三氧化二砷通过Bcl-2相关机制诱导哮喘患者T细胞凋亡

本研究观察了三氧化二砷对哮喘患者T细胞凋亡、白细胞介素-4分泌的影响，并探讨了Bcl-2的作用。分离哮喘患者(n＝21)和健康对照者(n＝20)的外周血T细胞，分别加入三氧化二砷和地塞米松培养24 h。用荧光显微术、流式细胞仪DNA含量分析法和细胞色素c ELISA试剂盒检测T细胞凋亡，用ELISA的方法测量血清和细胞培养上清液白细胞介素-4水平，用免疫荧光流式细胞分析法测定Bcl-2基因表达。与健康对照者比较，哮喘患者T细胞体外培养24 h后自发凋亡减慢。地塞米松使哮喘患者和健康对照者的T细胞凋亡率均增加，两试验组间增加幅度无显著差异。三氧化二砷显著增加哮喘患者T细胞凋亡率，但对健康对照者T细胞凋亡影响不明显。哮喘患者血清白细胞介素-4水平升高，T细胞Bcl-2表达上调。而且，在体外培养24 h后，哮喘患者T细胞比健康对照者T细胞自发分泌的白细胞介素-4及Bcl-2的表达水平均有所提高。三氧化二砷显著减少哮喘患者T细胞白细胞介素-4分泌，下调Bcl-2表达，但对健康对照者T细胞无明显影响。地塞米松可使两试验组T细胞释放白细胞介素-4显著减少，但对两试验组T细胞Bcl-2基因表达影响不明显。结果提示：三氧化二砷在体外可诱导哮喘患者T细胞凋亡，减少白细胞介素-4分泌，下调Bcl-2基因表达可能是其重要机制之一。     

三氧化二砷治疗哮喘作用机制的实验研究

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3 )对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞 (EOS)凋亡和核因子 κB(NF κB)表达的影响作用 ,探讨As2 O3 对哮喘可能的治疗机制。方法　豚鼠 2 0只建立哮喘模型后随机分为对照组和As2 O3 (2mg/kg)治疗组。每组 10只 ,采用TUNEL技术原位标记细胞凋亡 ;免疫组织化学染色技术检测豚鼠气道壁NF κB ;计算机图像分析技术对气道壁EOS凋亡和NF κB表达进行定量检测。结果　对照组豚鼠支气管壁EOS凋亡指数为 (0 2 3± 0 0 5 ) % ,整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个NF κB+ 细胞网络 ,其中支气管壁胞核NF κB+ 细胞密度为 (12 6 1± 190 )个 /mm2 上皮面积 ;哮喘豚鼠经As2 O3 处理后 ,支气管壁EOS凋亡指数显著增加 (P <0 0 1) ,胞核NF κB+ 细胞密度显著下降 (P <0 0 1) ,并且气道壁EOS凋亡指数与胞核NF κB+ 细胞密度之间呈显著性负相关 (r =- 0 91,P <0 0 1)。结论　抑制气道NF κB激活 ,促进EOS凋亡 ,可能是As2 O3 治疗哮喘的重要机制之一。     

三氧化二砷对小鼠精子形态的影响

三氧化二砷对小鼠精子形态的影响祝寿芬仇玉兰王仲霞山西医科大学卫生毒理教研室（太原０３０００１）砷及其化合物（Ａｓ＋和Ａｓ＋５）对妊娠小鼠和地鼠均可引起畸胎和死胎［１］。流行病学调查显示，砷长期暴露者会罹患皮肤癌、肺癌、肝癌［２］，还证明我国韶关地区居...     

