含后叶加压素的视上核神经元及含P物质的中缝背核神经元至下丘脑室旁核投射的研究

用HRP逆行追踪与免疫细胞化学结合的方法,对某些投射至大鼠下丘脑室旁核的神经元的化学性质进行了研究.结果显示在视上核内存在三种标记细胞:HRP单标细胞、后叶加压素免疫反应阳性单标细胞和HRP后叶加压素双标细胞.双标细胞为大、中型椭圆形或圆形细胞,约占HRP标记细胞总数的22%.在中缝背核投射至室旁核的神经元中,部分为P物质免疫反应阳性,双标细胞为中小型梭形细胞,约占HRP标记细胞总数的20%.上述结果提示:视上核有后叶加压素能神经元、中缝背核有P物质能神经元投射到室旁核.     

大鼠展神经核和前庭神经核内GABA反应神经元向动眼神经核的投射

用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)逆行标记结合γ-氨基丁酸(γ-amino-butyric acid,GABA)的免疫组织化学双标技术观察大鼠的展神经核和前庭神经核内GABA阳性神经元的分布,以及其向动眼神经核的投射。结果表明:注射HRP于大鼠动眼神经核内直肌亚核后,在对侧展神经核区以及前庭神经核、脑桥旁正中网状结构中发现HRP单标记细胞;在前庭神经核内,可见HRP单标记、GABA阳性和HRP/GABA双标记三类神经元,其中HRP/GABA双标记细胞占HRP标记细胞总数的47.1%。结果表明GABA在前庭神经核向动眼神经核的抑制性投射中起一定作用,而在展神经核向动眼神经核投射的核间通路中,可能不是起主要作用的抑制性神经递质。     

组成猫肠系膜上丛的神经元的分布——HRP法研究

本文以HRP浸泡猫肠系膜上丛近心断端,TMB法显色。观察到参与组成此丛的交感节后神经元位于腹腔-肠系膜上神经节复合体尾侧部。副交感节前神经元位于迷走神经背核主部的中三分之二,但偏头侧。在标记段的尾侧三分之二,标记细胞集中在核的外侧部;极少量标记细胞出现在延髓网状结构内,主要位于背核与疑核之间。标记的感觉神经元分布在结状神经节和脊神经节内,后者约占两者总数的71～74％。脊神经节内的标记细胞见于T_2～L_4。较集中在T_8～L_2,占一侧标记细胞总数的87～88％。高峰节段在T_(13)和L_1,占34～36％。脊神经节的标记细胞中,约有3％大型标记细胞,分布在T_5～L_1,高峰在T_8或T_9,占一侧大型标记细胞总数的21％。上述标记神经元的分布均为双侧。有一例动物在双侧薄束核内见到少量HRP标记纤维。     

大鼠脑干至脊髓5-羟色胺投射纤维的起源——免疫细胞化学和酶组织化学双重标记法

本文应用 HRP 逆行追踪与免疫细胞化学相结合的双重标记技术,研究了大鼠脑干至脊髓5-羟色胺(5-HT)投射纤维的起源,并对中缝核群和网状结构内5-HT 阳性细胞、HRP 标记细胞和5-HT-HRP 双重标记细胞进行了数量分析。结果表明,1.在延髓、脑桥尾侧部,5-HT-HRP双重标记细胞约占5-HT 阳性细胞的55%;占 HRP 标记细胞的45%。中脑仅有极少数5-HT-HRP双重标记细胞。2.脑干至脊髓5-HT 下行投射,主要起源于中缝苍白核、中缝隐核、中缝大核和延髓浅表弓状纤维区,所含双重标记细胞约占双重标记细胞总数的68%。3.浅表弓状纤维区、舌下神经根间核、中缝苍白核和中缝隐核主要为5-HT 下行投射;中缝大核及周围网状结构主要为非5-HT 下行投射。     

大鼠终纹床核向结合臂旁核的投射 Ⅲ.神经降压肽、促肾上腺皮质激素释放因子肽能通路研究

用荧光金逆行束路追踪结合免疫荧光双标记技术及HRP逆行束路追踪结合免疫细胞化学双标记技术证明,在大鼠终纹床核投射至结合臂旁核的神经元中,位于前外侧区卵圆核及其腹侧邻近区中的部分为神经降压肽及促肾上腺皮质激素释放因子免疫反应阳性,双标记细胞分别约占这个部位逆行标记细胞总数的40％及20％;在前腹侧区的梭形核及大细胞核中,部分为促肾上腺皮质激素释放因子免疫反应阳性。     

