骨髓基质干细胞移植治疗大鼠脊髓挫伤中碱性成纤维生长因子的变化

探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对脊髓损伤修复的可能作用及其对bFGF表达的影响,为BMSCs修复脊髓损伤提供实验依据。采用改良的Allen的WD法建立脊髓(T12节段)损伤模型,将66只SD大鼠随机分为正常组(A组)、损伤后未移植的对照组(B组)和BMSCs移植治疗组(C组)。通过BBB行为学评分记录两组动物后肢恢复功能,免疫组织化学方法检测bFGF的表达。结果显示:BMSCs移植组BBB评分高于对照组;bFGF在各组大鼠脊髓中均呈阳性表达,损伤后对照组与BMSCs移植组各个时点的表达量仍高于正常组(P<0.05),7d最高,后渐下降,但21d表达仍高于正常。其中BMSCs移植组与对照组各个时点的bFGF表达量均有显著差异(P<0.05)。结果提示:BMSCs移植治疗大鼠脊髓损伤模型有助于其功能的恢复。     

The effect of tetramethylpyrazine on the expression of NF-KB and I-KBa after acute spinal cord injury in the rat model

目的 观察川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段NF-κB及Ⅰ-κBα表达的影响.方法 SD大鼠110只,随机分为正常对照组、单纯脊髓损伤组和川芎嗪处理组.采用改良ALLEN氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型.采用改良Rivlin斜板实验、BBB评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分.在建模后1、3、6、12 h,1、3、5、7、14和21d获取损伤段脊髓标本,HE染色观察其组织病理变化;免疫组织化学染色检测NF-κB及Ⅰ-κBα表达.结果 随着时间推移,术后斜板临界度数和BBB评分值均逐渐升高,CBS评分值逐渐降低,且术后7、14和21 d川芎嗪处理组斜板临界角度数均较单纯脊髓损伤组高(P＜0.05),术后5、7、14和21 d实验组BBB评分值均较单纯脊髓损伤组高(P＜0.05),而术后5、7、14和21 d,川芎嗪处理组CBS评分值均较对照组低(P＜0.05).术后1、3、5和7d,川芎嗪处理组NF-κB阳性细胞表达数较单纯脊髓损伤组低(P＜0.05),Ⅰ-κBα阳性细胞表达数较单纯脊髓损伤组高(P＜0.05).结论 川芎嗪能够促进大鼠急性继发性损伤后脊髓组织中Ⅰ-κBα的表达,抑制NF-κB的表达,从而起到促进脊髓功能恢复的作用.     

静脉注射骨髓间充质干细胞可抑制大鼠损伤脊髓水通道蛋白-4的表达

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠损伤脊髓AQP-4表达的调节作用.方法:体外分离、培养、纯化MSCS,应用流式细胞术检测MSCs表面细胞标志CD34,CD45、CD29、CD90.根据改良Allen法制备大鼠脊髓损伤模型.SD大鼠随机分为假手术组、对照组和实验组,假手术组和实验组经尾静脉注射MSCs,对照组经尾静脉注射PBS.损伤注射MSCs后1、3、7 d,应用免疫组织化学和图像分析技术检测脊髓组织水通道蛋白-4(AQP-4)的表达.结果:对照组大鼠脊髓的AQP-4表达于损伤后1 d开始增加,损伤后3 d达到峰值,损伤后7 d开始减少.实验组大鼠脊髓的AQP-4表达比对照组明显减少.结论:MSCs移植可抑制脊髓损伤后AQP-4的表达.     

低剂量脂多糖预处理上调Nrf2表达减轻大鼠脊髓损伤的炎症反应

目的探讨低剂量脂多糖预处理对大鼠脊髓损伤的神经保护作用及其可能机制。方法 48只雌性SD大鼠随机分为4组:空病毒(EV)组、脂多糖联合空病毒(LPS-EV)组、核因子E2相关因子2(Nrf2)干扰病毒(NIV)组、脂多糖联合Nrf2干扰病毒(LPS-NIV)组,每组各12只。采用改良Allen’s打击法建立创伤性脊髓损伤(TSCI)模型,术后3 d进行BBB后肢运动神经功能评分,获取脊髓损伤段组织标本,HE染色观察其组织病理变化;Nissl染色观察神经元中Nissl体变化及神经元生存指数;免疫组织化学染色及Western blot法检测Nrf2、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达变化。结果与EV组比较,NIV组脊髓组织Nrf2蛋白表达降低,NF-κB、IL-1β、TNF-α蛋白表达增高,与LPS-NIV组比较无显著性差异;与EV组、LPS-NIV组比较,LPS-EV组Nrf2蛋白表达上调,NF-κB、IL-1β、TNF-α蛋白表达降低,神经元生存指数明显提高,脊髓组织病理损伤明显改善;各组之间BBB评分无统计学差异。结论低剂量LPS预处理对大鼠脊髓损伤起神经保护作用,其机制是通过介导Nrf2的表达,下调NF-κB及促炎症因子水平,从而减轻炎症反应。     

