柠檬苦素对人肝癌细胞SMMC-7721的体外抑制作用

目的:探讨柠檬苦素(limonin)对人肝癌细胞株SMMC-7721的体外抑制作用。方法:采用四唑盐(MTT)比色法观察不同浓度柠檬苦素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响;绘制细胞株SMMC-7721的生长曲线观察柠檬苦素对其增殖的影响。结果:MTT结果显示,不同浓度柠檬苦素对SMMC-7721细胞生长均有一定抑制作用,且除1.25μg.mL-1浓度外,同一时间各浓度组与对照组相比均有统计学差异(P<0.05);柠檬苦素浓度为1.25-80μg.mL-1,对SMMC-7721细胞48小时的抑制率为3.86%-71.06%,且48小时IC50值为24.42±5.27(19.15?29.69)μg.mL-1;生长曲线结果提示,柠檬苦素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论:柠檬苦素对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖具有抑制作用。     

氧化白藜芦醇在体外抑制人肝癌细胞株增殖和迁移的实验研究

目的:研究氧化白藜芦醇对体外培养人肝癌细胞QGY-7701、SMMC-7721增殖和迁移能力的影响。方法:采用MTT法测定氧化白藜芦醇抑制肝癌细胞QGY-7701、SMMC-7721生长的IC50;采用Transwell法测定经不同浓度氧化白藜芦醇(25μM、50μM和100μM)以及白藜芦醇50μM与细胞共培养24h后细胞的迁移率。结果:MTT实验结果显示,氧化白藜芦醇抑制QGY-7701和SMMC-7721细胞的IC50值分别为100.37±21.97μM和74.39±9.30μM。Transwell实验结果显示,经25μM、50μM、100μM氧化白藜芦醇和白藜芦醇50μM处理24h后,各实验组细胞迁移率分别是74.96±2.85%、60.26±9.25%、38.58±8.69%和46.80±8.43%。且与对照组比较有显著性差异(P0.05),氧化白藜芦醇浓度越高,细胞迁移率越低。结论:氧化白藜芦醇具有抑制体外培养人肝癌细胞QGY-7701、SMMC-7721的细胞增殖作用;可显著抑制肝癌细胞QGY-7701、SMMC-7721在体外培养条件下的迁移能力,其抑制能力呈浓度依赖性。     

三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨

目的:观察三氧化二砷对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法: 应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402细胞生长的抑制作用,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果: 三氧化二砷浓度为0.50 μmol/L、作用时间为24 h可显著抑制肝癌细胞系BEL-7402的生长,抑制作用呈时间、剂量依赖性;对SMMC-7721细胞,三氧化二砷浓度为2.00 μmol/L、作用时间为24 h才出现抑制细胞生长作用,二者的生长抑制率存在显著差异,0.25-2.00 μmol/L As₂O₃作用72 h后,BEL-7402细胞的生长抑制率均高于SMMC-7721细胞(P＜0.05)。检测SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH含量分别为(50.8±5.2)μmol/g protein和(18.7±1.4)μmol/g protein,存在明显差异。 结论:三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402的生长存在显著的差异;BEL-7402细胞对三氧化二砷非常敏感性,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低,细胞的氧化还原解毒系统不足有关。     

抗人DR5单抗与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721协同杀伤效应

目的：探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用，及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法：常规培养肝癌细胞SMMC-7721，流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化；MTT法检测细胞毒性作用；流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果：（1）mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡，在1.89μg／ml浓度下可杀伤36％的细胞，增加mDRA-6浓度，凋亡作用无明显增加；（2）SMMC-7721细胞对阿霉素敏感，存在浓度依赖性；（3）阿霉紊与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用，2μg／ml的mDRA-6与40ng/ml的阿霉素联合杀伤印％SMMC-7721，Hoechst 33258染色和AnnexinV／PI染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的。结论：mDRA-6能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡，阿霉素与mDRA-6联合具有协同作用。     

