硫酸多糖抗血管平滑肌细胞增殖作用机理的研究进展

血管平滑肌细胞 (vascular smooth mus-cle cell,VSMC)存在于血管壁中膜 ,是决定血管活性和血管构型的重要因素。根据结构与功能的不同 ,VSMC分为收缩型和合成型两种表型 (phenotype)。收缩型 VSMC呈分化状态 ,不能增殖 ;合成型的 VSMC是去分化的细胞 ,具有很强的增殖能力。近年来的研究表明 ,在各种刺激因素和生长因子的作用下 ,VSMC可由分化状态转变为去分化状态 ,并从中膜迁移内膜 ,在内膜中大量增殖 ,使血管壁增厚 ,顺应性下降 ,管腔狭窄 ,是高血压、动脉粥样硬化和血管再狭窄等疾病的主要原因 [1 ] 。硫酸多糖是含硫酸基、多聚…     

海洋硫酸多糖DPS对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的　研究海洋硫酸多糖 (DPS)对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及其作用机制。方法　建立碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和白介素 1(IL 1)所诱导的VSMC增殖模型 ,以MTT法观察DPS对VSMC增殖的影响 ,分别用Griess重氮化反应法和放免法测定VSMC上清液中一氧化氮 (NO)、血管紧张素II(AngII)和内皮素 1(ET 1)的含量。结果　DPS在 0 0 1- 10 μg·mL-1浓度下 ,对bFGF或IL 1所致的VSMC增殖均有明显抑制作用。DPS呈剂量依赖性增加NO合成及降低AngII和ET 1的生成或释放。 结论　DPS对VSMC增殖有抑制作用 ,其机制可能与增加一氧化氮合成及降低血管紧张素II和内皮素 1的生成或释放有关。     

海洋硫酸多糖DPS对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的　研究海洋硫酸多糖(DPS)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其作用机制。方法　建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白介素-1(IL-1)所诱导的VSMC增殖模型,以MTT法观察DPS对VSMC增殖的影响,分别用Griess重氮化反应法和放免法测定VSMC上清液中一氧化氮(NO)、血管紧张素II(AngII)和内皮素-1(ET-1)的含量。结果　DPS在0.01-10μg·mL^-1浓度下,对bFGF或IL-1所致的VSMC增殖均有明显抑制作用。DPS呈剂量依赖性增加NO合成及降低AngII和ET-1的生成或释放。结论　DPS对VSMC增殖有抑制作用,其机制可能与增加一氧化氮合成及降低血管紧张素II和内皮素-1的生成或释放有关。     

黄芪抑制血管平滑肌细胞增殖及其作用机制

目的 观察黄芪(AS)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,了解黄芪是否通过刺激VSMC产生一氧化氮(nitric oxide,NO),使细胞周期停滞于G0／G1期,从而抑制平滑肌细胞增殖。方法 [3H]-胸腺嘧啶核苷酸([3H]-TdR)掺入测定VSMCDNA合成,流式细胞仪检测细胞周期情况,硝酸还原酶法测定细胞培养上清中NO水平。结果 黄芪以剂量依赖关系抑制血清诱导的VSMC[3H]-胸腺嘧啶核苷酸掺入,使G0／G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,黄芪刺激VSMC后,细胞培养上清中NO水平呈剂量依赖上升。结论黄芪能抑制VSMC增殖,使细胞周期停滞于G0／G1期,这一过程可能与黄芪刺激VSMC产生NO有关。     

银杏内酯对血管紧张Ⅱ依赖性血管平滑肌细胞增殖的作用

目的 观察血管紧张Ⅱ（AngⅡ）对培养牛主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用及银杏内酯对其增殖的影响。方法 采用组织块贴壁法培养牛主动脉VSMC,以^3H-TdR掺入法和流式细胞仪分别测定VSMC的DNA合成量及细胞周期中各期细胞构成比。结果 （AngⅡ）（0.1μmol/L)作用24h使用^3H-TdR掺入量比对照组增加34%;S期和G2/M期细胞增多,细胞增殖指数由35.15%增至45.03%。与（AngⅡ）组相比,AngⅡ加银杏内酯B（G-B,0.1-10μmol/L)组、AngⅡ加G-B和银杏内酯A（G-A）的混合物（G-AB,0.1-10μmol/L)组的^3H-TdR掺入量减少;S期细胞构成比和细胞增殖指数减少。结论 AngⅡ对VSMC有促增殖作用,要被G-B和G-AB所拮抗。     

