显示,上述8个外膜蛋白中,OmpA和OmpA家族蛋白为跨膜蛋白,其余均无跨膜结构,Loa22、LigB和OmpA家族蛋白含有信号肽.200 μg重组表达的靶蛋白 rLoa22或rGroEL对豚鼠的免疫保护率均为75.0％.结论 问号钩体赖株感染细胞时外膜蛋白表达谱可发生明显变化.感染后高表达的钩体外膜蛋白尤其是GroEL和Loa22,可作为钩体基因工程疫苗侯选抗原.     

布鲁氏菌引起的巨噬细胞依赖性树突状细胞迁移与免疫应答

目的: 研究阴道巨噬细胞清除后小鼠对布鲁氏菌疫苗的免疫应答机制.方法: BALB/c小鼠60只随机分为3组, 每组20只, 实验组小鼠阴道内滴注脂质体包裹的clodronate以清除阴道巨噬细胞, 3 d后阴道滴注10 μL布鲁氏菌疫苗(含6×108个布鲁氏菌).同时设空脂质体对照组(不含clodronate)和PBS对照组.依次在12、 24、 36、 72 h收集小鼠阴道、髂内淋巴结和血液.采用免疫组织化学染色法观察阴道巨噬细胞清除效果和树突状细胞(DC)的迁移, 并用ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4的含量.收集小鼠腹腔液制备巨噬细胞进行细胞培养, 1.2×106个巨噬细胞中加入布鲁氏菌疫苗10 μL, 于不同时间点对巨噬细胞进行姬姆萨染色, 观察巨噬细胞的变化.结果: 清除巨噬细胞组小鼠接种布鲁氏菌疫苗后, 髂内淋巴结中S-100阳性DC数量没有明显的变化, IFN-γ和IL-4的含量也没有明显的升高.非清除组中, 不同的时间点, 髂内淋巴结中S-100阳性DC明显增多, 与PBS对照组相比, IFN-γ含量显著增高, 而IL-4则没有明显变化.体外巨噬细胞负载布鲁氏菌疫苗发现, 随着时间的延长, 巨噬细胞吞噬布鲁氏菌逐渐增多, 在12 h, 巨噬细胞开始出现坏死性凋亡.结论: 小鼠在对布鲁氏菌疫苗的免疫应答中, DC的迁移是巨噬细胞依赖性的, 并且这种依赖性有可能是由布鲁氏菌抗原成分在细胞间间接传递引起的.     

应用ELISPOT方法筛选确定尼帕病毒融合糖蛋白和附着糖蛋白的H-2~d限制性T细胞表位

目的在小鼠中筛选和确定尼帕病毒(Nipah virus, NiV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein, F)和附着糖蛋白(attachment glycoprotein, G)特异性的H-2d限制性T细胞表位。方法本研究基于NiV F和G蛋白全序列设计合成多肽库(单肽长为15个氨基酸, 前后肽重复10个氨基酸), 使用表达NiV F和G蛋白的DNA疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠, 通过矩阵设计将F和G抗原全序列肽库分别混合成肽池, 取免疫后小鼠脾细胞进行IFN-γ ELISPOT检测, 确定肽库中特异反应的优势表位肽。结果 F肽库筛选到12条特异性优势肽, 第56条多肽产生的反应最强;G肽库筛选到4条特异性优势肽, 第72条多肽产生的反应最强。结论本研究使用IFN-γ ELISPOT方法筛选和确定了12条NiV F抗原特异性和4条NiV G抗原特异性H-2d限制性优势T细胞表位, 为NiV免疫学与疫苗研究提供了参考。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Aspects of the problem of direct introduction of Standards of International Organizations

Editorial note. This article is published as part of a discussion. Particular issues of the article are disputable. First of all, this concerns the so-called “folder” method of introduction of international standards for medical devices to domestic medical practice (i.e., by direct translation of the standards and their publication as standardizing documents). Nevertheless, at least one of the problems, the problem of coordination between domestic state standards for medical devices and international recommendations of ISO and IEC, is undoubtedly of topical importance. Advancement of new health service legislation which is to be approved by law-makers will definitely introduce corrections into the present situation. The Editorial Board of Meditsinskaya Tekhnika believes this article will lessen these problems and to be welcomed by readers.