shRNA下调Paxillin表达对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的采用RNA干扰技术转染shRNA下调SMMC-7721肝癌细胞中Paxillin的表达,探讨Paxillin下调对SMMC-7721细胞迁移、侵袭力的影响。方法采用Paxillin shRNA转染肝癌细胞株SMMC-7721,分别设未处理SMMC-7721肝癌细胞组(未处理组)、shRNA Paxillin阴性组(对照组)和shRNA Paxillin组(实验组)。以GAPDH为内参,采用qRT-PCR、Western blot、ELISA法分别检测各组SMMC-7721细胞中Paxillin与FAK的表达;筛选出稳定转染Paxillin shRNA的肝癌细胞株,采用MTT、Transwell侵袭小室法分别检测各组细胞的增殖情况和侵袭力差异。结果 qRT-PCR和ELISA结果均显示Paxillin表达明显下调(P0.05),FAK表达各组间差异无显著性(P0.05);Western blot法检测结果显示实验组Paxillin的相对表达量明显低于未处理组和对照组;成功构建Paxillin稳定表达的SMMC-7721肝癌细胞株;MTT细胞增殖与Transwell细胞侵袭力检测显示Paxillin下调肝癌细胞的增殖、侵袭能力明显低于未处理组和对照组(P0.05)。结论 shRNA干扰技术可以下调Paxillin的表达;Paxillin表达下调抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖、侵袭能力;Paxillin有望成为肝癌复发、转移预测和基因治疗的新靶点。     

蜂毒肽诱导人肝癌细胞系SMMC-7721程序性坏死

目的 探讨蜂毒肽(MLT)对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤作用及可能机制.方法 采用MTT法检测不同浓度蜂毒肽对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤及程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对蜂毒肽杀伤SMMC-7721细胞的抑制作用.Hoechst 33342及PI双染色观察细胞程序性坏死的发生,流式细胞术检测...     

刺梨提取物的体外抗肿瘤作用

目的：观察刺梨提取物(CL)体外抗肿瘤作用。方法：采用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2-5-二苯基四氮唑(3-[4-5-dimetyltiazol-2-y1]-2,5-dipenyltetrazolium bromide,MTT)检测法测定CL对子宫内膜癌细胞和人肝癌SMMC7721细胞的细胞毒性作用．按台盼蓝排染法计数在不同浓度药物作用下．不同时间点的活细胞数．绘制子宫内膜癌细胞和人肝癌SMMC7721细胞的生长曲线。结果：MTT法检测显示,CL100μg/ml对子宫内膜癌在48、72、96h的抑制率分别为32．44％、50．17％和56．85％。     

重组腺病毒介导的人AWP1基因转移对人源肝癌细胞增殖的影响

目的以重组腺病毒作为AWP1（associated with PRK1）的转基因载体,研究AWP1对人肝癌细胞增殖的影响,为进一步研究AWP1基因功能提供依据。方法重组腺病毒质粒pAd-flag-AWP1转染293细胞进行重组腺病毒的包装和扩增,并进行PCR鉴定。用空病毒Ad-Null和重组腺病毒Ad-flag-AWP1分别感染人源肝癌细胞SMMC-7721,并于感染后24 h、72 h、第5天和第7天收集细胞计数,绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间。结果重组腺病毒Ad-flag-AWP1能够感染SMMC-7721细胞;依据细胞生长曲线计算的SMMC-7721细胞倍增时间分别为：SMMC-7721细胞约为5 d;而Ad-Null感染后其生长被抑制,倍增时间约为6 d;Ad-flag-AWP1感染后,其倍增时间约为3 d。结论重组flag-AWP1腺病毒转染SMMC-7721细胞过表达的AWP1蛋白可能具有促进人肝癌细胞生长的作用。     

2-脱氧-D-葡萄糖与奥沙利铂对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

目的: 研究糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)与奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)单独及联合应用对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响。方法: 将2-DG及L-OHP单药及联合用药作用于人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测各组细胞的生长抑制率,并计算两药的协同作用q值,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡情况,caspase-3试剂盒检测caspase-3活性。结果: 不同浓度的2-DG和L-OHP均可使肝癌细胞增殖受到抑制,并呈时间、浓度依赖性,两药合用后对细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05)。2-DG可诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G₂/M期;与L-OHP合用后细胞凋亡率更高,可阻滞细胞于G₂/M期和S期。Caspase-3活性在两药联合应用时明显增强。结论: 2-DG能有效抑制SMMC-7721细胞生长增殖,并诱导其凋亡;当其与L-OHP联合应用时能增强L-OHP的抗肿瘤作用,其机制可能与增加caspase-3活性有关。     

