苍术药材的质量标准研究

目的:完善苍术药材的质量标准。方法:对10批茅苍术与10批北苍术药材,采用显微鉴别法、TLC法进行鉴别;并对其水分、杂质、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、重金属进行测定;采用HPLC法建立苍术药材的高效液相特征图谱及测定苍术素含量。结果:苍术药材粉末的显微鉴别与薄层鉴别特征显著。在高效液相特征图谱中,20批苍术检出4个主要共有特征峰,其相似度为0.93~0.98。苍术药材中苍术素含量测定在0.5~60 mg·L-1范围内具有良好的线性关系(R2=0.999 1,n=13),平均加样回收率茅苍术为97.84%(1.62%),北苍术为98.63%(RSD为0.81%)。结论:本研究优化后的苍术药材质控方法符合中药质量控制的整体性、综合性及可适用性的要求,可用于苍术药材质量的综合评价。     

白术和苍术种子的显微鉴别研究

目的为白术和苍术种子(即瘦果)的鉴别及质量评价提供依据。方法采用体视显微镜和石蜡切片法观察种子的外观形态和显微结构。结果从外观性状上看,两者在种子形态、颜色、大小、冠毛长短上具有差异。两者在果皮内的维管束、导管、胚细胞形态等显微结构上也具有一定差异。结论种子大小及冠毛长度上的差异可作为区分白术及苍术种子的性状鉴别特征,白术内果皮的维管束和苍术果皮内侧的导管可作为两者的显微鉴别特征。     

组培和野生茅苍术药材挥发油成分的比较

目的:对组培茅苍术和野生茅苍术的根茎中所含挥发油的化学成分进行比较,从而初步评价通过组织培养技术所得茅苍术的品质.方法:采用水蒸气提取法提取药材挥发油,利用GC-MS联用技术进行分析.结果:从组培茅苍术和野生茅苍术的根茎中分别鉴定出30个相同的化合物,其中组培茅苍术的根茎中所含的β-桉叶醇、苍术醇、苍术素的相对含量高于野生品.结论:两者的挥发油所含成分没有显著性差异.     

栽培与野生茅苍术质量比较研究

本文通过对一年生栽培及野生茅苍术的原植物形态、药材性状、组织特征、粉末特征、化学成分等方面的比较研究,结果表明栽培茅苍术与野生品的质量基本一致,为推广应用人工栽培茅苍术提供依据.     

茅苍术道地药材的挥发油组成特征分析

目的 :在个体和总体两个水平上研究南苍术挥发油成分所蕴涵的多样性和特征 ,进而揭示茅苍术道地性的化学本质。方法 :分单株采集 7个居群的 47株南苍术根茎 ,用GC-MS分离鉴定挥发油中的 6个主要成分 ,使用SPSS分析软件进行主成分分析和聚类分析。结果 :聚类分析显示茅苍术挥发油主要组分的含量明显不同于非道地南苍术。其他分析表明 ,与非道地南苍术挥发油相比 ,茅苍术总挥发油含量显著低 (P<0.01) ,其归一化百分含量大于 1%的组分数目显著高 (P<0.01) ,苍术酮加苍术素的含量极其显著高 ,而茅术醇加 β-桉叶醇的含量极其显著低 (P<0.001)。主成分分析表明苍术酮在体现茅苍术道地性特征时具有非常特殊的作用。结论 :茅苍术道地性在挥发油中的表现主要是苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇及苍术素呈现出的一种特定配比关系 ,即 (0.70～2.00)∶(0.04～0.35 )∶(0.09～0.40)∶1。     

组培茅苍术挥发油的气相色谱质谱联用分析

目的:分析组织培养再生植株栽培后所得茅苍术的根茎中所含挥发油的化学成分,对组织培养技术生产的茅苍术药材进行品质评价.方法:采用水蒸气蒸馏提取法提取药材挥发油,利用GC-MS联用技术进行分析.结果:从组织培养再生植株栽培茅苍术的根茎中鉴定出22个化合物.结论:组织培养技术所生产的茅苍术主要含有β-桉叶醇、苍术醇、苍术素等成分,与野生茅苍术所合成分没有显著差异.     

