未成熟树突状细胞对小鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用

目的探讨未成熟树突状细胞（imDC）对小鼠胶原诱导性关节炎（CIA）的治疗作用及其机制。 方法分离、培养小鼠骨髓来源的单核细胞,经细胞因子和脂多糖（LPS）分别诱导为未成熟树突状细胞（imDC）和成熟树突状细胞（mDC）,并采用流式细胞技术核对细胞表型。选取6～8周龄雌性BALB/c小鼠30只,鸡Ⅱ型胶原对所有小鼠初次免疫,于初次免疫后第6天按随机数字表法将小鼠分为imDC组、mDC组和磷酸盐缓冲液(PBS)组,每组10只,并分别经尾静脉输注imDC、mDC和PBS;初次免疫后第7天对3组小鼠行加强免疫。于加强免疫后第21天观察3组小鼠的关节变形程度,并检测其关节炎指数（AI）、血清抗炎因子IL-10、TGF-β水平以及脾脏CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）比例。 结果经IL-4和GM-CSF诱导后,骨髓单核细胞CD80、CD86、MHC-Ⅱ的表达率分别为32.3%、25.6%、44.0%,经IL-4、GM-CSF和LPS诱导后,CD80、CD86、MHC-Ⅱ的表达率分别为91.5%、90.9%、94.2%,即imDC和mDC诱导分化成功。加强免疫后第21天,imDC组小鼠AI值为（7.32±1.63）分,显著优于同时间点的mDC组［（13.64±2.02）分］和PBS组［（12.78±1.96）分］。加强免疫后第21天,经ELISA检测,imDC组CIA小鼠血清IL-10和TGF-β以及脾脏CD4+CD25+Treg比例均显著高于同时间点的mDC组和PBS组,差异均有统计学意义（P<0.01）。 结论未成熟树突状细胞可有效抑制小鼠CIA的进展,其作用机制可能与未成熟树突状细胞可通过上调抗炎细胞因子的表达,刺激Treg细胞的增殖,从而诱导免疫耐受有关。     

树突状细胞与免疫耐受

树突状细胞(DC)是目前发现体内功能最强大的专职抗原递呈细胞(APC),其主要来源于CD34+造血干细胞.依据其成熟状态的不同而发挥不同的免疫调节作用,如成熟树突状细胞(mDC)可激活T细胞促进免疫应答,未成熟树突状细胞(imDC)及调节性树突状细胞(DCreg)可负向调节免疫应答,诱导免疫耐受.DC在感染、免疫性疾病、移植免疫及恶性肿瘤的发病机制与治疗中的作用成为免疫学界研究的焦点.近年来DC诱导免疫耐受的研究受到越来越多的关注,笔者就DC在免疫耐受中的作用作一综述.     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者外周血树突细胞的变化及意义

目的 探讨慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者体内树突细胞(DC)数量和功能的变化.方法 慢性ITP患者予以大剂量地塞米松(HD-DXM)冲击治疗,剂量40 mg/d,口服,连续4 d,观察短期疗效.用流式细胞术检测患者外周血中髓系DC(mDC)和浆细胞样DC(pDC)在治疗前后绝对数量的变化及与CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的相关性;流式细胞术检测外周血总Dc表面协同刺激分子的表达.将慢性ITP患者外周血单核细胞来源的DC、CD4+T淋巴细胞与自身血小板或健康人同源异基因血小板混合培养,观察CD4+T淋巴细胞增殖情况,检测DC血小板相关抗原的呈递功能.结果 与正常对照组比较,慢性ITP患者外周血pDC和mDC绝对数量均无明显变化(P值均》0.05);而外周血CD4+FOXP3+T细胞数明显降低(P《0.01),pDc和mDC与CD4+FOXP3+T细胞数之间均存在负相关性(r=-0.396,P=0.045和r=-0.410,P=0.037).HD-DXM治疗初始反应率达92.3%,pDC绝对数量较治疗前减少达75.5%(P《0.01);而mDC较治疗前虽增加了24.3%(P《0.05),但mDC上CD11c表达的平均荧光强度(MFI)从治疗前340±30降至199±21(P《0.01);CD4+F0xP3+T细胞数较治疗前显著增加(P《0.01),治疗后pDC与CD4+F0XP3+T细胞存在负相关(r=-0.524,P=0.006),而mDC与CD4+F0XP3+T细胞间无相关性(r=-0.360,P=0.071).慢性ITP患者外周血DC表面协同刺激分子CD86表达的MFI明显高于正常对照组(P《0.05);CD86、CD40、CD80表达阳性率及CD40、CD80表达的MFI与正常对照组比较差异均无统计学意义(P值均》0.05).慢性ITP患者CD4+T淋巴细胞增殖反应强度高于对照组(P《0.05),DC对血小板相关抗原呈递功能亢进.结论 DC可能参与了慢性ITP的免疫发病机制,并与CD4+CD25+Treg细胞有一定的关联.     

