RT／PCR法检测慢性丙型肝炎HCV—RNA

应用逆转录一多聚酶键反应（RT／PCR）方法，对8例慢性丙型肝炎血清进行了HCV－RNA检测，结果显示7例（87．5％）阳性。认为丙肝病毒（HCV）感染后，病毒血症的长期存在和肝内HCV的活跃复制，是导致任性丙型肝炎持续肝功能异常的主要原因。利用RT／PCR技术检测HCV-KNA，对慢性丙型肝炎患者病情及传染性的估计，指导临床治疗、预后判断等方面比抗一HCV检测更具意义。丙型肝炎病毒（HCV）在我国感染率较高，引起丙型肝炎（HC）后易慢性化．近年来随着HCV克隆成功，相继建立了一些HCV＄染标志的检测方法。资料表明［'J，目前…     

HCV RNA和抗-HCV联合检测的诊断意义

目的通过丙型肝炎病毒(HCV)与抗-HCV检测结果的比较,探讨两项检测对丙型肝炎诊断的价值。方法采用真空抽滤柱提取法提取HCVRNA,用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测HCVRNA的含量,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎抗体(抗-HCV)。结果 92份临床血清标本中87份抗-HCV阳性,阳性率为95%,有66份HCVRNA阳性,阳性率为72%,结果显示HCVRNA检出率显著低于抗-HCV(P<0.01)。抗-HCV光密度值(D值)高低与HCVRNA检出率有一定关系,高D值的标本HCVRNA检出率相对较高。结论抗-HCV阳性患者并不是都有病毒复制,HCVRNA才是病毒复制的直接指标。抗-HCVD值与HCVRNA检测结果有一定的关系。     

血清抗—Hcv与Hcv—RNA的关系比较

对160例门诊及住院肝炎患者采用ELISA法测抗—Hcv,并用逆转录套式聚合酶链反应检测血清Hcv—RNA。结果:160例肝炎患者中,120例Hcv—RNA阳性,即75％的患者存在病毒血症,115例抗—Hcv阳性患者中97例Hcv—RNA阳性,阳性率为84.3％。Hcv—RNA检出率与抗—Hcv的结果有一定关系。     

116例血清中HCV RNA定量检测与抗-HCV结果对比分析

目的探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)和HCVRNA定量检测阳性结果对丙型肝炎诊断治疗的临床意义。方法采用第三代ELISA夹心法检测抗-HCV，荧光定量PCR法检测HCVRNA检测116例血清抗-HCV或HCVRNA阳性标本。结果在116例标本中，抗-HCV( )／HCVRNA( )双阳性者83例，抗-HCV( )／HCVRNA(-)者12例，抗-HCV(-)／HCVRNA( )者21例)。两者阳性符合率为71．6％(83／116)。在HCVRNA定量阳性结果中，则有104例为HCV感染，其中抗-HCV的阳性检出率为80．0％(83／104)。随着血清HCVRNA滴度的增高，抗-HCV的阳性率也增加，两者变化趋势一致。结论抗-HCV检测，HCVRNA荧光定量PCR法检测均有一定的局限性，同时应用抗-HCV和HCVRNA检测对临床上完善HCV诊断、评价抗病毒疗效更为准确。     

肝病患者血清抗—HCV的检测

采用ELISA法检测103例各类肝病患者及118名健康人的抗-HCV,急性病毒性肝炎的阳性率11.1％,慢性肝炎为25.8％、肝硬化为20％,输血后肝炎为84.6％。抗-HCV阳性者36例中22例(61.1％)同时感染HBV。合并HCV感染者,HBV的复制率较低。     

HCV慢性患者干扰素治疗前后血清HCV RNA水平的变化

目的 探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因含量与干扰素疗效的关系。方法 采用“ＥＬＩＳＡ模式”化的ＨＣＶ－ＲＮＡ聚合酶链反应－杂交定量（ＰＣＲ－Ｈｙｂ）检测了１９例慢性丙型肝炎患者α－干扰素治疗前后的血清中的ＨＣＶ－ＲＮＡ的水平。结果 ３ＭＵ、６ＭＵα－干扰素治疗,分别是１１例、８例,完全反应者分别占７２．５％、７５％,部分及无效反应者分别占２７．５％、２５％（Ｐ〉０．０５）。两种剂量的完全反应者治疗前     