吲哚-3-甲醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的探讨吲哚-3-甲醇（13C）对人肝癌细胞株SMMC．7721的增殖和凋亡的影响。方法不同浓度的13C（100、150、200、250、300、350Ixmol／L）处理细胞48h后,显微镜下观察细胞生长状况;采用WST-1法检测细胞增殖情况,Hoehest33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测凋亡相关蛋白。结果13C能够抑制SMMC．7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在250μmol／L以下时,细胞生长变慢;处理浓度达到300μmol／L时,大量细胞凋亡。13C浓度高于200μmol／L时CytC、Cleavedcaspase．9和Cleavedcaspase．3蛋白表达明显增加,且随着13C浓度的增加三种蛋白的表达也明显增加。结论13C在体外实验条件下可抑制人肝癌细胞株SMMC．7721增殖并诱导其发生凋亡。     

白藜芦醇对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡作用及白藜芦醇对TRAIL的增敏效果。方法培养SMMC-7721细胞,同步化后,分成对照组、TRAIL干预组、Res＋TRAIL干预组,作用24h后,收集细胞,用流式细胞仪进行凋亡分析。结果对照组SMMC-7721细胞的凋亡率为3．02％±0．17％,TRAIL干预组凋亡率为8．55％±1．46％,Res＋TRAIl。干预组中25μmol·l-1、50μmol·l-1、100μmol·l-1。凋亡率分别为8．61％±1．41％、20．72％±1．33％、27．19％±1．43％。TRAlL干预组、Res＋TRAIL干预组与对照组相比,差异均有显著性（P〈0．01）。Res＋TRAIL干预组（5μmol·l-1、100μmol·l-1白藜芦醇）与TRAIL干预组相比,差异均有显著性（P〈0．01）;而Res＋TRAIL干预组（25μmol·l-1白藜芦醇）与TRAIL干预组比较差别无显著性（P〉0．05）。结论本研究表明’FRAIL对SMMC-7721细胞有凋亡诱导作用;白藜芦醇对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡有致敏作用,且呈剂量依赖关系。     

Inhibitory effect of emodin on human hepatoma cell line SMMC-7721 and its mechanism

BackgroundDa Huang (Radix et Rhizoma Rhei) is the dried root or rhizome of Rheum palmatum L., Rheum tanguticum Maxim ex Balf. or Rheum officinale Braill of family Polygonaceae. It has heat clearing, damp drying, fire purging and toxin removing effects. Because of its definite curative efficacy, it has been widely applied in clinical settings.ObjectiveTo study the inhibitory effect of emodin on human hepatoma cell line SMMC-7721 and its mechanism.MethodsMTT assay, flow cytometry and electron microscopy were used to investigate the inhibitory effect of different concentrations of emodin on human hepatoma cell line SMMC-7721.Results12 h, 24 h and 48 h after the action of 20, 40 and 80 umol/L emodin on SMMC-7721 cells, the proliferation of human hepatoma SMMC-7721 cells was inhibited; the inhibitory effects showed time-and concentration-dependence. 48 h after the action of different concentrations of emodin on SMMC-7721 cells, cells in G2/M phase increased significantly, while the proportion of S phase cells gradually declined.ConclusionEmodin can inhibit human hepatoma cell line SMMC-7721.     

TRAIL联合长春新碱对HL-60细胞生长及凋亡的影响

目的研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）联合长春新碱（VCR）诱导急性早幼粒白血病细胞株HL-60细胞凋亡,探讨其应用于临床的可行性。方法在对数生长期的HL-60细胞中分别加入不同浓度的TRAIL和0.1mg/L的VCR,采用MTT比色法测定TRAIL和VCR单独和联合应用时对细胞的生长抑制率,并用流式细胞术检测细胞凋亡。结果TRAIL联合VCR可协同降低HL-60细胞活力,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。且24h内当TRAIL浓度〈100g/L时促调亡作用随TRAIL浓度增加及培养时间延长而增强（P〈0.05）,而24h内当TRAIL浓度≥100μg/L时以及24h后虽抑制率和调亡率较高,但随浓度增高作用无显著差别（P〉0.05）。结论TRAIL与VCR具有协同作用,能高效杀灭白血病细胞。TRAIL是一种有望应用于白血病临床治疗的新型生物制剂。     

