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抗bcl—2核酶在HL—60细胞中的表达及促进其凋亡的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为消除白血病细胞中bcl-2基因对细胞凋亡的抑制作用开辟白血病基因治疗的途径。将合成的针对bcl-2mRNA的“锤头型”核酶基因定向克隆于真核表达本PDOR-neo,构pDOR-RZ重组体。通过脂质体Lipofectin介导的DNA转染法,把pDOR-RZ导入HL-细胞。 相似文献
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目的:检测9-顺式维甲酸(9-cisRA)诱导HL-60细胞凋亡的能力,并探讨其分子机制。方法:应用形态学观察、DNA电泳、流式细胞仪分析检测细胞凋亡,应用流式细胞仪检测HL-60细胞bcl-2含量。结果:9-cisRA可以诱导HL-60细胞在分化后发生典型的凋亡。在HL-60细胞分化和凋亡的过程中bcl-2含量逐渐下降。9-cisRA诱导HL-60细胞凋亡能力和降低bcl-2表达的能力均显著强于全反式维甲酸(A-TRA)。结论:9-cisRA具有诱导HL-60细胞凋亡的作用。bcl-2表达水平的降低可能是经诱导分化成熟的白血病细胞走向凋亡的重要条件。 相似文献
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氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡及其分子机制的初步研究 总被引:76,自引:1,他引:76
目的:了解氧化砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的细胞和分子机制。方法:以早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞等为研究对象,利用流式细胞仪,DNA电泳,Northern、Western印迹,免疫组化等手段,观察As2O3对APL的作用。结果:As2O3能显著诱导NB4细胞凋亡,而不影响HL-60和U937的生长和存活。氧化砷能有效降低NB4细胞中bcl-2基因的表达,而对其它几种凋亡相关基因(包括p53、c-myc、bax和bcl-XL)的mRNA水平无影响。结论:这可能是As2O3诱导NB4细胞凋亡的分子机制之一。 相似文献
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逆转录病毒介导的反义bcl-2序列促进足叶乙甙诱导的白血病细胞凋亡 总被引:7,自引:0,他引:7
目的:探讨逆转录病毒介导的反义bcl2序列对细胞凋亡的诱导作用。方法:PA317细胞包装逆转录病毒,病毒转导Jurkat细胞后用RTPCR及Western印迹法检测bcl2mRNA及蛋白表达水平;用流式细胞仪计数及DNA电泳检测细胞凋亡。结果:转染反义bcl2序列可使内源性BCL2蛋白表达下降,提高白血病细胞株对足叶乙甙(Vp16)的敏感性,促进细胞凋亡。结论:反义bcl2序列能促进Vp16诱导的白血病细胞凋亡,为bcl2反义技术治疗白血病的临床应用提供了实验依据。 相似文献
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为研究外源性野生型p53基因在白血病细胞表达意义,采用重组逆转录病毒载体介导的人野生型p53cDNA转移HL60-n细胞。结果发现外源性野生型p53基因可以诱导HL60-n细胞死亡,死亡细胞呈凋亡的形态学特征。 相似文献
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抗凋亡基因bcl—2在急性白血病骨髓与细胞株中的转录水平表达 总被引:2,自引:0,他引:2
采用原位杂交方法检测了急性白血病骨髓活检标本及细胞株中bcl-2基因表达水平。结果22例白血病患骨髓中21例存在bcl-2mRNA高表达;6种白血病细胞株中5种bcl-2mRNA阳性(Molt-4例外),它们分别为CEM、Raji、HL-60、U937及K562。表明造血系统肿瘤中广泛存在bcl-2基因转录水平激活,其基因产物可能通过抑制细胞凋亡过程而影响急性白血病细胞的生物学特性。 相似文献
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阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡中bcl—2,c—myc基因表达水平的变化 总被引:11,自引:0,他引:11
阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡中bcl-2、c-myc基因表达水平的变化仇志根马伴吟杨毅吴王月现已证明,阿糖胞苷(Ara-C)通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。我们采用Ara-C诱导HL-60细胞凋亡,并观察了凋亡调控基因bcl-2、c-myc表达... 相似文献