三氧化二砷对小鼠卵母细胞线粒体DNA氧化损伤作用及其机制

目的研究三氧化二砷(As2O3)对小鼠卵母细胞线粒体DNA(mt DNA)的氧化损伤作用及其作用机制。方法 1体外实验挤压正常小鼠卵巢获取卵母细胞,培养成熟后,分为As2O31和2μmol·L-1单独处理组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)5 mmol·L-1处理组、2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(Tempo)1 mmol·L-1处理组、As2O31或2μmol·L-1+NAC 5 mmol·L-1共处理组、As2O31或2μmol·L-1+Tempo 1 mmol·L-1共处理组,培养20 h后,收集成熟卵母细胞进行后续实验指标测定。2体内实验雌性昆明小鼠ip给药,分为As2O31和2 mg·kg-1染毒组、As2O31或2 mg·kg-1+NAC 200 mg·kg-1组,每日1次,连续60 d,椎脱臼处死取卵母细胞。2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光染色检测细胞内活性氧(ROS)水平;8-羟基脱氧鸟苷酶(8-OHd G)联免疫反应检测提取mt DNA中8-OHd G含量;Western蛋白印迹法检测DNA聚合酶γ(Polγ)和线粒体转录因子A(mt TFA)的蛋白表达;β-半乳糖苷酶(β-Gal)报告基因检测试剂盒检测溶酶体活力。结果 1体外实验As2O3单独处理组小鼠卵母细胞中ROS和8-OHd G含量升高,Polγ和mt TFA蛋白表达水平降低(P<0.05);而As2O3与NAC或Tempo共处理组卵母细胞中ROS含量减少,8-OHd G水平降低,Polγ和mt TFA蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。2体内实验As2O3单独处理组小鼠卵母细胞中ROS和8-OHd G含量升高,Polγ和mt TFA蛋白表达水平降低(P<0.05);As2O3与NAC共处理组小鼠卵母细胞中ROS含量减少,8-OHd G水平降低,Polγ和mt TFA蛋白表达水平提高(P<0.05)。As2O3单独处理组体外培养的卵母细胞,β-Gal活力显著提高(P<0.05),而As2O3与NAC或Tempo共处理组β-Gal活力显著下降(P<0.05)。体内实验各处理组β-Gal活力无显著差异。结论砷暴露可诱导小鼠卵母细胞大量生成ROS,抑制线粒体基因组修复与复制相关因子Polγ及mt TFA的表达,同时改变溶酶体活力,最终诱发mt DNA氧化损伤。     

甘草酸对哮喘小鼠肺组织Eotaxin表达的影响

目的:观察甘草酸对哮喘小鼠肺组织嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)表达的影响,探讨甘草酸抗支气管哮喘的可能机制。方法:小鼠分为(哮喘)模型组、激素(强的松)组、甘草酸组和正常对照组,建立卵蛋白哮喘模型后给予相应药物,4周后处死小鼠,计数各组支气管肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞及通过免疫组化检测各组肺组织中Eotaxin的表达,并与正常对照组比较。结果:与模型组比较,甘草酸能显著降低嗜酸粒细胞计数(P<0.01)及抑制肺组织Eotaxin的表达(P<0.05)。结论:甘草酸可能通过下调Eotaxin的表达而发挥抗嗜酸粒细胞性气道炎症的作用。     

三氧化二砷体外对哮喘患者外周血T细胞凋亡和白细胞介素4分泌的影响(英文)

目的探讨三氧化二砷治疗哮喘的可能机制。方法分离21例哮喘患者和20例健康对照者外周血T细胞,分别加入三氧化二砷(0.1mg·L-1)或地塞米松(5mg·L-1)培养24 h。用ELISA方法检测培养上清液中白细胞介素4(IL-4)的含量,用荧光显微镜、流式细胞术和细胞色素c试剂盒检测细胞凋亡。结果哮喘患者T细胞自发释放IL-4较健康对照者明显增多;三氧化二砷对健康对照者T细胞IL-4的释放无影响,对哮喘患者T细胞IL-4释放增加具有抑制作用;地塞米松可使两组T细胞IL-4的释放明显降低。哮喘患者外周血T细胞体外培养24h凋亡百分率较健康对照者明显降低,细胞浆细胞色素c含量降低;三氧化二砷明显增加哮喘患者T细胞凋亡的百分率和细胞色素c的含量,对健康对照者作用不明显;地塞米松可使两组的T细胞凋亡百分率和细胞色素c含量增加。结论三氧化二砷治疗哮喘的机制可能与诱导哮喘患者T细胞凋亡和IL-4分泌减少有关。     

