HBV前C区1896位突变的检测方法及其评价

为建立一种简便可行的检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变的方法。采用本室自行构建的ＨＧＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变株和野生株克隆作为标准株，对错配引物ＰＣＲ结合限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），作为检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变株的进行了评价。结果显示，该方法操作较为简便，特异性和重复性较满意，可用于临床和科研。     

HBV前C区1896位点变异与HBV感染者肝功能损害程度的关系

了解ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点变异与乙型肝炎病毒感染者肝功能损害程度的关系。方法：用ＰＣＲ技术，通过改变引物３’端的方法，检测ＨＢＶ感染者的前Ｃ区第１８９６位点变异株。结果：１０５例ＨＥＶ感染者中的ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点变异株总检出率为５６．２％；男性与女性患者的检出率分别为５７．０％与５００％；≤３０岁组，３１－５９岁组，≥６０岁年龄组的检率分别为６０．０％，５６．６％，２８．６％；无黄疸组，轻～中度黄疸组，重度黄疸组的检出率分别为５３．２％，６５．１％，４０．０％；在ＨＢＶ携带者、慢性肝炎（包括轻、中、重庆），重症肝炎及肝硬化患者中的检出率分别为６０．０％，５７．４％，３３．３％，７０．０％。结论：ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变株广泛存在于ＨＢＶ感染者中，而且其检出率与患者性别、年龄、ＨＢＶ感染时间长短及肝功能损害程度并无明显联系。     

慢性乙型肝炎患者血清TNFα及IL—6水平与HBV前C区基因变异关？…

目的：探讨细胞因子（ＴＮＦ，及ＩＬ－６）水平与ＨＢＶ前Ｃ区变异之间的关系。方法；应用ＥＬＩＳＡ法及３‘－碱基特异性聚合酶链反应法对４３例ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性乙型肝炎患者进行血清ＴＮＦ，ＩＬ－６含量及ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变的检测。结果：ＨＢＶ前Ｃ区突变株，检出率为４８．８％，突变株感染组ＴＮＦα、ＩＬ－６水平明显主于野生株感染组。结论．：慢性乙型肝炎患者血清ＴＮＦ，及ＩＬ－６水平与ＨＢＶ前Ｃ区     

应用PCR-ASO技术检测乙型肝炎病毒基因前C区突变

应用碱性磷酸酶标记的ＡＳＯ探针杂交技术对１２３例临床各型乙肝病毒（ＨＢＶ）感染后的血清标本ＰＣＲ后检测了ＨＢＶ基因前Ｃ区１８９６位已知的Ｇ－Ａ点突变株。结果表明：在ＨＢｅＡｂ阳性血清中发现有Ｗ２８Ｘ突变株，而ＨＢｅＡｇ阳性血清样本中未发现该突变株；有突变株的患者亦未全部表现为重症肝炎。提示ＨＢＶ基因前Ｃ区突变并不一定导致病情加重。野生株、突变株与肝炎重症化之间的关系有必要在临床过程中慎重地观察。     

乙肝病毒前C区基因变异对干扰素疗效影响的研究

以错配聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析，研究了ＨＢＶ前Ｃ区基因变异对干成素疗效的影响，在２９例接受干扰素治疗的慢性乙型肝炎病人中，有前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变者ＨＢＶＤＮＡ阴转７例（４６．６％７／１５）追踪１年内全部复发；无变异者ＨＢＶＤＮＡ阴转７例（５０．０％，７／１４），追踪未见复发，表明ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变是影响干扰素远期疗效，导致停药后复发的重要原因之一。     

慢性乙型肝炎患者血清TNF_α及IL-6水平与HBV前C区基因变异关系的研究

目的：探讨细胞因子（ＴＮＦα及ＩＬ－６）水平与ＨＢＶ前Ｃ区变异之间的关系。方法：应用ＥＬＩＳＡ法及３′－碱基特异性聚合酶链反应法对４３例ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性乙型肝炎患者进行血清ＴＮＦα、ＩＬ－６含量及ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变的检测。结果：ＨＢＶ前Ｃ区突变株，检出率为４８．８％（２１／４３），突变株感染组ＴＮＦα、ＩＬ－６水平明显高于野生株感染组。结论：慢性乙型肝炎患者血清ＴＮＦα及ＩＬ－６水平与ＨＢＶ前Ｃ区基因变异有密切关系，机体免疫压力的增高可能是导致ＨＢＶ前Ｃ区变异的重要原因之一     

干扰素疗法与HBV前C区点突变关系的初步研究

用错配引物聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析对１５例血清ＨＢｅＡｇ阳性性，ＨＢＶ－ＤＮＡ斑杂交阳性的慢性乙型肝炎患者进行了干扰素疗法与ＨＢＶ前Ｃ区基因１８９６位点突变之间系的观察。结果显示，治疗后ＨＢＶ野株和突变株的变化有四种类型，即Ｗ→Ｗ；Ｗ＋Ｍ→Ｗ＋Ｗ（３例）；Ｗ→Ｗ＋Ｍ（３例）；Ｗ＋Ｍ→Ｗ（１例）。     