流式细胞法测定茅苍术基因组大小

目的:建立流式细胞术测定茅苍术基因大小的方法,并进一步比较5种类型茅苍术的基因组大小变异情况。方法:以茅苍术幼叶为材料,采用改良Otto两步法提取细胞核,用已知基因组大小的玉米和蚕豆为内标,将处理好的样品上流式细胞仪测定。结果:通过改进实验方法,以蚕豆为内标,建立了流式细胞术测定茅苍术基因组大小的方法。5种类型茅苍术基因组大小的测定结果表明,尖叶类型基因组最大,扁茎类型最小,裂叶类型的基因组大小稍有下降。结论:本研究为茅苍术基因组大小研究提供了方法和数据参考,也将为茅苍术群体变异、种质资源评价和新品种选育等研究提供基础。     

HPLC测定道地产地和主产地茅苍术中β-桉叶醇及其他成分的含量

目的:通过测定道地产地和主产地茅苍术中有效成分及其他成分的含量,综合评价茅苍术的药材品质。方法:采用HPLC对不同产地的茅苍术中的β-桉叶醇、苍术素、苍术素醇和苍术内酯Ⅱ进行含量测定。结果:不同产地的茅苍术中成分的含量差异显著,各地的茅苍术药材质量存在较大差异。β-桉叶醇和苍术素醇含量最高的是湖北英山的野生品;苍术素和苍术内酯Ⅱ含量最高的产地是江苏茅山。结论:综合考虑茅苍术中苍术素、β-桉叶醇、苍术素醇和苍术内酯Ⅱ主产地的茅苍术的质量要比道地产地茅苍术的质量优,该结果为茅苍术的产业化发展提供依据。     

茅苍术悬浮细胞系建立及内生真菌诱导子对其挥发油积累的影响

目的 建立茅苍术悬浮细胞系,研究2种内生真菌诱导子对茅苍术悬浮细胞产挥发油的影响.方法 用内生真菌诱导子对茅苍术悬浮细胞进行诱导处理后超声提取茅苍术细胞中的挥发油,利用气相色谱法测定挥发油中苍术酮、苍术醇、β-桉叶醇和苍术素的量.结果 获得的茅苍术悬浮细胞生长较快,于第21天生物量达到最大,为6.95 g/L.未经诱导处理的茅苍术悬浮细胞中仅检出β-桉叶醇,其在培养21 d的细胞中的量达到最大,为17.469μg/g.添加2种内生真菌(分别属于小克银汉霉属和孔球孢霉属,编号为AL4和AL12)的粗诱导子对茅苍术悬浮细胞生物量及挥发油积累均有影响,其中AL4粗诱导子综合效果更好.添加AL4粗诱导子到14 d的茅苍术悬浮细胞培养基中,诱导子质量浓度为每升培养基含糖20 mg,诱导处理7 d后收集细胞,发现其干质量比同期对照提高3.31%,且检出细胞中苍术酮、苍术醇、β-桉叶醇和苍术素的干质量分别达到14.715、28.395、38.794、8.310μg/g.其中β-桉叶醇的量是对照的2.22倍.结论 添加内生真菌诱导子对茅苍术悬浮细胞的生长及挥发油积累均有促进作用.     

茅苍术中苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素的同时含量测定及其聚类分析

目的:建立气相色谱法同时测定茅苍术药材中苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素的含量,根据含量水平对茅苍术药材进行聚类分析。方法:HP-1弹性石英毛细管色谱柱(0.25 mm×30 m,0.25μm);氢火焰离子化检测器(FID);载气氮气;起始温度145℃,保持25 min,以10℃.min-1升温至250℃,保持10 min;进样方式为分流进样,分流比为40∶1;进样量为2μL;采用SPSS 13.0统计软件进行聚类分析。结果:苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素进样浓度分别在0.012~2.32(r=0.999 8),0.008~1.68(r=0.999 8),0.008~1.76(r=0.999 9),0.016~3.20 g.L-1(r=0.999 7)呈良好线性关系;平均回收率(n=3)分别为98.0%~99.0%,97.7%~99.4%,98.4%~99.2%,97.8%~99.7%;所分析的茅苍术药材大致划分为两类。结论:该方法准确、简便,具有良好的重复性和稳定性,可用于茅苍术药材中苍术酮、茅术醇、β-桉叶醇和苍术素含量的同时测定;道地产区茅苍术与其它非道地产区茅苍术4种活性成分含量的差异较大。     

几个道地产区茅苍术指纹图谱及苍术素含量测定研究

目的:结合茅苍术主要成分苍术素的含量测定与指纹图谱,比较不同产地药材化学成分的差异性,为科学评价不同产地茅苍术药材的质量提供依据.方法:采用HPLC对各产地茅苍术药材进行分析,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件比较指纹图谱的相似度,并用SPSS 19.0对13批样品进行聚类分析.采用药典方法测定苍术素含量.结果:建立了茅苍术药材指纹图谱检测方法,不同产地茅苍术药材指纹图谱有较大相似性.但苍术素的含量有较大的差异.聚类分析结果表明道地产区与主产区茅苍术药材存在一定差异,但差别不是很大.结论:所建立的HPLC指纹图谱具有良好的精密度、重复性和稳定性,结合苍术素的含量,为茅苍术质量评价的提供依据.     