三氧化二砷对实验性小鼠支气管哮喘气道重塑及TGF-β1、VEGF表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对支气管哮喘气道重塑的影响。方法将实验BALB/c小鼠40只随机分为正常对照组、模型组、地塞米松治疗组和As2O3治疗组,模型组通过腹腔注射卵白蛋白（OVA）致敏及反复雾化OVA吸入激发8周,建立支气管哮喘气道重塑动物模型,地塞米松和As2O3治疗组每次雾化吸入前分别给予地塞米松2 mg/kg和As2O34 mg/kg腹腔内注射。应用HE染色,观察支气管、肺组织的病理形态改变,应用图像分析系统测定气道重塑指标,应用免疫组化法检测各组小鼠肺组织中的转化生长因子β1（TGF-β1）、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组肺组织中的TGF-β1和VEGF mRNA表达水平。结果模型组小鼠经过8周过敏原激发后,肺组织病理学发生了较典型的哮喘样改变;地塞米松组和As2O3组小鼠的肺部组织病理学改变较模型组为轻,两组之间无显著差异。模型组小鼠肺组织中TGF-β1、VEGF的蛋白和mRNA表达均增强;与模型组相比,地塞米松组和As2O3组肺组织中TGF-β1、VEGF的蛋白和mRNA的表达均较弱,但仍强于正常对照组。结论致敏后给予8周过敏原激发可成功建立小鼠哮喘气道重塑模型;地塞米松和As2O3治疗均可抑制哮喘的气道重塑过程,其作用机制可能与抑制TGF-β1、VEGF的表达有关。     

三氧化二砷抑制小鼠B16黑色素瘤生长作用及其机制

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对小鼠B16黑色素瘤的生长及其血管生成的抑制作用 ;同时观察其对B16细胞增殖活性、细胞形态、细胞周期及凋亡的影响。方法　选用小鼠黑色素瘤B16细胞接种C5 7BL/ 6J小鼠 ,观察腹腔注射As2 O3 对实体瘤的重量及成瘤率的影响 ;应用HE染色、Ⅷ RAg免疫组化染色观测瘤组织内新生血管密度 ;采用CellTiter 96AqueousOne试剂检测B16细胞增殖活力 ;Giem sa染色、Feulgen染色观察细胞形态学变化 ;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡。结果　As2 O3 能显著抑制小鼠B16黑色素瘤的生长 ,治疗组成瘤率为 37 5 % ,抑瘤率达81 6 1% ,并能显著抑制瘤组织内血管生成 ;体外实验观察到As2 O3 能抑制B16细胞增殖 ,并存在浓度依赖效应 ,IC50 为32 99μmol·L-1;细胞形态学观察结果显示As2 O3 使B16细收稿日期 :2 0 0 4-0 2 -17,修回日期 :2 0 0 4-0 3 -2 8基金项目 :安徽省教育厅资助项目 ,No 2 0 0 4kJ2 79作者简介 :夏　俊 ( 1965 -) ,女 ,硕士 ,副教授 ,硕士生导师 ,研究方向 :肿瘤分子生物学 ,Tel:0 5 5 2 3 0 664 12 2 0 97,E mail:xia jun1965 @yahoo .com .cn崔秀云 ( 1941-) ,女 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向 :癌基因与抑癌基因 ,Tel:0 411 472 0 64 8,E mail:cuixy @dlmedu .edu .     

