聚焦电泳法测得的日本型无过氧化氢酶血症的红细胞过氧化氢酶的异质性

作者曾从以下几个方面比较了日本型无过氧化氢酶血症纯合子和杂合子的红细胞过氧化氢酶与正常的过氧化氢酶,即用滴定法测酶活性,氧的释放,酶在血液各种细胞中的分布,对热和一些酶抑制剂的稳定性,柱层析的洗提型式,电泳移动性以及与抗正常人体红细胞过氧化氢酶的血清的免疫反应。结果提示日本型无过氧化氢酶血症不同于瑞士型。同本型无过氧化氢酶血症的过氧化氢     

正常人与高雪氏病人成纤维细胞葡糖脑苷脂酶电泳

葡糖脑苷脂酶是一种与膜结合的溶酶体的酶,催化下述反应: 葡糖脑苷脂→葡萄糖+神经酰胺人类由于这种酶的遗传缺陷引起高雪氏病,此病的特点是葡糖脑苷脂在网状内皮系统内蓄积。利用电泳技术对葡糖脑苷脂酶的研究,可以进一步了解高雪氏病的生化遗传学及常见的成年型(Ⅰ型)与罕见的神经原病变型(Ⅱ型及Ⅲ型)之间的关系。但葡糖脑苷脂酶溶解度低且易于聚集,这就妨碍了酶的电泳分析。本文报导了研究正常人与高雪氏病人成纤维细胞葡糖脑苷脂酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳系统。研究结果表明胎盘的和正常的成纤维细胞葡糖脑苷脂酶的迁移率稍有不同,而     

胰酶激活的E型肉毒毒素及其类毒素免疫原性研究

目的胰酶激活E型肉毒毒素,并研究其类毒素免疫原性。方法胰酶激活E型肉毒毒素,脱毒后制备类毒素,免疫家兔,与常规方法制备的E型肉毒类毒素比较免疫原性。结果胰酶激活E型肉毒毒素的最佳条件为胰酶浓度0.5%、激活时间45 min、p H 6.0、温度37℃,在此条件下可提高毒素毒力1000倍,但其类毒素免疫原性与常规方法无显著性差异。结论胰酶激活E型肉毒毒素,可大幅度提高毒素毒力,但并未改变其免疫原性。     

延胡索酸水合酶缺陷型肾细胞癌32例临床病理和分子分析

延胡索酸水合酶缺陷型肾细胞癌属于罕见的、新近发现的与遗传性平滑肌瘤病和肾细胞癌综合征相关的肿瘤实体。延胡索酸水合酶缺陷型肾细胞癌可表现出多种临床和病理学表现,但通常表现为局部进展和转移性疾病,预后较差。作者通过延胡索酸水合酶免疫组化和(或)延胡索酸水合酶突变分析确定32例延胡索酸水合酶缺陷型肾细胞癌,并对其临床和病理特征进行回顾性分析。     

大鼠腰神经根受压后背根神经节及脊髓后角神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的变化

目的探讨大鼠腰神经根受压后后背根神经节和脊髓后角神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的变化规律.方法选用12只Wistar大鼠,随机分为实验组和正常组,采用免疫组织化学ABC法结合图像分析系统进行研究.结果大鼠腰神经根受压后4周,实验组背根神经节中神经元型一氧化氮合酶阳性神经元细胞数、平均面积明显增多,脊髓后角神经元型一氧化氮合酶阳性神经末梢也明显增多,与正常组相比均有显著性差异.神经元形态以中、小型细胞为主.结论大鼠腰神经根受压后感觉神经元神经元型一氧化氮合酶表达上调,提示神经元型一氧化氮合酶可能与根性腰腿痛的发生有关.     