U0126对imDC诱导初始性CD4+T细胞的体外研究

目的:研究ERK1/2信号通路在imDC诱导同种异体CD4+T细胞分化为Treg细胞中的作用,探讨免疫耐受状态建立的可能分子机制.方法:密度梯度离心法从血液标本中分离PBMC,加入GM-CSF和IL-4联合诱导、扩增至第7天,使其转化为imDC,从细胞形态学、细胞表面标记物以及细胞功能三方面进行鉴定;免疫磁珠分选法从单个核细胞中分离初始性CD4+T细胞,将其混合培养,同时设空白组、混合对照组、低浓度UO126组、中浓度U0126组和高浓度U0126组,分别以FCM检测初始性CD4+T细胞转化为Treg 细胞的转化率.结果:空白组:3.25%±0.89%,混合对照组:21.80%±0.40%,低浓度U叭26组:22.58%±0.52%,中浓度U0126组40.81%±0.81%,高浓度U0126组:41.58%±0.81%.结论:人外周血来源的im[DC可以诱导初始性CD4+T细胞转化成Treg细胞:ERK1/2信号传导通路特异性阻断剂U0126可以部分促进初始性CD4+T细胞向Treg细胞转化,表明该阻断剂在免疫耐受的诱导中起了一定的作用.     

霉酚酸酯诱导Balb/c小鼠调节性T细胞的分化和增殖

目的:观察霉酚酸酯对Balb/c小鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)分化和增殖的影响,进一步探讨其可能的免疫耐受诱导机制。方法:取8周龄的SPF级Balb/c小鼠24只,随机分为3组,霉酚酸酯组(MMF组):每只灌胃霉酚酸酯40mg/(kg·d),环孢素组(CsA组):每只灌胃CsA10mg/(kg·d),对照组:灌胃每天予等体积生理盐水。3周后眼眶静脉取血,无菌条件下分离脾脏,制备单细胞悬液。采用流式细胞仪检测小鼠外周血和脾细胞CD4+CD25+Treg细胞,免疫组化法检测小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达。结果:霉酚酸酯组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(6.35±0.09)%和(11.62±1.10)%,CsA组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(2.57±0.09)%和(5.46±0.75)%,对照组小鼠外周血和脾细胞中CD4+CD25+Treg细胞的比例分别为(4.64±0.13)%和(7.61±0.73)%,差异均有显著性(P<0.01)。霉酚酸酯组小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达水平明显高于对照组,差异有显著性(P<0.01),CsA组小鼠脾脏Foxp3蛋白的表达水平明显低于对照组。结论:霉酚酸酯能够明显诱导Balb/c小鼠体内CD4+CD25+Treg细胞的增殖,并能提高Foxp3蛋白的表达,有利于免疫耐受的形成,其免疫抑制机制与CsA不同。     

不同树突状细胞对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞体外扩增的影响

目的利用不同种类树突状细胞(dendritic cells,DC)体外扩增获得表型和功能稳定的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)。方法免疫磁珠法(MACS)分离Balb/c小鼠CD4+CD25+调节性T细胞,利用与调节性T细胞同基因或异基因成熟DC、未成熟DC和调节性DC刺激其扩增,流式细胞术测定其纯度和表型。以CD4+CD25-T细胞作为反应细胞,验证扩增前后Treg细胞的免疫抑制功能。结果MACS分离的CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(95.38±1.82)%,同基因和异基因DC都能有效刺激Treg细胞体外扩增,其中同基因成熟DC扩增效果最为明显。而且同基因成熟DC扩增后CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(94.16±1.88)%,而且高表达Foxp3分子。当CD4+CD25+调节性T细胞与效应T细胞比例为1∶1时,能够有效的抑制效应T细胞的增殖,而且,同基因成熟DC扩增的CD4+CD25+调节性T细胞的抑制效果比新分离的Treg效果更好。结论同基因成熟DC能够体外扩增表型和功能稳定的Treg细胞。     

