高体积分数氧诱导幼鼠肺组织细胞凋亡情况及p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导机制

目的 探讨幼鼠高体积分数氧(高氧)暴露后肺组织细胞凋亡及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)对细胞凋亡的调控作用.方法 幼年Wiser大鼠40只随机分为空气对照组、高氧暴露组(高氧暴露第1、2、3天)和p38MAPK干预组,每组各8只.空气对照组大鼠置于同一室内空气中;高氧暴露组大鼠置于氧体积分数为900 mL/L的有机玻璃氧仓中;p38MAPK干预组大鼠尾静脉注射p38MAPK的抑制剂SB203580 2 h后置于高氧仓中3 d.应用Western blot法和末端标记法分别检测p38MAPK在大鼠肺组织中的表达及肺组织的细胞凋亡指数,并同时观察SB203580对肺组织细胞凋亡的影响.应用SPSS 13.0统计软件行单因素方差分析.结果 高氧暴露第1、2天组大鼠肺组织细胞凋亡指数与空气对照组比较无明显差异,高氧第3天组大鼠肺组织细胞凋亡指数较空气对照组明显增加(P<0.05),发生凋亡的主要靶细胞为肺泡、支气管上皮及血管内皮细胞.高氧暴露第1天,肺组织p38MAPK活性迅速升高,于第2天达高峰,高氧暴露第3天p38 MAPK活性有所下降,但仍高于空气对照组(Pa<0.05).使用SB203580干预后,肺组织p38MAPK活性被抑制,同时肺组织细胞凋亡指数降低.结论 高氧暴露可诱导肺组织发生细胞凋亡;p38MAPK参与了高氧诱导的肺组织细胞凋亡的调控,可能起促凋亡作用.     

丝裂原活化蛋白激酶在高氧肺损伤中的作用

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)是上世纪90年代发现的一类细胞内信号转导通路,它在细胞的生长、发育、分化和凋亡等一系列生理病理过程中扮演重要角色。高氧肺损伤是目前临床上高氧治疗后较常见的并发症,其发病机制尚不清楚。p38MAPK在高氧肺损伤及其修复过程中与其他多种因素相互影响,对疾病的发生、发展及转归起着重要的调控作用。     

p38丝裂素活化蛋白激酶在新生大鼠高氧肺损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）在新生大鼠高氧肺损伤中的表达及其特异性抑制剂SB203580，对其产生保护作用的机制。方法 160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤＋SB203580组和高氧肺损伤＋生理盐水组，建立模型。作用12、24、72h和1周后，分别处死大鼠。取右上肺进行肺组织病理学检查，取右下肺进行肺湿／干重比值（W／D）测定，取左肺以Western免疫印迹法检测肺组织中p38MAPK的表达，以酶联免疫吸附试验检测肺组织中TGF-β1的含量。结果 72h时，高氧肺损伤组和高氧肺损伤＋生理盐水组p38MAPK呈强阳性表达；在这两组中，肺组织TGF-β1浓度随时间延长呈持续上升趋势，在各时相点均明显高于空气对照组和高氧肺损伤＋SB203580组（P均〈0．01）。结论 p38MAPK参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程，SB203580能够通过阻断p38MAPK表达，进而抑制TGF-β1表达来减轻这种损伤。     

p38丝裂素活化蛋白激酶在新生大鼠高氧肺损伤中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)在新生大鼠高氧肺损伤中的表达及其特异性抑制剂SB203580,对其产生保护作用的机制。方法160只新生大鼠随机分为空气对照组、高氧肺损伤组、高氧肺损伤 SB203580组和高氧肺损伤 生理盐水组,建立模型。作用12、24、72h和1周后,分别处死大鼠。取右上肺进行肺组织病理学检查,取右下肺进行肺湿/干重比值(W/D)测定,取左肺以Western免疫印迹法检测肺组织中p38MAPK的表达,以酶联免疫吸附试验检测肺组织中TGF-β1的含量。结果72h时,高氧肺损伤组和高氧肺损伤 生理盐水组p38MAPK呈强阳性表达;在这两组中,肺组织TGF-β1浓度随时间延长呈持续上升趋势,在各时相点均明显高于空气对照组和高氧肺损伤 SB203580组(P均<0.01)。结论p38MAPK参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程,SB203580能够通过阻断p38MAPK表达,进而抑制TGF-β1表达来减轻这种损伤。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与高体积分数氧肺损伤

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)广泛存在于真核细胞体内,介导细胞外信号到细胞内引起细胞反应.p38 MAPK通过磷酸化转录因子引起相关基因转录,调控高体积分数氧后细胞凋亡、肺内炎性反应过程及肺纤维化,参与高体积分数氧肺损伤的发生发展.在信号通路水平阻断和调控p38 MAPK的表达将成为防治高体积分数氧肺损伤的新途径.     