茅苍术多糖的分析

目的:从茅苍术中提取粗多糖ALP,进行分离纯化,得到均一的多糖ALP2,并初步研究其组成和结构。方法:采用热水提取后残渣稀碱水提取,乙醇沉淀,三氯乙酸法脱蛋白,DEAE-52柱层析,Sephadex G-100柱层析分离纯化得白色粉末状多糖。HPLC法进行纯度鉴定,气相色谱法测定其单糖组成。结果:纯度鉴定其为均一组分;红外光谱显示有多糖的特征结构;气相色谱分析,茅苍术多糖由鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖三种单糖组成,其摩尔比为鼠李糖∶阿拉伯糖∶半乳糖=0.59∶4.42∶0.54。结论:本研究为茅苍术的进一步开发利用提供了一定的理论依据。     

茅苍术及其组培栽培品挥发油气质联用分析

目的 研究茅苍术的挥发油,为茅苍术资源的野生抚育及可持续利用提供基础和科学依据.方法 用气相色谱和质谱联用技术测定不同产地茅苍术挥发油,并进行聚类分析.结果 道地产区茅苍术与其组培栽培品聚为一类,其中主要药效成分苍术酮、苍术素、茅术醇、β-桉叶醇相对百分含量没有显著差异,苍术酮和苍术素含量明显高于非道地茅苍术.结论 研究结果体现了茅苍术药效成分道地性的特征,为茅苍术品质评价提供了依据,组培苗可作为人工补种材料.     

内生真菌诱导子对茅苍术细胞生长及苍术素积累的影响

目的:研究内生真菌诱导子对茅苍术细胞生长以及苍术素积累的影响.方法:采用细胞悬浮培养方法研究内生真菌诱导子不同浓度、不同加入时间对茅苍术细胞生长、苍术素合成以及相关酶活性的影响.结果:低浓度诱导子对细胞生长没有明显的影响,但高浓度诱导子显著抑制细胞生长,当诱导子质量浓度达到100 mg·L-1时,细胞生长抑制率达到46.7%;此外,从茅苍术内生真菌中筛选获得6株具有较强诱导作用的内生真菌,其中Rhizoctonia SP1诱导子的作用较强,20～60 mg·L-1 Rhizoctonia SP1诱导子显著促进苍术素的生物合成.在细胞培养至12 d时,添加40 mg·L-1 Rhizoctonia SP1诱导子,苍术素的含量在第21天达到最大值28.06μg·L-1,比对照提高了48.3%;且细胞多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性出现了显著提高.结论:内生真菌诱导子能有效提高茅苍术细胞悬浮培养体系中苍术素的产量.     

铜胁迫对茅苍术3种药效成分积累及其生物合成2种关键酶基因表达的影响

目的研究铜胁迫对茅苍术药效成分β-桉叶醇、苍术酮和苍术素积累及其生物合成关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、法呢基焦磷酸合酶(FPPS)基因表达的影响。方法在铜胁迫下,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定茅苍术HMGR、FPPS的表达量;采用高效液相色谱法测定茅苍术3种药效成分的含量;采用SPSS软件对两者进行相关性分析,DPS软件进行灰色关联度分析。结果当铜胁迫在100 mg/kg以内时,茅苍术根茎内FPPS表达量与苍术酮含量略有增加;但铜浓度继续增加时,HMGR、FPPS表达量与3种药效成分含量呈不同程度的下降趋势。铜胁迫下HMGR、FPPS的表达量与β-桉叶醇、苍术酮和苍术素的含量呈显著正相关(P0.05)。灰色关联度分析发现铜胁迫下茅苍术根茎中β-桉叶醇、苍术酮的含量与HMGR、FPPS的表达量关联较大,FPPS基因的表达对β-桉叶醇和苍术酮合成贡献较大,但苍术素含量与这2种关键酶基因的表达关联度较小。结论阐明了铜胁迫下茅苍术2种关键酶基因表达量与3种药效成分含量的变化规律,揭示了铜胁迫下茅苍术药效成分β-桉叶醇、苍术酮与萜类生物合成关键酶HMGR、FPPS的关系,有助于进一步深入研究铜胁迫下茅苍术药效成分合成的分子调控机制,为提高茅苍术药材的品质提供理论基础。     

