候选HCVE1蛋白疫苗在健康志愿者中的耐受性和免疫原性

比利时Ghent大学和医院的Leroux-Roels等在Vero细胞中表达了1b丙型肝炎病毒（HCV）的E1蛋白，即羧基端截短的重组E1蛋白（192～326位氨基酸）。它装配形成20nm的病毒样颗粒后，在免疫小鼠中显示了良好的免疫原性。他们以之为候选疫苗，在20名男性志愿者中进行Ⅰ期临床试验。     

肿瘤疫苗Astuprotimut-R

黑色素瘤相关抗原-3（MAGE-3）为肿瘤特异性免疫治疗的理想靶分子。葛兰素史克公司研发的重组抗肿瘤融合蛋白疫苗Astuprotimut—R（GSK-249553），系将MAGE-3表位融合到流感嗜血杆菌蛋白D抗原的部分序列中所制得，即MAGE-3重组蛋白。     

重组痘病毒活疫苗研究进展

痘病毒特别是痘苗病毒已成功地表达了数十种外来抗原。但由于痘苗病毒的神经毒性等原因，对重新使用该病毒作为活疫苗的载体仍有争议，从而限制了痘苗病毒重组活疫苗在人类及其他哺乳动物中广泛使用。为了解决这些问题，近年来许多研究者进行了深入研究，并取得了重要进展，本文从四个方面进行阐述：（１）痘苗病毒毒力基因的研究；（２）高度减毒重组体及兽用口服疫苗的研究；（３）多价重组体的构建；（４）禽痘病毒非复制性活疫苗     

人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用

目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗(HPV16 L2E6E7)酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性(R2>0.99)和回收率(90%~110%);特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。     

HPV16 E6/E7重组体DNA免疫对小鼠脾细胞分泌活性的影响

目的研究人乳头状瘤病毒16型（HPV16）E6／E7蛋白与结核杆菌热休克蛋白70（HSP70）表达重组体DNA免疫对小鼠活化脾细胞分泌活性的影响。方法采用肌肉注射DNA的方法免疫小鼠。分离脾细胞。用ELISA检测细胞因子的表达水平及抗体的水平。用RT-PCR的方法检测细胞中细胞因子mRNA的水平。结果以HPV16E6／E7为基础的DNA免疫小鼠后，检测到的细胞因子IL-2，IFNγ的含量明显升高：与结核杆菌HSP70重组后。IL-2，IFNγ的含量较重组前明显升高。与结核杆菌HSP70重组后，IL-10及抗体水平没有明显变化。结论以HPV16E6／E7为基础的DNA免疫能增强小鼠的细胞免疫反应。与结核杆菌HSP70重组后能提高细胞免疫的效果，但对体液免疫几乎没有影响。     

Multiferon有望用于H5N1型禽流感

美国Viragen公司的初步研究表明，Multiferon（多亚型，人源天然α干扰素）有显著抵抗高致病性H5N1禽流感病毒的活性。在用于治疗H5N1病毒所致禽流感之前，Viragen公司治疗病毒所致疾病的蛋白分析专家就将一系列浓度下的Multiferon、重组α干扰素、重组β干扰素和利巴韦林分别用于标准细胞系。公司宣布，结果表明他们的产品有较强的抗病毒活性，优于其他同类受试产品，且该药没有细胞毒性。     

HMGN2重组表达质粒的构建及其抗乙型病毒性肝炎的病毒活性

目的：构建HMGN2重组表达载体并观察高迁移率蛋白HMGN2分子的抗乙型病毒性肝炎的病毒作用。方法用基因克隆的方法,构建pET -32 a-c （＋）-HMGN2重组表达质粒;用亲和层析的方法,纯化His-HMGN2融合蛋白, Tricine-SDS-PAGE电泳、Western blotting对纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。以HBV DNA转染的细胞株HepG2.2.15细胞为模型,用ELISA检测HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg）,用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA的含量。结果成功构建了pET-32a-c（＋）-HMG17重组表达质粒,其表达的融合蛋白可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达,降低HBV DNA拷贝数。结论 HMGN2在体外细胞培养中有直接抗HBV的活性。     