新生大鼠高氧肺损伤P38活化和MMP-2 mRNA表达的研究

目的：观察高氧肺损伤新生大鼠肺组织中P38-丝裂原活化蛋白激酶（P38）的活化与基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA表达水平的变化,并探讨P38的活化对MMP-2 mRNA表达的影响。方法：将36只新生Sprague-Dawley大鼠随机分为空气组、高氧组和SB203580干预组,每组12只。建立高氧肺损伤动物模型,处理组给予相应的干预。各组分别于第3天和第7天处死大鼠,常规苏木精-伊红染色,观察肺组织病理学变化;Western blot检测肺组织P38蛋白的活化水平,RT-PCR检测肺组织MMP-2 mRNA表达的变化。结果：高氧组大鼠肺组织P38的活化和MMP-2 mRNA表达水平较空气组和干预组明显增强,差异有统计学意义（P<0.01）。结论：P38在新生大鼠高氧肺损伤中活化增强,可能参与MMP-2 mRNA表达的调控。     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与高氧肺损伤的研究进展

目的丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是信号由细胞表面传递到细胞内部的重要传递者,近来研究发现在高氧肺损伤中MAPKs既有介导细胞死亡的作用,又有抗感染、抑制凋亡、保护细胞、促进细胞增殖及肺损伤修复作用。本文就这方面的研究进展作一概述。     

细胞因子在高氧肺损伤中表达的研究

目的 监测高氧肺损伤大鼠肺组织中细胞因子表达的变化,探讨其在高氧肺损伤中的作用.方法 吸入≥85%氧气建立高氧肺损伤大鼠模型,于给氧后1、3、6、9、12 d留肺组织标本,HE染色观察肺组织病理形态学改变;并通过免疫组织化学法检测细胞因子包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素1(IL-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达.结果随给氧时间延长高氧组肺泡腔内出现炎性细胞浸润、肺泡腔增大,肺泡间隔较薄,肺泡数量减少.高氧组肺泡上皮细胞、血管内皮细胞、支气管上皮细胞内在1、3、6、9、12 d上述细胞因子均呈阳性表达,其中TNF-α和IL-1于给氧后3 d表达明显增强,这种高表达持续到给氧后第6天;而IL-8及ICAM-1在给氧第6天表达最强,其表达明显增高时间略迟于TNF-α和IL-1.显微图像分析表明四种细胞因子在高氧组各个时间点表达不同,高氧组1 d表达均略高于对照组,但差异没有统计学意义(P>0.05).从给氧第3d起高氧组中四种细胞因子的表达均明显高于对照组(P<0.05).结论 TNF-α、IL-1、IL-8及ICAM-1在高氧肺损伤的病理过程中可能发挥着重要作用.     

Notch受体在早产鼠高氧肺损伤中的动态表达

目的检测Notch受体、AQP5、SP-C在高氧暴露下早产SD大鼠肺的表达,探讨Notch在高氧肺损伤中的作用机制。方法SD早产鼠80只随机分为对照组和高氧组,于1、71、42、1 d行肺组织病理学检查;免疫组织化学法检测Notch1、Notch3;RT-PCR检测Notch1、Notch3、AQP5S、P-C mRNA;Western blot检测AQP5、SP-C。结果病理学检查显示,高氧组肺发育滞后,Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)分化抑制。免疫组织化学法检测结果显示,高氧组各时间点(除7 d)肺组织Notch1表达低于对照组(P<0.05,0.01),Notch3上调(P<0.01)。Notch1、Notch3 mRNA改变类似蛋白水平。高氧组AQP5,SP-C mRNA及蛋白较对照组显著下降。结论85%高氧导致早产鼠肺Notch受体表达异常。Notch信号可能通过调控转分化参与高氧肺损伤。     