小鼠调节性T细胞的CD4+ CD25+ CD127low/-标记分析

新的特异性细胞表面标记的发现是提高调节性T细胞(Treg)测量和分选技术的重要环节,Foxp3是公认的天然Treg的标记,却不能作为分选细胞的标记,CD127是新发现低表达于Treg细胞表面的标记。本实验测定CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25+Foxp3+标记的小鼠外周血及脾脏Treg细胞的数量,并测定CD4+CD25+CD127low/-细胞内Foxp3转录因子的表达水平,分析CD4+CD25+CD127low/-标记在小鼠Treg细胞测定及分选的价值。收集BALB/c小鼠外周血及制备脾细胞悬液,分别三重荧光染色CD4、CD25、CD127及CD4、CD25、Foxp3后应用流式细胞仪检测,得出CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+这两种标记的小鼠外周血和脾脏Treg细胞的比例;再在CD4、CD25、Foxp3基础上加CD127染色(四重荧光染色),检测CD4+CD25+CD127low/-细胞Foxp3转录因子的表达情况。结果显示:①BALB/c小鼠外周血CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+TCD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为39.02%、5.35%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为7.13%、3.97%;②BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+T、CD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为23.49%、3.86%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为12.8%、8.23%;③BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞比例高于CD4+CD25+Foxp3+细胞,以脾脏更为明显(P<0.01);④小鼠外周血及脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞高表达Foxp3转录因子,CD4+CD25+Foxp3+细胞低表达CD127。结论:BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-较CD4+CD25+Foxp3+能定量更多的Treg细胞;CD127low/-作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,在细胞分选时受其他细胞的干扰最小,是定量和纯化小鼠Treg细胞的更好标记选择。     

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞抑制功能的影响

目的 观察高迁移率族蛋-B1(HMGB1)对调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)免疫抑制功能的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 免疫磁珠法分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg.采用固相包被抗CD3/可溶性抗CD28及HMGB1刺激的方法,流式细胞术观察HMGB1对抑制性细胞因子T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达的影响,并通过MTF比色试验观察HMGB1刺激对Treg抑制功能的影响.结果 经抗CD3/CD28刺激活化的CD4+CD25+Treg在1000 ng/ml HMGB1作用72 h时CTLA-4表达下降最明显(P＜0.01).CD+CD25+Treg与CD4+CD25-Treg细胞比值达1:1时抑制效率达到90%以上,而HMGB1刺激后的CD4+CD25+Treg对CD4+CD25-T细胞的抑制功能明显减弱.结论 HMGB1可以通过诱导Treg CTLA-4表达下调,从而影响Treg免疫抑制活性.     

IL-4对小鼠骨髓树突状细胞表面分子CD11c、CD80、CD86表达的影响及其意义

目的探讨IL-4对小鼠骨髓树突状细胞(DC细胞)表面分子CD11c、CD80、CD86表达的影响及其意义。方法对照组(n=5只,30孔)应用20 ng/ml GM-CSF,实验组(n=5只,30孔)应用20 ng/ml GM-CSF+20 ng/ml IL-4分别刺激小鼠骨髓细胞生长,隔日进行细胞换液,观察并对比细胞形态学变化,流式细胞仪测定DC细胞表面相关分子表达。结果实验组诱导小鼠骨髓细胞第7日观察可见DC细胞形态,对照组第7日未发现明显DC细胞形态,流式细胞仪测定实验组CD11c(0.546±0.289)、CD80(0.506±0.085)、CD86(0.562±0.260)表达分别较对照组CD11c(0.236±0.058)、CD80(0.279±0.096)、CD86(0.237±0.070)表达明显增高(P<0.05)。结论 IL-4可以促进小鼠骨髓DC细胞表面分子CD11c、CD80、CD86表达,促进DC细胞分化成熟。     