重组水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达与鉴定

目的  在毕赤酵母细胞中稳定表达经连接肽连接的HBsAg和水痘-带状疱疹病毒糖蛋白（glycoprotein,g）E的重组蛋白,并进行初步纯化及颗粒性验证。方法  构建HBsAg-gE的四拷贝重组表达质粒,经酶切线性化后电转化至毕赤酵母KM71细胞中,甲醇诱导表达。采用免疫印迹法和ELISA检测表达的重组蛋白,经蔗糖密度梯度离心和凝胶排阻层析初步纯化后进行透射电子显微镜观察。结果  HBsAg-gE四拷贝重组质粒经双酶切鉴定正确。表达的重组蛋白经免疫印迹法检测,可以与小鼠抗gE单克隆抗体及抗HBsAg多克隆抗体特异性结合,相对分子质量约90 000。经ELISA检测HBsAg呈阳性。蔗糖密度梯度离心后,重组蛋白聚集在40%至55%区带之间,在透射电子显微镜下观察到直径约20 nm左右的病毒样颗粒结构。结论  成功在毕赤酵母中表达了HBsAg-gE病毒样颗粒,为在酵母系统中表达水痘-带状疱疹重组疫苗奠定了基础。     

全球重组蛋白疫苗研发态势简析

目的 分析全球重组蛋白疫苗的研发态势。方法 采用计算机检索Cortellis数据库中全球已上市、处于注册或预注册状态、已启动Ⅲ期临床试验的重组蛋白疫苗,检索时间为自建库起至2021年9月1日。分别从原研单位国家分布、首次上市/Ⅲ期临床试验启动时间、适应证等方面分析其全球研发概况。结果 全球重组蛋白疫苗有74个已上市或处于注册、预注册状态,有29个处于Ⅲ期临床试验阶段。从原研单位国家来看,中国已上市或处于注册、预注册状态/进入Ⅲ期临床试验阶段的产品均最多（21个/12个）;美国、英国、古巴、法国分别有15个/7个、11个/0个、5个/0个、4个/1个,位居前列。1986年至1997年、1998年至2009年、2010年至2021年分别上市9个、29个、36个产品,2016年至2021年启动Ⅲ期临床试验的产品有23个。适应证涵盖乙型病毒性肝炎病毒感染,百日咳、白喉、破伤风（简称百白破）,流行性感冒（简称流感）嗜血杆菌感染,流感病毒感染,脑膜炎奈瑟球菌感染,脊髓灰质炎病毒感染的产品分别有30个、18个、12个、11个、6个、6个;以预防人乳头状瘤病毒（HPV）感染、非HPV感染引起的肿瘤、肺...     

用植物系统生产重组疫苗和药用蛋白的研究进展

植物表达系统具有多方面的优越性，越来越受到研究者的重视。本文介绍用此系统生产重组疫苗和药用蛋白的最新研究进展。     

长效重组因子VⅢFc融合蛋白在Ⅲ期临床研究中获阳性结果

美国BiogenIdec公司和瑞典OrphanBiovitrum公司（SOBI）于2012年10月31日宣布，其共同开发的长效重组因子ⅧFc融合蛋白（rFⅧFc）在一项名为A-LONG的全球性、多中心的Ⅲ期临床研究中获得阳性结果。该研究表明：rFⅧFc可有效控制和预防出血，可用于A型血友病患者的日常预防和围手术期处理。     

新的HIV DNA候选疫苗通过Ⅰ期临床试验

最近已证明两种新的HIV DNA疫苗在健康成年人中具有安全性和良好的耐受性。第一种疫苗是表达A、B和C亚型HIV-1 Env蛋白和B亚型HIV-1融合蛋白（Gag—Pol—Nef）的混合质粒。第二种疫苗是利用重组腺病毒（rAd5）来传递上述HIV抗原。     

TT病毒结构蛋白抗原在大肠杆菌中的表达及应用

目的 用原核系统表达TT病毒（TTV）的重组蛋白抗原，建立诊断（TTV）感染的特异性方法。方法 采用PCR方法扩增TTVORF2基因，将之插入到测序质粒载体中进行测序，验证序列正确后将之嵌入到原核表达载体pQE30中，并转化大肠杆菌M15菌株，进行诱导表达。用SDS－PAGE分析表达产物。表达产物经Ni-NTA柱层析纯化后，得到纯度为90％的ORF蛋白抗原。用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western-Blot分析，用间接ELISA方法检测血清抗－（TTV）IgG抗体。结果 经IPTG诱导后，筛选出2株高表达株。结论 该蛋白具有良好的抗原活性，可以有效地用于TTV的感染检测中。     

