全反式维甲酸对HL-60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的 探讨全反式维甲(ATRA)诱导HL-60细胞分化过程中人类端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白表达和端粒酶活性的改变。 方法 应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量的变化;采用多聚酶链反应-酶联免疫反应(PCR-ELISA)方法检测ATRA处理HL-60细胞前后端粒酶活性的改变,用碘化丙锭染色经流式细胞仪检测细胞周期变化。 结果 1μmol/L ATRA作用HL-60细胞24、48、72h,hTERT蛋白平均荧光强度分别为61.87±4.36、37.47±2.85、33.45±2.37,与空白对照组相比,具有显著性差异,P<0.05。1μmol/L ATRA作用48h后,HL-60细胞的端粒酶活性即出现下降,作用72h,端粒酶的活性明显受到抑制。 结论 在HL-60细胞分化过程中,ATRA能抑制HL60细胞的hTERT基因的表达和端粒酶活性。     

hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞诱导凋亡作用及细胞周期的影响。方法:应用hTERT ASODN封闭HL-60细胞hTERT基因,RT-PCR方法检测目的基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分析,TUNEL方法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA梯带。结果:hTERT ASODN作用细胞72h后,hTERT基因表达明显受到抑制(P<0.01)。流式细胞仪检测显示:ASODN组细胞阻滞于G₀/G₁期,S、G₂/M期细胞减少(P<0.05);细胞增殖指数(PI)明显降低(P<0.05);检测出早期凋亡峰。Annexin V/PI检测及TUNEL检测均显示:ASODN组凋亡细胞阳性率明显高于SODN组(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳显示:ASODN组出现凋亡DNA梯带。结论:hTERT ASODN能够封闭目的基因表达,阻滞HL-60细胞于G₀/G₁期,并诱导细胞凋亡,对治疗白血病具有潜在应用价值。     

华蟾素对HL-60细胞凋亡诱导作用及与三氧化二砷的协同作用

[目的]观察华蟾素对白血病细胞的凋亡诱导作用及其与三氧化二砷（As2O3)的协同作用。[方法]通过形态学方法、DNA电泳、Annexin V标记法检测华蟾素或（和）As2O3作用后HL-60细胞的凋亡发生情况。[结果]0.0625μg/ml-0.5μg/ml的华蟾素作用48h后，HL－60细胞发生凋亡，并具有一定的量效关系；华蟾素与As2O3合用后对HL－60细胞的凋亡诱导作用明显增强。[结论]华蟾素对白血病细胞具有凋亡诱导作用，并且与As2O3具有协同作用。     

槲皮素对HL-60细胞中c-myc和cyclin D1基因表达的影响

槲皮素(quercetin)是一种天然黄酮类化合物,它能抑制多种癌细胞株的生长,对白血病的治疗具有巨大潜力,其抗增殖的作用机理虽有许多研究[1,2],但对c-myc和cyclinD1的影响却少有报道.本实验以HL-60细胞为靶细胞,研究槲皮素对c-myc和cyclinD1表达的影响.     

柔红霉素对HL-60细胞凋亡及Fas、FasL表达的影响

目的 :通过测定柔红霉素 (DNR)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60凋亡及Fas/FasL基因表达的变化 ,探讨Fas/FasL系统在细胞凋亡中的作用。方法 :应用荧光显微镜、结合DNA电泳及流式细胞仪分析技术 ,观察柔红霉素对HL 60细胞凋亡的影响及细胞凋亡过程中Fas/FasL基因的表达。结果 :柔红霉素浓度为 0 .1、1 μg/ml时 ,作用 6小时出现典型凋亡细胞 ,荧光显微镜观察HL 60细胞可见凋亡小体、染色质浓缩和胞体出芽改变 ,流式细胞仪分析可见凋亡峰 ,2 4小时达高峰 (45 .2 %± 1 0 .3 % )。 1 0 μg/ml柔红霉素作用 6小时 ,未见凋亡峰。柔红霉素可诱导Fas/FasL基因表达。结论 :柔红霉素诱导细胞凋亡是其治疗白血病的主要机制之一 ,Fas/FasL系统参与柔红霉素诱导的HL 60细胞的凋亡过程     