定量聚合酶链反应检测血清中HCV RNA^＋

目的：探讨定量聚合酶链反应用于检测丙型肝炎病毒HCV含量变化的意义。方法：用信号引物能量转移定量聚合酶链反应（PCR），检测68例丙型肝炎患者血清HCVRNA水平。结果：其HCVRNA含量范围103～1011拷贝／ml，急性丙肝106.83±3.72拷贝／ml，慢性丙肝106.54±2.67拷贝／ml，而无症状携带者104.95±2.16拷贝／ml。血清HCVRNA水平同ALT水平呈相关。结论：丙肝病毒感染后HCV复制水平与肝损害相关，定量检测HCVRNA的水平变化是预测和评价干扰素疗效的重要指标。     

151例血清抗-HCV阳性患者的HCV RNA检测分析

目的:探讨丙型肝炎抗体(抗-HCV)和丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的关系.方法:研究对间接ELISA法检测抗-HCV阳性患者的血清进行HCV RNA检测(采用RT-PCR法).结果:151例血清抗-HCV阳性患者有85例HCV RNA阳性,阳性率为56.2%.另外,还观察了40例抗HCV阳性病人的双份血清,急性期第一份血清ALT升高、HCV RNA为阳性;经抗病毒治疗后的第二份血清,部分病人ALT复常,HCV RNA阴转,另外部分病人反复ALT异常,HCV RNA则始终为阳性.结论:HCV RNA能鉴别活动性HCV感染及非活动性感染,可为抗病毒药物疗效的评价和临床合理用药提供依据.     

同步检测抗—HCV和HCV RNA提高HCV感染的检出率

探讨同步检测抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ可不提高ＨＣＶ感染的检出率。方法 对２７５例各类肝病患者用第二代试剂盒和逆转录聚合酶链反应分别检测血清抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 抗－ＨＣＶ阳性率为２８．４５％，ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为３３．５３％。全组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ总检出率为３２．７３％。     

丙型肝炎患者HCV RNA与转氨酶的关系

目的了解丙型肝炎病毒核糖核酸（HCVRNA）与天冬氨酸转移酶（AST）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）之间的关系。方法对119例（自2008年1月～2009年5月）来自湖南省人民医院住院和门诊丙型肝炎患者进行HCVRNA、抗-HCV及AST、ALT检测。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测标本中的HCVRNA,同时采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测抗-HCV,用全自动生化检测仪测定AST、ALT水平。分析分别在HCVRNA大于临界值组和HCVRNA小于临界值组的病人血清中转氨酶与其的关系。结果本研究的119例标本中有116例抗-HCV均为阳性,其中HCVRNA高于上限值（≥1000copies/mL）87例,二都有很好的相关性;共有70例存在ALT异常,73例存在AST异常,ALT、AST水平与HCVRNA含量对数值无显著相关性,但ALT、AST阳性率与HCVRNA大于临界值有一定的吻合关系。结论HCVRNA是反映HCV复制的可靠指标。结合AST、ALT结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的损伤情况。RT-PCR法检测HCVRNA具有非常好的临床应用价值。     

丙型肝炎病毒抗体与丙型肝炎病毒核糖核酸的关系

目的:研究丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)与丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的关系。方法:对38例抗-HCV阳性的丙型肝炎(HC)病人,用酶标仪测血清抗-HCVOD值,同时用逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-nesled-PCR)检测血清HCVRNA。结果:38例抗-HCV阳性的HC病人中23例HCV RNA阳性,即60％的HC病人存在病毒血症;在不同的抗-HCV OD值范围内HCV RNA检出率不等。HCV RNA检出率随抗-HCV OD值增高而增加(P<0.01)。结论:①血清抗-HCV与血清HCV RNA之间有较好的一致性;②抗-HCV OD检测对HC的诊断及判断HC病人是否存在病毒血症有一定价值。     

抗-HCV与HCV-RNA检测结果不一致原因分析

目的 :探讨抗 HCV和HCV RNA结果不一致的原因。方法 :应用ELISA法和FQ PCR法同步检测 380例患者血清中抗 HCV和HCV RNA。结果 :在 2 80例抗 HCV阳性中有 10 6例HCV RNA为阴性 ,有 3例抗 HCV阴性患者HCV RNA却为阳性。结论 :同步检测抗 HCV和HCV RNA可提高肝病患者HCV感染的检出率 ,为其诊断和治疗提供指导。     

