rhG-CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的 研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor，rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白(macrotubule-associated protein2，MAP-2)mRNA表达的关系。方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，观察rhG-CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，测定rhG-CSF用药组和非用药组的MAP-2 mRNA表达水平的改变。结果 比较rhG-CSF治疗组与非用药组：治疗组大鼠，局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低，神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP-2 mRNA表达明显提前恢复正常。结论 一定剂量的rhG-CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤，保护神经元，改善功能预后。     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血皮层 p-ERK及c-Fos表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后活化的胞外信号调节激酶和c-Fos的表达变化及垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对其表达的影响。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,72只大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注对照组、缺血再灌注PACAP治疗组,大脑中动脉阻塞2h分别再灌注2、12、24、48h。再灌注后各时间点进行神经功能学评分后处死大鼠,免疫组织化学法分别检测3组大鼠p-ERK及c-Fos表达水平。结果缺血再灌注不同时间点PACAP组大鼠神经功能学评分较缺血再灌注对照组减低。脑缺血诱导JNK活化,缺血再灌注对照组缺血侧皮层p-ERK 2h达高峰后渐下降;c-Fos分别在2、24h表达高峰。与之相比,PACAP组各时间点p-ERK表达升高,24、48h c-Fos表达下降。结论PACAP对局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,部分依赖于其上调了磷酸化EPK的表达,并下调了延迟表达的c-Fos基因。     

成年大鼠局灶脑缺血/再灌注后海马BDNFmRNA和bFGF mRNA的动态变化研究

目的观察局灶脑缺血/再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)mRNA的动态表达。方法将108只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、假手术组(SC组)、模型组(I/R组),每组再于缺血1h后再灌注于1,3,7,14,21,28d六个时间点进行观察,正常组和假手术组于相应时间点同步观察。采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型。应用原位杂交法检测大鼠缺血再灌注后1,3,7,14,21,28d缺血侧海马BDNF mRNA和b FGF mRNA表达。结果正常海马区可见少量BDNF mRNA和b FGF mRNA的阳性表达。BDNF mRNA阳性反应主要集中于齿状回颗粒细胞以及CA2、CA3中的锥体细胞胞浆中,b FGF mRNA主要位于海马锥体细胞层、CA1、CA2区。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马BDNF mRNA表达增加,主要见于齿状回颗粒细胞层和锥体细胞层。缺血/再灌注后1d时BDNF mRNA阳性反应即有增多,3d时达到高峰(P0.01),阳性产物染色较深,7d后迅速下降(P0.01),28d时接近正常水平。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马可见b FGF mRNA的强阳性表达,1d时开始增加(P0.05),3d即达一小高峰(P0.01),7d开始下降,21d时明显下降,28d时降到正常水平(P0.05)。结论局灶脑缺血/再灌注可上调BDNF mRNA和b FGF mRNA的表达,有利于脑缺血后神经功能恢复,具有神经保护作用。     

炎性介质阻断剂对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损、细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨炎性介质阻断剂AG490对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损、细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的影响。方法雄性SD大鼠被随机分为假手术组、缺血再灌注组、生理盐水组、AG490组;采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型;AG490组于脑缺血即刻及再灌注后12 h分别腹腔注射AG490 1 mg/kg。再灌注24 h后对各组大鼠进行神经功能缺损评分;利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测神经细胞凋亡数;应用Western Blot法检测各组脑组织磷酸化酪氨酸蛋白激酶(P-JAK2)、磷酸化信号转导和转录激活因子(P-STAT3)、caspase-3表达。结果与缺血再灌注组及生理盐水组比较,AG490组大鼠神经功能缺损评分明显减低(均P<0.05);凋亡细胞数及P-JAK2、P-STAT3、caspase-3表达明显减少(均P<0.01)。结论AG490可阻断JAK2/STAT3细胞因子信号转导通路,有效抑制caspase-3表达,减轻缺血灌注损伤后神经细胞凋亡,改善神经功能缺损症状。     

尤瑞克林对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12表达的影响

目的探讨尤瑞克林(urokallikrein)对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(cysteinyl aspartate specific proteinase-12,caspase-12)表达的影响及其对糖尿病合并急性脑缺血再灌注损伤神经细胞的保护机制。方法将82只雄性SD大鼠随机分为假手术组(10只)、缺血组(36只)和尤瑞克林组(36只)。以无菌链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制作糖尿病大鼠模型,采用Zea-Longa法制作大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型,比较各组大鼠脑缺血2h再灌注12、24、48h神经功能评分、缺血半暗带细胞凋亡数目及caspase-12表达的差异。结果与假手术组比较,缺血组和尤瑞克林组大鼠脑缺血再灌注12、24、48h神经功能评分、细胞凋亡数及caspase-12表达水平均升高(均P0.05),而尤瑞克林组神经功能评分、细胞凋亡数及caspase-12表达水平低于缺血组(均P0.05)。结论尤瑞克林对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的抑制作用可能通过下调caspase-12表达而实现。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后早期生长反应基因-1 mRNA的表达