不同细胞刺激剂对小鼠调节性T细胞功能活化的影响

目的研究体外实验中不同细胞刺激剂对小鼠调节性T细胞(Treg)表面T淋巴细胞毒性相关抗原-4(CTLA-4)及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达的影响,并对不同细胞刺激剂在Treg抑制活性发挥中的作用进行比较。方法免疫磁珠法分离健康清洁级BALB/c小鼠脾脏CD4 CD25 Treg。采用植物凝集素(PHA,20 mg/L)、刀豆蛋白A(ConA,5 g/L)及固相包被抗CD3(1 mg/L)刺激Treg,观察刺激后24、48和72 h CTLA-4及Foxp3表达的时间-效应关系。结果PHA刺激对小鼠Treg细胞表面CTLA-4及Foxp3表达均无显著影响(P均>0.05);而ConA表现出一过性的Treg活化作用,24 h CTLA-4表达明显上调(P<0.01),但随刺激时间延长作用减弱,48 h和72 h后其表达已接近未刺激前的范围,同时ConA未能明显诱导Foxp3表达(P>0.05);抗CD3可有效刺激Treg活化,在24、48和72 h CTLA-4及Foxp3表达均明显上调(P<0.05或P<0.01),其中以作用24 h和48 h表达上调尤为显著(P均<0.01)。结论抗CD3在体外实验中能明显刺激Treg活化并诱导其抑制性相关分子CTLA-4及Foxp3的表达,为进一步探讨CD4 CD25 Treg的免疫调节效应提供了可能。     

供体Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响

本研究探讨供体CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗GVL)效应的影响。建立BALB/c→C57BL/6小鼠EL4白血病骨髓移植模型,体外磁珠分离纯化供鼠CD4+CD25+T细胞,在骨髓移植的同时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞。以移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理形态等为观察指标并进行组间比较。结果显示:白血病对照组小鼠平均生存时间为(17.9±0.7)天,均存在白血病细胞浸润;移植对照组及效应T细胞组平均生存时间为(23.2±1.6)天和(22.3±1.9)天,肝脏、皮肤和小肠病理切片显示均存在GVHD病理改变;Treg细胞组小鼠平均生存时间为(47.3±6.5)天,70%的受鼠获得长期存活,病理显示无GVHD及白血病细胞浸润,其GVHD评分较移植对照组及效应T细胞组明显降低(p0.05)。结论:在小鼠allo-BMT中联合输注供体CD4+CD25+T细胞可减少及减轻GVHD,并保留GVL效应。     

胃癌外周血调节性T细胞表达与预后的关系

目的：探讨胃癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋、CD4^＋FOXP3^＋、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞的表达状态与临床病理特征及预后关系。方法：采用流式细胞术检测35例胃癌患者及17例健康对照者外周血中CD4^＋CD25^＋、CD4^＋FOXP3^＋、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的比率及细胞数目;收集胃癌患者临床病理资料并进行术后随访,分析调节性T细胞表达状态与临床病理特征及无瘤生存率之间的关系。结果：胃癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋、CD4^＋FOXP3^＋及CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞比率与健康对照者间有显著差异（P〈0.01）,CD4^＋FOXP3^＋及CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞数目与健康对照间差异有统计意义（P〈0.05）。CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的比率[（2.57±1.50）%]高于对照组[（0.68±0.67）%],并与TNM分期及肿瘤大小有明显相关（P〈0.01）。CD4^＋FOXP3^＋、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞占CD4^＋T细胞的比率与无瘤生存率相关,有显著差异（P〈0.01）,CD4^＋FOXP3^＋及CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞数目与无瘤生存率相关,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：CD4^＋FOXP3^＋及CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞可能在胃癌免疫耐受中发挥重要作用,检测其比率及数目对于判断胃癌的病期及预后有一定价值。     

Castleman′s病患者的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的研究

目的：探讨Castleman′s病患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及其与疾病的关系。方法：用流式细胞术对14例Castleman′s病患者及30例正常对照的外周血中CD4^＋CD25^lowT细胞、CD4^＋CD25^highT细胞、CD4^＋CD25^highFOXP3＋T细胞的比例进行检测。结果：局灶型Castleman′s病患者外周血中CD4^＋CD25^lowT细胞、CD4^＋CD25^highT细胞和CD4^＋CD25^highFOXP3＋T细胞比例在治疗前分别为（4.55±0.53）%、（0.73±0.09）%、（0.64±0.09）%;治疗后分别为（4.88±0.24）%、（1.0±0.10）%、（0.93±0.10）%,均低于正常对照组。治疗后这3种T细胞的比例较治疗前有显著升高（P〈0.05）。多中心型患者外周血中这3种T细胞比例在治疗前分别为（9.43±0.81）%、（2.79±0.17）%、（2.46±0.09）%;治疗后（8.82±1.01）%、（2.71±0.10）%、（2.23±0.10）%,均高于正常对照组。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在局灶型和多中心型Castleman′s病中的变化是不同的,这种不同的变化可能和这两型的临床表现和预后不同有关。     