丙型肝炎病毒RNA含量与抗-HCV及ALT的关系探讨

目的 了解丙型肝炎病毒核糖核酸（HCV RNA）与抗丙肝病毒抗体（抗-HCV）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）的关系。方法 83份确诊为丙肝的住院患者样本作观察组,95份健康体检人群样本作对照组,用荧光定量逆转录聚合酶反应（FQ-RT-PCR）检测这两组样本的HCV RNA含量,并同时采用ELISA法检测抗-HCV,用全自动生化检测仪测定ALT水平。结果 观察组HCV RNA含量高于80copy／ml者67份,抗-HCV阳性者64份．经进一步相关性分析,两者有很好的相关性（r=0．587,P=0．002）;83份病例中有58份ALT异常,其异常率随HCV RNA含量的升高而增加。经统计学分析,ALT异常例数和正常例数差异有显著性（P〈0．01）;ALT水平和HCV RNA含量无相关性（r=0．175,P=0．095）;而ALT异常率与HCV RNA含量呈正相关（r=0．903,P=0．036）。结论 HCV RNA含量与抗-HCV同时检测可提高临床对丙型肝炎的诊断。HCV RNA是反映HCV复制的可靠指标,结合ALT的结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的炎症状态。FQ-RT-PCR法检测HCV RNA具有非常好的临床应用价值。     

HCV及其与HBV重叠感染患者血清HCVRNA检测的临床意义

目的探讨HCV及其与HBV重叠感染患者血清HCV RNA检测的临床意义。方法收集我院HCV感染及其与HBV重叠患者血清标本共179例,分为慢性丙型肝炎组（n=101）、肝硬化组（n=45）和肝癌组（n=33）。采用ELISA法检测血清抗HCV,用荧光定量PCR检测HCV RNA;对重叠感染HCV和HBV的31例患者同时检测HBVDNA。结果 179例患者抗HCV的总阳性率为97.8%,高于HCV RNA的阳性率（69.8%）（P〈0.01）。肝硬化组和肝癌组HCV RNA的阳性率分别为82.2%和84.8%,高于慢性丙型肝炎组阳性率64.4%（P〈0.05）。HCV与HBV重叠感染组的HCV RNA的阳性率为48.4%,低于单纯HCV感染组的HCV RNA阳性率（71.6%）（P〈0.05）。HCV与HBV重叠感染患者的HBV DNA阳性率为35.5%,也显著低于单纯HBV感染患者阳性率（76.7%）（P〈0.01）。HCVRNA阳性组ALT异常率（60.8%）高于HCV RNA阴性组（35.2%）（P〈0.05）。结论对HCV感染相关的不同疾病患者联合检测抗HCV、HCV RNA和ALT,对于HCV和HBV重叠感染者同时检测HBV DNA,有利于疾病的明确诊断、病情观察及预后判断。     

肺癌与人类巨细胞病毒感染关系的初步研究

目的：探讨肺癌与人类巨细胞病毒（HCMV）感染的关系。方法：对88例肺癌及117例肺非癌患者，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清HCMV－IgG，IgM抗体，用聚合酶链反应（PCR）法检测尿HCMV－DNA。同时检测其中64例肺癌及67例肺非癌患者的病灶局部冲洗或支气管肺泡灌洗回收液HCMV－DNA。对肺癌组中抗癌化疗的患者于每一化疗周期复查血清HCMV－IgM，尿HCMV－DNA。结果：肺癌组血清HCMV－IgM阳性率26．1％，病灶局部冲洗或支气管肺泡灌洗回收液HCMV－DNA阳性率26．6％，均显著高于肺非癌组（P＜0．01）；血清HCMV－IgG及尿HCMV－DNA阳性率两组未见明显差别。42例肺癌到化疗第二周期时，血清HCMV－IgM16例由阴性转阳性，尿HCMV－DNA6例转阳性。结论：肺病与HCMV感染有统计学上的相关性；抗癌化疗使肺癌患者HCMV活动性感染明显增多，值得重视。     

