哮喘患儿诱导痰辅助性T细胞亚群及相关细胞因子变化研究

探讨支气管哮喘患儿诱导痰中辅助性T细胞（Th）亚群及相关细胞因子的变化及意义。方法　观察2009年9月至2010年1月深圳儿童医院收集的20例哮喘患儿及20例同年龄对照组儿童,采用流式细胞术检测哮喘患儿外周血Th1、Th2、Th17、CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）数量;同时收集哮喘患儿和对照组儿童的诱导痰,进行炎性细胞计数与分类,荧光定量聚合酶链反应（Real Time PCR）测定外周血单个核细胞及诱导痰T-bet、IFN-γ、GATA3、IL-4、Foxp3、TGF-β、RORrt、IL-17A、IL-8、TNF-α等mRNA表达水平。结果　（1）急性期哮喘患儿外周血Th1、Treg细胞比例降低（P < 0.05）、Th2细胞、Th17细胞比例与正常对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。（2）急性发作期哮喘患儿外周血单个核细胞T-bet、Foxp3、IFN-γ、TGF-β表达降低（P < 0.05）,GATA3、RORγt、IL-4、IL-17A 与正常对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。（3）急性发作期哮喘患儿诱导痰中性粒细胞、嗜酸性粒细胞数量增加（P < 0.05）。（4）急性发作期哮喘患儿诱导痰中RORγt、IL-17A、GATA3、IL-4、IL-5、IL-8、TNF-α表达增高（P < 0.05）,T-bet、IFN-γ、Foxp3、TGF-β表达与正常对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。结论　哮喘患儿诱导痰Th2与Th17转录因子和细胞因子增多,可能是导致儿童哮喘气道炎症反应的重要原因。     

诱导痰炎性细胞计数和儿童哮喘严重程度相关性的临床研究

目的 探讨哮喘患儿诱导痰中嗜酸性粒细胞、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）与哮喘严重程度的关系。方法 选择2005年6月～2006年6月湖州市中心医院门诊哮喘急性发作期的患儿77例，检测其肺功能并分别采用瑞氏染色法及荧光免疫法检测高渗盐水诱导痰中嗜酸性粒细胞数量和ECP浓度，并选择同期62名健康儿童作为对照。结果 哮喘急性发作期患儿诱导痰中嗜酸性粒细胞数量和ECP质量浓度显著高于健康组（P〈0．01），哮喘急性发作期患儿诱导痰中嗜酸性粒细胞数量与患儿第1秒用力呼气容积／用力肺活量比值（FEV1／FVC）呈显著负相关（r=-0.64，P〈0．01）；ECP质量浓度与患儿FEV1／FVC呈显著负相关（r=-0.58．P〈0．01）。哮喘患儿诱导痰中嗜酸性粒细胞数量和ECP质量浓度随病情加重逐渐升高，且轻度、中度和重度患儿之间比较差异有显著性（P〈0.05）。结论 诱导痰中嗜酸性粒细胞和ECP质量浓度可反映哮喘的严重程度。     

诱导痰分析对预测毛细支气管炎转归的意义

目的观察首次喘息的毛细支气管炎(毛支)患儿诱导痰组分的变化,探讨诱导痰液炎性细胞及细胞因子在预测其转归的价值。方法用4.5%高渗盐水超声雾化法留取70例毛细支气管炎婴儿的诱导痰液,用荧光酶标法、ELISA方法检测诱导痰液中的嗜伊红阳离子蛋白质(ECP)、白介素(IL)-4、干扰素(IFN)-γ水平,台盼蓝染色和瑞氏染色计数嗜酸性粒细胞,随访观察3年。结果毛支发作3年后有24.3%(17/70)患儿发展为哮喘,其初发阶段诱导痰液中的嗜酸性粒细胞(EOS)、ECP、IL-4明显高于未发展为哮喘的单纯毛支患儿(P<0.01),而IFNγ-则明显低于单纯毛支患儿(P<0.01),差异具有显著性。结论对于诱导痰中存在ECP、IL-4、EOS显著增高的毛支患儿有发展为哮喘的可能,在其初发阶段应进行哮喘的早期干预治疗。     

RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及布地奈德对其抑制作用

目的：观察布地奈德（BUD）对支气管哮喘小鼠肺组织中Th17细胞的特异性转录因子RORγt表达的影响,探讨BUD治疗哮喘的机制。方法：采用卵清蛋白（OVA）致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;Balb/c雌性小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、BUD组,每组各10只。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）、血清中白细胞介素-17（IL-17）水平;对BALF中炎性细胞进行计数;苏木精-伊红（HE）染色评价各组小鼠气道炎症程度;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肺组织中RORγt mRNA表达水平。结果：哮喘组小鼠BALF、血清中IL-17水平较对照组明显升高（P<0.01）,BUD治疗后IL-17水平明显降低（P<0.01）。肺组织中RORγt mRNA在哮喘组较对照组明显升高（P<0.01）,BUP治疗后RORγt mRNA水平明显降低（P<0.01）。哮喘组细胞总数、中性粒细胞数和嗜酸性粒细胞数均较对照组明显增多（P<0.01）,BUD组细胞总数、中性粒细胞数和嗜酸性粒细胞数与哮喘组比较明显减少（P<0.01）,与对照组比较差异无统计学意义。HE染色表明BUD治疗后气管炎性反应明显缓解。结论：哮喘小鼠RORγt表达水平和IL-17水平增高,导致哮喘小鼠的全身和局部炎症反应增强,可能是导致哮喘发生的机制之一。BUD可通过抑制RORγt和IL-17的表达水平,发挥其免疫抑制功能而起到治疗哮喘的作用。     

穿心莲内酯对哮喘小鼠嗜酸性粒细胞表达的影响及其作用机制

目的：穿心莲内酯是中药穿心莲的主要有效成分,在体内外均具有较强的抗炎作用。该研究观察穿心莲内酯对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞、eotaxin及IL-5表达的影响。方法：32只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、布地奈德组、穿心莲内酯组,每组8只。以卵清蛋白（OVA）致敏激发建立哮喘小鼠模型。ELISA法检测BALF及外周血中eotaxin、IL-5的水平,实时荧光定量PCR法检测肺组织eotaxin、IL-5 mRNA的表达。结果：穿心莲内酯明显抑制哮喘小鼠BALF中嗜酸性粒细胞（P0.05）。结论：穿心莲内酯通过降低哮喘小鼠eotaxin、IL-5的表达,抑制哮喘气道嗜酸性粒细胞浸润。     

急性发作期哮喘患儿诱导痰中白细胞介素-5水平变化及其临床意义

目的：观察急性发作期哮喘患儿诱导痰中白细胞介素-5(IL -5)水平变化及其与哮喘发作期病情分度的关系，探讨其在哮喘发病机制中的作用和在临床诊治中的意义。方法：按随机分层设计，65例急性发作期哮喘患儿被分为 轻、中、重度发作组，34例健康儿童作为对照组。采用超声雾化高渗盐水诱导痰液，以酶联 免疫法(ELISA)测定诱导痰中IL5水平，同时进行诱导痰中嗜酸细胞(EOS)计数，测定用力 呼气比值(FEV-1)。结果：哮喘急性发作期患儿诱导痰中EOS计数、IL-5 水平均高于健康儿童组，FEV-1则低于健康儿童组，差异均具有显著性(P 0.05)；而IL-5水平随发作程度的加重而明显升高，轻、中、重度发作各组间两两比较差异均有显著性(P<0.05)；重度哮喘患儿FEV-1低于轻、中度哮喘(P<0.05) 。痰液中IL-5水平与EOS计数之间呈显著正相关(r=0.482，P<0.05)，与F EV-1值之间呈显著负相关(r=-0.647，P<0.01)。结论：诱导痰中IL-5水平可能较EOS计数更能准确反映哮喘患儿气道炎症和哮喘发作时的病情程度，可以作为临床评价哮喘病情和药物疗效的准确灵敏的指标。     

不同严重程度支气管哮喘儿童诱导痰IL-17含量及炎症细胞百分比变化

目的 探讨不同严重程度支气管哮喘儿童诱导痰中白细胞介素(IL)-17的含量及中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的百分比变化,揭示IL-17参与哮喘发病的可能机制.方法 将40例急性发作期哮喘儿童依据哮喘严重度分为中重度组16例,轻度组24例,并选择健康体检儿童20例为正常对照组,检测所有儿童诱导痰中IL-17的含量和沉渣涂片中中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的百分比.结果 中重度组、轻度组和正常对照组的诱导痰中IL-17的含量分别是(1.096±0.664) ng/L、(0.474±0.240) ng/L、(0.227±0.360) ng/L,中性粒细胞百分比分别是(55.359±12.486)％、(44.476±17.708)％、( 36.493±12.470)％,嗜酸性粒细胞百分比分别是(1.252±2.025)％、(4.107±3.234)％、(1.409±3.480)％,三组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).中重度组患儿中性粒细胞百分比与IL-17含量呈正相关(r =0.740,P=0.049),轻度组患儿中性粒细胞百分比与IL-17含量呈负相关(r=-0.764,P =0.000).结论 不同严重程度哮喘儿童IL-17含量、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞百分比不同,IL-17参与了儿童哮喘的部分发病机制.     