川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型NF-kB及I-kBα表达的影响

 【摘要】 目的：观察川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段NF-kB及I-kBα表达的影响。方法：SD大鼠110只,随机分正常对照组、单纯脊髓损伤组和川芎嗪处理组。采用改良ALLEN氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型。采用改良Rivlin斜板实验、BBB(Basso,Beattie,Bresnahan)及CBS（Combine Behavior Score）评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分。在建模后1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d和21d获取损伤段脊髓标本,HE染色观察其组织病理变化;免疫组织化学染色检测NF-kB及I-kBα表达。结果：随着时间推移,术后斜板临界度数和BBB评分值均逐渐升高,CBS评分值逐渐降低,且术后7、14和21d川芎嗪处理组斜板临界角度数均较单纯脊髓损伤组高（P＜0.05）,术后5、7、14和21d实验组BBB评分值均较单纯脊髓损伤组高（P＜0.05）,而术后5、7、14和21d,川芎嗪处理组CBS评分值均较对照组低（P＜0.05）。术后1、3、5和7d,川芎嗪处理组NF-kB阳性细胞表达数较单纯脊髓损伤组低（P＜0.05）,I-kBα阳性细胞表达数较单纯脊髓损伤组高（P＜0.05）。结论：川芎嗪能够促进大鼠急性继发性损伤后脊髓组织中I-kBα的表达,抑制NF-kB的表达,从而起到促进脊髓功能恢复的作用。     

蛛网膜下腔置管灌注rhNCAM1促损伤脊髓再生修复的实验研究

目的:探讨神经细胞粘附分子1(neural cell adhesion molecule 1,NCAM1)灌注治疗小鼠脊髓撞击伤后对脊髓修复及神经功能恢复的影响。方法:采用改良NYU(纽约大学)Weight-Drop Impactor打击装置,以25 gcf(l0 g重量从25 mm高度自由落下)制备脊髓损伤模型(打击面积为2 mm×2 mm)。将SA小鼠30只随机分为3组:实验组(rhNCAM1组,n=10)于损伤即刻经蛛网膜下腔注入rhNCAM1蛋白2μl(约100μg),隔日1次,共5次;对照组(生理盐水组,n=10)于损伤即刻经蛛网膜下腔注入生理盐水2μl,隔日1次,共5次;假手术组仅做椎板切除术,术后缝合切口。观察各组小鼠1~8周行为学改变,行BBB评分。第8周灌注固定、取材,采用神经纤维200(NF200)免疫荧光检测,进行图像分析及统计处理。结果:(1)行为学评估:实验组BBB评分在各时间点均显著高于对照组(P<0.01);(2)NF200免疫荧光染色:实验组阳性着色明显多于、并强于对照组;实验组无组织瘢痕结构面积明显小于对照组。结论:蛛网膜下腔应用rhNCAM1后可能改善SCI后损伤区及两端的神经细胞之间的功能,促进轴突再生,促进双下肢运动功能的恢复。     

电刺激促进大鼠脊髓钝挫伤后运动功能恢复

目的探究神经电刺激对大鼠脊髓顿挫伤(SCC)后的干预效果并探讨相应机制。方法将大鼠分为:假手术组、对照组和实验组。用Allen’s法复制大鼠T9脊髓钝挫伤模型。实验组用神经电刺激干预。定期观察大鼠后肢运动功能恢复情况;用免疫组织化学染色技术以及蛋白质印记技术检测神经生长因子和巢蛋白的表达。结果脊髓损伤后,大鼠的运动功能迅速下降。随着时间的推移,实验组大鼠运动功能评分逐渐升高,第7天较对照组明显上调(P<0.05)。与对照组相比,实验组神经生长因子和巢蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论电刺激可能创造有利于神经元存活和可塑性的微环境,有利于大鼠后肢运动功能的恢复。     