海洋硫酸多糖AHD的降压作用及其机制的初步探讨

采用肾血管性高血压大鼠（两肾一夹）（简称ＲＨＲ）,分别以１２．５、２５、５０ｍｇ·ｋｇ～－１预防口服给药５周,每日１次,观察海洋硫酸多糖 ＡＨＤ的降压作用及对 ＲＨＲ血清一氧化氮（ＮＯ）、血浆内皮素（ＥＴ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量的影响。结果表明：ＡＨＤ明显降低ＲＨＲ大鼠的收缩压和舒张压,降压强度在给药剂量范围内是剂量依赖性;显著增加血清ＮＯ含量;明显降低血浆ＥＴ、ＡｎｇⅡ含量。揭示ＡＨＲ对ＲＨＲ具有良好的降压作用,可能与促进体内 ＮＯ生成,降低ＥＴ和 ＡｎｇⅡ释放有关。     

海洋硫酸多糖DPS对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

本文采用碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和白介素－１（ＩＬ－１）氘诱导的大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖模型,以ＭＴＴ法观察了海洋硫酸多糖ＤＰＳ对ＶＳＭＣ增殖的影响。大鼠血管平滑肌细胞在ＤＰＳ浓度为０．００１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌ的２液中孵育２４ｈ后,分别加入ｂＦＧＦ（５０ｍｇ／ｍｌ）或ＩＬ－１（５０Ｕ／ＭＬ）再孵育２４ｈ,用ＭＴＴ法测定海洋硫酸多糖ＤＰＳ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明,     

间硝苯地平对血管紧张素Ⅱ促进血管平滑肌细胞增殖和蛋白质合成的影响

以培养血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｃｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌ，ＶＳＭＣ）为模型，观察了间硝苯地平（ｍ－ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ，ｍ－Ｎｉｆ）对血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ，ＡＮＧⅡ）促进ＶＳＭＣ增殖和蛋白质合成的影响。结果表明，ｍ－Ｎｉｆ抑制ＡＮＧⅡ（１００ｎｍｏｌ·Ｌ￣（－１））引起ＶＳＭＣ［￣３Ｈ］ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ和［￣３Ｈ］ｌｅｕｃｉｎｅ参入，并呈剂量依赖性。ｍ－Ｎｉｆ（２×１０￣（－６）ｍｏｌ·Ｌ￣（－１））可抑制ＡＮＧⅡ对ＶＳＭＣ的刺激、ＤＮＡ及蛋白质合成速率，分别降低了４６％，５８％，５３％。提示ｍ－Ｎｉｆ可抑制ＡＮＧⅡ对ＶＳＭＣ增殖和蛋白合成的促进作用     

间硝苯地平对血管紧张素Ⅱ促进血管平滑肌细胞增殖和蛋白质合成的影响

以培养血管平滑肌细胞(vascularsmcothmusclecell,VSMC)为模型,观察了间硝苯地平(m-nifedipine,m-Nif)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ANGⅡ)促进VSMC增殖和蛋白质合成的影响。结果表明,m-Nif抑制ANGⅡ(100nmol·L^-1)引起VSMC[³H]thymidine和[³H]leucine参入,并呈剂量依赖性。m-Nif(2×10^-6mol·L^-1)可抑制ANGⅡ对VSMC的刺激、DNA及蛋白质合成速率,分别降低了46%,58%,53%。提示m-Nif可抑制ANGⅡ对VSMC增殖和蛋白合成的促进作用。     

一氧化氮部分介导吡格列酮抑制培养兔胸主动脉平滑肌细胞增殖

目的:观察吡格列酮(PIO)对高糖高胰岛素诱导兔胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其与一氧化氮(NO)的关系.方法:模拟胰岛素抵抗 (IR)状态培养VSMCs,四甲基氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,试剂盒分别检测细胞液中NO含量及细胞总一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性.结果:PIO干预后,正常培养组和模拟IR培养组VSMCs含MTT溶解物的吸光值(A490)均低于各自对照组(P＜0.01).PIO显著增加VSMCs总NOS活性、iNOS活性以及NO含量(P＜0.01).PIO上述作用在模拟IR培养时更强,均可被NOS抑制剂L-NAME部分阻断.结论:在正常或模拟IR培养时,PIO抑制VSMCs增殖的作用部分通过NO介导.     