肥大细胞在高氧肺损伤中的促纤维化作用

支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是一种慢性肺部疾病,通常发生于需要机械通气的早产儿,病死率高,目前缺乏有效的防治方法。经典型BPD的主要病理特征为严重的气道损伤、肺实质炎症、鳞状上皮化生及肺纤维化,虽然其发病机制尚未完全明确,但在早产儿纤维化肺中可观察到大量肥大细胞聚集,研究认为高氧刺激下肥大细胞脱颗粒释放的一系列炎症介质对BPD有重要影响。该文旨在综述肥大细胞在BPD中的促纤维化作用及机制,以期为BPD的治疗提供新的思路。     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织中ERK1/2变化的研究

目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）1/2在高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织中的表达及作用。方法：将48 只新生Wistar大鼠随机分为高氧组和对照组,每组 24 只。高氧组生后即置于氧箱中,维持氧浓度为 0.90,诱导CLD;对照组生后置于空气中。于生后3 d、7 d和14 d采集肺组织标本,应用免疫组化、Western blot及Real-time PCR方法检测ERK1/2蛋白及mRNA表达,同时测定肺组织纤维化评分。结果：免疫组化及Western blot结果显示7 d、14 d时高氧组肺组织p-ERK1/2蛋白的表达均明显高于同时间点对照组（P<0.01）。Western blot结果同时显示各组间ERK1/2总蛋白的表达差异无统计学意义。Real-time PCR结果表明各组间ERK1、ERK2 mRNA水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：新生大鼠持续吸入高氧后,ERK1/2蛋白磷酸化活化,参与了高氧致CLD肺纤维化的形成过程。     

新生大鼠高氧肺损伤血管内皮生长因子蛋白及其mRNA表达变化研究

目的：血管内皮生长因子（VEGF）参与肺的发育和损伤修复,VEGF具有促进肺泡和肺血管增殖以及预防新生儿支气管肺发育不良（BPD）的作用。该研究的目的是探讨新生大鼠高氧肺损伤后肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达的变化。方法：新生Sprague-Dawley大鼠48只随机分为高氧实验组和空气对照组,高氧实验组吸入95%以上高氧建立高氧肺损伤模型。分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）检测新生大鼠3 d,7 d,14 d肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达变化。结果：空气对照组新生大鼠生后随着肺发育,肺组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达逐渐增加。高氧实验组新生鼠吸入高氧3 d,肺VEGF蛋白表达出现降低,在7 d,14 d明显降低与对照组比较差异有显著性（VEGF 蛋白:12.67±3.82 vs 7.79±5.23; 15.10±8.91 vs 5.85±3.37, 均P<0.01）;高氧实验组VEGF mRNA表达在3 d,7 d,14 d均明显低于对照组（VEGF mRNA: 1.19±0.63 vs 0.78±0.22, 1.52±0.47 vs 0.53±0.18, 1.89±0.81 vs 0.48±0.12, 均P<0.01）。结论：VEGF能促进新生大鼠肺发育,VEGF蛋白及VEGF mRNA表达与新生大鼠肺发育有密切关系。高氧可抑制VEGF蛋白及VEGF mRNA在新生大鼠肺内的表达,VEGF在新生鼠肺发育和高氧肺损伤发病机制中起重要作用。     

HoxB5基因在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的探讨高氧致慢性肺疾病(CLD)早产鼠肺组织HoxB5基因表达规律及其对肺发育的影响。方法将80只早产鼠随机分为实验组及对照组,采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,测定肺组织HoxB5 mRNA水平,并同时观察放射状肺泡计数(RAC)的变化。结果生后1、3d,两组HoxB5 mRNA水平及RAC差异无统计学意义(P>0.05),7d时两者均开始降低(P<0.05),14d继续下降,21d降至最低(P<0.01),且肺组织HoxB5 mRNA水平及RAC呈明显正相关(P<0.01)。结论暴露高氧中早产鼠肺组织HoxB5基因呈低表达状态,其表达水平与肺泡发育障碍程度相一致。     

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的 研究硫氧还蛋白(Trx)及其还原酶(TR)在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义.方法 早产新生SD大鼠,生后第一天随机分为空气组和高氧组.每组64只.两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx和TR mRNA表达;同时采用HE染色观察肺组织病理学变化,并进行辐射状肺泡计数(RAC).结果 病理学观察显示:与对照组比较,高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后,同时RAC值亦较空气组显著减少(P＜0.05).高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强(P＜0.05),且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰.结论 高氧上调肺组织Trx、TR表达;肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用.     