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为探讨rhGM-CSF对VP-16诱导的HL-60细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用rhGM-CSF孵育的HL-60细胞由VP-16诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因bcl-2和fas的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测DNA的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、bcl-2和fas的表达,实验结果显示,rhGM-CSF可抑制VP-16诱导的HL-60细胞的凋亡,它加强了VP-16对bcl-2表达的下调作用,抑制了VP-16对fas表达的上调作用,由此推测,rhGM-CSF可能是通过下调fas表达降低HL-60细胞对VP-16的敏感性。 相似文献
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神经酰胺在诱导HL-60细胞凋亡中的作用研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:观察神经酰胺对HL60细胞凋亡产生的影响、凋亡相关基因bcl2变化及与蛋白激酶C(CPK)途径的关系,探讨其在细胞凋亡过程中可能的调节作用。方法:采用DNA凝胶电泳、细胞荧光染色、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)等技术对细胞进行凋亡鉴定及bcl2mRNA表达分析。结果:外源性及内源性神经酰胺类药物可诱导HL60细胞产生典型的凋亡改变,明显下调bcl2mRNA表达,且与刺激药物呈时间、剂量上的依赖性;CPK途径激活剂佛波酯(PMA)、二酰基甘油单独作用无诱凋作用,但加入内源性CPK抑制剂神经鞘氨醇,即可产生凋亡特有的DNA梯形降解。结论:神经酰胺类药物诱导的HL60细胞凋亡信号,可通过调节抑凋基因bcl2表达降低而产生效应,且与CPK途径的抑制密切相关 相似文献
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目的:探讨WT1基因反义RNA对髓系白血病细胞生长增殖和细胞凋亡的影响及作用机制。方法:用WT1基因反义RNA培养K562、HL60细胞,用氮蓝四氮唑盐染色、流式细胞仪检测、逆转录聚合酶链反应等方法观察细胞增殖、凋亡、细胞动力学和基因表达情况。结果:WT1反义RNA可以特异性抑制K562细胞增殖,诱导K562、HL60细胞凋亡;对HL60细胞的增殖无影响,对WT1、bcl2、mdm2基因表达无显著影响。结论:WT1基因与白血病细胞的增殖、凋亡密切相关,对白血病细胞凋亡的影响与p53、bcl2基因无关。 相似文献
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粒—巨噬细胞集落刺激因子对Vp16诱导白血病细胞凋亡的调控作用 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:探讨粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对Vp16诱导白血病细胞凋亡的调控作用,指导白血病临床治疗中正确使用GM-CSF。方法:在构建高效表达GM-CSF的逆转录载体N2A/CMV/GM-CSF表达系统的基础上,对转GM-CSF基因和未转GM-CSF基因的白血病HL-60细胞进行研究。结果:未转GM-CSF基因及转空载体N2A的HL-60细胞经Vp16处理后均出现凋亡的特征性表现:DNA电泳呈梯状;流式细胞仪DNA直方图上呈现特征性的亚二倍体(亚G1)峰;透射电镜观察细胞形态可见凋亡的特征性改变。结论:Vp16具有诱导白血病细胞发生凋亡的作用,而GM-CSF能够抑制Vp16诱导的细胞凋亡。以上结果表明,白血病临床治疗中为预防和改善化疗所致骨髓抑制而应用GM-CSF时,应谨慎地选择时机,在化疗前和化疗期间不宜使用,以避免白血病细胞对抗癌药物诱导的凋亡产生抵抗而导致耐药。 相似文献
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细胞凋亡相关基因与白血病 总被引:2,自引:0,他引:2
细胞凋亡是当前生命科学研究的热点之一,凋亡相关基因bcl-2,P53,c-myc,ICE家族,APO=-1/Fas,bcr-abl,PML-RARα等涉及白血病发病机制,治疗和耐药,通过调控凋亡相关基因促进白血病细胞凋亡,可能是治疗白血病的新途径。 相似文献