新一代黄病毒疫苗

近１０年来，在前黄病毒分子学方面的知识速增长，在此基础上，正在研制几种潜在的重组亚单位疫苗，实验证明似有效，另外，由病毒结构包膜糖蛋白诱导的体液免疫力是提供抗黄病毒感染保护作用的唯一有效方法的假设可能有疑问。本文概括了最近有关这个领域的想法，并对几种未来的黄病毒疫苗系统导保护性免疫力的效果的进行了评价。     

重组卡介苗的研究与应用

重组卡介苗可同时表达多种病原体抗原，已成为新的疫苗载体。对重组卡介苗的研究方法和进展，包括重组卡介苗疫苗载体、启动子、电转化方法、绿色荧光蛋白的作用、重组耻垢分枝杆菌疫苗及重组卡介苗的作用机制等进行综述，并介绍了重组卡介苗在表达病毒、细菌及寄生虫抗原和表达细胞因子及抗肿瘤等方面的应用。     

新型乙型肝炎疫苗

联合疫苗是简化婴儿乙型肝炎疫苗接种的重要步骤，目前正在进行临床评估。为减少注射次数，正在对大剂量疫苗两剂免疫程序进行评价，包裹于可降解的生物多聚体微粒的疫苗（缓释疫苗）单剂接种已在动物中作了检测。目前正在研究增强现有疫苗的免疫原性。一种方法是研制含ＨＢｓＡｇ完整前Ｓ１和前Ｓ２区或这些区中免疫原位表位以及小表面蛋白的重组疫苗，几种疫苗已在进行临床试验。今后的研究包括在细菌（如沙门菌）中表达ＨＢｓＡｇ     

Octapharma与Fresenius Kabi公司达成有关HESylated重组蛋白的协议

BioSante制药公司的蛋白表达技术2A/Furin技术获得两项美国专利。第一个美国专利覆盖生产重组抗体的方法，专利号为763059。在病毒载体上表达抗体时结合应用2A／Furin技术，有可能快速产生稳定、抗体高产的细胞系，这样可减少商业化抗体生产的时间和成本。     

2种预混胰岛素治疗2型糖尿病酮症的成本—效果分析

目的评价精蛋白锌重组赖脯胰岛素混和注射液25R（优泌乐25）与精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液（优泌林70/30）治疗2型糖尿病酮症的成本—效果。方法将60例2型糖尿病酮症患者随机分为A和B组各30例。A组给予优泌乐25治疗,B组给予优泌林70/30治疗,并进行成本—效果分析。结果 A组总成本为2508元/人,B组为3200元/人;A组成本—效果比（C/E）为26.88低于B组的40.00,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论优泌乐25治疗2型糖尿病酮症的成本—效果优于优泌林70/30,值得临床推广应用。     

研制甲型和乙型肝炎疫苗的新途径

乙型肝炎（ＨＢ）血源疫苗和酵母重组疫苗预防ＨＢ病毒（ＨＢＶ）感染已获满意效果，然而，无应答或低应答现象不仅发生于肥胖、肾功能衰竭或免疫抑制者，亦可见于健康者，因此，有必要研制免疫原性较强的ＨＢ疫苗。目前使用的重组ＨＢ疫苗系Ｓ基因编码的２２６个氨基酸产物装配而成的抗原颗粒，由于前Ｓ基因编码的蛋白已结合在ＨＢＶ包膜内，因此，前Ｓ基因产物至少在理论上可增强ＨＢ疫苗的保护作用。甲型肝炎（ＨＡ）灭活疫苗比目     

艾滋病病毒外膜蛋白与干扰素融合基因表达产物的免疫学研究

为了将艾滋病病毒外膜蛋白(env)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠，观察小鼠的免疫功能状态和细胞免疫应答，将IFNα-2b基因片段插入到env基因的下游，经脂质体转染，筛选重组痘苗病毒，经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。用重组病毒vJ16env／IFNα-2b免疫小鼠，以生理盐水和野生型痘苗病毒作为对照，检测小鼠脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性；用流式细胞仪测定小鼠脾细胞CD4^+、CD8^+T细胞计数与CTL。结果表明，与对照组比较，实验组脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性显著增高(P&;lt;0．05)；CD4^T淋巴细胞计数和CTL活性也显著增高(P&;lt;0．05)；CD8^T淋巴细胞计数呈增高趋势，但未达到显著意义的程度。结论：重组病毒vJ16env／IFNα-2b能增强小鼠的免疫功能和诱导细胞免疫。