RUNX3小干扰RNA对SH-SY5Y细胞生长和药物敏感性的作用

目的：探讨RUNX3基因对人神经母细胞瘤细胞生长和药物敏感性的调节作用。方法:构建RUNX3基因的小干扰RNA载体并将其转导入SH-SY5Y细胞，G418筛选后获得稳定转染的阳性克隆后，应用RT-PCR和Western blotitng进行鉴定；MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化；MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后对阿霉素敏感性的变化；Western blotting检测细胞转染前后细胞周期相关蛋白cyclin D1、CDK4、CDK6、p21、 p27和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax以及耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达变化。结果:成功构建了RUNX3的小干扰RNA载体并将其转染SH-SY5Y细胞；筛选到稳定的RUNX3低表达的神经母细胞瘤细胞模型；MTT和流式细胞仪检测结果显示，转染RUNX3小干扰RNA后的细胞的生长速度显著快于对照组（P<0.05），且G1期的细胞比率显著低于对照组（P<0.05）；MTT法和流式细胞仪结果显示, 转染RUNX3小干扰RNA后的细胞对化疗药物的敏感性降低，细胞内的阿霉素蓄积量显著减少（P<0.05）；Western blotting显示，转染RUNX3小干扰RNA后的细胞中Bcl-2、P-gp和cyclin D1的表达明显增高，p21的表达明显降低。结论:下调RUNX3基因能促进神经母细胞瘤细胞生长，降低细胞对化疗药物的敏感性，提示RUNX3在神经母细胞瘤的发生和发展中可能扮演重要角色。     

TSG101小干扰RNA对SH-SY5Y细胞生长和药物敏感性的作用

目的：探讨TSG101基因对人神经母细胞瘤细胞生长和药物敏感性的调节作用。方法:构建TSG101基因的小干扰RNA载体并将其转导入SH-SY5Y细胞，G418筛选后获得稳定转染的阳性克隆后，应用RT-PCR和Western blotting进行鉴定；MTT法和流式细胞仪检测细胞转染前后生长速度和细胞周期的变化；DNA ladder法和流式细胞仪检测细胞转染前后对顺铂诱导的凋亡的变化；Western blotting检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax，耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达变化。结果:成功构建了TSG101的小干扰RNA载体并将其转染SH-SY5Y细胞；筛选到稳定的TSG101低表达的神经母细胞瘤细胞模型；MTT和流式细胞仪检测结果显示，转染TSG101小干扰RNA后的细胞的生长速度显著减慢于对照组（P<0.05），且G1期的细胞比率显著高于对照组（P<0.05）；DNA ladder法和流式细胞仪检测结果显示，用10 mg/L CDDP处理36 h后，转染TSG101小干扰RNA后的细胞的凋亡数显著多于对照组（P<0.05），形成DNA条带；Western blotting显示，转染TSG101小干扰RNA后的细胞中Bcl-2和P-gp的表达明显低于对照组。结论：下调TSG101基因能抑制神经母细胞瘤细胞生长，增加细胞对化疗药物的敏感性，提示TSG101在基因治疗中具有较好的临床应用前景。     

RNA干扰survivin基因提高淋巴瘤细胞对阿霉素的敏感性

目的：探讨RNA 干扰下调Burkitt淋巴瘤Daudi细胞系凋亡抑制基因survivin的表达对阿霉素敏感性的影响。方法：构建survivin发夹RNA（shRNA）真核表达载体, 脂质体介导转染Daudi细胞。多重RT-PCR 检测 survivin mRNA 表达；Western blotting 检测Survivin蛋白表达；流式细胞仪（FCM）检测干扰前后细胞凋亡率；MTT 法检测干扰前后细胞对化疗药物阿霉素（adriamycin,ADR）敏感性变化。结果：与无功能control-shRNA处理组和PBS处理组比较，转染survivin-shRNA 细胞的survivin mRNA和蛋白表达率显著降低，抑制率分别为62.32% 和61.88% (P<0.05)；FCM结果示转染组细胞凋亡指数（apoptosis index, AI) 显著高于两对照组(P<0.05)； MTT结果显示，转染组细胞的阿霉素半数抑制浓度(IC50)为（0.25±0.43） μmol/L，显著低于无功能control-shRNA处理组（0.87±0.21） μmol/L和PBS处理组(0.91±0.36) μmol/L,P<0.05；相同剂量ADR对转染细胞的生长抑制率明显高于PBS组和control组。结论： 发夹RNA干扰survivin基因可显著提高Daudi细胞凋亡率和对化疗药物阿霉素的敏感性。     