阿片μ受体与SP、CGRP和SOM在大鼠三叉神经节和背根神经节内的共存研究

本研究应用免疫荧光及免疫荧光双重染色技术，观察了大鼠三叉神经节和背根神经节内阿片μ受体免疫反应阳性神经元的分布及其与SP、CGRP和SOM阳性神经元之间是否存在共存关系。结果显示：（1）三叉神经节和背根神经节内的阿片μ受体免疫反应阳性神经元多为中小到细胞，其免疫反应阳性产物不仅见于胞膜表面也出现于胞浆内。SP和SOM免疫反应阳性神经元亦为中小型细胞，但以小细胞为主，而CGRP免疫反应阳性神经元有一部分为大型神经元。（2）在三叉神经节内，有相当数量的阿片μ受体阳性神经元同时呈SP、CGRP或SOM免疫反应阳性。其中双重免疫反应神经元分别占阿片μ受体阳性细胞总数的34．6％、54．3％和23.9％，而在SP、CGRP和SOM各阳性细胞中分别有49．4％、50．9％和37.5％的神经元同时是阿片μ受体免疫反应阳性．（3）在背根神经节内，也有相当数量的神经元呈阿片μ受体与SP、CGRP和SOM双重免疫反应阳性，其中双标细胞数分别占阿片μ受体免疫反应阳性细胞总数的30．1％、48．4％和26.8％，各占SP、CGRP和SOM阳性细胞总数的51．5％、44．2％和35．9％。本文结果提示吗啡的镇痛作用中有部分可能是通过激活阿片μ受体来影响初级传入纤维中SP、CGRP和SOM的释放而实现的．     

狗内脏大神经起始神经元的研究——HRP及CT-HRP法研究

本文在11例幼狗左侧内脏大神经近侧端涂CT—HRP、单纯HRP或二者混合的HRP,观察该神经中交感节前神经元在脊髓中的部位、分布节段和细胞形态特征。共发现8110个标记细胞,分布范围在同侧胸1—腰1脊髓节段,胸4—12节段出现频率最高,占标记细胞总数的92.53％±0.29,其中胸8—10节段占总数的46.38％±0.55。标记细胞出现在脊髓的四个区域:中间外侧核主部(ILP)、中间外侧核索部(ILf)、中介核(IC)和中介核旁室管膜部(ICpe)。在ILp发现的标记细胞占总标记细胞的87.92％,ILf占总数的5.7％,IC占总数的4.29％,ICpe占总数的1.4％。ILp和ILf两部的标记细胞分布节段较广(12—14个节段),IC和ICpe两部较窄(7—11个节段)。本文还讨沦了实验方法和狗内脏大神经中交感节前神经元在脊髓内的分布特征。     

延髓缝核SP神经元至脊髓背角的下行投射—HRP逆行追踪与免疫细胞化学结合法研究

将HRP分别注入18只大鼠的颈、胸、腰段脊髓背角内,应用HRP逆行追踪与免疫细胞化学结合法,对大鼠延髓缝核至脊髓背角的SP能下行投射进行了观察。至脊髓背角的SP能下行纤维主要来自大缝核(无明显定位关系),其次是隐缝核及苍白缝核。各缝核双标细胞占整个延髓缝核HRP标记细胞总数的百分比分别为:大缝核7.5％,隐缝核2.9％,苍白缝核1.4％。本文还讨论了延髓缝核SP能神经元至脊髓背角下行投射的机能意义。     