基于色差原理分析茅苍术、北苍术有效成分含量与颜色的相关性

探索茅苍术、北苍术药材粉末三色空间值ΔL^*(亮度)、Δa^*(红绿)、Δb^*(黄蓝)与内在倍半萜类、聚炔类等4种有效成分含量的相关性，为苍术质量评价提供参考，并建立基于色度量化值的可区分茅苍术、北苍术的定性识别模型。采用色差仪测定23批茅苍术、北苍术的三色空间值(明暗色度值L^*、红绿色度值a^*、黄蓝色度值b^*);采用高效液相色谱法测定23批药材样品中白术内酯Ⅱ、β-桉叶醇、苍术素、苍术酮4种有效成分的含量；采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA),以三色空间值为对象，建立区分茅苍术、北苍术的定性识别模型；通过SPSS,对色度值与上述4种指标成分含量进行相关性分析。结果显示，构建的PCA和PLS-DA识别模型可以将茅苍术与北苍术分成2个区域，茅苍术、北苍术的颜色与β-桉叶醇、苍术素等成分含量具有正相关性。因此，所构建的PCA和PLS-DA模型可以成功鉴别茅苍术与北苍术，其外观色泽可快速预测苍术药材内在品质。此研究对苍术的质量评价研究，以及...     

人工种植茅苍术最佳采收期的初步研究

茅苍术Atractylodes lancea(Thunb·)DC·为药典2005年版收载的苍术原植物之一[1]。茅苍术的有效成分主要是挥发油,药效结果表明总挥发油中的β-桉叶醇为健脾的有效成分之一。曾报道[2]以南京茅苍术栽培品挥发油的含量研究茅苍术最佳采收期及最少生长年限。本研究以总挥发油及β-桉叶醇作为衡量茅苍术质量的指标,对茅苍术不同年限及同一年限不同生长期的样品进行含量测定,为湖北人工种植茅苍术最佳采收期的确定提供依据。1仪器     

基于4种序列的辽产苍术属植物DNA条形码鉴定

目的：采用4种序列对辽宁产苍术属植物进行鉴定,进而选择适合苍术属植物DNA条形码鉴定的序列。方法：使用试剂盒提取辽宁产4种苍术属植物关苍术Atractylodes japonica Koidz.ex Kitam、朝鲜苍术A.coreana （Nakai） Kitam、茅苍术A.lancea （Thunb.） DC.、北苍术A.chinensis （Bunge） Koidz.共43份样品的总DNA,进行聚合酶链式反应（PCR）扩增及产物测序;使用DNAMAN 8.0软件对测得的双向序列进行拼接;使用MEGA 6.0软件进行序列比对;使用邻接法构建系统聚类树。结果：仅内转录间隔区2（ITS2）序列将4种苍术属植物各分为一支,聚类效果较好,psbA-trnH、matK、rbcL聚类混乱,物种分离度低。结论：ITS2序列可作为苍术属植物DNA条形码鉴定的有效序列片段,苍术野生品和栽培品、叶裂与叶不裂均聚在一起,ITS2序列片段不能区分。     

RP-HPLC测定茅苍术中β-桉叶醇的含量

目的:采用RP-HPLC测定茅苍术中β-桉叶醇的含量,为茅苍术质量标准研究提供依据.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈-水(68:32);流速1.0 mL·min-1;检测波长200 nm;柱温为25 ℃.结果:测得10批茅苍术药材中β-桉叶醇含量为0.833～4.466 mg·g-1,β-桉叶醇为0.048～1.200 μg,r=0.999 9,平均回收率99.3%,RSD 1.4%(n=9).结论:建立了高效液相色谱法测定茅苍术中β-桉叶醇含量的方法,该方法准确,可靠,可用于茅苍术药材的测定.     

基于ITS2序列的中药材苍术种苗DNA条形码鉴定

目的:建立基于DNA条形码技术的中药材苍术种苗鉴定方法。方法:收集中药材苍术及其易混品原植物样品28份,构建苍术种苗鉴定参考核糖体内部转录间隔区2(ITS2)条形码数据库。从河北、山东、山西、内蒙古、辽宁及湖北等苍术主产地收集苍术种苗52份。通过提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增,双向测序获得其ITS2条形码序列。应用PUAP 4.0软件计算种内、种间遗传距离,利用MEGA 7.0软件构建邻接树,对中药材苍术种苗进行DNA条形码鉴定。结果:中药材苍术及其易混品原植物ITS2条形码序列具有稳定的序列差异,邻接树呈现单系性,可以明显区分苍术及其易混品;基于标准参考数据库,42份苍术种苗为朝鲜苍术(80.8%),7份苍术种苗为苍术(13.5%),3份苍术种苗为白术(5.7%)。结论:基于ITS2序列可以准确区分中药材苍术及其混伪品种苗。苍术种苗基原物种鉴定结果以朝鲜苍术为主,提示苍术临床用药存在潜在安全风险。