三氧化二砷对小鼠肝癌生物学行为的影响

目的研究三氧化二砷对HepA小鼠肝癌生长、血管生成及侵袭与转移特性的影响。方法建立皮下种植肝癌小鼠模型,用药后观察小鼠肿瘤体积变化及抑瘤率;利用免疫组织化学观察移植瘤中血管内皮生长因子（VEGF）,对移植瘤的微血管密度（MVD）进行计数。结果三氧化二砷对小鼠肝癌瘤体体积和抑瘤率均具有抑制作用;三氧化二砷能抑制肿瘤新生血管生成,降低VEGF的表达,并能降低肿瘤MVD,与未用药对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论三氧化二砷能缩小肿瘤体积、增加抑瘤率,并能降低VEGF的表达,减少微血管密度。     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞作用的研究

目的以人脐静脉内皮细胞作为血管新生内皮细胞的模拟物,通过研究As2O3对人脐静脉内皮细胞的影响,探讨As2O3的抗血管新生作用机制。方法分离和培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度和时间的As2O3和VEGF作用于脐静脉内皮细胞,应用流式细胞技术测定As2O3和VEGF对脐静脉内皮细胞增殖、细胞凋亡和癌基因bcl-2表达的影响。结果As2O3以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制癌基因bcl-2表达,而VEGF可拮抗As2O3的部分作用。结论As2O3可以通过直接作用于内皮细胞而抑制血管新生。     

三氧化二砷对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响(英文)

目的研究三氧化二砷(As2O3)对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响。方法45只MRL/lpr狼疮小鼠ip给予环磷酰胺50 mg·kg-1(每周1次)和As2O30.8 mg·kg-1,每天1次,共2个月。用ELISA法检测血清抗双链DNA(dsDNA)抗体、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)浓度;用流式细胞术测定脾CD3+,CD19+,CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞亚群的百分比;用PAS染色法观察肾组织病理变化;用免疫荧光方法检测肾组织IgG和补体C3的表达。结果与给药前比较,给药2个月后,正常对照组血清抗dsDNA抗体水平升高,由给药前1.18±0.26升高至1.80±0.26(P<0.01),As2O3和环磷酰胺组该抗体水平明显降低,分别由给药前1.14±0.58和1.09±0.22降低至0.92±0.06和0.67±0.14(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较:①As2O3和环磷酰胺组血清抗ds-DNA抗体、IFN-γ和IL-12浓度明显降低(P<0.05),环磷酰胺组抗ds-DNA抗体比As2O3组显著降低(P<0.01);②As2O3组CD3+,CD3+CD4+和CD19+细胞百分率明显降低(P<0.01),环磷酰胺组CD3+,CD3+CD8+和CD19+细胞百分率明显降低(P<0.01);As2O3组CD3+CD4+细胞百分率明显降低(P<0.01);③As2O3和环磷酰胺组小鼠肾小球细胞计数和活动度积分明显降低(P<0.05,P<0.01),As2O3和环磷酰胺组无显著差异;④As2O3和环磷酰胺组肾IgG表达明显降低(P<0.05),补体C3表达无明显差异,As2O3和环磷酰胺组之间无显著性差异。结论As2O3能降低MRL/lpr狼疮小鼠血清抗ds-DNA抗体水平,抑制T,B和Th细胞活化和增殖,降低血清IFN-γ和IL-12水平,从而缓解狼疮肾炎的病理变化。     

三氧化二砷对狼疮小鼠存活率和自身免疫反应的影响(英文)

目的探讨三氧化二砷(ATO)在治疗系统性红斑狼疮中的应用价值并探讨其作用机制。方法① BXSB狼疮小鼠随机分为ATO治疗组和对照组,每组17只。ATO治疗组隔日ip ATO0.4 mg·kg-1至d105,实验持续至d 210结束,观察两组小鼠的存活率,采用ELISA法检测小鼠血清IgG和抗ds-DNA抗体水平。②另外20只BXSB狼疮小鼠,同上分组处理,至d 90处死取脾和肾组织,提取总RNA,用RT-PCR方法检测脾和肾组织中干扰素γ(IFN-γ)mRNA的表达。结果至d210,ATO治疗组小鼠死亡8只,对照组死亡13只。至d90和d105,治疗组小鼠血清抗ds-DNA抗体(A450 nm)分别为0.335±0.011和0.223±0.017,对照组分别为0.688±0.016和0.683±0.014。至d90 ATO治疗组小鼠脾和肾组织IFN-γ mRNA表达较对照组亦明显下降。至d 105,ATO治疗组血清IgG水平较对照组明显下降,分别为(4.9±1.3)和(6.9±1.0)g.L-1。结论 ATO可提高BXSB狼疮小鼠的存活率,降低血清IgG和抗ds-DNA抗体水平,抑制脾和肾组织IFN-γ mRNA的表达。     