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目的研究肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清及诱导痰中白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)的表达,探讨其在MPP感染发病机制中的作用及临床意义。方法收集华中科技大学同济医学院附属孝感医院儿科2009年6月至2010年12月住院确诊的56例MPP患儿,采用酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测56例患儿血清及42例患儿诱导痰中IL-2和IL-6的质量浓度,用t检验比较患儿血清及诱导痰中IL-2、IL-6在不同病期和轻重症中的表达水平。以同期40名体检的儿童作为正常对照组。结果 MPP患儿血清及诱导痰中IL-2在急性期明显低于恢复期和正常对照组(P<0.05),IL-6在急性期明显高于恢复期和正常对照组(P<0.05);MPP患儿血清及诱导痰中IL-2在急性期和恢复期中轻症组均高于重症组(P<0.05),IL-6在急性期和恢复期中轻症组均低于重症组(P<0.05);血清和诱导痰中两种标本检测结果一致,且诱导痰中IL-2和IL-6总体上高于血清组,两者呈正相关。结论 IL-2和IL-6在MP感染发病机制中起重要作用。MP感染初期可通过检测血及诱导痰中的IL-2和IL-6,为病情严重程度及预后作出深入评估和判...     

支气管哮喘患儿诱导痰液中白细胞介素-4及γ-干扰素水平的研究

目的研究支气管哮喘患儿诱导痰液中白细胞介素（IL）-4及γ-干扰素（IFN-γ）水平变化，探讨其在哮喘发病机制中的作用。方法2004年2月～2006年6月儿科住院哮喘患儿36例，用ELISA法测定诱导痰中急性期及缓解期IL-4及IFN-γ水平。结果哮喘患儿诱导痰IL-4水平急性期明显高于缓解期和正常对照组（P〈0．01）；IFN-γ水平急性期低于缓解期及对照组（P〈0．05）；IL-4／IFN-γ比值急性期高于缓解期及对照组（P〈0．05）。急性期患儿诱导痰IL-4水平重症组明显高于轻症组（P〈0．01），IFN-γ水平重症组明显低于轻症组（P〈0．05），IL-4／IFN-γ比值重症组高于轻症组（P〈0．05）。结论哮喘患儿存在Thl／Th2功能紊乱，IL-4及IFN-γ参与哮喘患儿的免疫状态改变，在哮喘发病机制中发挥一定作用。     

哮喘发作患儿诱导痰液中炎性细胞及IL-6、IL-8、TNF-α水平分析

目的 了解儿童哮喘急性发作时气道炎性特征及临床意义。方法 对34例哮喘急性发作期、24例哮喘缓解期患儿和15例正常儿童的诱导痰液进行炎性细胞计数和分类，并测定其中白细胞介素6、8(IL-6、8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平，分析炎性细胞与上述细胞因子及最大呼气流速(PEF)之间的关系。结果 急性组的总细胞数、嗜酸性细胞、中性粒细胞单核细胞比例及IL-8、IL-6、TNF-α水平均高于正常对照组。缓解组除嗜酸细胞及淋巴细胞比例明显高于正常对照组外，其余上述炎性细胞比例及细胞因子水平均降至正常。嗜酸性细胞比例与PEF呈显著负相关，IL-8水平与中性粒细胞呈显著正相关，急性组IL-6水平与嗜酸性细胞呈显著正相关。结论 除嗜酸细胞和单核细胞外，中性粒细胞也参与了哮喘发作患儿的气道炎症过程，IL-6、IL-8、TNF-α可能是参与这种过程的重要细胞因子。诱导痰液中上述炎性细胞及细胞因子的变化，可用于判断病情及指导治疗。     

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目的探讨诱导痰细胞和白细胞介素8(IL8)、白细胞介素9(IL9)、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)在儿童哮喘发病中的作用及相互关系。方法以2004年9月至2005年3月重庆医科大学附属儿童医院确诊哮喘的44例患儿为研究对象,其中急性发作期25例、缓解期19例,同时选10例因骨骼畸形入院的患儿作对照组,进行诱导痰的细胞分类检查和ELISA方法检测IL8、IL9、eotaxin。结果哮喘患儿诱导痰细胞总数明显升高,急性发作期诱导痰中性粒细胞数明显高于缓解期和对照组,缓解期淋巴细胞数明显高于急性发作期和对照组,嗜酸性粒细胞各组间比较差异无显著性意义;哮喘患儿诱导痰IL8、IL9质量浓度与对照组比较有明显升高,且IL8、IL9质量浓度与中性粒细胞百分数呈正相关,eotaxin在各组间比较差异无显著性意义。结论与成人过敏性哮喘不同,中性粒细胞在儿童哮喘的发病中扮演重要角色,IL8趋化中性粒细胞聚集于气道,中性粒细胞在IL9的作用下产生和释放IL8,三者相互影响,共同参与哮喘的发病。     

