三氧化二砷对肝癌细胞survivin基因和端粒酶活性的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导肝癌细胞凋亡时survivin基因表达和端粒酶活性的变化。方法:采用倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞亚二倍体百分率,逆转录-多聚酶链式反应检测细胞survivin mRNA表达,免疫组织化学染色检测细胞survivin蛋白的表达,端粒酶检测试剂盒检测端粒酶活性。结果:0.25~2.00μmol/L As2O3明显抑制肝癌Bel-7402细胞生长,诱导细胞凋亡,survivin mRNA和蛋白表达上调,端粒酶活性下降,呈时间、剂量依赖关系。结论:As2O3抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,可能与其降低端粒酶活性有关;而survivin基因表达上调,可能是抵抗As2O3诱导凋亡的途径之一。     

全反式维甲酸对HL-60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的 探讨全反式维甲(ATRA)诱导HL-60细胞分化过程中人类端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白表达和端粒酶活性的改变。 方法 应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量的变化;采用多聚酶链反应-酶联免疫反应(PCR-ELISA)方法检测ATRA处理HL-60细胞前后端粒酶活性的改变,用碘化丙锭染色经流式细胞仪检测细胞周期变化。 结果 1μmol/L ATRA作用HL-60细胞24、48、72h,hTERT蛋白平均荧光强度分别为61.87±4.36、37.47±2.85、33.45±2.37,与空白对照组相比,具有显著性差异,P<0.05。1μmol/L ATRA作用48h后,HL-60细胞的端粒酶活性即出现下降,作用72h,端粒酶的活性明显受到抑制。 结论 在HL-60细胞分化过程中,ATRA能抑制HL60细胞的hTERT基因的表达和端粒酶活性。     

榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及对端粒酶活性和hTERT表达影响的研究

目的：探讨榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及其影响端粒酶活性及其催化亚单位人端粒酶逆转录酶（hTERT）表达的机制。方法：将榄香烯处理人脑胶质瘤U251细胞株后，用MTT法检测细胞增殖抑制率．并求出半数抑制浓度（IC50），倒置显微镜和电镜观察经榄香烯处理的U251细胞形态。流式细胞仪和原位末端标记技术检测细胞周期及细胞凋亡率的变化，免疫荧光技术观簪凋亡小体．流式细胞仪测定bcl-2表达水平．端粒重复扩增（TRAP）法测定端粒酶活性的变化，RT—PCR检测bcl-2和hTERT的表达。结果：榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用，呈剂量和作用时间的依赖性，IC50为0.062mg／ml，倒置显微镜下可见榄香烯组细胞皱缩、变小，电镜下可见具有典型新月形核的凋亡细胞和凋亡小体，流式细胞仪检测榄香烯阻滞U251细胞周期中S期向G2／M期的转变过程，减少有丝分裂，并引起细胞凋亡，免疫荧光技术观察凋亡小体，TRAP法发现榄香烯可以降低端粒酶活性的变化＋呈时间和剂量依赖型。RT—PCR分别证实榄香烯降低bcl-2和hTERT基因表达水平。结论：榄香烯诱导人脑胶质瘸U251细胞凋亡，并抑制U251细胞端粒酶的活性，榄香烯作用于胺质瘤的分子生物学机制可能通过抑制bc1-2表达，下调hTERT基因，降低端粒酶的活性，从而诱导细胞调亡。     

反义寡核苷酸对K562细胞增殖和端粒酶活性的影响

 目的　研究靶向封闭端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的反义硫代寡核苷酸（ASPSODN）对K562细胞目的基因的抑制及其对端粒酶活性及细胞增殖周期和凋亡的影响 。方法　ASPSODN转染到人类红白血病细胞株K562,采用MTT法、酶联免疫吸附（ELISA）法和流式细胞术（FCM）检测K562细胞的增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果　0.6 μmol／L的ASPSODN（0.42±0.16）能明显下调hTERT表达（P＜0.05）,端粒酶相对活性降至52 %;MTT法检测显示明显抑制K562细胞增殖活性;FCM显示细胞凋亡率为10.31 %,PI染色显示细胞被阻止在G1／G0期,S期及G2／M期的细胞减少,但无特征性的凋亡峰。结论　ASPSODN靶向 hTERT 能特异性抑制K562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调端粒酶活性,抑制K562细胞增殖,并通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞凋亡。     

腺病毒介导的shRNA沉默hTERT基因表达对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨靶向人端粒酶反转录酶（hTERT)的短发夹RNA（shRNA)对人鼻咽癌细胞株CNE-2 hTERT表达的影响,及其对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的效应。方法构建表达绿色荧光蛋白(EGFP)基因和靶向hTERT基因短发夹RNA的重组腺病毒质粒,观察其对鼻咽癌细胞株(CNE-2)的转染效果,RT-PCR检测hTERT mRNA表达水平,Western blot检测hTERT蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡状况。结果Adv-EGFP-shTERT重组腺病毒质粒转染率可达90%以上,成功转染CNE-2细胞24 h后,hTERT mRNA的表达水平显著下降,转染48 h后,hTERT蛋白表达明显下调,细胞增殖活性受到显著抑制,细胞凋亡率可达23.0%。结论腺病毒载体介导靶向hTERT基因的RNA干扰,能显著抑制端粒酶反转录酶表达,进而抑制端粒酶活性,抑制CNE-2细胞增殖并诱导其凋亡,为鼻咽癌的基因治疗研究提供了理论基础。     