大鼠颈椎骨折错位致脊髓损伤模型的继发性损伤研究

目的　建立大鼠颈椎骨折错位致脊髓继发性损伤模型。 方法　20只成年SD大鼠,随机分为实验组(n=11)和对照组(n=6),3只处死取颈椎测量C4/5水平椎管和椎体矢状径。实验组利用颈椎骨折错位脊髓损伤装置在C4/5之间快速（200 mm/s）错位1.65 mm,造成颈椎骨折错位和颈脊髓损伤,采用自制器械固定颈椎。对照组除未行错位外与实验组相同。术后进行行为学（前肢运动和梳理试验）评价8周,和病理学检查。 结果 实验组行为学评分各个观察时间点均较对照组低。脊髓HE染色切片见实验组脊髓萎缩,灰质破坏,空洞,对照组未见明显异常。实验组损伤中心残留面积（2.79±0.98）mm2,明显小于对照组（6.36±0.08）mm2（P=0.034）。 结论　成功建立了大鼠颈椎骨折错位脊髓继发性损伤模型,大鼠C4/5骨折错位1.65 mm导致明显的脊髓组织损伤和运动功能障碍。     

肝癌衍生生长因子-2在大鼠脊髓损伤后的表达及其意义

目的:探讨肝癌衍生生长因子(HDGF)-2在大鼠脊髓损伤后的表达及其意义。方法:取成年SD大鼠120只,随机分成正常对照组和脊髓损伤组。采用改良Allen’s法建立脊髓损伤动物模型,分别于损伤后1、21、45d分别采集受损伤的脊髓标本。应用免疫组织化学染色技术观察HDGF-2在正常脊髓、受损伤后不同时间点的脊髓组织中的表达情况。结果:(1)HDGF-2在大鼠正常脊髓和受损伤脊髓前角神经元和胶质细胞的细胞核中均有表达。(2)脊髓神经细胞核内HDGF-2染色评分,在正常组为50±9,脊髓损伤组为132±30,两组间HDGF-2表达比较具有显著性差异(P0.01)。(3)HDGF-2表达评分在术后1、21、45 d分别为141±62,107±33和92±18,脊髓损伤不同时间点HDGF-2表达评分比较具有显著性差异(P0.01)。结论:脊髓损伤后HDGF-2表达升高,提示其参与脊髓损伤和修复的病理过程。     

慢病毒介导的RNA干扰下调IL-6抑制脊髓顿挫损伤后Caspase-3表达

目的通过慢病毒介导的RNA技术干扰IL-6的表达,探究脊髓顿挫损伤后Caspase-3的表达变化。方法Allen′s打击法制备脊髓顿挫伤(SCC)模型,BBB评分确认造模成功;免疫组织化学和Q-PCR技术定位和定量测定IL-6和Caspase-3的表达变化;Gene MANIA网站预测IL-6与Caspase-3的联系;慢病毒介导的RNA干扰技术构建IL-6干扰模型后,Q-PCR技术定量测定Caspase-3的表达变化。结果 SCC后SD大鼠BBB评分显著低于假手术组(P0.05);IHC结果显示:IL-6和Caspase-3均在在脊髓白质胶质细胞表达;Q-PCR结果显示:IL-6在损伤后12h表达显著增加,3d、28d表达持续下降;Caspase-3在损伤后12h、3d、28d表达持续下降。生物信息学分析结果:IL-6和Caspase-3在大鼠体内存在共定位关系。干扰组Caspase-3表达比空载组显著降低(P0.05)。结论在SCC后,抑制IL-6表达可降低Caspase-3表达水平。     

电针刺激对脊髓挫伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响

BACKGROUND: Electroacupuncture has promoting effects on the functional recovery of the injured spinal cord, can decrease pain, and elevate postoperative effect after acute spinal cord contusion.  OBJECTIVE: To observe the effect of electroacupuncture on apoptosis in the injured site after spinal cord contusion, and analyze its neuroprotective effects on neurological function in rats with spinal cord contusion. METHODS: A total of 66 adult female Sprague-Dawley rats were randomly divided into: sham surgery group (n=20), spinal cord contusion group (n=20), electroacupuncture stimulation group (n=20) because six rats were excluded due to modeling failure and death. Before model establishment, at 1, 3 days, 1, 2, 3 and 4 weeks after model establishment, motor functions were evaluated by BBB score and the inclined plate test. At 3 days after model establishment, apoptosis of nerve cells could be detected in the site of injury in each experimental group using TUNEL assay. mRNA and protein expression of bax, bcl-2 and caspase-3 was detected surrounding the injury site using RT-PCR and western blot assay. Morphological changes in the site of injury could be observed using hematoxylin-eosin staining. The regeneration of nerve fibers was observed using HRP tracing.  RESULTS AND CONCLUSION: (1) Motor function score was significantly increased at various time points in the 2nd week of treatment in the electroacupuncture stimulation group than in the spinal cord contusion group (P < 0.05). (2) Apoptotic index was significantly lower in the electroacupuncture stimulation group than in the spinal cord contusion group at 3 days after model establishment (P < 0.05). (3) mRNA and protein expression of bax and caspase-3 was significantly lower in the electroacupuncture stimulation group than in the spinal cord contusion group at 72 hours (P < 0.05); bcl-2 gene and protein expression was significantly higher (P < 0.05). (4) The number of HRP-positive nerve fibers was highest in the sham surgery group, followed by electroacupuncture stimulation group, and lowest in the spinal cord contusion group at 4 weeks (P < 0.05). Results indicated that electroacupuncture plays a protective role on the spinal cord contusion by reducing apoptosis of nerve cells at the site of injury.      