RNA干扰技术抑制耐药细胞MDR1基因表达的研究

目的： 探讨载体表达的小干扰RNA (siRNA)抑制MDR1基因的表达，并逆转卵巢癌耐药细胞多药耐药的可行性。 方法： 浓度梯度诱导法和人MDR1基因载体转染法建立阿霉素耐药细胞株OVCAR/AR和多药耐药亚株OVCAR/MDR细胞。脂质体介导将MDR1特异性siRNA的表达载体(pSN/mdr1a和pSN/mdr1b)转染耐药细胞，实时定量RT-PCR方法检测MDRl mRNA的表达，流式细胞术检测P-gp的表达，MTT法检测耐药细胞对化疗药的抵抗性。 结果： 耐药细胞OVCAR/MDR细胞MDR1 mRNA的表达高于OVCAR/AR细胞，两者均高于其亲代细胞OVCAR-3；转染pSN/mdr1a和pSN/mdr1b可显著抑制两株耐药细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达，OVCAR/MDR和OVCAR/AR细胞对阿霉素抗药性的逆转率分别为79.5%和93.9%。 结论： 载体表达的MDR1特异性siRNA可抑制卵巢癌耐药细胞亚株MDR1基因的表达，因而增加耐药细胞对化疗药物的敏感性。     

Superfect 高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达

目的：构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体，并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率，为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。 方法：RT-PCR体外扩增PDX-1 基因，双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体，对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定；利用Percoll 细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs，流式细胞仪检测细胞周期后，Superfect 介导正确重组的载体转染骨髓 MSCs，检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化；G418筛选阳性细胞后，RT-PCR 和Western blotting 检测PDX-1 基因在骨髓 MSCs 中的表达。 结果：重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功。流式细胞仪显示 85.9%的MSCs处于G₀/G₁期，提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能；荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光，Superfect 介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关；RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓 MSCs表达，随转染时间延长，表达逐渐增强，与Western blotting结果一致。结论：成功构建了含有PDX-1 基因的真核表达载体；Superfect 能高效介导外源性基因在骨髓MSCs 中表达；转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞。     

慢病毒介导的GATA6基因沉默对肝癌Huh-7细胞凋亡的影响

目的:研究GATA6基因沉默对肝癌Huh-7细胞凋亡的影响,同时探讨可能的作用机制。方法:构建靶向GATA6基因的慢病毒干扰载体,用流式细胞术确定转染效率,用RT-PCR和Western blotting法检测其对人类肝细胞癌细胞株Huh-7的干扰效果,流式细胞术检测细胞凋亡比例,Western blotting法检测各转染组Huh-7细胞NF-κB及Bcl-2蛋白表达。结果:靶向GATA6基因的慢病毒干扰载体感染肝癌Huh-7细胞后,转染效率为57.4%。GATA6在mRNA和蛋白水平的表达明显下降。GATA6沉默的肝癌Huh-7细胞凋亡比例增加(P0.05),NF-κB和Bcl-2蛋白水平表达降低。结论:利用慢病毒载体干扰技术沉默GATA6基因的表达可以明显促进Huh-7细胞凋亡,其机制可能通过NF-κB信号通路调节凋亡相关蛋白的表达,进而影响细胞的凋亡。靶向GATA6的RNA干扰技术在肝癌的基因治疗中具有一定的研究价值。     

小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药

目的研究小分子干扰RNA（siRNA）逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901／VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA（mdr1si2631和mdr1si3071）,转染SGC7901／VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901／VCR细胞48h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79．59％及59．98％。结论siRNA可逆转SGC7901／VCR细胞mdr1介导的多药耐药。     

AIF靶向短发夹RNA干扰重组载体对神经母细胞瘤细胞SHSY5Y的沉默作用

目的探讨AIF基因短发夹RNA(shRNA)表达质粒对神经母细胞瘤细胞(SHSY5YAIF)基因的干扰作用。方法根据siRNA设计原则,构建靶向AIF基因的短发夹RNA干扰质粒(pGPU6/GFP/AIF),使用脂质体法转染人神经母细胞瘤细胞,通过RT-PCR和Wester blot印迹检测神经母细胞瘤细胞AIF基因mRNA和蛋白表达水平。结果 pGPU6/GFP/AIF重组质粒经限制性内切酶酶切及测序证明基因插入正确。质粒成功转染SHSY5Y细胞后,该细胞的AIFmRNA和蛋白表达明显下降(P0.05)。结论成功构建靶向AIF基因的shRNA表达载体转染神经母细胞瘤细胞,有效抑制AIFmRNA和蛋白表达,为AIF基因靶向治疗提供前期的实验依据。     