福辛普利对平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用，并研究福辛普利对其的影响。方法：采用流式细胞技术测定在不同浓度和不同作用时间血管紧张素Ⅱ作用下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2表达的变化和福辛普利对其的影响。结果：血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用。福辛普利可抑制AngⅡ作用，对细胞凋亡有一定的影响，同时可影响凋亡调控基因的表达。结论：血管紧张素Ⅱ具有一定的的促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用，尤其大剂量作用较明显。而福辛普利可明显抑制AngⅡ对血管平滑肌细胞的作用。     

Regulation of intracellular Ca^2＋ and calcineurin by NO／PKG in proliferation of vascular smooth muscle cells

AIM: To determine whether Ca2+/calcineurin mediated the inhibitory effects of nitric oxide /cGMP-dependent protein kinase (NO/PKG) on the proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMC). METHODS: Proliferation and viability of primary VSMC from rat aorta were measured using [3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] (MTT) assay and acridine orange and ethidium bromide staining, respectively. Cytosolic Ca2+ was determined by Fluo-3/AM. Calcineurin protein and its activity were assayed using immunoblotting and free inorganic phosphate analysis, respectively. RESULTS: (+/-)-S-nitroso-N-acetyl-penicillamine (SNAP) and Sp-8-(4-chlorophenylthio)-guanosine-3',5'-cyclic monophosphorothioate (Sp-8-pCPT-cGMPS) decreased phenylephrine (PE)-induced proliferation of VSMC by 27.3% and 36.6%, respectively, but Rp-8-[(4-chlorophenyl)thio]-guanosine-3',5'-cyclic monophosphorothioate (Rp-8-pCPT-cGMPS) increased PE-induced proliferation of VSMC. SNAP, Sp-8-pCPT-cGMPS, and Rp-8-pCPT-cGMPS did not affect the viability of VSMC. Calcineurin protein was decreased by 63.1% and its activity was decreased by 59.7% in smooth muscle cells (SMC) pretreated with verapamil (Ver) and then stimulated by PE. In SMC pretreated with Ver, the absorbance of cells stimulated by PE decreased by 22.0% and was further inhibited by the additional treatment of SNAP and Sp-8-pCPT-cGMPS. In SMC pretreated with cyclosporin A (CsA), the absorbance of cells stimulated by PE decreased by 36.7%, but could not be further altered by the additional treatment of SNAP, Sp-8-pCPT-cGMPS, and Rp-8-pCPT-cGMPS. In addition, Ver inhibited PE-induced intracellular Ca2+ variations, which could be further inhibited by SNAP and Sp-8-pCPT-cGMPS, but not by Rp-8-pCPT-cGMPS. Moreover, the increase in calcineurin activity induced by PE was inhibited by SNAP and Sp-8-pCPT-cGMPS, but was promoted by Rp-8-pCPT-cGMPS. Conclusion: NO/PKG regulates calcineurin activity via the modulation of intracellular Ca2+ concentration, and thus partially inhibits the proliferation of VSMC without affecting their viability.     

Differential effects of lovastatin on mitogen induced calcium influx in human cultured vascular smooth muscle cells

1. In this study the effect of lovastatin, an inhibitor of cholesterol and isoprenoid synthesis, on the rises in intracellular calcium concentration ([Ca²⁺]_i) induced by platelet derived growth factor BB (PDGF-BB), angiotensin II (AII), low density lipoproteins (LDL) and foetal calf serum (FCS) was examined in human cultured vascular smooth muscle cells (VSMC) from saphenous vein. Changes in [Ca²⁺]_i were measured in cell suspensions by the Ca²⁺ sensitive probe, fura 2.
2. Incubation with lovastatin for 24–26 h markedly reduced the peak rise and sustained phase of [Ca²⁺]_i elevation in response to PDGF-BB but the responses to AII, LDL and FCS were unaffected. Further experiments showed that lovastatin pretreatment inhibited PDGF-BB induced Ca²⁺ influx but not intracellular Ca²⁺ release. This inhibition could be overcome by co-incubation with mevalonic acid.
3. Pretreatment of cells with the heterotrimeric G protein inhibitor pertussis toxin for up to 24 h completely abolished AII-induced [Ca²⁺]_i rises but the response to PDGF-BB was unaffected.
4. The tyrosine kinase inhibitor genistein largely abolished PDGF-BB-induced [Ca²⁺]_i elevation but had no significant effect on AII-induced responses.
5. Pre-incubation with lovastatin had no effect on the level of tyrosine phosphorylation of PDGF-β receptors (as measured by Western blot) in response to the PDGF-BB ligand.
6. PDGF-BB elicits Ca²⁺ influx via a tyrosine kinase-dependent mechanism distinct from the heterotrimeric G protein coupled pathway utilized by AII. Lovastatin most likely acts by inhibition of isoprenylation (via blockade of isoprenoid synthesis) of an intermediate molecule involved in PDGF-BB-induced Ca²⁺ influx.

