多巴胺诱导大鼠海马脑片Ca~(2 )-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的抑制作用(英文)

目的:研究多巴胺(DA)对大鼠海马脑片Ca~(2 )-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPK Ⅱ)活性的影响。方法:采用大鼠海马脑片体外培养模型,以~(32)P-掺入法测定CCDPK Ⅱ的活性。结果:外源性DA可显著降低大鼠海马脑片CCDPK Ⅱ活性,并有一定的浓度依赖性和时间依赖性。去除胞外的Ca~(2 )对不同浓度DA诱导的CCDPK Ⅱ活性抑制有部分或完全保护作用。阿扑吗啡(非特异性DA受体激动剂)、SKF38393(特异性D_1样DA受体激动剂)和喹吡罗(特异性D_2样DA受体激动剂)均可显著降低CCDPK Ⅱ的活性。Sch-23390(特异性D_1样DA受体拮抗剂)和多潘立酮(特异性D_2样DA受体拮抗剂)均可拮抗DA所诱导的酶活性抑制。结论:DA抑制海马CCDPK Ⅱ的活性,其作用机制与D_1样和D_2样受体以及胞外Ca~(2 )的内流有关。     

多巴胺诱导大鼠海马脑片Ca^2＋—钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的抑？…

AIM: To study the effect of dopamine (DA) on Ca(2+)-calmodulin dependent protein kinase II (CCDPK II) activity in rat hippocampus. METHODS: Using rat hippocampal slices as an in vitro model, the activity of CCDPK II was examined by the method of 32P-incorporation. RESULTS: Exogenous DA reduced CCDPK II activity in hippocampal slices in a concentration- and time-dependent manner. Removal of extracellular calcium antagonized the DA-induced inhibition of CCDPK II activity, partially or completely. The activity of CCDPK II was markedly decreased by apomorphine (a nonselective DA receptor agonist), SKF38393 (a selective D1-like DA receptor agonist), or quinpirole (a selective D2-like DA receptor agonist). The inhibition of CCDPK II activity induced by exogenous DA was abolished by preincubation with Sch-23390, a selective D1-like DA receptor antagonist, or domperidone, a selective D2-like DA receptor antagonist. CONCLUSION: DA has an inhibitory effect on CCDPK II activity in rat hippocampus, related to stimulation of D1-like and D2-like receptors and calcium influx.     

慢性染铅对小鼠海马Ca~(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。6周后用逆转录聚合酶链反应法观察各组小鼠海马CaMKⅡmRNA的表达。结果3个染铅组小鼠CaMKⅡmRNA水平均明显降低,并具有浓度效应关系。结论铅致CaMKⅡ基因表达水平下降。     

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93加重大鼠离体心脏钙超载损伤

目的观察钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对大鼠离体心脏钙超载损伤的影响。方法采用Langendorff装置进行离体心脏灌流,利用钙反常现象诱发胞内钙超载。32只SD♂大鼠随机分为正常对照组、药物KN-93对照组、钙反常组和KN-93处理组。实验全程记录左心室内压的变化,以左心室舒张末压(LVEDP)和发展压(LVDP)评价心功能,于不同时间点收集冠脉流出液,并测定乳酸脱氢酶(LDH)的含量。实验结束后,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测心肌梗死面积的变化。结果与正常对照组相比,KN-93(2.5μmol·L~(-1))对正常心脏的左室功能、冠脉流量和心肌梗死面积没有明显影响(P>0.05);与正常对照组相比,钙反常组在复钙灌注结束时LVEDP抬升、LVDP降低,梗死面积达(18±7.2)%,冠脉流量减少,LDH含量增加(P<0.01);KN-93(2.5μmol·L~(-1))处理组与钙反常组相比,心肌梗死面积为(90±4.8)%,LVEDP进一步升高,LVDP消失,冠脉流量明显减少,LDH含量明显增多(P<0.01)。结论 CaMKⅡ抑制剂KN-93加重急性钙超载引起的心肌损伤,这一作用可能与影响CaMKⅡ活性有关。     

多巴胺和谷氨酸在纹状体脑片的相互作用:受体机制介导的CCDPKⅡ,PKA和LDH活性变化(英文)