下丘脑室旁核经迷走神经复合体对哮喘大鼠的神经调控研究

为探讨下丘脑室旁核对哮喘大鼠的神经调控途径,取健康雄性SD大鼠制备哮喘模型并诱发哮喘发作,运用WGA-HRP逆行追踪法与免疫组织化学染色法(ABC法)相结合的双重标记方法,在光镜下观察向迷走神经复合体(DVC)发出投射的下丘脑室旁核(PVN)神经元内Fos蛋白的表达情况。结果显示:PVN内有三种阳性细胞,即HRP逆行标记神经元、Fos样免疫阳性神经元和HRP/Fos双标神经元。这些神经元主要见于PVN小细胞部的内侧亚核和外侧亚核,散在分布于背侧亚核,在前小细胞亚核内未见阳性反应;Fos样免疫阳性细胞呈双侧分布,且HRP逆标神经元,HRP/Fos双标神经元也为双侧分布,但以注射区同侧占优势。HRP/Fos双标神经元占HRP标记细胞的44.22%。本研究结果提示,哮喘大鼠发作时中枢内包括下丘脑PVN、延髓DVC的多个脑区内神经元兴奋,且两者之间通过直接投射联系参与哮喘的调控。     

含CCK脊神经节细胞的皮肤-内脏分支投射——荧光双标和免疫组织化学结合三重标记法研究

用荧光素逆行双标和免疫组化结合三标技术,研究脊神经节含CCK-8的感觉神经元的皮肤-内脏分支投射。将fast blue(FB)和nuclear yellow(NY)分別注入大鼠左侧腹腔神经节和左侧第9～11肋间神经皮支内。灌注固定,取左侧胸9～11脊神经节,恒冷箱切片。在Nikon荧光显微镜下观察,激发光波长为365nm。镜下可见三种不同标记的神经元:NY标记神经元,胞核发黄色荧光;FB标记神经元,胞浆发蓝色荧光;NY+FB双标神经元(具有分支投射的神经元),胞浆发蓝色荧光和胞核发黄色荧光。双标神经元约占所有荧光标记神经元的2.8％。含有双标神经元的切片,用CCK-8抗血清孵育,用改良的PAP法显色。镜下可见CCK免疫反应阳性神经元。在CCK免疫反应阳性神经元中,可以区分:1.被CCK标记的NY神经元(NY+CCK)。2.被CCK标记的FB神经元(FB+CCK)。3.被CCK标记的NY+FB双标神经元(NY+FB+CCK)。4.单纯CCK免疫反应阳性神经元。NY+FB+CCK三标神经元约占NY+FB双标神经元的11.5％,仅占CCK阳性神经元的0.4％。以上结果表明:脊神经节中有些感觉神经元的周围突具有分支,分别投射到内脏和皮肤;这类神经元中,有些神经元含有CCK-8。从而提示:内脏牵涉性痛的会聚可在脊神经节进行;CCK可能参与内脏和皮肤感觉会聚的调节。因此,本文为牵涉性痛的发生机制和躯体-内脏反射提供了重要的化学神经解剖学资料。     

延髓内脏带儿茶酚胺能神经元对LPS免疫刺激的Fos表达

目的　探讨“延髓内脏带 (MVZ)至下丘脑室旁核 (PVN)”的儿茶酚胺能通路在“免疫 脑通讯”中的作用。　方法　应用WGA HRP逆行追踪与抗Fos和抗酪氨酸羟化酶 (TH)抗体双重免疫组织化学相结合的三重标记方法 ,即先将WGA HRP注入大鼠一侧PVN内 ,存活 4 8h后经腹腔注射免疫刺激剂脂多糖 (LPS)诱发免疫反应后 ,观察MVZ中WGA HRP逆标细胞、Fos蛋白和儿茶酚胺能神经元 (以TH为标记物 )的分布及表达状况。　结果　在MVZ内发现 7种阳性神经元 ,即HRP、Fos、TH单标细胞、Fos HRP、Fos TH、HRP TH双标细胞和Fos HRP TH三标细胞。Fos HRP双标记和Fos HRP TH三标记细胞分别占总HRP逆行标记细胞的 12 5 %和 39 6 %。　结论　MVZ对LPS免疫刺激起反应 ,并可能将免疫信息经儿茶酚胺能神经元上传至PVN ;MVZ可能作为“免疫 脑通讯”的一个中继站 ,通过“MVZ→PVN”通路起免疫调节作用。     