三氧化二砷诱导HeLa细胞凋亡与其抑制HPV18 E6表达和端粒酶活性有关

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡时,对14PV18 E6致瘤基因和端粒酶活性的影响。方法 用不同浓度的As2O3作用于HeLa细胞不同时间段后,光镜和电镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞周期改变,MTT法测定细胞生长抑制情况。RT-PCR方法检测HPV18 E6的表达,TRAP-ELISA方法测定细胞内端粒酶活性变化。结果 2μmol／L As2O3处理HeLa细胞48h后,可降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,抑制HPV18 E6的表达,细胞内端粒酶活性明显下降。As2O3对HeLd细胞的这种作用呈时间-剂量依赖关系。结论 As2O3诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制HPV18 E6致瘤基因的表达有关,细胞内端粒酶活性的抑制可能与这种E6致瘤基因的抑制有关。     

肝细胞癌端粒酶活性及hTERT mRNA表达与术后早期复发的关系

目的：研究肝细胞癌端粒酶活性及人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达与肝细胞癌术后早期复发的关系。方法：采用ELISA—TRAP法检测60例肝癌组织及其癌旁组织端粒酶活性，RT—PCR法检测hTERT mRNA表达，5例正常肝脏组织作为对照。分析端粒酶活性及hTERT mRNA表达与临床病理之间的关系。结果：肝癌组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达阳性率分别为86．7％（52／60）及90％（54／60），癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达阳性率分别为40％（24／60）及43．3％（26／60）。正常肝脏组织均未检测到端粒酶活性及hTERT mRNA表达。癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达与术后早期复发及包膜浸润、门静脉侵犯、肝内转移等恶性肿瘤的恶性生物学行为有关。结论：癌旁组织端粒酶活性及hTERT mRNA表达可能是肝细胞癌术后早期复发的预后指标。     

三氧化二砷诱导K562／ADM细胞凋亡过程中对bcl-2、survivin、ROS表达的影响

[目的]探讨As2O3诱导白血病K562／ADM耐药细胞凋亡的分子机制。[方法]采用MTT比色法检测K562／ADM增殖活性：细胞形态学和Annexin Ⅴ／PI双染色检测细胞凋亡：RT—PCR检测bcl-2、survivin和caspase-3基因mRNA的表达水平；流式细胞法（FCM）测定bcl-2、caspase-3蛋白表达。激光共聚焦显微镜（LCSM）观察细胞内活性氧（ROS）产生情况。[结果]As2O3显著抑制K562／ADM细胞的增殖；经As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变，AnnexinⅤ／PI双染显示凋亡细胞明显增加：凋亡抑制基因bcl-2、survivin mRNA及bcl-2蛋白表达下调，caspase-3 mRNA表达和caspase-3活性显著增强，ROS活性下降。[结论]As2O3诱导K562／ADM耐药细胞凋亡，与bcl-2和survivin表达下调，caspase-3活化有关，而与活性氧的氧化损伤无关。     

白花蛇舌草对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性及hTERT基因表达的影响

目的 探讨白花蛇舌草(HD)对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性和hTERT基因表达的影响,分析HD抗肿瘤机制.方法 分别以不同浓度的HD作用于体外培养的Hela细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用PCR-TRAP-ELISA方法 定量检测HD处理后Hela细胞端粒酶活性,用RT-PCR法测定hTERT mRNA的表达水平.结果 一定浓度的HD作用于Hela细胞一定时间后可诱导Hela细胞凋亡,端粒酶活性明显降低,hTERT mRNA的表达水平下降.结论 HD可能通过下调hTERT基因表达来降低端粒酶活性,进而诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.     

Arsenic trioxide downregulates telomerase activity in HL-60 cells

Telomeres are the specialized nucleoproteincomplexes at the physical ends of eukaryoticchromosomes[1]. Telomere length decreases along with increasing cycles of cell divisions. Telomere shortening has therefore been proposed to play a role in cellular senescence. Telomerase is a protein-RNA enzyme complex that adds a six-base DNA sequence (TTAGGG) to the ends of chromosomes and thereby prevents their shortening. This enzyme is specifically activated in most malignant tumors but is usuall…     

hTERT基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性的影响

探讨人类端粒酶逆转录酶（ｈｕｍａｎ ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ,ｈＴＥＲＴ）基因的反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＮＤ）对Ｋ５６２细胞端粒酶活性的影响。方法：采用多聚酶链反应－酶联免疫测定（ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ）方法检测人工合成的反义脱氧寡核苷酸处理Ｋ５６２细胞前后端粒酶活性的改变,以逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）分     

As2 O3对人胃癌BGC-823 细胞端粒酶的影响

 目的 观察三氧化二砷（As₂ O₃）对人胃癌BGC-823细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因转录的影响。方法 用不同浓度的三氧化二砷作用于人胃癌BGC-823细胞，通过MTT法测定细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡变化；TRAP PCR ELIsA方法检测细胞端粒酶活性的变化；RT-PCR半定量方法检测细胞端粒酶hTEI汀基因mRNA的转录水平。结果 三氧化二砷可明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，抑制作用随三氧化二砷浓度的升高及作用时间的延长而增强。细胞的端粒酶活性明显下降，细胞hTERT基因的转录表达显著抑制。BGC-823细胞端粒酶活性的下调与As₂ O₃作用时间和浓度有关，呈现明显的时间-剂量效应关系。结论 As₂ O₃能够抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖、促使细胞凋亡、抑制细胞的端粒酶活性。As₂ O₃是一种良好的端粒酶抑制剂，在肿瘤的治疗中具有一定应用价值。