二重RT-FCR同时测定HGV与HCV RNA方法学研究

本文对二重RT-PCR同时测定HGV与HCV RNA的反应条件进行了最佳化研究,发现在用于HGV扩增的三组引物中,NS5b区的L与S二组引物较5'NCR区的N组引物有更高的检测敏感度(P<0.01)。不同的样本贮存对HGV与HCV RNA检测结果影响较大,将逆转录与第一次扩增分开进行可使测定敏感度提高约100倍。本法在同一反应体系中可同时检测HGV与HCV RNA,减轻了实验人员的操作强度,可降低测定费用近50％。     

RELATIONSHIP BETWEEN LOAD OF HCV RNA AND ANTIBODIES AGAINST REGIONAL SPECIFIC PROTEINS OF HCV IN SERUM

Objective To study whether HCV RNA load is related to the antibodies against regional specific proteins of HCV. Methods 69 serum samples were detected for HCV RNA load by Real time fluorescent PCR. Anti-HCV and the antibodies against regional specific proteins of HCV were detected by EL1SA. Results The positive rates of anti-C and anti-NS3 were remarkably higher than those of anti-NS4 and anti-NS5. We divided the serum samples into two groups on the basis of load of HCV RNA, there was no statistical significance between A and B group in the positive rate as well as the antibody reactivity of HCV anti-C, anti-NS3 , anti-NS4 and anti-NS5. From the distribution of different combined patterns, we could conclude that the pattern IV was superior to others in both of the two groups. Conclusion There are remarkable differences in different antibodies against the regional specific proteins of HCV. The positive rates and the antibody reactivity of anti-C, anti-NS3, anti-NS4, anti-NS5 are not related to the HCV viral load. The E1A-3 which conclude C, NS3, NS4, NS5 proteins could enhance the sensitivity of detection HCV.     

HCV感染的不同临床型HCV核心非结构区抗体检测结果和稳定性研究

目的:研究HCV感染的不同临床型HCV核心区、非结构区抗体检测结果及其稳定性。方法:采用酶联免疫试验(EIA)检测不同功能区抗体,聚合酶链反应(PCR)测定其逆转录病毒。结果C区C11与C22抗体检测结果各临床型均具良好的一致性;NS3区C7区与C33抗体检测结果差异较大。单片段C区C11抗体与Ns3区抗体C7抗体具有早期检测的价值,各临床型反应性较强(S／CO值较高);且二者互补性较强,尤其HCV相关肝癌。HCV抗体检测不能见出所有HCV感染者,抗HCV阳性者可部分或大部分RT—PCR阳性;RT—PCR能检出HCV阴性标本,且均为急性感染和无症状ALT正常者。HCV相关肝癌HCV抗体和RT—PCR反应性较低。单片段C11抗体极易缺失或(和)变异,阳性者均出现病毒血症中;NS3抗体单独阳性多见,却少与病毒血症共存;NS4．5抗体亦可单独阳性。结论:C、NS3抗体出现较早,反应性强,检出率高,具有早期诊断价值。NS4、Ns5抗体出现较晚,在慢性感染时检出率较高,HCV抗体检测加入NS4、NS5抗体可提高其检测水平。RT—PCR对确诊HCV感染具有重要意义。     

定量PCR检测血清HBV-DNA与血清HBV标志物关系的研究

目的 :探讨定量PCR检测血清HBV -DNA与血清HBV标志物之间的关系及其临床意义。方法 :35 2例血清标本运用荧光定量PCR检测血清HBV -DNA及放射免疫法 (ELISA)检测血清HBV标志物。结果 :经荧光定量PCR检测 94例HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本 ,其血清HBV -DNA全部阳性 ,DNA测值范围 4 .8× 10 5～ 2 .8× 10 8copy/ml;81例HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性的标本 ,其血清HBV -DNA4 3例阳性(阳性率为 5 3% ) ,DNA测值范围 1.0× 10 4～ 1.4× 10 7copy/ml;39例HBsAg、HBcAb阳性的标本 ,其血清HBV-DNA2 4例阳性 (阳性率为 6 1% ) ,DNA测值范围 3.5× 10 3 ～ 1.6× 10 7copy/ml;10 0例HBVM全阴性的标本 ,血清HBV -DNA全部阴性。结论 :荧光定量PCR检测血清HBV -DNA准确灵敏 ,可反映乙肝患者病程变化 ,对于乙肝临床诊断、治疗方案的选择、疗效观察及预后判断有极其重要的作用。