大鼠内侧杏仁核的性双形性和向内侧视前区直接投射的研究

本文将内侧杏仁核分为5个亚区：即前背亚区、前腹亚区、中背亚区、后背亚区和后腹亚区。细胞构筑定量分析结果表明;雄性大鼠内侧杏仁核的吻尾长度（1.440mm）、体积（0.6485mm3）、细胞总数（50421个）均显著大于雌性（吻尾长度为1.320mm，体积为0.5326mm3，细胞总数为43922个）。并且证明内侧杏仁核的5个亚区中.雄性大鼠后背亚区的吻尾长度（0.510mm）、体积（0.1519mm3）、细胞总数（13331个）都显著地大于雌性（吻尾长度为0.375mm、体积为0.0774mm3、细胞总数为8655个），而其它亚区无上述性别差异。另外，雄性大鼠内侧杏仁核及其后背亚区和后腹亚区的细胞密度小于雌性。上述性别差异均具有统计学意义。这些结果表明内侧杏仁核具有性双形性，且此性双形性主要表现在后背亚区。将HRP注入一侧内侧视前区，在同侧内侧杏仁核各亚区内标记细胞的平均数及其占内侧杏仁核内标记细胞总平均数的百分比为：后背亚区为107.4个，占58％;后瓜亚区为42.1个，占21.2％;前背亚区为16.毛个，占8.8％;前腹亚区为13.6个，占6.7％;中背亚区为9.6个，占5.3％。进一步提示后背亚区可能是内侧杏仁核与性功能有关的主要功能部位。     

大鼠中枢神经内细胞色素氧化酶与逆行辣根过氧化物酶联合反应

向大鼠单侧尾壳核注射HRP后,用氯化钴—细胞色素氧化酶组织化学反应方法,证明脑干内红核、三叉神经中脑核及耳蜗神经核等显高CO活性神经元;丘脑板内核、黑质、中缝背核及中脑被盖核等神经元呈现HRP标记;蓝斑核内可同时观察到高CO活性和HRP标记两种神经元。实验结果说明此法有可能直接用于研究脑内高CO活性神经元与其它神经元之间的联系。     

大鼠中脑中央灰质向伏核的SP能和L-ENK能投射

<正> 本文应用HRP逆行追踪与免疫细胞化学相结合的双标技术研究了中脑中央灰质向伏核的SP能和L-ENK能投射。将HRP注入一侧伏核,然后将中脑切片分组后分别行HRP组织化学反应和免疫细胞化学反应,结果在中央灰质内分别观察到SP样阳性细胞,ENK样阳性细胞、HRP单标细胞以及SP-HRP和ENK-HRP二种双标细胞。SP-HRP和ENK-HRP双标细胞分别占HRP标记细胞总数的5％和2％。SP-HRP双标细胞主要位于中央灰质     

大鼠脑干内向杏仁中央核投射的神经元对胃肠道伤害性刺激的FOS表达

本文应用ＨＲＰ逆行追踪与ＦＯＳ免疫组化结合的方法，观察了脑干内向杏仁中央核投射的神经元对胃肠道伤害性刺激的ＦＯＳ表达。结果在脑干内见到ＦＯＳ样免疫反应阳性、ＨＲＰ标记和ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反应阳性的细胞，它们分布在延髓的孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构、脑桥臂旁核、中脑导水管周围灰质腹外侧区、中缝背核和被盖背侧核等区域．ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反应阳性细胞占ＨＲＰ标记细胞总数的３２．７％．脑干内检出ＦＯＳ／ＨＲＰ双重反应阳性细胞１４８４个，其中延髓占１９．４％，脑桥占７９．５％，中脑仅占１．１％。以上结果提示大鼠脑干内向杏仁中央核投射的神经元中约有１／３参与胃肠道伤害性刺激信息向Ｃｅ的传导，其中绝大多数是通过臂务核中继后投向杏仁中央核的。     

大鼠咬肌内P2X_3受体阳性神经纤维来自三叉神经节神经元

目的:观察咬肌内是否有表达P2X3受体的神经纤维,并追踪这些P2X3受体阳性神经纤维的来源。方法:将10只SD大鼠随机分为免疫组化组和HRP示踪组,每组5只。免疫组化组用于分别观察咬肌和三叉神经节(TG)内P2X3受体阳性纤维和神经元的分布;HRP示踪组用于观察将HRP注入咬肌后P2X3受体/HRP双标神经元在TG内的分布。结果:咬肌内有少量神经纤维表达P2X3受体;TG内P2X3受体阳性神经元的数量约占细胞总数的50.4%±1.3%;TG内有21.7%的HRP标记神经元表达P2X3受体,P2X3受体/HRP双标神经元的胞体主要定位于TG的外侧部。结论:P2X3受体可能参与咬肌疼痛信息向中枢的传递。     