目的:研究DA和Glu及其受体激动剂/拮抗剂对大鼠纹状体脑片Ca~(2 )/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPKⅡ)、cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)活性及乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响,以探讨纹状体DA和Glu两个神经递质系统的相互作用。方法:用~(32)P掺入法测定大鼠纹状体脑片CCDPKⅡ和PKA活性,用比色法测定LDH的释放。结果:(1)NMDA受体拮抗剂MK-801能拮抗DA、D_1激动剂SKF 38393和D_2激动剂LY 171555对CCDPKⅡ活性的抑制作用。D_1拮抗剂SCH 23390和D_2拮抗剂spiperone均能拮抗Glu诱导的CCDPKⅡ活性降低。(2)DA和SKF 38393显著增加纹状体脑片PKA活性,MK-801可降低这种作用。(3)DA和Glu增加LDH的释放并与浓度成正比。MK-801拮抗DA诱导的LDH释放增加;spiperone能显著减少Glu诱导的纹状体神经元LDH释放。结论:DA和Glu的相互作用对调节纹状体神经元CCDPKⅡ和PKA活性及细胞功能是非常重要的。     

家兔心衰心肌细胞钙渗漏与钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ表达的关系

目的探讨家兔心衰心肌细胞钙渗漏与蛋白激酶A(PKA)和Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达和活性的关系。方法 30只家兔随机均分为假手术组和心衰组。通过超容量负荷联合压力负荷制备家兔心衰模型,用心脏多谱勒和心导管术测定家兔心脏功能,应用钙成像系统进行肌浆网钙回摄和钙渗漏试验。采用Western blot法和γ-32P掺入法测定CaMKⅡ和PKA的蛋白表达水平和活性;应用ELISA法测定血浆去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)和脑钠肽(BNP)水平。结果与假手术组相比,心衰组家兔左室舒张末压、血浆NE、E和BNP水平均明显增加(P<0.01),而射血分数明显降低(P<0.01),肌浆网钙回摄功能下降(P<0.05),而钙渗漏增加(P<0.01),PKA的蛋白表达水平和活性均下降(P<0.05),而CaMKⅡ蛋白表达水平和活性均增加(P<0.05)。结论家兔心衰心肌细胞钙渗漏与CaMKⅡ蛋白表达水平和活性增加相关。     

多巴胺受体拮抗剂对缺氧诱导的大鼠脑Ca~(2 )-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ活性抑制的保护作用(英文)

目的:研究多巴胺受体拮抗剂对缺氧诱导的大鼠海马、纹状体脑片Ca~(2 )-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPK Ⅱ)活性抑制的影响。方法:采用大鼠海马、纹状体脑片体外缺氧模型(置于95％N_2 5％CO_2),以~(32)P-掺入法测定CCDPK Ⅱ的活性。结果:缺氧30min,大鼠海马、纹状体脑片CCDPK Ⅱ活性分别降低为对照的29.2％和27.0％。Sch-23390(特异性D_1-样多巴胺受体拮抗剂)和多潘立酮(特异性D_2-样多巴胺受体拮抗剂)对缺氧所诱导的酶活性抑制均可导致浓度依赖的保护作用。CCDPK Ⅱ活性最大可恢复至对照的60％左右。结论:多巴胺在缺氧诱导的大鼠海马、纹状体CCDPK Ⅱ活性抑制中有重要作用,其作用机制与D_1样和D_2样受体有关。     

钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在非霍奇淋巴瘤中的功能和作用研究

目的 探讨钙离子-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在非霍奇淋巴瘤中的功能及作用机制。方法 人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞随机分为空白组、对照组、实验组和联合组。空白组给予RPMI1640培养基进行培养;对照组先给予pCaMKⅡshRNA-1和pCaMKⅡshRNA-2转染后,再给予RPMI1640培养基进行培养;实验组先给予pcDNA3.1/CaMKⅡ真核表达质转染后,再给予RPMI1640培养基培养;联合组先用pcDNA3.1/CaMKⅡ真核表达质粒转染后,再给予含20μmol·L^-1 SP600125的RPMI1640培养基进行培养。干预48 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Western blot法检测淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷酸化即刻早期原癌基因（p-c-Jun）和磷酸酸化c-Jun N末端激酶（p-JNK）蛋白的表达情况。结果 干预48 h后,实验组、对照组、联合组和空白组的细胞凋亡率分别为（29.57±4.38）%,（5.23±0.89）%,（21.24±0.97）%和（11.85±1.24）%,Bcl-2蛋白相对表达量分别为0....     