哮喘患儿支气管诱导痰液中炎细胞变化的临床研究

目的研究支气管哮喘患儿急性发作期及其缓解期支气管诱导痰液中炎细胞变化及临床意义。方法选择2002-02—2002-12在中国医大二院儿童哮喘门诊就诊的哮喘患儿,其中哮喘急性发作期34例;哮喘缓解期30例;健康对照组22例。比较哮喘不同病程之间以及不同病程与正常儿童之间支气管诱导痰液细胞成分的差异。结果哮喘患儿急性发作期支气管诱导痰液中,中性粒细胞占细胞总数的百分比明显高于缓解期及正常对照组(均P<0.01)。哮喘急性发作期、缓解期诱导痰液中嗜酸细胞占总数的百分比均明显高于正常对照组,差异显著(P<0.01)。结论支气管哮喘是一种慢性气道炎症性疾病,在不同发病时期气道内的炎细胞变化不同。     

γ干扰素和神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化及TrkA的表达

目的　在人神经母细胞瘤 (neuroblastoma ,NB)SMS KCNR细胞系中分别应用γ干扰素(IFN γ)、神经生长因子 (NGF)及联合应用IFN γ和NGF作为诱导剂诱导NB细胞分化 ,观察细胞形态学的变化、细胞增殖情况及TrkAmRNA的表达。方法　常规方法培养人SMS KCNR细胞系细胞 ,收取第 10天培养的细胞 ,提取总RNA ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测TrkAmRNA的表达水平 ,应用锥虫兰染色方法计数活细胞数并用倒置相差显微镜观察细胞形态学的改变 ,计数细胞分化率。结果　在KCNR细胞中同时负荷IFN γ和NGF的细胞表现出比单独负荷IFN γ或NGF更加显著的形态学分化 (P <0 0 1)。前者细胞增殖抑制更加明显 (P <0 0 1)。在IFN γ组 ,TrkAmRNA表达增加 (P <0 0 1) ,NGF组TrkAmRNA的表达未见明显改变 (P >0 0 5 ) ,联合用药组TrkAmRNA的表达有明显降低 (P <0 0 1)。结论　在人SMS KCNR细胞中 ,联合应用IFN γ和NGF比单独应用二者有更加显著诱导分化的作用。与IFN γ诱导TrkAmRNA表达增加不同 ,联合用药导致TrkAmRNA表达下调 ,可能存在某种负调节机制。研究结果表明 ,联合应用IFN γ和NGF可能是治疗NB甚至是晚期NB的合理方案     

IL-4IL-5及IgE在儿童咳嗽变异性哮喘中的价值

目的：咳嗽变异性哮喘(CVA)是一种与气道炎症相关的疾病,有研究表明IL-4,IL-5与IgE的产生有相关性,而且与哮喘的形成有关,因此推测IL-4,IL-5在CVA发病中起重要作用。该文旨在观察IL-4,IL-5及IgE在咳嗽变异性哮喘中的诊断价值。方法：用酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测咳嗽变异性哮喘患儿、哮喘急性发作期患儿、正常同龄儿童各30例外周血单个核细胞(PBMC)内IL-4,IL-5及血清IgE水平。结果：①咳嗽变异性哮喘患儿发作期PBMCIL-4为91.57±12.19ng/L、IL-5为13.28±0.31ng/mL,显著高于缓解期的74.68±11.54ng/L,6.53±0.28ng/mL及正常对照组70.32±18.16ng/L,5.29±0.36ng/mL,(均P<0.01),但缓解期及正常对照组间差异无统计学意义;②咳嗽变异性哮喘发作期患儿血清IgE水平为279.6±41.3KU/L,显著高于缓解期153.8±37.5KU/L,两组均显著高于正常对照组的90.6±44.8KU/L,(均P<0.01);③咳嗽变异性哮喘患儿发作期IL-4,IL-5及IgE水平与哮喘患儿发作期的92.21±3.12ng/L,15.11±1.37ng/mL,287.5±41.9KU/L之间相比差异无统计学意义。结论：联合检测单个核细胞内IL-4,IL-5及血清IgE水平对咳嗽变异性哮喘的诊断有重要价值;IL-4,IL-5可能在咳嗽变异性哮喘的发病机制中起重要作用;咳嗽变异性哮喘可能存在与哮喘相同的发病机制,是典型哮喘的前驱表现。     