调节性T细胞抑制小鼠淋巴瘤细胞系EL4体外增殖的研究

本研究探讨自体调节性T细胞对T细胞淋巴瘤细胞系EL4的增殖抑制作用及其机制。应用免疫磁珠分离法(MACS)分选获得C57BL/6小鼠CD4+CD25+T细胞(Treg细胞),流式细胞术检测分选所得的细胞纯度及Foxp3的表达水平,PT-PCR法检测Foxp3 mRNA的表达,3H-TdR掺入法检测分选的Treg细胞对T细胞淋巴瘤细胞系EL4的体外抑制作用,ELISA方法检测抑制实验中细胞因子TGF-β1和IL-10的水平。结果显示,MACS分选获得CD4+CD25+T细胞纯度达94.52%,Foxp3表达比例为84.72%;分选后的细胞用PT-PCR法可检测到Foxp3mRNA的表达;3H-TdR掺入法证实无论有无抗原呈递细胞(APC)或树突状细胞(DC)存在,自体Treg细胞在体外都能明显抑制EL4细胞的增殖(p0.05),APC或DC有可能增强这种抑制作用,且单纯DC对EL4细胞的增殖也有抑制作用;实验中可检测到细胞因子TGF-β1和IL-10。结论:自体Treg细胞在体外能够明显抑制淋巴瘤细胞系EL4细胞的增殖,APC或DC可能增强这种抑制作用,且单纯DC对EL4细胞的增殖也有抑制作用。细胞因子TGF-β1和IL-10是Treg细胞发挥抑制作用的途径之一。     

体外扩增CD4＋CD25＋Treg细胞的效果比较及体外免疫抑制功能鉴定

本研究比较3种不同细胞组分扩增CD4＋ CD25＋ Treg的效果并鉴定其免疫抑制功能.用免疫磁珠分选法从小鼠脾细胞中分选出CD4＋T细胞、CD4＋ CD25＋ Treg细胞和CD4＋ CD25-T细胞,负载CD3/CD28克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激,分别对CD4＋T细胞、CD4＋ CD25＋ Treg细胞和CD4＋ CD25-T细胞进行体外扩增培养,流式细胞术检测扩增后CD4＋ CD25＋ Treg细胞的比例及Foxp3基因的表达,用混合淋巴细胞反应（MLR）检测CD4＋ CD25＋ Treg对CD4＋ CD25-T细胞增殖的抑制作用,CCK-8方法检测细胞抑制率.结果表明：经过2周培养,3组细胞均有明显的扩增.CD4＋T细胞组扩增倍数为（77.8±5.32）倍,CD4＋ CD25＋ Treg细胞的比例由（6.61±1.00）％增加到（15.33±1.31）％.CD4＋ CD25-T细胞组扩增迅速,倍数为（95.20 ±7.67）倍,CD4＋ CD25＋ Treg细胞的比例由培养前（0.37±0.13）％增加到（9.84±0.98）％.磁珠分选后的CD4＋ CD25＋ Treg细胞的扩增倍数为（41.20±6.92）倍,细胞纯度由（86.75±1.25）％下降到（85.32±1.62）％,Foxp3表达由（76.92±1.13）％下降到（75.33±2.11）％,扩增前后的细胞纯度和Foxp3表达,差异无统计学意义（P＞0.05）.体外抑制实验显示体外扩增的CD4＋ CD25＋ Treg细胞对CD4＋ CD25-T细胞增殖有明显的抑制作用,对效应性T细胞增殖的抑制效能与其细胞数呈正相关.结论：本研究在体外成功扩增了小鼠CD4＋ CD25＋ Treg细胞,并且具有免疫抑制功能,其中CD4＋ CD25＋ Treg细胞组扩增的CD4＋ CD25＋ Treg细胞数量多,细胞纯度高.     