     

缬沙坦对球囊损伤后血管平滑肌细胞增生的影响

目的 探讨缬沙坦因子防治人类血管成形术后再狭窄的可行性方法观察新的非肽类血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型(AT_1)受体拮抗剂,缬沙坦(Valsartan),对血管平滑肌细胞(VSMC)增生的影响。对大鼠髂动脉球囊内皮剥脱术后过度增生模型采用~3H-TdR和~3H-Leu掺入,免疫组化染色检测VSMC中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及图象分析血管壁形态学变化。结果 缬沙坦显著减少~3H-TdR和~3H-Leu的掺入量,减少新生内膜面积和PCNA阳性细胞数。结论 缬沙坦能抑制大鼠动脉的球褒内皮损伤后的VSMC增生,可能它是防治血管成形术再狭窄的有效药物。     

家兔动脉血管平滑肌细胞培养方法的改进

目的提高家兔血管平滑肌细胞(vascular smooth mus-cle cell,VSMC)体外培养的成功率。方法以传统的主动脉平滑肌细胞培养方法中的组织块贴壁法为基础,从动物选择、培养基配制、血管取材、组织块的大小和接种间距、培养液的量及换液量、细胞传代的时机等多个重要环节进行改进;用倒置显微镜、电镜对培养细胞进行形态学观察,并用平滑肌细胞特异性α-肌动蛋白(α-actin)单克隆抗体免疫组织化学方法进行鉴定。结果台盼蓝检查传代细胞的存活率大于97%;光镜下见培养细胞平行排列呈长梭形及"峰、谷"样结构特征;免疫组织化学染色鉴定培养细胞中VSMC的纯度为97%;电镜技术观察到VSMC完整的超微结构。结论此培养方法能提高动脉平滑肌细胞原代培养的成功率,传代后血管平滑肌细胞生物学特征的稳定性好,可作为研究血管平滑肌细胞生物学行为的有效模型。     

曲古菌素A抑制血管平滑肌增殖和诱导凋亡的研究

目的观察曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)体外抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导凋亡的作用。方法采用MTT比色法和BrdU参入法观察TSA对血清诱导的VSMC增殖的抑制作用;采用流式细胞仪和检测细胞周期蛋白表达的方法观察TSA对VSMC细胞周期的影响;采用测定DNA片段和活化caspase-3表达的方法观察TSA诱导VSMC发生凋亡的作用。结果小剂量TSA抑制血清诱导的VSMC增殖而无明显的细胞毒作用,大剂量TSA激活caspase-3并诱导VSMC发生凋亡。TSA干预可延缓血清诱导VSMC进入S期,此效应与抑制cyclinD1和cyclinA表达有关。结论TSA能抑制血清诱导的VSMC增殖,使VSMC停滞于静止期,大剂量条件下诱导VSMC凋亡。TSA有望成为治疗血管增殖性疾病的新策略。     

紫草素对血管平滑肌细胞化疗性损伤保护作用的机制

目的:探讨紫草素对血管平滑肌细胞(VSMC)化疗性损伤产生预防性保护及治疗作用的机制。方法:培养兔血管平滑肌细胞,以硫酸长春新碱建立化疗性损伤模型,采用噻唑兰(MTT)法测定细胞活性,并测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)和细胞内游离Ca2+浓度,使用流式细胞术比较各组间细胞周期的改变。结果:紫草素用于预防或治疗时,实验组的细胞活性、LDH的水平及细胞内游离Ca2+浓度与模型组比较差异均有极显著性(P<0.01),与空白组相比接近,差异无显著性(P>0.05);紫草素可消除化疗药物对细胞有丝分裂阻滞作用,使G2期细胞比例恢复正常,单药时可提高正常细胞S期比例。结论:紫草素对VSMC化疗损伤具有预防性保护作用和损伤后的修复作用。     

氯沙坦对血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的影响

目的探讨氯沙坦对血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)的影响。方法贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞,分别给予不同浓度血管紧张肽Ⅱ(ATⅡ)和氯沙坦,采用半定量逆转录聚合酶链反应及Western blotting检测不同处理组平滑肌细胞CYR61 mRNA和蛋白表达。采用酶联免疫吸附技术检测平滑肌细胞培养介质中CYR61含量的变化。结果10~(-6)/10~(10) mol·L~(-1)ATⅡ呈剂量依赖性地增加平滑肌细胞内CYR61蛋白及其mRNA表达水平,增高培养介质中CYR61含量(P<0.01)。10~(-5)～10~(-7)mol·L~(-1)氯沙坦预处理组中,ATⅡ刺激的平滑肌细胞CYR61蛋白及其mRNA表达水平及培养介质中CYR61含量明显减低(P<0.01)。结论氯沙坦可拮抗ATⅡ所致的平滑肌细胞内CYR61的表达与分泌。     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨叶酸抑制同型半胱氨酸致大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),流式细胞仪检测VSMC周期,[3H]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果同型半胱氨酸以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例显著增多,增加VSMC的[3H]TdR参入。叶酸可明显抑制同型半胱氨酸诱导的作用。结论同型半胱氨酸能诱导VSMC增殖,叶酸能抑制同型半胱氨酸诱导的VSMC增殖。