人Arresten基因的真核表达及其对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的: 真核表达人Arresten蛋白，并研究其对体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的影响。方法: 用脂质体介导，将含有人Arresten基因的重组质粒pSecTag2-AT转染COS-7细胞；应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染细胞目的基因mRNA表达；收集转染48h后上清液，浓缩后Western blotting分析检测目的蛋白的表达。用转染细胞上清液处理平滑肌细胞后,CCK-8法检测细胞增殖；Transwell小室法检测细胞迁移。结果:RT-PCR结果显示转染Arresten基因的COS-7细胞基因组中存在有目的基因特异性片段（449 bp），表明基因转染成功；Western blotting结果表明转染细胞上清液中有目的蛋白表达。细胞体外增殖分析显示Arresten蛋白可显著抑制血管平滑肌细胞的增殖作用(F=40.154,P<0.01)；Transwell小室法检测显示经对照细胞，载体DNA转染及重组质粒转染的COS-7细胞培养上清液处理的平滑肌细胞迁移数为(28.70±3.97)个、(26.10±4.53)个、(14.00±3.33)个（F=38.915,P<0.01）。结论: 真核表达的人Arresten蛋白能有效抑制体外培养的血管平滑肌细胞的增殖和迁移。     

siRNA特异性抑制卵巢癌细胞葡萄糖调节蛋白78表达及其意义的研究

目的研究利用小分子干扰技术（RNAi）,构建Grp78靶向RNA干扰质粒载体,观察其对人类卵巢癌细胞SKOV3Grp78基因表达的抑制作用。初步探讨RNA干扰技术抑制Grp78的表达作为卵巢癌基因治疗的可行性。方法从GeneBank中选取人类卵巢癌细胞Grp78基因序列,采用siRNA Target Designer-Version 1.51设计软件设计Grp78基因发卡寡核苷酸,序列符合siRNA表达载体psiSTRIKETMU6的要求并与psiSTRIKETM质粒载体连接,采用脂质体转染法将含有特异性小分子干扰Grp78 mRNA的重组载体psiSTRIKETM/Grp78导入卵巢癌细胞系SKOV3中,分别在转染前、转染后24h、48h和72h通过RT-PCR和Western blot检测Grp78 mRNA及蛋白水平的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞经梯度浓度紫杉醇处理后的细胞存活率。结果成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp78 RNA干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp78。将上述质粒转染到卵巢癌细胞后,观察到psiSTRIKETM/Grp78能够有效的抑制Grp78 mRNA及蛋白表达。转染psiSTRIKETM/Grp78基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制,出现凋亡征象,且对化疗药物的敏感性增加。结论构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78 mRNA及蛋白的表达,增加卵巢癌细胞的化疗敏感性。RNAi技术抑制Grp78表达为卵巢癌的基因治疗开辟了新的思路。     

microRNA-25在脑缺血/再灌注损伤诱导的细胞凋亡过程中的作用

目的 在体外培养的SH-SY5Y细胞和IMR-32细胞中,观察microRNA-25（miR-25）对缺血/再灌注（I/R）损伤诱导的细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 在体外培养的人SH-SY5Y细胞和IMR-32细胞中,用氧葡萄糖剥夺/再恢复（OGDR）模拟脑缺血/再灌注损伤。合成miR-25过表达片段,并构建慢病毒载体质粒,用脂质体将载体质粒转导入细胞中。MTT法检测细胞活力、TUNEL法检测凋亡、RT-PCR、Real-time PCR和Western blotting分别检测目的基因mRNA和蛋白的表达情况。 结果 与正常培养组相比,OGDR组中细胞内miR-25表达下调,细胞活力明显下降,凋亡明显增多,同时Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调（n=3,P<0.05）;而与OGDR组相比,过表达miR-25组内细胞活力明显升高,凋亡明显减少,同时Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达下降Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高（n=3,P<0.05）。结论 I/R损伤后miR-25表达上调可能通过Bax/Bcl-2-Caspase-3途径进而抑制I/R损伤诱导的凋亡,为I/R损伤的临床治疗提供潜在的治疗靶点。     

XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖

目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。     

RNA干扰介导的端锚聚合酶1表达下调诱导人神经母细胞瘤细胞的凋亡

目的探讨RNA干扰(RNAi)介导的端锚聚合酶1(TNKS1)的表达下调对人神经母细胞瘤(NB)细胞SH-SY5Y体外增殖能力和凋亡的影响及机制,为开发治疗NB的新靶点提供一定的实验基础。方法根据TNKS1基因序列,设计合成3个TNKS1基因的特异性短发夹环(shRNA)干扰片段,利用慢病毒作为载体,构建目的基因的RNAi序列。慢病毒感染SH-SY5Y细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测TNKS1基因的表达,筛选出最佳干扰序列进行后续实验。然后进行克隆形成实验,检测RNAi-TNKS1后细胞增殖能力的改变。并进一步用Western blotting法检测抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Caspase-3、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的关键蛋白β-catenin及其下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc的表达,最后用透射电镜观察凋亡形态的改变,探讨RNAi-TNKS1对细胞凋亡的影响及其作用机制。结果慢病毒载体构建成功,病毒滴度为5×1011TU/L。Real-time PCR检测结果显示,#3 shRNA为最佳的有效靶点。克隆形成实验的结果显示,RNAi-TNKS1后SH-SY5Y细胞的克隆形成率较对照组明显下降。Western blotting结果显示,RNAi-TNKS1可显著抑制Bcl-2蛋白的表达,促进Caspase-3蛋白的表达。此外,Wnt/β-catenin通路的关键蛋白β-catenin及其下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc的表达也降低。透射电镜结果显示,RNAi-TNKS1后细胞呈现明显的凋亡结构和形态。结论 RNAi介导的TNKS1的表达下调可降低SH-SY5Y细胞的体外增殖能力,诱导其凋亡,可能部分是通过抑制Wnt/β-catenin通路发挥作用。     

蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y细胞的保护作用

目的:研究蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y细胞的作用,以探讨其可能的作用机制。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,并转染APP595/596基因,体外构建研究Aβ致病作用的细胞模型。采用CCK-8法检测细胞存活率;检测LDH评价细胞的损伤程度;流式细胞术检测细胞凋亡;用RT-PCR和Western blot法检测β-分泌酶(又称β位点APP裂解酶1,β-site APP cleaving enzyme 1,BACE 1)的mRNA及蛋白的表达;采用免疫荧光细胞化学和Western blot法检测Aβ的表达。结果:蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y神经细胞有保护作用,可增加细胞的存活率,降低LDH的释放,抑制细胞的凋亡,减少BACE1的mRNA与蛋白的表达,抑制Aβ的生成。结论:蛇床子素可保护转染APP595/596基因的SH-SY5Y神经细胞,其保护机制可能与减少BACE l的mRNA与蛋白表达有关。     

miR-449a过表达抑制人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖并促进其凋亡

目的探讨miR-449a对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y的增殖和凋亡的影响。方法用Lipofectamine TM2000将miR-449a模似物或miR-449a对照转染至SH-SY5Y细胞,分为空白、miR-449a模似物和miR-449a对照SHSY5Y细胞组;实时荧光定量PCR(q-PCR)检测各组细胞中miR-449a表达;CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,Western blot检测c-Myc蛋白和Bax/Bcl-2蛋白表达。结果 miR-449a模似物瞬时转染SH-SY5Y细胞后,miR-449a的表达水平明显高于正常对照组(P0.05);SH-SY5Y细胞增殖能力受到明显抑制(P0.05);凋亡率明显增加(P0.05);c-Myc蛋白表达显著降低(P0.05);细胞促凋亡蛋白Bax表达升高;抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P0.05)。结论 miR-449a可通过c-Myc影响SH-SY5Y细胞的增殖和周期,通过调节Bax/Bcl-2影响其凋亡。     