siArid2重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响

 目的:通过RNA干扰技术沉默内源性抑癌基因Arid2(siArid2)的表达,观察其对肝癌细胞生长及细胞周期的影响。方法: 设计3对特异性沉默Arid2基因的shRNA序列,分别克隆到腺病毒骨架载体上形成重组腺病毒质粒。将质粒转染到HEK293细胞中,包装和扩增形成完整高滴度的重组腺病毒AdsiArid2-1~3。用构建好的腺病毒感染人肝癌SMMC-7721细胞,Western blotting方法检测Arid2蛋白的表达,筛选干扰效果最佳的重组腺病毒。MTS技术和流式细胞术观察干扰Arid2基因后肝癌细胞增殖和细胞周期的变化。结果: 成功构建了高滴度的重组腺病毒AdsiArid2-1~3。经Western blotting鉴定,AdsiArid2-3为抑制效果最佳的重组腺病毒。MTS结果显示,AdsiArid2组细胞在72 h、96 h的吸光度值与空细胞组和Adsicontrol组相比增高,细胞增殖速率明显加快。流式细胞术检测结果显示,AdsiArid2组处于G1期、S期的细胞百分比与空细胞组和Adsicontrol组相比,G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增多。结论: 成功构建干扰Arid2的重组质粒及重组腺病毒。沉默Arid2可以促进肝癌细胞的增殖,促进其由G1期向S期的转换。     

机械刺激对肝癌细胞形态及增殖周期的影响

本研究采用“四点弯曲梁加载装置” ,对培养的人肝癌细胞株SMMC 772 1施以拉伸刺激 ,通过显微计算机图像处理系统了解其形态变化 ,流式细胞仪了解其增殖行为 ,结果发现 (1)加载 2 4h后SMMC 772 1G2 -M期 8.6 3% ,对照组 15 .92 %。 (2 )加载 72h后SMMC 772 1铺展投影面积缩小。 (3)加载 2 4h后SMMC 772 1分裂指数 0 .4 6 ,对照组 0 .5 5。加载可部分抑制SMMC 772 1的生长。     

红毛毡提取物体外抗肿瘤的实验研究

目的：探讨红毛毡提取物的体外抗癌作用。方法：用MTT法检测红毛毡提取物对13种肿瘤细胞株体外生长的抑制作用。结果：红毛毡提取物对所试肿瘤细胞株的体外生长均具有较强的抑制作用,其中对急性T细胞白血病细胞Jurkat、人肾癌细胞OS-RC-2、人慢性髓质白血病细胞K562、人肺癌细胞A549和人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435s的作用强,半数抑制浓度（IC50）分别为9．25±3．68、10．75±2．40、10．90±3．74、11．21±3．07和12．66±1．19μg·ml^-1,其次是对人食管癌细胞Eca-109、人胰腺癌细胞PANC-1、人黑色素瘤细胞A375、人肝癌细胞QGY-7703和人胃癌细胞SGC-7901,半数抑制浓度（IC50）分别为14．36±2．26、15．36±6．73、15．48±1．98、17．21±10．32和19．01±5．95μg·ml^-1。结论：红毛毡提取物具有广谱抗肿瘤作用。     

汉防己对胸腺的细胞增殖的影响研究

目的研究汉防己（Han-Fang-Chi／Stephenia tetrandra S Moore）对小鼠胸腺的细胞增殖的影响，探讨其作用机制。材料与方法取小鼠胸腺的细胞，分为对照组和药物组（汉防己煎剂浓度分别为1μg／ml，10μg／ml，50μg／ml，100μg／ml），采用MTT法统计学比色意义法观察防己对小鼠胸腺的细胞增殖的影响。结果汉防己煎剂在1～100μg／ml可不同程度抑制胸腺的细胞增殖，结果有（P〈0．05），其半数抑制浓度IC50为8．34μg／ml。结论防己（1～100μg／ml）可不同程度抑制小鼠胸腺的细胞的增殖，具有时间依赖性和剂量依赖性，即随着时间延长和剂量增加，其抑制作用逐渐增强。