肺炎克雷伯菌AmpC酶基因分型和随机扩增DNA多态性研究

目的了解我院肺炎克雷伯菌AmpC酶的基因分型及耐药情况,指导临床合理使用抗生素。方法采用K-B法初筛出可疑产AmpC酶的菌株,再用三维试验检测产AmpC酶的情况,用多重PCR进行基因分型、随机扩增DNA多态性技术进行同源性的分析。结果从临床260株肺炎克雷伯菌中初筛出57株可疑产AmpC酶的菌株,三维试验检测57株菌中AmpC酶阳性有51株,产AmpC酶的肺炎克雷伯菌大多数是DHA型占90%,只有很少一部分产MIX型占6%、FOX型占2%和ACC型占2%。通过15种药物对产AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性的分析,51株对亚胺培南的敏感性为98.0%,对头孢西丁耐药性为100%,对其他第三代头孢菌素的耐药性均超过70%。结论我院临床分离产AmpC酶的肺炎克雷伯菌主要基因型是DHA型,且呈多重耐药。     

糖原累积病IB型:微粒体膜葡萄糖-6-磷酸转运系统的缺陷

众所周知糖原累积病(GSD)Ⅰ型(von Gierke病)是一种先天性代谢病,该病酶的缺陷在1952年由Cori和Cori首先证实。可是,随着病例数的积累,已有一些报告表明,在某些von Gierke病的病人肝脏中,葡萄糖-6-磷酸酶(G6P酶)具有正常活性。现在的GSDⅠ型已经分为两种亚型。Ia型是由于G6P酶的缺陷,Ib型在临床上难以与Ia型相鉴别,但肝G6P酶显示出正常活性。直到证实了微粒体膜G6P转运系统的缺陷,Ib型的缺陷才被阐明。本文报告作者关于GSD Ib型的一系列     

大鼠腰神经根受压后背根神经节及脊髓后角神经元型一氧化氮合酶阳性神经元

目的：探讨大鼠腰神经根受压后后背根神经节和脊髓后角神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的变化规律。方法：选用１２只Ｗｉｓｔａｒ大鼠,随机分为实验组和正常组,采用免疫组织化学ＡＢＣ法结合图像分析系统进行研究。结果：大鼠腰神经根受压后４周,实验组背根神经节中神经元型一氧化氮合酶阳性神经元细胞数、平均面积明显增多,脊髓后角神经元型一氧化氮合酶阳性神经末梢也明显增多,与正常组相比均有显著性差异。神经元形态以中、小型细胞为主。结论：大鼠腰神经根受压后感觉神经元神经元型一氧化氮合酶表达上调,提示神经元型一氧化氮合酶可能与根性腰腿痛的发生有关。     

前列腺素D合成酶单克隆抗体的制备及其在精子中的定位

目的制备小鼠抗人Lipocalin型前列腺素D合成酶的单克隆抗体,探讨Lipocalin型前列腺素D合成酶在精子表面的定位与分布。方法用毕氏酵母表达的Lipocalin型前列腺素D合成酶作抗原免疫BALBc小鼠,制备杂交瘤,产生单克隆抗体,ELISA与Westernblot分析鉴定其特异性,免疫组织化学法探讨Lipocalin型前列腺素D合成酶在人精子表面的分布与定位。结果获得了1株抗人Lipocalin型前列腺素D合成酶的单克隆抗体,其效价为1∶1000,抗体亲和力为2×108molL,小鼠IgG亚型为IgG1,Westernblot结果显示该抗体能特异性识别Lipocalin型前列腺素D合成酶,组化结果显示Lipocalin型前列腺素D合成酶定位于人精子表面。结论成功制备了1株鼠抗人Lipocalin型前列腺素D合成酶的单克隆抗体,精子的表面有Lipocalin型前列腺素D合成酶的分布。     