鲎血细胞多肽诱导HL-60细胞凋亡

目的：研究鲎血细胞多肽（下称鲎血多肽）诱导HL－60细胞凋亡的作用。方法：MTT法测定鲎血多肽对HL－60细胞的毒性和HL－60细胞的相对存活率,荧光显微镜观察HL－60细胞形态的变化,流式细胞仪鉴定细胞凋亡和分析细胞周期,扫描电镜观察细胞膜的改变。结果：鲎鱼多肽对HL－60细胞有明显的细胞毒性,IC50值为24μg/ml;荧光显微镜观察到凋亡细胞主要表现为细胞体积缩小,核染色质固缩,荧光染色增强。50－100μg/ml的鲎血多肽处理6h,HL－60细胞主要表现为细胞凋亡;而鲎血多肽浓度为200μg/ml时的主要为细胞坏死。50μg/ml鲎血多肽处理HL－60细胞0－12h,流式细胞仪检测到凋亡细胞亚二倍体峰出现,细胞周期分析G1期细胞减少,G2期细胞增加。鲎血多肽浓度为25－100μg/ml时,细胞凋亡率随浓度增加而增加,鲎血多肽为200μg/ml时,则主要为细胞坏死,凋亡细胞减少。扫描电镜观察发现,HL－60细胞用鲎血多肽处理后,细胞膜损伤,出现空洞。结论：鲎血细胞多肽能诱导HL－60细胞凋亡;凋亡的发生较早,与细胞膜受损有一定的关系;G1期细胞对鲎血多肽更敏感。     

白花蛇舌草对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性及hTERT基因表达的影响

目的 探讨白花蛇舌草(HD)对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性和hTERT基因表达的影响,分析HD抗肿瘤机制.方法 分别以不同浓度的HD作用于体外培养的Hela细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用PCR-TRAP-ELISA方法 定量检测HD处理后Hela细胞端粒酶活性,用RT-PCR法测定hTERT mRNA的表达水平.结果 一定浓度的HD作用于Hela细胞一定时间后可诱导Hela细胞凋亡,端粒酶活性明显降低,hTERT mRNA的表达水平下降.结论 HD可能通过下调hTERT基因表达来降低端粒酶活性,进而诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

反义hTERT对K562细胞端粒酶活性及细胞增生的影响

目的：观察反义hTERT表达质粒转染K562细胞后是否能够抑制端粒酶活性及K562细胞的增生。方法：质粒的构建与转染；将200bphTERTcDNA片段，反向连接于pLNCX-neo质粒上得到反义hTERT基因表达质粒，在体外转染中通过脂质体法将质粒导入K562细胞中，以G418进行筛选得到阳性克隆；以MTT法和形态学法检测反义hTERT表达质粒对K562细胞增生的抑制作用；以TRAP-PCRELISA法来研究反义hTERT基因对K562细胞的端粒酶活性的抑制作用。结果：转染反义hTERT表达质粒细胞与对照组（空白对照及空质粒组）相比较。生长速率明显变慢。部分细胞出现凋亡等形态学改变。反义hTERT对K562细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用。结论：研究构建的端粒酶反义hTERT基因表达质粒转染到K562细胞中后，能够封闭K562细胞hTERT-mRNA的表达，在抑制端粒酶活性的同时，减慢了K562细胞的生长速度。     

番荔枝内酯化合物squamocin诱导白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究番荔枝内酯化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ诱导白血病ＨＬ－６０细胞凋亡作用。方法：采用ＭＴＴ法检测番荔枝内酯单体化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ对白血病细胞株ＩＬ－６０细胞增殖的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１,磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的蛋白水平变化。结果：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞５天后,细胞生长受到明显的抑制,ＩＣ５０为０．１７μｇ／ｍｌ。ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的ＤＮＡ梯形带。ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果呈现ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白表达无明显变化,而磷酸化的ＭＡＰＫ量显著减少。结论：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,且与ｂｃｌ－２、ｂａｘ、ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白     

Arsenic trioxide downregulates telomerase activity in HL-60 cells

Telomeres are the specialized nucleoproteincomplexes at the physical ends of eukaryoticchromosomes[1]. Telomere length decreases along with increasing cycles of cell divisions. Telomere shortening has therefore been proposed to play a role in cellular senescence. Telomerase is a protein-RNA enzyme complex that adds a six-base DNA sequence (TTAGGG) to the ends of chromosomes and thereby prevents their shortening. This enzyme is specifically activated in most malignant tumors but is usuall…     