S—nitrosocaptopril抑制大鼠主动脉平滑肌细胞Ca^2＋池操纵性Ca^2＋内流

Ｎｏｍｕｒａ等的研究表明 :高血压大鼠肌浆网Ｃａ2 ＡＴＰ酶转运功能障碍 ,使由电压依赖性Ｃａ2 通道 (ｖｏｌａｇｅ ｄｅｐｅｎ ｄｅｎｔＣａ2 ｃｈａｎｎｅｌ,ＶＤＣＣ)和Ｃａ2 池操纵性Ｃａ2 通道 (ｓｔｏｒｅ ｏｐｅｒａｔｅｄＣａ2 ｃｈａｎｎｅｌ,ＳＯＣＣ)开放的机率增加[1,2 ] 。Ｓ ｎｉ ｔｒｏｓｏｃａｐｔｏｐｒｉｌ(ＣａｐＮＯ)是我们近年合成的一种一氧化氮供体类舒血管药。ＣａｐＮＯ作为外源性一氧化氮供体是直接作用于血管平滑肌的活性物 ,对正常和不同类型高血压大鼠均表现明显的剂量依赖性的降压效应[3] 。本文以…     

左旋千金藤立定对大鼠纹状体缺血性损伤的拮抗作用(英文)

目的:研究左旋千金藤立定(SPD)对大鼠纹状体缺血性损伤的拮抗作用。方法:用四动脉结扎形成大鼠前脑缺血模型,焦油紫染色从组织形态观察纹状体中神经元的变化;以纹状体脑片孵育的缺糖缺氧为离体缺血模型,用同位素~(32)P掺入法和比色法测定CCDPK和LDH活性的变化及SPD对它们的影响。结果:缺血30min复灌6h和12h,对照组大鼠纹状体大部分神经元丧失,细胞形态异常;而SPD给药组大鼠纹状体神经元未见明显减少,形态基本正常。SPD减轻缺血时纹状体脑片CCDPK活性的降低及LDH的漏出。缺血30min复灌6h和12h,对照组大鼠纹状体大部分神经元丧失,细胞形态异常;而SPD给药组大鼠纹状体神经元未见明显减少,形态基本正常。SPD减轻缺血时纹状体脑片CCDPK活性的降低及LDH的漏出。结论:SPD对纹状体神经元缺血性损伤有拮抗作用,并可拮抗缺血对纹状体神经元CCDPK活性的抑制及LDH的漏出。     

Phosphorylation of membrane proteins in response to persistent stimulation of adenylate cyclsae-linked dopamine receptors in slices of striatum

Prolonged incubation of slices of striatum with agonists of D-1 dopamine receptors increased phosphorylation of at least 5 membrane protein bands. The extent of the increase in phosphate-incorporation depended on the concentration (10^?5 M?10^?4 M) of the agonist in the incubation medium and the duration of incubation (20 min or longer). Preincubation of slices with haloperidol (10^?6 M) greatly reduced, while ( ? )sulpiride (10^?6 M) failed to alter the increase of phosphorylation elicited by dopamine. Prolonged incubation of striatal slices with LY 141865 (10^?5 M) or isoproterenol (10^?5 M) increased the phosphate-incorporation only in one of the protein bands with an apparent molecular weight of 42,000. Incubation of striatal slices with cholera toxin increased the phosphorylation of protein bands in a similar way to those elicited by dopamine. The present results suggestthat the increased phosphorylation of certain protein bands elicited by prolonged exposure of striatal slices to D-1 dopamine receptor agonists may be associated with the desensitization of dopamine-sensitive adenylate cyclase.     

萘甲异喹对大鼠心肌细胞Ca~(2+)内流的影响

目的研究萘甲异喹（NI）对大鼠心肌细胞外Ca(2+)内流的影响。方法：应用钙离子荧光指示剂Fura－2检测。结果：NI（3，10μmol·L(-1)）和维拉帕米（0．3μmol·L(－1)）对静息状态下心肌细胞内Ca(2+)浓度无影响，但可浓度依赖地抑制高钾（60mmol·L(-1)）和异丙肾上腺素（lμmol·L(－1)）引起的心肌细胞内Ca(2+)浓度的升高，抑制率分别为29％±6％、49％±9％和26％±6％、40％±8％；NI对两种激动剂作用的抑制百分率无明显差异，而维拉帕米对高钾作用的抑制大于对异丙肾上腺素作用的抑制。结论：NI对心肌细胞电压依赖性钙通道以及和β受体有关的钙通道有阻断作用，NI可能是非选择性钙通道阻滞剂。     

左旋千金藤立定加强尾核脑片多巴胺释放(英文)

观察左旋千金藤立定((-)-stepholidine,SPD)对家兔尾核脑片多巴胺(DA)释放的影响.方法:以[~3H]DA预孵脑片,测定DA放射性.结果:选择性D_2受体激动剂LY171555以剂量依赖方式抑制电诱发的兔尾核脑片[~3H]DA释放.SPD可翻转LY 171555对[~3H]DA释放的抑制作用,并以剂量依赖方式加强[~3H]DA释放,在无电刺激条件下,SPD诱发大鼠尾核[~3H]DA释放被蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)激活剂咐波酯所加强.结论:SPD对突触前D_2自身受体是阻滞剂.     