人脐带来源间充质干细胞分离培养方法的优化

背景：关于人脐带间充质干细胞的分离培养方法不一,如何提高人脐带来源间充质干细胞获得效率的问题尚未解决。 目的：优选人脐带来源间充质干细胞制备的消化酶组分。 方法：无菌条件下取正常足月剖腹产的脐带近胎儿段,按不同混合酶浓度比值划分为3组,混合酶Ⅰ组成分为0.4%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA和0.1%透明质酸酶;混合酶Ⅱ组成分为0.1%Ⅱ型胶原酶、0.4%胰酶、0.02%EDTA和0.1%透明质酸酶;混合酶Ⅲ组成分为0.3%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA、0.1%透明质酸酶和0.1%DNA酶。每组再按消化时间分为1,2,3 h 3个亚组。最后重悬细胞终体积均定位4 mL并计数,采用含血清的DMEM培养液体外培养细胞。 结果与结论：采用3种不同混合酶浓度进行消化,发现相同消化时间内,混合酶Ⅲ组消化细胞最多(P < 0.05)。在作用3 h时,混合酶Ⅲ组获取的细胞中活细胞比值显著低于混合酶Ⅰ组和混合酶Ⅱ组(P < 0.01)。提示0.3%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA、0.1%透明质酸酶和0.1%DNA酶混合液消化脐带组织块2 h为获取脐带间充质干细胞的最佳条件。     

黏脂贮积症Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β家系的溶酶体酶学分析

目的分析总结黏脂贮积症(mucolipidosis, ML)Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β溶酶体酶酶学检测的特点, 为选择酶学检测指标提供依据。方法检测两例确诊为ML Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β患者及10例健康个体血浆及白细胞中的多种溶酶体酶活性, 比较患者与健康个体的差异;分别以"mucolipidosis"及"黏脂贮积症"为关键词, 检索PubMed、CNKI、万方数据库, 分析总结已报道的ML Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β的酶学检测结果。结果两例患儿血浆中多种溶酶体酶活性与健康个体相比均明显增高, 程度由高至低分别为:芳基硫酸酯酶A(arylsulphatase A, ASA)和α-L-艾杜糖醛酸酶(α-iduronidase, IDUA)(20倍以上)、β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase, GUSB)(10倍以上)、β-D半乳糖苷酶(β-galactosidase-1, GLB1)和α-半乳糖苷酶(α-galactosidase A, GLA)(5倍以上)、α-N-乙酰葡萄糖胺酶(α-N-acetylglucosaminidase, NAGLU)(2倍), 葡萄糖脑苷酯酶(gluc...     

Ⅱ型糖尿病与脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性的关联

目的探讨Ⅱ型糖尿病与脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性是否有关联.方法采用聚合酶链式反应和限制性片段长度多态性方法,对Ⅱ型糖尿病患者和正常人脂蛋白脂酶基因内含子6PvuⅡ多态性及其对血脂及载脂蛋白(apo)水平的影响进行研究.结果表明Ⅱ型糖尿病与脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性有一定关联.     

内皮型一氧化氮合酶基因转染对人吞噬细胞释放细胞因子和生成环核苷酸的影响

目的和方法:将内皮型一氧化氮合酶基因转染吞噬细胞,观察该基因表达对吞噬细胞释放细胞因子和cAMP的影响。 结果:内皮型一氧化氮合酶可在吞噬细胞获得稳定表达,但该产物在活细胞中不产生一氧化氮。一氧化氮合酶基因表达可上调TNF-α的释放,下调IL-10和cAMP的生成,使用一氧化氮合酶抑制剂不改变这种变化趋势。结论:内皮型一氧化氮合酶基因产物的功能具有细胞特异性。导致吞噬细胞功能变化的效应分子可能不是一氧化氮。     

