特应性皮炎患儿淋巴细胞Th1/Th2相关趋化因子受体的表达

目的在单细胞水平上,探讨几种与Th1/Th2相关的趋化因子受体的表达在特应性皮炎(AD)发病机理中的作用。方法采用荧光双色流式细胞术分析35例AD患儿及34例健康对照外周血CD4+及CD8+淋巴细胞表面与Th1细胞相关的趋化因子受体CXCR3、CCR5和Th2细胞相关的趋化因子受体CCR3、CCR4及CCR8的表达。结果与健康对照组相比,AD患儿外周血淋巴细胞表面CXCR3(87.10%±10.00%)、CCR5(11.20%±5.16%)、CCR3(12.00%±7.46%)和CCR4(25.90%±8.19%)表达水平显著增加(P分别<0.001、<0.05、<0.001、<0.05),进一步分析发现,CD4+淋巴细胞表面CXCR3(24.30%±7.60%)、CCR5(2.17%±1.17%)、CCR3(4.06%±2.34%)和CCR4(16.80%±4.10%)表达水平明显升高(P<0.05),CD8+淋巴细胞表面CXCR3(22.60%±6.45%)、CCR5(3.28%±1.80%)、CCR3(4.26%±2.02%)、CCR4(15.50%±4.87%)和CCR8(1.30%±0.59%)表达水平亦明显升高(P<0.001或P<0.05)。结论不同淋巴细胞表面Th1/Th2相关的趋化因子受体表达的增加,可能导致Th1/Th2免疫反应在高水平状态下发生失衡,从而在AD发病机理中起着重要作用。     

妊娠合并重症甲型H1N1流感患者T细胞亚群及Th1/Th2水平的变化

[目的]研究妊娠合并重症甲型H1N1流感患者T细胞亚群的分布特点及辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)水平的变化.[方法]收集2009年11月14日至12月31日于中国医科大学附属盛京医院确诊的女性甲型H1N1流感患者34例,按是否妊娠分为甲流妊娠组(A组,17例),甲流非妊娠组(B组,17例),同时收集抗...     

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法(BSA-ICC)并作临床初步应用。方法从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中富集CD4细胞,加入莫能霉素,用不同浓度的佛波醇酯(PMA)和钙离子载体(A23817)诱导CD4细胞不同时间,比较其胞内表达白细胞介素-2(IL-2)/白细胞介素-4(IL-4)的细胞百分率,确定最适诱生条件;用不同稀释度的IL-2M cAb、IL-4M cAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG(b io-SAM IgG)和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)作棋盘配比试验,确认M cAb、b io-SAM IgG和HRP-SA的最适浓度,根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA-ICC法。用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2/IL-4细胞的百分率。结果诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100μg/L和2.0μmol/L,诱导高峰时间分别为5和7 h,BSA-ICC法中所用IL-2M cAb、IL-4M cAb最适稀释度分别为1∶20和1∶40,b io-SAM IgG和HRP-SA浓度分别为10~15μg/m l和15μg/m l。20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为(45.90±4.39)%、(37.28±2.67)%和(25.19±3.49)%,分泌IL-4的细胞百分率分别为(10.5±1.50)%、(9.94±1.06)%和(16.13±2.50)%,IL-2 CD4 /IL-4 CD4 比值分别为3.65±0.94、3.55±0.76和1.27±0.26。结论所建方法可用于T辅助(Th)细胞亚型的测定,从而判断Th细胞的极化状态。妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化,呈Th2反应,可能与恶性肿瘤的发生有关。     