钙调素拮抗剂E6对大鼠神经细胞内钙的影响

目的　观察钙调素拮抗剂E6对神经细胞静息[Ca2 +]i、KCl (5 0mmol·L-1)和谷氨酸 (glutamicacid ,Glu ,0 1mmol·L-1)引起的神经细胞 [Ca2 +]i 升高的影响。方法　用Ca2 +敏感荧光指示剂Fura 2 /AM负载大鼠脑细胞 ,测定神经细胞内游离Ca2 +浓度 ([Ca2 +]i)。结果　E6可升高神经细胞静息 [Ca2 +]i,EC50 为 6 6 8μmol·L-1;无外Ca2 +条件下 ,也升高 [Ca2 +]i,EC50 为 1 30 μmol·L-1,说明E6主要是通过促进细胞内贮存Ca2 +释放引起内Ca2 +升高。E6抑制KCl升高细胞 [Ca2 +]i 的IC50 为 6 0 μmol·L-1;抑制Glu激发的细胞 [Ca2 +]i 升高的IC50 为 0 15 μmol·L-1。结论　E6可能是通过与细胞内钙调素 (Calmodulin ,CaM)结合后 ,影响兴奋性氨基酸受体的开放和电压依赖性钙通道的活性状态 ,表现出对由去极化或受体激动剂引起的内Ca2 +升高的抑制作用     

D2 dopamine receptors and modulation of spontaneous acetylcholine (ACh) release from rat striatal synaptosomes

1. The effect of two D_3/2 dopamine receptor agonists, LY-171555 (quinpirole) and 7-hydroxy-N,N-di-n-propyl-2-aminotetralin (7-OH-DPAT) on spontaneous [³H]-acetylcholine ([³H]-ACh) release were investigated in rat striatal synaptosomes.
2. Quinpirole and 7-OH-DPAT inhibited in a concentration-dependent manner the basal efflux of [³H]-ACh with similar E_max (maximal inhibitory effect) values (29.95±2.91% and 33.19±1.21%, respectively). Significant differences were obtained between the pEC₅₀ (−log of molar concentration) of quinpirole (7.87±0.12) and 7-OH-DPAT (7.21±0.17; P<0.01).
3. Different concentrations (0.3–10 nM) of haloperidol (D_2/3 dopamine receptor antagonist) shifted to the right the concentration-response curves elicited by quinpirole and 7-OH-DPAT, without modifications in the E_max.
4. Slopes of a Schild plot obtained with haloperidol in the presence of quinpirole and 7-OH-DPAT were not signficantly different from unity (0.85±0.05 and 1.17±0.11, respectively) and consequently haloperidol interacted with a homogeneous receptor population. The pK_B values of haloperidol obtained from Schild regression were 9.96±0.15 (in presence of quinpirole) and 9.90±0.09 (in presence of 7-OH-DPAT).
5. Specific binding of [³H]-YM-09151-2 to membranes of striatal synaptosomes and cells expressing D₂ and D₃ dopamine receptors was inhibited by haloperidol. Analysis of competition curves revealed the existence of a single population of receptors. There were no differences between the estimated pK_i (−log of molar concentration) values for synaptosomes (8.96±0.02) and cells expressing D₂ receptors (8.81±0.05), but the pK_i value from cells expressing D₃ dopamine receptors differed significantly (8.48±0.06; P<0.01).
6. In conclusion, the data obtained in the present study indicate that quinpirole and 7-OH-DPAT, two D_3/2 dopamine receptor agonists, inhibit the spontaneous [³H]-ACh efflux and this effect is competitively antagonized by haloperidol and probably mediated through dopamine D₂ receptors.

     

山豆根碱对大鼠血小板摄取~（45）Ca~（2＋）的影响

用４５Ｃａ２＋摄入法测定了大鼠血小板摄取细胞外Ｃ２＋，观察山豆根碱对血小板摄取Ｃａ２＋的影响、结果表明，静息血小板可迅速摄取细胞外Ｃａ２＋，呈时间和浓度依赖性；ＡＤＰ促进血小板摄取Ｃａ２＋；山豆根碱以浓度依赖方式抑制静息的和ＡＤＰ诱导的血小板摄取细胞外Ｃａ２＋。这提示山豆根碱抑制血小板聚集的作用机制之一与阻止细胞外Ｃａ２＋内流入血小板，降低血小板胞浆内Ｃａ２＋浓度有关。