下丘脑室旁核后叶加压素神经元向迷走神经复合体和脊髓的投射——HRP 逆行追踪和免疫组化结合法研究

本文报道用 HRP 逆行追踪和 PAP 免疫组织化学结合法研究了大鼠室旁核向迷走神经复合体和脊髓的投射及其化学性质。脊髓一侧注射 HRP 后,室旁核 HRP 标记细胞集中于小细胞尾侧区,以其内侧部,外侧部和背部最多。在脊髓各组中比较,胸段组出现的 HRP 标记细胞最多,腰段组次之,骶段组最少。迷走神经复合体注射 HRP 后,HRP 标记细胞的分布与脊髓注射后的分布相似,但标记细胞较稀疏。结果表明,室旁核(主要是小细胞尾侧区)发出下行纤维投射至迷走神经复合体和脊髓。室旁核 HRP 标记细胞中,有一些细胞呈后叶加压素免疫反应阳性。脊髓组双标细胞多位于 HRP 标记细胞的主要分布区,即内侧部、外侧部和背部。迷走神经复合体组双标细胞的分布与脊髓组的分布基本相同,仅双标细胞较稀少,约占脊髓组 HRP 标记细胞的19.2%,占迷走神经复合体组 HRP 标记细胞的20.3%。从而为室旁核后叶加压素神经元投射到迷走神经复合体和脊髓提供了直接证据。     

大鼠中缝背核接触脑脊液神经元化学性质的研究

用CB-HRP追踪与免疫细胞化学结合的方法,对大鼠中缝背核接触脑脊液神经元(简称触液神经元)的化学性质进行了研究.将CB-HRP注入第三脑室后,中缝背核内观察到CB-HRP标记细胞,标记细胞分布于中缝背核的背侧部和腹侧部.在CB-HRP与P物质或5-羟色胺免疫细胞化学结合的切片上,中缝背核内出现三种标记细胞:HRP单标细胞,P物质或5-羟色胺免疫反应阳性单标细胞,HRP/SP或HRP/5-HT双标细胞,双标细胞为中、小型梭形或圆形细胞.上述结果提示:中缝背核存在SP能和5-HT能触液神经元.     

猫外侧膝状体神经元HRP示踪结合Calbindin的免疫组织化学研究

目的 HRP示踪结合Calbindin双标猫外侧膝状体核(LGN)至视皮质的中继神经元.方法 在猫视皮质的17区多点微量注射30%HRP,逆行标记LGN至视皮质的中继神经元,先以金标抗HRP-抗孵育切片,用免疫金银法将HRP颗粒转化黑色银颗粒.然后用ABC法作Calbindin(CB)的免疫组化,试图双标记LGN的中继神经元.结果 HRP标记细胞与CB免疫阳性细胞清晰可辨,HRP标记细胞内为银染黑色颗粒,而CB免疫阳性细胞为染色均匀的棕色.猫LGN的A、A_1和C板层均有CB免疫阳性神经元的分布;HRP标记细胞分布于A和A_1板层.LGN内未见HRP和CB的双标记神经元.结论 LGN内含CB神经元可能不参与视觉信息的传导,而是与局部视觉信息的整合有关.     

杏仁核参与大鼠哮喘发作及其机制探讨

为探讨杏仁核是否参与大鼠哮喘发作及其机制,采用卵蛋白致敏哮喘大鼠模型,运用WGA-HRP逆行追踪与免疫组织化学染色相结合的双重标记方法,在光镜下观察向下丘脑室旁核(PVN)发出投射的杏仁核神经元内Fos蛋白的表达情况。结果显示:杏仁核内可观察到三种阳性细胞,即HRP逆标神经元、Fos阳性神经元和HRP/Fos双标神经元。Fos阳性细胞呈双侧分布,主要分布在杏仁核的内侧亚核(MeA)和中央亚核(CeA);HRP逆标神经元和HRP/Fos双标神经元分布在注射区同侧的内侧杏仁核,内侧杏仁核内HRP/Fos双标神经元占HRP单标神经元的33.55%。本研究结果提示,哮喘大鼠发作时,杏仁核、下丘脑室旁核的神经元兴奋,且杏仁核到下丘脑室旁核的直接投射可能参与了哮喘发作的调控。