树突状细胞疫苗调节慢性乙型肝炎患者细胞因子诱导的杀伤细胞相关免疫功能的研究

目的研究树突状细胞（DC）疫苗对培养的慢性乙型肝炎（CHB）患者细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）免疫功能的调节作用。方法采用体外细胞培养的方法培养30例CHB患者CIK细胞,分为DC疫苗组和无DC疫苗组,培养14d后用流式细胞术检测各组ClK中CD3’CIM’、CD3’CD8’及CD3’CD56’T细胞的所占比例,ELISA方法检测培养上清中自细胞介素-12（IL-12）、γ干扰素（IFN-1）及白细胞介素-4（IL4）的浓度。结果DC疫苗组CD3^＋CIM^＋、CD3^＋CD8^＋及CD3^＋CD56^＋T细胞所占比例分别为18．27％、64．36％和20．00％,无DC疫苗组则分别为17．79％（P〉0．05）、54．69％（t=4．130,P〈0．01）和13．39％（t=5．601,P〈0．01）。DC疫苗组的CIK培养上清中IL．12、IL4及IFN-1的浓度分别为（177．82±130．06）、（31．774-9．52）、（86．99±56．30）ng/L,无DC疫苗组分别为（80．83±50．15）n∥L（t=3．811,P〈0．01）、（40．33±19．74）ng／L（t=2．141,P〈0．05）和（42．07±19．68）ng／L（t=4．125,P〈0．01）。结论CIK细胞培养中加入DC疫苗进行诱导,增强了所培养CIK细胞的杀伤活性。     

肺癌患者荷瘤DNA倍体含量及外周血FOXP3与化疗效果的相关性研究

目的探讨肺癌患者荷瘤DNA倍体含量及外周血FOXP3与化疗效果的相关性。方法采用流式细胞术检测89例肺癌患者的DNA倍体含量,并对67例手术和化疗患者检测体内CD4+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞(Treg细胞),并以63例健康体检者作正常对照。结果随着TNM分期的发展,异倍体肿瘤的发生率逐渐上升(P0.01),有淋巴结转移或癌栓者其癌旁肺组织异倍体比率高于无癌栓或淋巴结转移者,肺癌患者CD4+CD25+T细胞、CD4+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例与对照组相比明显升高,CD4+FOXP3+T细胞占CD4+CD25+T细胞的比例与对照组相比无差异,化疗后较化疗前显著降低。结论化疗可使患者CD4+FOXP3+T细胞占CD4+及CD4+CD25+T细胞的比例明显下调,同时测定癌及癌旁细胞核DNA倍体模式,在评估肺癌恶性程度及预后上有一定意义。     

人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA与T细胞CDA^＋CD25^＋Treg表达相关性探讨

目的探讨人外周血单个核细胞中FOXP3mRNA的表达与CD4^＋CD25^＋Treg表达的相关性。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录成mRNA,以β-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4^＋CD25^＋Treg的比例。结果哮喘患儿组CD4^＋CD25^＋Treg细胞百分率明显低于同龄对照组,P〈0.01;FOXP3mRNA的表达也显著降低,P〈0.05;FOXP3和β-actin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物。结论应用SYBRGreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3mRNA表达水平简便、经济、可行,哮喘患儿CD4^＋CD25^＋Treg明显降低可能参与哮喘发病,FOXP3表达降低可能是导致CD4^＋CD25^＋Treg发育障碍的重要因素。     

慢性乙肝患者CD4~+ CD25~+ T细胞对外周血树突状细胞成熟的作用

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者CD4+CD25+Treg细胞对外周血树突状细胞成熟的影响。方法对2013年6月至2013年12月就诊的15例CHB患者和18例健康对照各抽取外周血20 ml,分离外周血单个核细胞(PBMC),于体外培养获得树突状细胞(DC)及免疫磁珠分选获得CD4+CD25+Treg细胞;分别将CD4+CD25+Treg细胞和CD4+CD25-T细胞与DC共培养后采用流式细胞仪检测DC表面标志CD83、CD80、CD86、HLA-DR的表达。结果健康对照组,加入Treg后,相比于DC对照组及DC与CD4+CD25-T细胞共培养组,DC的CD83、CD80、CD86表达下降,差异有统计学意义。CHB患者组,加入Treg后,相比于DC对照组,DC的CD83、CD80、CD86表达下降,差异均有统计学意义;与DC和CD4+CD25-T细胞共培养组相比,Treg对DC的CD83、CD80表达抑制率较高,差异有统计学意义。CHB患者组的Treg对DC的CD83、CD80、CD86表达抑制率均高于健康对照组,差异均有统计学意义。结论 CHB患者外周血Treg细胞能够抑制DC的成熟,抑制效应强于健康对照。