三氧化二砷诱导宫颈癌细胞凋亡的研究

目的:研究三氧化二砷能否诱导宫颈癌细胞凋亡。方法:AnnexinV/PI双染,流式法检测早期凋亡;倒置显微镜观察、HE染色检测凋亡过程的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡晚期出现的DNALadder。结论:适合浓度的三氧化二砷可以诱导宫颈癌细胞发生明显凋亡。     

三氧化二砷抑制肝癌细胞增殖的体内实验研究

目的：探讨As2O3对小鼠H22肝癌细胞增殖的抑制作用。方法：建立小鼠H22肝癌实体型移植瘤模型，腹腔应用As2O3治疗后，通过PCNA及CyclinD1免疫组化检测指标反映细胞增殖改变。结果：As2O3能够下调PCNA及CyclinD1蛋白的表达。结论：As2O3对小鼠肝癌细胞的增殖具有明显的抑制作用，具有治疗肝癌潜在价值。     

三氧化二砷对胃癌细胞SGC7901/ADR GST-π和TopoⅡ表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对GSTπ和TopoⅡ表达的影响。方法用MTT法检测As2O3的非细胞毒性浓度和SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及用免疫组织化学法检测细胞GSTπ和TopoⅡ的表达。结果与结论0.4~0.8μmol.L-1As2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P<0.01),As2O3可下调GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,部分逆转SGC7901/ADR细胞对ADM的耐药性。     

三氧化二砷对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响

目的观察不同浓度的三氧化二砷对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响。方法噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0μmol.L-1)的三氧化二砷作用于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24、48、72 h后的细胞增殖率,Western blot检测不同浓度的三氧化二砷作用于MDA-MB-231细胞24 h的PCNA水平。结果不同浓度的三氧化二砷作用于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞24、48、72 h后,随着时间的推移和浓度的升高,细胞增殖抑制率增加,有浓度和时间依赖性,以1.0μmol.L-1三氧化二砷作用最明显,Western blot检测显示,与对照组比较,随着浓度的升高,PCNA蛋白降低,其中以1.0μmol.L-1三氧化二砷作用后最明显。结论三氧化二砷能促进MDA-MB-231细胞的凋亡,其机制可能与下调PCNA表达的促凋亡途径有关。     

四种砷拮抗剂对三氧化二砷诱导的三种粒系白血病细胞凋亡和端粒酶活性的减量调节作用(英文)

目的:研究巯基供体N-乙酰半胱氨酸(NAC)和二巯丁二钠(NDMS)、抗氧化剂过氧化氢酶(CAT)和Ca~(2 )清除刘(Quin 2)对三氧化二砷诱导的三种粒系白血病细胞凋亡和端粒酶活性改变的调控作用。方法:用流式细胞仪和PCR ELISA法分别检测NAC、NDMS、CAT或Quin 2与三氧化二砷共同作用于三种粒系白血病细胞后其凋亡和端粒酶活性的变 化。结果:三氧化二砷0.6、2.7和8.1μmol/L可分别诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,慢性粒细胞白血病细胞株K562,急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞发生40％-60％的凋亡,同时下调三种细胞的端粒酶活性。NAC 4mmol/L,NDMS 200μmol/L,CAT 80kU/L,Quin 220μmol/L不同程度抑制这种凋亡作用。NAC和CAT既可独立降低三种细胞的端粒酶活性,也可促进三氧化二砷对端粒酶的下调作用,而Quin 2可抑制K562和HL-60细胞中的这种下调作用。结论:三氧化二砷诱导的三种细胞的凋亡过程涉及了疏基失活、自由基的改变、细胞内Ca~(2 )浓度改变及端粒酶活性下降。NAC、NDMS、CAT及Quin 2可不同程度拮抗三氧化二砷对三种细胞的作用。