黏脂贮积症Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β家系的溶酶体酶学分析CSCD

目的分析总结黏脂贮积症(mucolipidosis,ML)Ⅱ型α/β和Ⅲ型α/β溶酶体酶酶学检测的特点,为选择酶学检测指标提供依据。方法检测两例确诊为MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β患者及10例健康个体血浆及白细胞中的多种溶酶体酶活性,比较患者与健康个体的差异;分别以"mucolipidosis"及"黏脂贮积症"为关键词,检索PubMed、CNKI、万方数据库,分析总结已报道的MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β的酶学检测结果。结果两例患儿血浆中多种溶酶体酶活性与健康个体相比均明显增高,程度由高至低分别为:芳基硫酸酯酶A(arylsulphatase A,ASA)和α-L-艾杜糖醛酸酶(α-iduronidase,IDUA)(20倍以上)、β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUSB)(10倍以上)、β-D半乳糖苷酶(β-galactosidase-1,GLB1)和α-半乳糖苷酶(α-galactosidase A,GLA)(5倍以上)、α-N-乙酰葡萄糖胺酶(α-N-acetylglucosaminidase,NAGLU)(2倍),葡萄糖脑苷酯酶(glucocerebrosidase,GBA)(无明显变化)。两例患儿白细胞中多种溶酶体酶的活性与健康个体相比无差异,均在正常范围。筛选出22篇文献,共报道了15个溶酶体酶学指标,血浆中升高最明显的是总己糖胺酶(hexosaminidase A and B,Hex A+B)(平均升高24.4倍)和α-甘露糖苷酶(α-mannosidase,α-man)(24.7倍),其次是ASA(22.4倍),GUSB为18.8倍;选用较多的指标分别是Hex A+B(12篇)、α-man(11篇)和GUSB(10篇)。结论溶酶体酶学分析是MLⅡ型α/β和Ⅲ型α/β不可或缺的辅助诊断手段,通过对两例患儿的血浆酶学的分析和文献复习,推荐选用ASA、GUSB、Hex A+B和α-man为二者的血浆溶酶体酶学分析指标。     

2型糖尿病肾病患者血清脂联素水平与红细胞膜ATP酶活性的关系

目的：探讨了2型糖尿病肾病患者血清脂联素水平与红细胞膜Na^＋·K^＋-ATP酶和Ca^＋2·Mg^＋2-ATP酶活性的改变参与了2型糖尿病肾病发生的可能机制。方法：应用放射免疫分析和Reilnila制膜法测定了45例2型糖尿病无肾病组和31例2型糖尿病肾病组患者血清脂联素水平和红细胞膜Na^＋·K^＋-ATP酶及Ca^＋2·Mg^＋2-ATP酶含量,并与30名正常健康人作比较。结果：2型糖尿病患者无论有无肾病组其血清脂联素水平均非常显著地低于正常人组（P〈0.01）,红细胞膜Na^＋·K^＋-ATP酶和Ca^＋2·Mg^＋2-ATP酶含量也显著地低于正常人组（P〈0.01）。2型糖尿病肾病组与无肾病组亦有显著性差异（P〈0.05）。结论：2型糖尿病的发生与发展与血清脂联素水平与红细胞膜Na^＋·K^＋-ATP酶及Ca^＋2·Mg^＋2-ATP酶的活性有密切的关系。     

介绍一种新型多功能电子酶联检测分析仪

免疫酶技术的深入、广泛开展,急需一种性能好,效率高的标准化国产酶联仪。为此,薛采芳,陈白虹(第四军医大学403室)袁晓光、汪高远、戚恒、马金柱(华东电子管厂)在研制生产DG-Ⅰ型、DG-3021型的基础上,研制成功一种新型、多功能,由微电脑控制的DG-3022型酶联检测、分析仪。该仪器经测试与应用,证明性能稳定,重复性及线性关系都     

肝豆状核变性培养细胞内微粒体铜转运的研究

肝豆状核变性 (Wilson disease,WD)的基因已被克隆 ,定位在 13q14.3。序列分析表明 ,该基因编码一个由 1411个氨基酸组成的铜转运 P-型 ATP酶 [1 ]。有关该酶在亚细胞结构的定位及在细胞铜代谢中的作用 ,尚不清楚。有学者 [2 ,3 ] 对从细菌到人不同类型细胞的铜转运 P型 ATP酶进行了探讨 ,结果不一。我们采用人离体培养皮肤成纤维细胞模型 ,对 WD患者、杂合子及正常人皮肤成纤维细胞 ,经 P型 ATP酶阻滞剂 (矾酸钠 )或激动剂 (长春新碱 )孵育后 [4] ,微粒体铜代谢情况进行分析 ,初步探讨 P型 ATP酶在人成纤维细胞亚细胞结构中的定位…     