不同程度脊髓背侧压迫损伤模型大鼠脊髓损伤致伤器的设计

背景：随着对脊髓损伤研究的不断深入,国内外学者不断设计出各种脊髓损伤模型,主要包括脊髓挫伤、重物坠击、脊髓压迫、化学灼伤、放射性损伤及激素横断半横断损伤等,然而各种制备方法都存在一定的局限。 目的：设计脊髓损伤致伤器并建立不同程度脊髓损伤动物模型。 方法：实验自行设计包括致伤部件及传动装置的脊髓损伤致伤器,利用不同致伤质量m1=10 g,m2=20 g,m3=30 g及时间T1=3 s,T2=5 s,造成不同质量×时间暨不同程度SD大鼠脊髓背侧压迫损伤,分为m1T1,m2T1,m3T1,m1T2,m2T2,m3T2共6组,并设假手术组进行对照。 结果与结论：造模后各实验组BBB评分均低于假手术组(P < 0.01),m1T1组与其他各实验组相比差异有显著性意义(P < 0.01),建模后8周m1T2组BBB评分高于与m2T2组及m3T2组(P < 0.05)。建模后8周各组体感诱发电位和运动诱发电位潜伏期明显长于假手术组(P < 0.01)。除了m1T1组与m1T2组外,其他各组间建模后体感诱发电位潜伏期均明显延长(P < 0.05)。所有组建模后运动诱发电位潜伏期均明显延长(P < 0.05)。结果证实,实验所设计的脊髓损伤致伤器可制备出不同程度的脊髓背侧压迫损伤动物模型。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

SD大鼠股骨骨折合并脊髓损伤模型的构建

背景：骨折合并脊髓损伤的动物模型创伤大,造模后存活率较低,而改良Allen法和股骨开放截骨法制作动物模型时操作简单,不需要特殊器械,建模时间及出血较少,适用于骨折合并脊髓损伤动物模型的制作。 目的：建立一种既能成功维持长时间存活,并符合临床特征,又简便易行的实验动物模型。 方法：将48只SD雄性大鼠随机数字表法均分为单纯股骨骨折组和股骨骨折合并脊髓损伤组,通过双侧小切口开放截骨造成股骨中端横行骨折并植入内固定建立股骨骨折模型,改良Allen法自制打击装置造成大鼠T10段脊髓急性挫伤性损伤,两种方法融合制造股骨骨折合并脊髓损伤模型,观察大鼠制模成功后不同时间点大体情况及4周后骨折断端愈合情况。 结果与结论：建模后骨折合并脊髓损伤动物模型均成活,双下肢感觉及运动功能丧失,但可利用双上肢缓慢匍匐向前移动,前3 d进食少,活动少,夜间采用尾端悬吊后,骨折患肢未出现缺血坏死,到达第4周时,单纯股骨骨折组死亡1只,股骨骨折合并脊髓损伤组共死亡4只,成活率为83.33%,髓腔内固定未见脱出,两组骨折断端均有连续骨痂生成,从体积上来看,股骨骨折合并脊髓损伤组骨痂组织明显大于单纯股骨骨折组。证实将改良Allen法与小切口股骨外侧开放截骨法结合后,简单易行,可以成功制作股骨骨折合并脊髓损伤动物模型并成活至第4周。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