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切割bcr/abl核酶的逆转录病毒载体构建及其对K562细胞的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病(CML)中的作用以及探索CML基因治疗的可能性。方法:合成针对bcr/abl融合基因转录本b3a2断裂点“锤头状”核酶的cDNA序列,定向克隆于逆转录病毒载体内,通过脂质体介导的DNA转染法,将核酶基因导入K562细胞,并通过克隆分析法、流式细胞术(FCM)、逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、DNA电泳及电镜观察等方法检测核酶对K562细胞的影响。结果:①核酶转染K562细胞后48小时克隆形成抑制率达85%;②细胞内P210蛋白合成受到明显抑制;③RTPCR半定量检测bcr/ablmRNA表达水平明显下降;④核酶处理组K562细胞发生凋亡,表现为:在FCM图谱上可见明显的凋亡峰;DNA电泳分析出现典型的梯状DNA带;电镜观察呈现凋亡早期形态学改变。结论:核酶基因通过逆转录病毒载体导入K562细胞后可成功表达,使K562细胞bcr/ablmRNA及P210蛋白表达水平下降,抑制K562细胞增殖,同时诱导K562细胞发生凋亡。 相似文献
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bcl-2基因转染阻断Fas介导的Jurkat细胞凋亡 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:通过bcl2阻断Fas介导的细胞凋亡了解bcl2基因在淋巴瘤癌变过程中逃避机体免疫监控的作用机制。方法:应用基因重组技术重组pLXSNbcl2,采用电穿孔法将其与空载体分别转染包装细胞系PA317,将阳性克隆病毒上清感染人T淋巴瘤细胞株Jurkat,用G418筛选,其阳性克隆进行免疫组化检测,应用抗Fas抗体诱导细胞凋亡来模拟细胞毒T细胞的杀伤机制,观察bcl2在淋巴瘤逃避免疫机制中的作用。结果:转染人bcl2基因的Jurkat(Jurkatbcl2)细胞较对照Jurkat及转染空载体Jurkat(Jurkatneo)细胞,bcl2表达量明显增加,而Fas基因表达量无明显变化。其Jurkatbcl2能明显耐受抗Fas抗体诱导的细胞凋亡。结论:人bcl2基因在淋巴瘤中过量表达,能部分阻断抗Fas抗体诱导的细胞凋亡,bcl2基因过量表达可能是淋巴瘤癌变过程中逃脱机体免疫监控的机制之一。 相似文献
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逆转录病毒介导的反义bcl—2序列促进足叶乙甙诱导的白血病?… 总被引:6,自引:0,他引:6
探讨逆转录病毒介导的反义bcl-2序列对细胞凋亡的诱导作用,方法:PA317细胞包装逆转录病毒,病毒转导Jurkat细胞后用RT-PCR及Western印迹法检测bcl-2 mRNA及蛋白表达水平;用流式细胞仪计数及DNA电泳检测细胞凋亡。 相似文献
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目的:获得具有天然糖基化结构的重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)。方法:采用含sRα启动子和新霉素抗性基因的真核细胞表达载体pMEneo,接上XhoI接头,与XhoI酶切hGM-CSFcDNA片段连接,构建了可在哺乳动物细胞中稳定表达的pMEneo-hGM-CSF质粒。结果:22个pMEneo重构载体克隆中,8个含有hGM-CSFcDNA片段,酶切鉴定插入方向为5个顺式,1个顺式串珠,2个反式。结论:将上述各式以DEAE法转染COS细胞,瞬时表达鉴定,用TF1细胞MTT法测定培养液上清的hGM-CSF活性,顺式和顺式串珠培养上清活性为1×(103~104)U/ml,反式插入方向培养上清没有活性 相似文献
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目的:探讨急性髓系白血病(AML)细胞凋亡径路的特征及调控模式。方法:运用流式细胞仪(FACS)、DNA电泳、Northernblot分析技术,观察了化疗药物足叶乙甙(Vp16)作用于原代AML细胞前后,bcl-XL表达与凋亡的敏感性、临床特征、预后的关系。结果:绝大部分AML高表达bcl-XLmRNA病例经Vp16处理后,其bcl-XL虽然下调,但仍维持较高水平,并对凋亡诱导不敏感,与高白细胞数、髓外浸润等不良预后特征相关,化疗后不易缓解,处于长期缓解中的病例经Vp16处理后,bcl-XL亦表达下调,但凋亡率远低于AML细胞。结论:bcl-XL高表达与AML的发生、维持和化疗耐药性相关,bcl-XL高表达下调是凋亡启动的基础,但本身不足以引致凋亡。 相似文献