质粒AmpC酶转录调控因子AmpR蛋白的表达、纯化及鉴定

质粒AmpC酶是革兰阴性杆菌耐β-内酰胺类抗生素的主要机制之一.产生质粒AmpC酶的细菌对多种抗生素耐药,可以在细菌间传播.近年来在我国各地陆续发现诱导性表达的DHA型质粒AmpC酶,研究其诱导性耐药的表达机制,对预防和控制耐药菌株的传播具有重要的临床意义.本文对诱导DHA型质粒AmpC酶表达的AmpR转录调控因子进行初步研究.     

转染组织纤溶酶原激活物及内皮型一氧化氮合酶基因的内皮细胞和平滑肌细胞共同种植于人工血管对内膜增生的影响

背景：前期研究表明,双层细胞种植能有效提高内皮细胞保留率,将组织纤溶酶原激活物基因转染到内皮细胞中能提高其细胞溶解纤维蛋白的能力。 目的：采用双细胞种植及修饰内皮的组织纤溶酶原激活物基因提高内皮细胞保留率和抗栓能力,通过内皮型一氧化氮合酶基因调控平滑肌细胞的增殖,观察对小口径人工血管通畅率的影响。 方法：以4种不同组合细胞(内皮细胞+平滑肌细胞SMC,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞,内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)种植在PTFE管腔面。将新西兰大白兔随机分成4组,4种人工血管经旁路分别移植在4组兔的腹主动脉上。 结果与结论：移植后60 d,种植内皮细胞+平滑肌细胞组和内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组内膜厚度无明显差异(P > 0.05)。与内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组相比,未转染内皮型一氧化氮合酶组(内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞）内膜明显增厚(P < 0.05);未转染组织纤溶酶原激活物组(内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)内膜较薄(P < 0.05)。提示组织纤溶酶原激活物基因转染可以促进血管内膜增生导致血管狭窄,但同时转入内皮型一氧化氮合酶基因可以抑制组织纤溶酶原激活物的促进平滑肌细胞增殖及内膜增生的作用。     

过氧化物酶Ⅱ对体外培养人退变腰椎间盘髓核细胞的抑制作用

背景:椎间盘退变可导致髓核细胞数量的减少,过氧化物酶Ⅱ可参与细胞的抗氧化损伤、细胞分裂、分化、信号转导和凋亡等过程的调控。过氧化物酶Ⅱ对椎间盘退变有促进作用,但其机制仍不清楚。目的:观察过氧化物酶Ⅱ对体外培养的人退变腰椎间盘髓核细胞的活性和Ⅱ型胶原合成的影响。方法:体外培养人退变腰椎间盘髓核细胞,设置对照组及过氧化物酶Ⅱ10,100和1000ng/L组。对照组不含氧化物酶Ⅱ,其他3组加入相应剂量的氧化物酶Ⅱ。应用免疫组化法鉴定髓核细胞,并采用cck-8试剂盒检测细胞增殖情况,于加过氧化物酶Ⅱ后第3和7天分别取对照组及各组细胞上清液,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验测定Ⅱ型胶原表达情况。结果与结论:在体外培养的人退变腰椎间盘髓核细胞,随加入的过氧化物酶Ⅱ质量浓度的增加,椎间盘髓核细胞数量和Ⅱ型胶原合成逐渐减少(P0.01)。提示过氧化物酶Ⅱ对椎间盘髓核细胞的数量和Ⅱ型胶原合成有明显的抑制作用,并呈剂量依赖关系。以此推测过氧化物酶Ⅱ对髓核细胞的抑制作用可能是导致椎间盘退变的一种促发因素。