过敏性哮喘患者高迁移率族蛋白1、Th1/Th2细胞亚群及其细胞因子表达分析

目的：探究剪切及多聚腺苷酸化特异因子6（CPSF6）在乳腺癌骨转移中的作用及机制。方法：通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）,免疫印迹（WB）,免疫组织化学染色（IHC）分析12例乳腺癌骨转移患者转移灶及20例乳腺癌患者原发灶CPSF6表达情况。通过细胞实验探索CPSF6对肿瘤细胞生长和转移能力的影响,通过体内转移模型探索CPSF6敲低对乳腺癌细胞骨转移能力的影响。进一步探索乳腺癌细胞通过CPSF6改造细胞外微环境的能力,并采用RT-qPCR, WB实验检验CPSF6对下游靶基因的调控作用。结果：CPSF6在乳腺癌患者转移灶中表达水平显著增高。CPSF6与乳腺癌细胞的增殖和迁移能力正相关。在231-BM细胞中敲低CPSF6后,其分泌的细胞上清促进破骨细胞前体细胞向成熟细胞分化的能力降低;体内实验中,CPSF6敲低的细胞在小鼠体内形成溶骨性病灶的能力显著降低,而且转移灶外周的破骨细胞数量显著下降。CPSF6缺失能够下调肿瘤细胞内Notch通路配体JAG1的表达水平,导致微环境中破骨前体细胞Notch通路失活和下游靶基因的抑制。我们推测肿瘤细胞在转移灶中通过高表达CPSF6,依赖Notch信号途径,促进转移灶周围破骨细胞的成熟,最终产生溶骨性病灶。结论：乳腺癌骨转移灶中存在CPSF6基因过度表达。CPSF6通过调控Notch信号通路,促进肿瘤组织周围破骨细胞的成熟和溶骨活性,从而导致乳腺癌的溶骨性骨转移。     

放化疗对食管癌患者T淋巴细胞及自然杀伤细胞影响的临床研究

目的探讨食管癌患者外周血T淋巴细胞、自然杀伤（NK）细胞的变化及放化疔对其的影响。方法68例经病理组织学确诊的食管癌患者采用单纯放疗或同步放化疗治疗,应用流式细胞仪测定其治疗前后外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞比例,以健康体检人群为对照分析其变化。结果（1）食管癌患者外周血T细胞、Th细胞、Th／Ts细胞比值较正常对照组均明显下降（P〈0．01）,而Ts细胞水平显著升高（P〈0．05）。（2）外周血T淋巴细胞亚群及Th／Ts比例与患者性别、肿瘤分期、病理分化程度、病变部位等临床病理参数无明显相关性。（3）放化疗后,患者外周血总T细胞、Th细胞、Th／Ts细胞比值及NK细胞均上升（P〈0．01）,而Ts细胞降低（P〈0．05）;单放组总T细胞、Th细胞、NK细胞较同步组升高更显著。结论食管癌患者细胞免疫功能低下,检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于患者的免疫监测。放疗及化疗应着重围绕提高总T细胞、Th细胞和NK细胞的数量与功能。     

过敏性哮喘患者高迁移率族蛋白1、Th1/Th2细胞亚群及相关细胞因子表达分析

目的：分析高迁移率族蛋白-1（high mobility group protein-1，HMGB-1）、辅助T淋巴细胞（Th）亚群以及相关细胞因子在不同严重程度的过敏性支气管哮喘患者中的表达意义。方法：选择98例轻中重度过敏性哮喘患者和30例同期体检的健康者（对照组），采用流式细胞术分析患者以及健康者外周血CD4⁺干扰素-γ⁺（IFN-γ⁺）T细胞、CD4⁺白细胞介素-4⁺（IL-4⁺）T细胞百分比。通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中HMGB-1、Th1细胞因子（IFN-γ）和Th2细胞因子（IL-4、IL-5）的表达水平。采用Spearman分析HMGB-1、Th1/Th2细胞亚群及其相关细胞因子与肺功能的相关性。结果：所有哮喘患者HMGB-1、CD4⁺IL-4⁺T细胞百分比、IL-4、IL-5均高于对照组；重度组患者HMGB-1、CD4⁺IL-4⁺T细胞百分比、IL-4、IL-5高于轻、中度患者。所有患者CD4⁺IFN-γ⁺T细胞百分比、IFN-γ表达均低于对照组；重度患者CD4⁺IFN-γ⁺T细胞百分比和IFN-γ表达低于轻、中度患者。HMGB-1、IL-4水平与肺功能负相关，IFN-γ水平与肺功能正相关。结论：HMGB-1和IFN-γ、IL-4可作为评价支气管哮喘严重程度的有效指标。     