乙型肝炎病毒核心启动子热点突变与HBcAg存在状态

目的：研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核心启动子（ＢＣＰ）区１７６２位和１７６４位热点突变对ＨＢｅＡｇ存在状态的影响。方法：采用错配引物的ＰＣＲ结合限制性内切酶技术检测９０例不同ＨＢｅＧａ状态的ＨＢＶ无症状携带者的ＨＢＶＢＣＰ热点突变。结果：６０例ＨＢｅＡｇ阴性者中ＨＢＶＢＣＰ热点突变者２６例（４３．３％）,其中２０例伴有ＨＢＶ前Ｃ区（Ｐｒｅ－Ｃ）区１８９６位热点突变;３０例ＨＢｅＡｇ阳性者中仅３例（１     

重症乙型肝炎病人HBV前C区A83位点的变异

目的：探讨ＨＢＶ前Ｃ区Ａ８３位点的变异和重症肝炎发病机理的关系。方法：应用多聚酶链反应，结合限制性内切酶多态性分析法及末端终止法对３例重症乙型肝炎病毒前Ｃ区变异状况进行了分析，并选择５例其他型乙肝病人作对照。结果：发现３例重症乙型肝炎病人中有２例ＨＢＶ前Ｃ区Ａ８３位点突变；其它５例未发现变异。结论：ＨＢＶ前Ｃ区Ａ８３位点突变和重症肝炎的发生有密切的关系。     

乙型肝炎患者HBV前C区变异及临床意义

目的 研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区变异的临床意义。方法 应用错配ＰＣＲ限制片段长度多态性分析，检测ＨＢＶ前奁１８９６位突变，结果 ６２０例乙型肝炎患者ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位变异２６４例变异率４２．５８％，在急性肝炎，慢性轻度，慢性中度，慢性重度，重型肝炎，肝硬化中，变异率分别为１２．５％，３５．０％，５５．９４％，４５．２６％，５４．７２％，４８．７６％，年龄，性别与变异无关，病程〉５年，中丙     

乙型肝炎患者HBV前C区变异及临床意义

目的研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区变异的临床意义。方法应用错配ＰＣＲ限制片段长度多态性分析,检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位突变。结果６２０例乙型肝炎患者ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位变异２６４例,变异率４２．５８％。在急性肝炎、慢性轻度、慢性中度、慢性重度、重型肝炎、肝硬化中,变异率分别为１２．５％、３５．０％、５５．９４％、４５．２６％、５４．７２％、４８．７６％。年龄、性别与变异无关,病程＞５年、谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、抗ＨＢｅ（＋）者变异率均明显增高。结论ＨＢＶ前Ｃ区变异与肝病严重性有一定关系。     

沈阳地区乙型肝炎病毒DNA前C区变异研究

用限制性酶切片段长度多态性分析对沈阳地区７０例血清经巢式聚合酶链反应扩增ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的乙型肝炎患者的Ｃ基因前Ｃ区１８９６位点进行分析。结果：（１）急性乙型肝有Ｃ区变异检出率为４％（１／２０），慢性迁延肝炎为２５％（５／２０），慢性活动性肝炎为３８％（５／１３），肝硬化为３３％（４／１２）；（２）ＡＬＴ升高组中，ＨＢｅＡｇ及抗ＨＢｅ均阴性患者和ＨＢｅＡｇ阴性，抗ＨＢｅ阳性患者ＨＢＶ ＤＮＡ前Ｃ     

乙型肝炎病毒前C区基因变异的研究

作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ｅ系统阳性的慢件乙型肝炎（乙肝）患者血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，筛选出乙肝ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）阳性／乙肝ｅ抗体（抗—ＨＢｅ）阴性和ＨＢｅＡｇ阴性／抗—ＨＢｅ阳性各２０份ＰＣＲ阳性血清，分别用人工合成的ＨＢＶ前Ｃ区基因寡核苷酸探针Ｍ０（无突变），Ｍ１（１点突变），Ｍ２（２点突变）进行斑点杂交，结果发现ＨＢｅＡｇ阴性／抗—ＨＢｅ附性慢性乙肝患含有１７例（占８５％）在１８９６位核苷酸发生点突变，形成终止密码，其中１０例（占５０％）发生２点突变。选突变ＰＣＲ产物直接测序，同样证实点突变的存在。提示乙肝患含ＨＢｅＡｇ阳性自然转换为抗—ＨＢｅ阳性、并不一定是病毒复制减弱，而可能足ＨＢＶＤＮＡ前Ｃ区发生了基因变异。     