依达拉奉通过microRNA-25抑制高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

目的:探讨依达拉奉通过微小RNA-25(microRNA-25,miR-25)对高糖诱导的人神经母细胞瘤SHSY5Y细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法:将SH-SY5Y细胞用含高浓度葡萄糖的DMEM培养基和依达拉奉的联合培养液共同培养24 h。MTT比色法测定SH-SY5Y细胞存活率;DCFH-DA荧光探针法检测SH-SY5Y细胞中活性氧簇(ROS)的水平;采用流式细胞术检测SH-SY5Y细胞的凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平;实时定量PCR检测细胞中miR-25的表达水平。为进一步阐明依达拉奉抑制高糖诱导的神经细胞凋亡的作用靶点,我们将miR-25抑制剂应用于细胞,之后采用caspase-3凋亡试剂盒检测细胞的凋亡率。结果:与对照组相比,高糖诱导后细胞存活率明显降低,细胞中的ROS水平和细胞凋亡率明显升高,Bax的表达明显增加,Bcl-2的表达明显降低,miR-25的表达水平也明显降低。给予依达拉奉治疗之后,细胞存活率明显升高,ROS含量和细胞凋亡率明显降低,Bax的蛋白水平明显降低,Bcl-2蛋白水平明显升高,miR-25的表达水平亦明显升高。进一步给予miR-25抑制剂后,caspase-3的水平明显升高,此时同时给予依达拉奉后并不能抑制高糖引起的神经细胞的凋亡。结论:依达拉奉对高糖诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有抑制作用,其作用靶点可能是miR-25。     

SFRP5基因甲基化通过激活Wnt/β-catenin通路调节白血病细胞MDR1/P-gp的表达

 目的:研究分泌型卷曲相关蛋白5（SFRP5）基因甲基化对耐药白血病细胞多药耐药蛋白1/P-糖蛋白（MDR1/P-gp）表达的调节及其可能的信号通路。方法:采用甲基化特异性PCR（MSP）检测白血病患者及白血病细胞系中SFRP5基因启动子区甲基化状态。采用Western blotting检测非磷酸化β-catenin（NP-β-catenin）在SFRP5基因甲基化白血病患者及细胞系中表达。使用去甲基化试剂5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶（DAC）恢复SFRP5表达,采用RT-PCR和real-time PCR检测处理前后MDR1 mRNA表达,采用Western blotting检测P-gp表达。结果:5/12例白血病患者标本及4种白血病细胞系存在SFRP5基因完全甲基化。在5例患者标本中,有3例（L2、L7和L8）NP-β-catenin水平高于其它标本,在4种白血病细胞系中,KG1a中NP-β-catenin水平高于另外3个细胞系。存在NP-β-catenin高水平表达的3例患者（L2、L7和L8）中检出MDR1 mRNA及P-gp表达。在4种细胞系中,KG1a存在MDR1 mRNA及P-gp表达。使用去甲基化试剂DAC处理L2、L7、L8患者标本和KG1a细胞,恢复SFRP5表达,L2、L7、L8和KG1a中MDR1 mRNA水平均显著下降（P<0.01）,P-gp表达水平亦被下调。结论: SFRP5基因甲基化可导致Wnt/β-catenin信号通路被激活,活化的β-catenin激活下游靶基因MDR1转录,编码的药物外排泵P-gp表达增加,促进白血病多药耐药的形成。     

BCL-3基因沉默对BCL-3高表达的人大肠癌RKO细胞增殖和药物敏感性的影响

 目的：构建针对人BCL-3基因的RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒载体,观察其对大肠癌细胞株中BCL-3基因的沉默效应,以及基因沉默对细胞生物学行为及药物敏感性的影响。方法：运用RT-PCR及Western blotting方法检测5株大肠癌细胞株中BCL-3的表达状况;构建人BCL-3基因的RNAi慢病毒载体,并转染BCL-3高表达的大肠癌细胞株,运用Western  blotting方法鉴定其对BCL-3基因的沉默效果;BCL-3基因沉默后运用细胞增殖实验及软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,运用MTT方法检测大肠癌细胞株对化疗药物敏感性的变化。结果：BCL-3高表达于大肠癌细胞株RKO中;成功构建了BCL-3　RNAi慢病毒载体,Western blotting实验显示其可抑制RKO细胞中BCL-3蛋白的表达;抑制BCL-3的表达后,增殖实验表明RKO细胞增殖能力下降,软琼脂克隆形成实验表明RKO细胞的克隆形成率下降;MTT实验表明BCL-3表达抑制后奥沙利铂对RKO细胞的半数抑制浓度（median inhibitory concentration, IC50）显著降低。结论: BCL-3表达抑制后,BCL-3高表达的大肠癌细胞株RKO的增殖能力下降,并且其对奥沙利铂的敏感性增强。