HoxB5基因在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的 探讨高氧致慢性肺疾病（CLD）早产鼠肺组织HoxB5基因表达规律及其对肺发育的影响。方法 将80只早产鼠随机分为实验组及对照组,采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）等技术,测定肺组织HoxB5 mRNA水平,并同时观察放射状肺泡计数（RAC）的变化。结果 生后1、3d,两组HoxB5 mRNA水平及RAC差异无统计学意义（P〉0.05）,7d时两者均开始降低（P〈0.05）,14d继续下降,21d降至最低（P〈0.01）,且肺组织HoxB5 mRNA水平及RAC呈明显正相关（P〈0.01）。结论 暴露高氧中早产鼠肺组织HoxB5基因呈低表达状态,其表达水平与肺泡发育障碍程度相一致。     

高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织CDK4 p21的表达及意义

目的：早产儿慢性肺疾病（CLD）的发病机制目前研究还不十分清楚,但CLD的最终病理变化与肺细胞增殖有关。该文采用高氧诱导早产鼠CLD模型为对象,探讨CDK4和p21基因动态表达与肺细胞增殖调控的关系。方法：高浓度氧致早产鼠CLD模型（实验组）和正常对照组各40例为研究对象,每组分别于实验后的1,3,7,14和21 d随机选取8只大鼠处死, 取出肺组织,常规制成5 μm切片。检测观察：①肺组织形态学;②肺组织纤维化评分;③采用免疫组化检测肺组织内PCNA表达;④采用原位杂交检测肺组织CDK4 mRNA和p21 mRNA的表达。结果：两组肺组织细胞PCNA指数：与对照组比较,实验组1 d,3 d PCNA表达均减弱（P﹤0.05）,7 d开始表达增强（P＜0.01）, 14 d和21 d明显高于对照组（P＜0.01）。两组肺组织细胞CDK4 mRNA表达强度： 从7 d开始实验组高于对照组（P﹤0.05）, 14 d,21 d明显高于对照组（P﹤0.01）。两组肺组织细胞p21 mRNA表达强度：实验组1 d,3 d表达明显高于对照组（P﹤0.01）, 7 d 后持续下降, 但也高于对照组（P﹤0.05）。7~21 d肺组织细胞CDK4 mRNA,p21 mRNA 表达分别与PCNA呈显著正、负相关（r分别为0.83和-0.81,P﹤0.05）。结论：高氧可诱导早产鼠肺细胞增殖。肺组织细胞CDK4基因的过度表达、p21基因的表达下降,可能是高氧诱导肺细胞增殖的机制之一。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：595-600］     

维甲酸下调结缔组织生长因子表达减轻新生大鼠高氧肺损伤的研究

目的：探讨维甲酸（RA）对高氧肺损伤保护作用的机制。方法：90 只Sprague Dawley新生鼠随机平分为空气组、高氧组和高氧+RA 组。高氧组、高氧+RA 组置于 85% 氧浓度的氧箱中,高氧+RA 组每日腹腔注射RA 500 μg/kg。分别于实验第 4天、7天、14天行开胸术取新生鼠肺组织,苏木精-伊红染色光镜下行辐射状肺泡计数,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组化检测肺组织结缔组织生长因子（CTGF）表达。结果：与空气组相比,高氧组和高氧+RA 组肺组织随氧暴露时间延长,出现炎性细胞浸润,肺泡结构紊乱,肺泡数量减少,肺间隔增厚,其中高氧+RA 组病理改变明显轻于高氧组;在第7天和第14天,高氧组和高氧+RA组肺组织 CTGF 的 mRNA 和蛋白表达比空气组增加（P＜0.05）;且高氧+RA组中 CTGF 的 mRNA 和蛋白表达在第 14 d 比高氧组减少（P＜0.05）。结论：高氧暴露下新生鼠肺组织 CTGF 表达增加,RA 保护高氧肺损伤可能是通过下调 CTGF 表达。