快速检测乙型肝炎病毒前核心区基因变异株方法的建立与初步…

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）选择性地扩增血清标本中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因前Ｃ区（Ｐｒｅ－Ｃ）后，以三种寡核苷酸探针Ｍ０（野毒株基因序列）、Ｍ１（ｎｔ．１８９８位点突变株基因序列）、Ｍ２（ｎｔ．１８９８位及ｎｔ．１９０１位上双点突变株基因序列）在极其严谨的条件下分别杂交，检测ＨＢＶＰｒｅ－Ｃ的最常见变异，结果一法具有很高的特异性。应用上述方法检测了３１份乙肝病人的血清标本，结果７份ＨＢｅＡｇ阳性标本     

乙型肝炎病毒前C变异体的体外转录和翻译

目的明确乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ第１７位和２９位密码子突变体对ｅ抗原合成和分泌的影响。方法用ＰＣＲ 方法扩增ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因区,克隆后测序及进行序列分析。将ＨＢＶ前Ｃ区Ｔ１８６２／Ａ１８９９位点突变体亚克隆人表达 质粒 ｐＧＥＭＴ中,经体外翻译后,比较野毒株和变异株的表达产物。结果该前 Ｃ区突变株在体外仍能合成 ＨＢＶ ｅ前体 蛋白。结论前 Ｃ区 Ｔ１８６２／Ａ１８９９突变并不能阻断 ＨＢＶ ｅ抗原前体蛋白合成,ｅ抗原前体可能在分泌过程中受阻。     

慢性乙型肝炎患者HBV前C区基因突变与临床的关系

目的：探讨慢性乙型肝炎患者ＨＢＶ前Ｃ区基因变异与临床的关系。方法：应用３′－碱基特异性ＰＣＲ法（３′－ＢＳ－ＰＣＲ）。结果：５５例ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性乙型肝炎患者中检出突变株２５例。突变株的检出主要集中在抗－ＨＢｅ阳性患者中，并随肝损害加重而增加，重型肝炎患者突变株检出率最高。ＨＢＶ、ＨＣＶ重叠感染者高于ＨＢＶ单纯感染者。结论：突变株感染者病情较重，预后差；抗－ＨＢｅ的出现并不完全意味着病情的缓解；ＨＣＶ的重叠感染可能是导致ＨＢＶ前Ｃ区基因突变的原因之一。     

乙型肝炎病毒前C变异体的体外转录和翻译

目的 明确乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ第１７位和２９位密码子突变体对ｅ抗原合成和分泌的影响。方法 用ＰＣＲ方法扩增ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因区,克隆后测序及进行序列分析。将ＨＢＶ前Ｃ区Ｔ１８６２／Ａ１８９９位点突变体亚克隆入表达质粒ｐＧＥＭＴ中,经体外翻译后,比较野毒株和变异株的表达产物。结果 该前Ｃ区突变在体外仍能合成ＨＢＶｅ前体蛋白。结论 前Ｃ区Ｔ１８６２／Ａ１８９９突变并不能阻断ＨＢＶｅ抗原前体蛋白合成,ｅ抗原前体可能在分泌过程中受阻。     

干扰素治疗慢性乙肝的前瞻性观察及其影响因素

以错配聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析和中和生物法研究了ＨＢＶ前Ｃ区基因变异及干扰素中和抗体对干扰素疗效的影响。结果表明：有前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ基因突变者ＨＢＶＤＮＡ阴转７例（４６．６％，７／１５），追踪一年内全部复发，无变异者ＨＢＶＤＮＡ阴转７例（５０．０％，７／１４），追踪观察未见复发。中和抗体阳性者ＨＢＶＤＮＡ阴转率为２６．７％（４／１５），明显低于中和抗体阴性的病人（８３．３％，１０／１２）。     

乙肝病毒基因前C区突变株感染的检测及临床意义

乙肝病毒基因前Ｃ区突变株感染的检测及临床意义刘华瑞，王小飞，王锦蓉等。华西医科大学肝炎研究室四川医学１９９４；１５（４）１９２应用３′－末端突变特异性ＰＣＲ（ｍｓＰＣＲ）技术对１１７例１４２份临床各型乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者的血清标本进行了ＨＢＶ基因...     

HBV－DNA前C区变异的重型肝炎末梢血T细胞亚群分布的研究

用限制性酶切片段长度多态性分析，对１７例经巢式聚合酶链反应扩增ＨＢＶ—ＤＮＡ阳性的重型肝炎患者血清的Ｃ基因前Ｃ区１８９６位点进行分析，并比较研究变异株组和野毒株组重型肝炎末梢血Ｔ细胞亚群分布。结果：①单纯前Ｃ区１８９６位变异株感染３例，单纯野毒株感染８例，变异株和野毒株共同存在６例；②９例前Ｃ区变异株感染重型肝炎末梢血ＣＤ８＋Ｔ细胞百分率与单纯野毒株感染重型肝炎组比较明显降低。变异组９例全部死亡，非变异组８例中仅１例死亡。结果说明：乙肝病毒基因组前Ｃ区１８９６位变异与重型肝炎发生有关。Ｃ区变异组末梢血ＣＤ８＋Ｔ细胞下降可能由ＣＤ８＋Ｔ细胞向肝脏集聚所致，可能是变异株组重型肝炎预后极差的重要原因