目的探讨早期生长反应基因-1( early growth response gene-1,Egr-1)mRNA在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达情况。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200 ～250 g,应用原位杂交和RT-PCR方法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后Egr-1 mRNA的表达情况。结果 (1)原位杂交结果:假手术组神经元及胶质细胞为轻度阳性表达。缺血2 h再灌注2 h后,缺血侧Egr-1 mRNA细胞阳性表达明显增强。再灌注4 h时Egr-1 mRNA细胞阳性表达最高,再灌注22 h Egr-1 mRNA细胞阳性表达下降,至166 h时下降更加明显,但仍显著高于假手术组。(2)RT-PCR结果:大鼠脑缺血再灌注后缺血侧Egr-1 mRNA的表达明显高于假手术组,P<0.01。动态观察发现,脑缺血2h再灌注2 h后,Egr-1 mRNA即高表达,缺血2 h再灌注4 h达高峰,再灌注46 h已明显下降,但仍高于假手术组,P<0.01,随缺血再灌注时间延长,Egr-1 mRNA表达又逐渐增多,至再灌注166 h其表达亦明显高于假手术组,P<0.01。结论缺血再灌注后Egr-1 mRNA有规律性表达。     

丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的研究丁苯酞预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法健康成年SD雄性大鼠48只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、丁苯酞预处理组,每组各16只。各组均灌胃5d后,采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注(MCAO)模型,缺血2h、再灌注24h,进行神经功能缺损评分,TTC染色及图像分析观察脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织caspase-3、bcl-2表达的变化。结果与缺血再灌注组相比,丁苯酞预处理组神经缺损程度改善,梗死灶体积减少,caspase-3阳性细胞数量减少,bcl-2表达上调。结论丁苯酞可减轻缺血性脑血管病的发作,具有一定的神经保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase—9 mRNA及Apaf—1mRNA表达的动态变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase-9 mRNA及Apaf-1 mRNA表达的动态变化.方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血后再灌注模型,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测caspase-9 mRNA及Apf-1 mRNA的表达.结果缺血2 h后再灌注,缺血皮质中caspase-9 mRNA的表达在再灌注后24h达高峰,48h仍保持高水平,而Apaf-1 muRNA的表达无明显改变.结论局灶性脑缺血后再灌注48h内caspase-9 mRNA表达增强.     

ACEI对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的观察血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)对肾性高血压大鼠脑缺血再灌注后神经功能和细胞凋亡的影响,探讨ACEI的脑保护机制。方法采用狭窄肾动脉方法建立肾性高血压大鼠模型,随机分依那普利组(A组)和高血压缺血再灌注组(B组);正常血压组分为假手术组(C组)和缺血再灌注组(D组)。用线栓法造成大脑缺血再灌注模型,缺血时间为2h,再灌注时间22h。用免疫组织化学技术检测脑组织bcl-2、bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果(1)脑缺血再灌注后神经功能评分:A组神经功能评分较B组和D组降低(P<0.05,);D组神经功能评分低于B组(P<0.05)。(2)A组与B组和D组比较bcl-2表达明显增多(P<0.05),bax表达显著降低(P<0.05),神经细胞凋亡明显减少(P<0.05);B组与D组比较,bcl-2表达明显降低(P<0.05),bax表达明显增加(P<0.05),而神经细胞凋亡明显增多(P<0.05)。结论ACEI明显改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能,减少神经细胞凋亡,上调脑组织bcl-2表达,抑制bax表达,提示对脑缺血再灌注损伤有脑保护作用。     

氯化锂在肢体缺血后处理中对脑缺血再灌注大鼠的糖原合酶激酶3β/微管相关蛋白2a/b通路的影响

目的探讨肢体缺血后处理中氯化锂对脑缺血再灌注大鼠糖原合酶激酶3β(GSK3β)及其下游微管相关蛋白2a/b(MAP2a/b)的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注组(I/R组),肢体缺血后处理组(Lpost C组)和氯化锂组(Li Cl组),15只每组。制作脑缺血再灌注,肢体缺血后处理及氯化锂干预大鼠模型,于大鼠脑缺血再灌注24 h后进行神经功能缺损评分和大鼠脑梗死体积测定;应用Western blotting法检测P-GSK3β(ser9),MAP2a/b的蛋白表达。结果除了假手术组,I/R组神经功能缺损评分和脑梗死体积最大,Lpost C组较小,Li Cl组神经功能缺损评分和脑梗死体积最小(均P0.05)。与I/R组相比,Lpost C组磷酸化GSK3β(P-GSK3β)(ser9)及MAP2a/b表达增高(均P0.05)。与Lpost C组相比,Li Cl组P-GSK3β(ser9)及MAP2a/b表达明显升高(均P0.05)。结论肢体缺血后处理使P-GSK3β(ser9)表达增加,激活GSK3β/MAP2a/b信号通路对脑缺血再灌注损伤起保护作用。氯化锂通过增加MAP2 a/b的稳定性增强对脑缺血后处理的脑保护作用。     