流式微球分析法检测血清中Th1/Th2/Th17型细胞因子的表达在肺结核病患者中的临床意义

目的探讨流式微球分析法(CBA法)检测血清Th1/Th2/Th17型细胞因子的表达在结核病患者中的临床意义。方法按照BD CBA Flex Set检测试剂盒的要求,用CBA法检测98例肺结核患者(痰涂片阳性肺结核患者38例,痰涂片阴性肺结核患者60例)和79例同期健康体检者的Th1型细胞因子(白细胞介素2、γ干扰素、肿瘤坏死因子),Th2型细胞因子(白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素10)以及Th17型细胞因子(白细胞介素17A)的表达水平,并分析3组之间的差异。结果除白细胞介素17A组间、组内差异无统计学意义(P0.05)外,结核组白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素10、肿瘤坏死因子、γ干扰素水平均高于对照组(P0.05);痰涂片阳性患者白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10、γ干扰素水平均高于对照组(P0.05),痰涂片阳性患者和阴性患者差异无统计学意义(P0.05);而痰涂片阳性患者白细胞介素6和肿瘤坏死因子水平均显著高于痰涂片阴性患者(P0.05)。结论白细胞介素6和肿瘤坏死因子可作为判断结核病严重程度的指标,监测结核病病情的转归。与此同时,CBA法作为1种新兴的检测技术,敏感度高,可同时检测多种细胞因子,并能大大节约血清用量与时间,因此可作为结核病检测和病情监测的实验室技术。     

FSC/SSC和CD45/SSC分群法流式T淋巴细胞亚群分析的实验研究

目的 建立并标准化流式细胞术外周血T淋巴细胞亚群含量测定方法,探讨CD45/SSC和FSC/SSC分群法检测的特点与适用性.方法 采用FSC/SSC分群的三色流式细胞术和CD45/SSC分群的四色流式细胞术,对194例健康人外周血T细胞亚群进行测定,并调查两种方法检测结果的精密性及临床应用的成功分群率.结果 FSC/SSC分群法健康人外周血总T细胞、T4细胞、T8细胞、T4/T8比值、DN-T细胞、DP-T细胞的百分含量依次为(69.98±5.79)%、(35.25±5.16)%、(25.08±4.34)%、(6.17±3.08)%、(0.71±0.36)%和(1.45±0.28)%;CD45/SSC分群法结果依次为(71.42±6.02)%、(35.82±5.78)%、(24.98±4.45)%、(5.98±3.11)%、(0.67±0.32)%和(1.47±0.30)%,两种方法检测结果之间差异无统计学意义(F检验,P＞0.05).精密度实验显示,FSC/SSC分群法和CD45/SSC分群法的变异系数均在4%以内,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).临床945份标本分析中,FSC/SSC分群法和CD45/SSC分群法的成功分群率分别为97.78%和99.83%,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FSC/SSC分群法和CD45/SSC分群法均可用于外周血淋巴细胞亚群含量的检测;FSC/SSC分群法成本相对低廉,上机操作简便,适合大规模临床应用开展,CD45/SSC分群法适合用于特殊标本的复查.     

CpG-ODN2216刺激健康人外周血淋巴细胞TH1/TH2细胞因子的表达

目的 观察CpG-ODN2216对健康人外周血单个核细胞（PBMC）中TH1/TH2淋巴细胞的极化作用,以及培养上清液中TH1/TH2型细胞因子的水平.方法 取健康献血员外周血用淋巴细胞分离液分离PBMC,与CpG-ODN2216共培养24 h,流式细胞仪检测PBMC中TH1/TH2淋巴细胞的改变,ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的释放水平.结果 CpG-ODN2216能刺激淋巴细胞向TH1、Tc1转化,对TH2无明显的刺激作用.培养上清液中IFN-γ的表达水平显著增高（P＜0.01）,IL-2、IL-4和IL-10无明显改变（P＞0.05）.结论 CpG-ODN2216可以促进外周血淋巴细胞向TH1、Tc1极化,并诱导PBMC产生高水平的TH1型细胞因子IFN-γ,介导TH1型免疫应答.     

狼疮性肾炎患者Th1／Th2细胞因子的研究

目的探讨狼疮性肾炎患者的发病与Th1／Th2优势活化状态之间的关系。方法采用酶联免疫吸附法（FLISA）测定32名狼疮性肾炎患者和10名健康人PBMC培养上清白细胞介素-4（IL-4）,白细胞介素-10（IL—10）,干扰素-γ,（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）水平。结果活动期狼疮性肾炎患者IL-4、IL-10水平明显高于非活动期、正常对照组,差异有显著性（P〈0．05）。活动期狼疮性肾炎患者IL-2水平明显低于非活动期、正常对照组。差异有显著性（P〈0．05）。IFN-γ水平3组间无显著性（P〉0．05）。结论Th2细胞因子介导的免疫应答在活动期狼疮性肾炎的发病机制中占主导地位,活动期狼疮性肾炎患者Th1细胞因子的细胞活化降低。