hTERT基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性的影响

探讨人类端粒酶逆转录酶（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ,ｈＴＥＲＴ）基因的反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＮＤ）对Ｋ５６２细胞端粒酶活性的影响。方法：采用多聚酶链反应－酶联免疫测定（ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ）方法检测人工合成的反义脱氧寡核苷酸处理Ｋ５６２细胞前后端粒酶活性的改变,以逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）分     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：探讨bcl-2反义寡核苷酸诱导ＨＬ－６０细胞的凋亡。方法：将人工合成的bcl-2反义寡聚脱氧苷酸片段与ＨＬ－６０,细胞共培养,在作用的第０天、３天、５天通过免疫组化法（ＡＰＡＡＰ法）检测细胞内bcl-2蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。结果：bcl-2反这寡核苷酸可下调ＨＬ－６０细胞内bcl-2的蛋白表达水平,其作用与其浓度和时间呈正相关,同时可诱导细胞凋亡,而bcl-2反义寡核苷酸及对照无此作用。     

As2O3诱导白血病细胞凋亡过程中Ca2+的变化及其调节

目的研究Ca2 在As2O3诱导白血病细胞系NB4、K562、HL-60凋亡中的作用,及抗氧化剂NAC、NDMS、CAT和Cae 清除剂Quin 2对As2O3引起的Ca2 变化的调控作用.方法细胞内Ca2 用Fluo-3AM标记,并用流式细胞仪检测.结果0.6 μmol/L As2O3作用72 h能诱导NB4发生44.9%的凋亡,提高其浓度至2.7和8.1 μmol/L,也能诱导K562和HL-60分别发生58.3%和62.3%凋亡.As2O3能不同程度降低NB4和HL-60细胞内Ca2 水平,对K562细胞内Ca2 水平影响不大.抗氧化剂NAC、NDMS、CAT和Ca2 清除剂Quin 2对As2O3引起的NB4细胞Ca2 水平下降显示出抑制作用,对HL-60细胞内Ca2 水平下降无明显抑制作用.结论Ca2 水平下降在As2O3诱导的不同白血病细胞凋亡作用过程起着不同的作用.抗氧化剂NAC、NDMS、CAT和Ca2 清除剂Quin 2可不同程度地抑制As2O3诱导的NB4细胞凋亡时细胞内Ca2 水平下降.     

黄芩苷作用HL-60细胞前后c-myc基因表达的变化

 目的 研究中药黄芩苷（baicalin）对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增生、凋亡的影响及探讨c-myc基因在其中的作用。方法 培养人髓系白血病细胞株HL-60细胞,应用MTT法绘制细胞生长曲线观察黄芩苷对HL-60细胞增生的影响;DNA凝胶电泳观察细胞凋亡;RT-PCR检测黄芩苷作用前后c-myc基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测黄芩苷作用前后c-myc蛋白表达水平的变化。结果　细胞生长曲线结果示黄芩苷能明显抑制HL-60细胞增生,半数抑制浓度（IC50）约为20μmol／L,DNA 片段化的检出表明黄芩苷能有效诱导HL-60细胞凋亡;黄芩苷作用后HL-60细胞c-myc基因和蛋白的表达水平均下降,并且随作用时间延长,表达下降更明显。结论 黄芩苷能有效抑制HL-60细胞增生,诱导其凋亡,c-myc基因可能参与了黄芩苷抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡的过程。     

三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及Survivin和Caspase-3表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导HL-60细胞凋亡过程中Survivin基因表达以及Caspase-3蛋白变化情况。方法:采用7.5μmol/L As2O3和20μmol/LAc-devd-cho单独或联合作用于HL-60细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Survivin mRNA、免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的变化,流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡率。结果:7.5μmol/LAs2O3作用HL-60细胞24h和48h后,其凋亡率分别为(31.93±0.34)%和(55.91±0.52)%,Survivin mRNA比值分别为51.42%和22.37%,Caspase-3蛋白激活逐渐增加;20μmol/L Ac-devd-cho对HL-60细胞凋亡和Survivin mRNA表达均无影响;20μmol/L Ac-devd-cho和7.5μmol/L As2O3共同作用HL-60细胞24h和48h,细胞凋亡率分别为(9.61±0.21)%和(13.05±0.35)%,分别与As2O3单独作用组相比有显著性差异(P<0.05),Survivin mRNA比值分别为52.14%和21.08%,分别与As2O3单独作用组相比无显著性差异(P>0.05),Caspase-3蛋白激活被阻断。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡与抑制Survivin基因表达、激活Caspase-3蛋白的活性有关。