rhG—CSF增加实验性脑缺血周围区的突触囊泡蛋白的表达

目的:研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑梗死周围区的突触囊泡蛋白(synapstophin,SYN)表达的影响。方法:用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,观察rhG-CSF对神经功能缺损评分的影响;应用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法分别测定梗死周围区SYN的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,治疗组的神经功能缺损评分较低,脑缺血周围区SYN的mRNA和蛋白表达较对照组增高。结论:rhG-CSF可以促进脑缺血周围区的突触囊泡蛋白的表达,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

rhG—CSF增加实验性脑缺血周围区的nestin蛋白表达

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulatingfactor,rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血的神经元保护作用.方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于再灌注不同时间点对治疗组和对照组进行神经缺损评分(NSS);并用免疫组织化学方法测定神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达.结果与对照组相比,rhG-CSF治疗组大鼠的神经缺损评分明显降低(P＜0.05);治疗组脑梗死区周围的nestin表达较对照组增多.结论脑缺血再灌注后,一定剂量rhG-CSF可能通过提高nestin的表达,增加神经细胞的修复,改善脑卒中的预后.     

杏仁核毁损对甲基苯丙胺大鼠脑内5-HT2A受体的影响

目的探讨杏仁核毁损对甲基苯丙胺（MAP）大鼠脑内5-HT2A受体表达的影响。方法24只SD大鼠分为对照组、模型组、假手术组和手术组，每组各6只；采用腹腔注射MAP制备精神分裂症模型，立体定向毁损杏仁核，采用Sams-Dodd法评定各组动物刻板行为的变化，以PCR技术测定脑组织中5-HT2A受体mRNA的表达。结果杏仁核毁损可明显降低MAP大鼠刻板行为评分（P〈0．05）。各组大鼠额叶、颞叶皮质和中脑均有5-HT2A受体mNRA（61lbp）的阳性表达，且均以额叶皮质表达最为强烈；模型组及假手术组大鼠中脑5-HT2A受体mRNA受体表达的水平明显低于对照组和手术组（P〈0．05）。结论杏仁核毁损可改善MAP大鼠的刻板行为，这可能是通过中脑5-HT2A受体mRNA表达的增高而起作用。     

经鼻导入rhG-CSF对脑梗死大鼠皮层FasL和HO-1表达的影响

目的 探讨经鼻靶向中枢导入重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑梗死大鼠皮层Fas配体(FasL)和血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响. 方法将60只大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、脑梗死组、脑梗死+皮下注射rhG-CSF组、脑梗死+经鼻导入生理盐水组、脑梗死+经鼻导入rhG-CSF组.线栓法制作大鼠可逆性大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,2 h后再灌注.于MCAO模型制作成功后1 d、3 d制备脑组织冠状冰冻切片,用免疫荧光染色检测FasL和HO-1在缺血半暗带皮层的表达,激光共聚焦显微镜采集图像并计数阳性细胞数. 结果正常组和假手术组大鼠脑组织中见极少量FasL和HO-1阳性细胞,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).脑梗死组大鼠FasL和HO-1阳性细胞数明显增加(1 d时较3 d时高),表达区域主要为缺血半暗带皮层,与脑梗死+经鼻导入生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05).经鼻给予rhG-CSF治疗后脑梗死大鼠脑组织内FasL阳性细胞表达下降,HO-1阳性细胞表达进一步上调,与脑梗死+皮下注射rhG-CSF组大鼠比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论经鼻靶向中枢导入rhG-CSF可以通过降低FasL、上调HO-1表达抑制脑梗死大鼠缺血半暗带皮层神经元凋亡,参与脑保护机制.     

重组人粒细胞集落刺激因子在大鼠局灶性脑缺血中促进神经细胞分化作用的实验研究

目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠局灶性脑缺血中促进神经细胞分化作用.方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型,于再灌注不同时间点对治疗组和对照组进行神经功能缺损评分,并用免疫组织化学方法测定5-溴脱氧尿核苷(Brdu)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性核蛋白(NeuN)的表达.结果 与对照组相比,rhG-CSF治疗组大鼠的神经功能缺损评分明显降低,治疗组缺血区及周边的Brdu、GFAP、NeuN表达较对照组增多.结论 脑缺血再灌注后,rhG-CSF可促进神经细胞分化,增加神经细胞修复,具有神经保护作用.