兔颈脊髓半侧挫伤模型的建立及其MRI和组织学表现的研究

目的 建立兔颈脊髓半侧挫伤模型,观察不同程度损伤24小时后其MRI及组织学表现。方法 22只成年雄性新西兰兔,随机分为中度损伤组（n=9）、重度损伤组（n=9）和假手术组（n=4）。直径为3.0 mm的打击头由电磁伺服材料试验机驱动,对准C5脊髓左侧行高速挫伤（500 mm/s）。根据打击头的位移距离分为位移2.0 mm组（中度损伤组）和位移2.8 mm组(重度损伤组)。假手术组仅暴露C5脊髓,不进行挫伤。损伤后24小时每组随机取两例行MRI影像学检查,所有动物均取材进行组织学观察,测量横断面脊髓出血面积。 结果 中度损伤组打击力和位移分别为(2.47±0.39) N和(1.99±0.02) mm,重度损伤组打击力和位移分别为(5.16±0.82) N和(2.76±0.02) mm,中度损伤组的打击力明显小于重度损伤组（P<0.05）。MRI结果显示,中度及重度损伤组均可见C5左侧脊髓信号改变。HE染色显示脊髓左侧有明显的出血及脊髓组织结构破坏,中度损伤组损伤中心横截面出血面积（0.012±0.006）mm2明显小于重度损伤组（0.039±0.006）mm2（P<0.05）。 结论 本文建立的兔颈脊髓半侧挫伤模型能够控制挫伤位移,实现对脊髓的高速打击。不同程度的颈脊髓半侧挫伤在打击力、MRI影像学及组织学上均有不同。     

重组人促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后NF-κB表达的影响

目的研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对急性脊髓损伤大鼠核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达的影响。方法参照Nystrom's压迫方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型,成年健康Wistar大鼠72只,雌雄不限,按随机数字表法分为正常对照组8只、损伤组32只、重组人促红细胞生成素治疗组32只。术后应用联合行为评分(combined behavioral score,CBS)评价大鼠脊髓神经功能;免疫组化和Western blot检测各组大鼠NF-κB的表达。结果三组CBS评分结果显示,损伤组>重组人促红细胞生成素治疗组>对照组。免疫组化结果显示,损伤组与rHuEPO治疗组NF-κB阳性产物的平均光密度值(MOD)显著高于正常对照组(<0.01),而rHuEPO治疗组与损伤组相比MOD值明显降低(<0.01)。Westernblot结果显示,与正常对照组比较,损伤组与rHuEPO治疗组组NF-κB的灰度值(IDV)与内参照IDV的比值明显升高(<0.01),而rHuEPO治疗组则明显低于损伤组(<0.01)。结论 rHuEPO治疗组很可通过下调NF-κB的表达参与脊髓继发性损伤的修复。     

Development of a rat model of graded contusive spinal cord injury using a pneumatic impact device

An animal model of spinal cord trauma is essential for understanding the injury mechanisms, cord regeneration, and to aid the development of new therapeutic modalities. This study focused on the development of a graded experimental contusion model for spinal cord injury (SCI) using a pneumatic impact device made in Korea. A contusive injury was made to the dorsal aspect of the cord. Three trauma groups were defined according to the impact velocity (IV). A control group (n=6), received laminectomy only. Group 1 (n=10), 2 (n=10), and 3 (n=10) had IVs of 1.5 m/sec, 2.0 m/sec, and 3.5 m/sec respectively. Functional assessments were made up to the 14th day after injury. The cord was removed at the 14th postinjury day and prepared for histopathologic examination. Significant behavioral and histopathological abnormalities were found in control and each trauma group. All trauma groups showed severe functional impairment immediately after injury but following different rates of functional recovery (Fig. 5). As the impact velocity and impulse increased, the depth of contusive lesion revealed to be profound the results show that the rat model reproduces spinal cord lesions consistently, has a distinctive value in assessing the effects of impact energy.     

17-β雌二醇提高巯醇抗氧化物（酶）治疗脊髓损伤的作用 

目的 探讨17-β雌二醇治疗脊髓损伤的分子机制,为临床应用雌激素治疗脊髓损伤提供理论依据。 方法 成年雄性SD大鼠180只,采用改良的Allen法构建大鼠急性脊髓挫伤模型后经17-β雌二醇治疗,采用化学比色法测定脊髓组织中丙二醛（MDA）和内源性巯醇抗氧化物（酶）：还原型谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量;免疫组织化学分析凋亡相关因子Caspase-3、Bcl2和Bax蛋白的表达变化。 结果 17-β雌二醇治疗组与脊髓损伤组比较,BBB评分明显增加;在多个时间点MDA含量明显降低;巯醇抗氧化物（酶）GSH、SOD和GSH-Px含量显著增加;Caspase-3和Bax表达的阳性细胞数明显减少;Bcl2表达的阳性细胞数明显增加（P<0.05）。 结论 大剂量的17-β雌二醇治疗可能通过调控内源性巯醇抗氧化物（酶）,提高肢体运动功能,抑制细胞凋亡,从而减轻脊髓损伤程度。