诱导痰IL-5水平与儿童哮喘发作严重程度的关系

目的　 观察急性发作期哮喘患儿诱导痰中白细胞介素 5 (IL 5 )水平变化及其与哮喘发作期病情分度的关系 ,探讨其在哮喘发病机制中的作用和在临床诊治中的应用意义。 方法 　按随机分层设计 ,84例急性发作期哮喘患儿分为轻、中、重度发作组 ,3 0例健康儿童作为对照组。采用超声雾化高渗盐水诱导痰液 ,以酶联免疫法 (ELISA)测定诱导痰中IL 5水平 ,同时进行诱导痰中嗜酸细胞 (EOS)计数 ,测定肺通气功能指标FEV1 %。 结果 　哮喘急性发作期患儿诱导痰中EOS计数、IL 5水平均高于健康儿童组 ,FEV1 %则低于健康儿童组 ,均具有显著性差异 (P <0 0 1)。急性发作期哮喘患儿轻、中、重度各组均明显升高 ,轻、中、重度发作各组间两两比较差异均有显著性 (P <0 0 5 )。且痰液中IL 5水平与嗜酸细胞 (EOS)计数之间呈显著正相关 (r =0 482 ,P <0 0 1) ,与FEV1 %值之间呈显著负相关 (r=-0 64 7,P <0 0 1)。 结论 　检测诱导痰中IL 5水平可能较EOS计数更能准确反映哮喘患儿气道炎症和哮喘发作时的病情程度 ,可作为临床评价哮喘病情和药物疗效的准确灵敏的指标。     

miR-98在哮喘患儿外周血单个核细胞中的表达及意义

目的 探讨支气管哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-98的表达及其临床意义.方法 收集43例发作期和缓解期哮喘患儿,30例健康儿童(对照组)的外周血标本,分离PBMCs,采用实时定量PCR法检测PBMCs中miR-98及IL-13、IL-4 mRNA的相对表达量.结果 miR-98在哮喘发作期患儿PBMCs中的表达低于缓解期和对照组儿童,而IL-13、IL-4在哮喘发作期患儿PBMCs中的mRNA水平均高于缓解期和对照组,差异有统计学意义(P均<0.01);缓解期患儿和对照组间miR-98、IL-4 mRNA和IL-13 mRNA水平差异无统计学意义(P均>0.05).哮喘患儿发作期,miR-98水平与IL-4、IL-13 mRNA相对表达量均呈负相关(r=-0.794、-0.804,P均<0.001),IL-4和IL-13 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.853,P<0.001).结论 miR-98在哮喘发作期患儿PBMCs中表达降低,可能与小儿哮喘的发作相关.     

神经生长因子对儿童难治性癫(癎)脑神经细胞及早期生长反应基因1表达的影响

目的 探讨外源性神经生长因子(NGF)对儿童难治性癫(癎)脑(癎)性放电区神经细胞及早期生长反应基因1(Egr-1)表达的影响.方法 采用解离细胞即刻培养技术,将术中取下脑海马(癎)性放电区组织块解离后进行培养,设立对照组和NGF 12.5、50、100 ng/ml 3个不同浓度的加药组,孵育4 h后将其固定;通过免疫荧光细胞化学法,以双苯酰亚胺(Bb)染核,联合细胞特异性标志蛋白GFAP、MAP2标记星形胶质细胞、神经元,计算各组神经细胞总数,并利用RT-PCR技术半定量分析细胞中Egr-1mRNA表达情况.结果 外源性NGF作用4 h后,海马区存活的神经细胞总数及GFAP(+)的星形胶质细胞、MAP2(+)的神经元数较空白对照组升高,且与NGF剂量呈量效关系,随NGF浓度增高而增加(P<0.05);与此同时,神经细胞表达Egr-1mRNA也随NGF浓度增高而表达量增加,即AEgr-1/Aβ-actin值与NGF剂量呈量效关系(P<0.01);且存活的神经细胞数与其表达的Egr-1mRNA量呈正相关(r=0.780,P<0.01).结论 外源性NGF对(癎)性放电区损伤神经细胞有保护作用,其作用可能通过促进Egr-1基因的表达来实现.