Abstract：

Objective To investigate recombinant human granulocyte colony-stimulating factor ( rhG-CSF) induce neuronal differentiation in focal cerebral ischemia rats. Methods A model of focal cerebral ischemia /reperfusion in rats was performed with the intraluminal filament occlusion. To evaluate neurological severity score of rhG-CSF treated group and contrast group in different reperfusion time,and using immunohistochemistry to measure the expression of 5-bromodeoxyuri-dine( Brdu) ,glial fibrilary acidic protein( GFAP) ,Neuronal Nuclei( NeuN) . Results Compare to contrast group, rhG-CSF significantly reduced the neurological severity scores and increased the expression of Brdu, GFAP, NeuN in peri-infarcted zones. Conclusion The rhG-CSF treatment can induce neuronal differentiation, can enhance the repairment of neuronal cells and have neuroprotective effects.     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血大鼠突触可塑性影响的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对脑缺血大鼠神经功能恢复及突触可塑性的影响。方法：采用大鼠大脑中动脉缺血模型，分为假手术组、模型组、PBS组和MSCs组，研究脑缺血24h后移植MSCs的大鼠神经功能缺损评分（NSS）；分别测定梗死灶周围脑组织突触素（SYN）和脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达；电镜及免疫电镜下观察突触结构的变化。结果：与模型组及PBS组大鼠相比，MSCs组的NSS评分较低，SYN及BDNF mRNA的表达则明显较高；电镜检查示MSCs组大鼠突触界面曲率较大，突触后致密物质的厚度增加，突触间隙宽度变窄，突触活性带长度增加；免疫电镜示BrdU阳性细胞和宿主脑神经元形成非成熟的突触样结构。结论：MSCs移植可能通过神经营养效应调节脑缺血周围神经细胞的可塑性改善脑缺血大鼠的神经功能。     

经鼻导入rhG-CSF对脑梗死大鼠皮层FasL和HO-1表达的影响

目的 探讨经鼻靶向中枢导入重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑梗死大鼠皮层Fas配体(FasL)和血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响. 方法将60只大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、脑梗死组、脑梗死+皮下注射rhG-CSF组、脑梗死+经鼻导入生理盐水组、脑梗死+经鼻导入rhG-CSF组.线栓法制作大鼠可逆性大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,2 h后再灌注.于MCAO模型制作成功后1 d、3 d制备脑组织冠状冰冻切片,用免疫荧光染色检测FasL和HO-1在缺血半暗带皮层的表达,激光共聚焦显微镜采集图像并计数阳性细胞数. 结果正常组和假手术组大鼠脑组织中见极少量FasL和HO-1阳性细胞,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).脑梗死组大鼠FasL和HO-1阳性细胞数明显增加(1 d时较3 d时高),表达区域主要为缺血半暗带皮层,与脑梗死+经鼻导入生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05).经鼻给予rhG-CSF治疗后脑梗死大鼠脑组织内FasL阳性细胞表达下降,HO-1阳性细胞表达进一步上调,与脑梗死+皮下注射rhG-CSF组大鼠比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论经鼻靶向中枢导入rhG-CSF可以通过降低FasL、上调HO-1表达抑制脑梗死大鼠缺血半暗带皮层神经元凋亡,参与脑保护机制.     

Rho激酶抑制剂对大鼠脑缺血损伤的脑保护作用及S100B蛋白表达的影响

目的:探讨Rho激酶抑制剂(法舒地尔)对大鼠脑缺血损伤的脑保护作用及S100B蛋白表达的影响.方法:90只雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和法舒地尔组.采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型.术后对3组大鼠进行神经功能缺损评分(NSS);用分光光度法测定髓过氧化物酶(MPO)活性;用干湿重法测定脑含水量;伊文思蓝(EB)法测定血-脑屏障的通透性;实时荧光定量逆转录PCR法检测缺血脑组织中S100B蛋白的表达.结果:与假手术组比较,脑缺血组和法舒地尔组大鼠NSS和MPO活性明显增高,脑含水量、EB含量及S100B蛋白表达明显增加(P<0.05-0.01).与脑缺血组比较,法舒地尔组大鼠NSS和MPO活性明显降低,脑含水量、EB含量及S1OOB蛋白表达明显减少(均P<0.05).结论:法舒地尔可通过抑制脑缺血损伤后的炎症反应发挥脑保护作用,其机制可能与下调S100B蛋白的表达有关.