康莱特注射液诱发肾癌细胞凋亡及p53,bcl—2表达的研究

目的;探讨康莱特注射液抗肿瘤的作用机制。方法：利用ＭＴＴ法分析康莱特肾癌细胞的抑制作用,末端脱氧核苷酰转移酶法检测细胞凋亡,免疫组织化学法分析ｐ５３和ｂｃｌ－２基因表达的影响。结果：康莱特抑制肾癌细胞的ＩＣ５０为１９．３１μｌ／ｍｌ,５μｌ／ｍｌ,和１０μｌ／ｍｌ康莱特注射液具有诱发细胞凋亡的作用,细胞凋亡分别为３１．３０％和８９．７６％,康莱特浓度继续增加时,细胞凋亡的数量反而减少,１５μdispla     

细胞凋亡调控及其进展

本文对细胞凋亡调控基因，特异性死亡信号分子、死亡受体及配体信号传导通和细胞凋亡机制研究及其最新进展进行了综述。     

Bcl-2基因家族与细胞凋亡

细胞凋亡(apoptosis)在多细胞器官的发育和平衡中起着重要的作用,从线虫到人类的遗传学和分子生物学研究表明这一过程高度保守,受基因调控。近年来,调节细胞凋亡的分子研究已取得了很大的进展,特别值得注意的是,细胞凋亡的正负调节因子常是同一基因家族成员,它们决定细胞...     

子宫颈鳞状细胞癌组织中细胞凋亡及相关调控基因蛋白的表达

目的：通过对细胞凋亡及部分相关蛋白表达进行检测,探讨子宫颈鳞状细胞癌组织中凋亡细胞的调控机制。方法：应用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和双重免疫荧光染色技术对正常子宫颈及不同分化程度的鳞状细胞癌组织中凋亡细胞和Ｂａｘ、Ｂｃｌ－２、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达进行检测,利用共聚焦显微镜观察结果。结果：ＴＵＮＥＬ法检测发现,每例标本均有不同程度的细胞凋亡,但数量及分布区域不完全相同,低分化鳞状细胞癌凋亡细     

肾母细胞瘤中p53、Bcl—2基因调控和细胞凋亡研究

目的：分析肾母细胞瘤细胞凋亡和p53、Bcl－2蛋白表达的相关性及其与肾母细胞瘤组织学类型的关系。方法：对30例肾母细胞瘤用DNA末端标记（TUNEL）方法检测细胞凋亡，免疫组化LSAB法检测p53、Bcl-2蛋白的表达。结果：30例肾母细胞瘤凋亡指数（AI）为1‰-412%，平均99.7‰；p53、Bcl－2的表达指数PEI、BEI分别为0‰-308‰、1‰-365‰，平均值分别为81．8‰、90．2‰。细胞凋亡和p53与肾母细胞瘤组织学类型有显著相关性，细胞凋亡与p53呈负相关，Bcl-2与组织学类型、细胞凋亡均无关。结论：p53在调节肾母细胞瘤细胞凋亡中可能起重要作用，细胞凋亡和p53突变可能与肾母细胞瘤的细胞分化、预后有关，PEI、AI的检测可为了解肾母细胞瘤的发病机制和判断预后提供实验依据。     

抑凋亡基因Bcl—2与肿瘤

抑凋亡基因Ｂｃｌ－２与肿瘤张力综述吴金生审校近年来，随着细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）概念的确立，人们对肿瘤的发生及发展有了新的认识。认为肿瘤的发生不仅与细胞过度增殖相关，也与细胞凋亡减少有关［１］。细胞凋亡又名细胞程序性死亡（Ｐｒｏ－ｇｒａｍｍｅｄ...     

细胞凋亡调节与宫颈癌发生

目的：探讨子宫颈癌发生中的影响细胞凋亡的调节因素。方法：检测对象为194例经福尔马林固定石蜡包埋的手术切除标本，包括上皮内瘤样病变（CIN）78例[其中重度非典型增生（SD）41例；原位癌（CIS）37例]早期浸润癌（MIC）35例；大细胞非角化型浸润癌（IC）40例及正常宫颈鳞状上皮（NE）41例。凋亡细胞的检出使用TDT－mediated dUTP-biotin nick end labeling(TUNEL)方法；细胞凋亡相关基因蛋白p53、bcl-2、bax的表达采用单克隆抗体免疫组化ABC染色方法；HPV16、18型E6 DNA感染使用PCR方法进行检测。结果：1）凋亡细胞标记率仅在CIN呈现有意义地进行性减少（P＜0．01），癌变以后不再继续下降；2）在SD、CIS组，p53、bcl-2及bax基因蛋白的表达与TUNEL标记率呈现有意义地相关性变化（P＜0．05）；3）HPV16、18型E6 DNA感染与凋亡细胞及相关基因蛋白表达未呈现相关性改变。结论：以上结果提示细胞凋亡的改变与宫颈癌发生的早期过程有关，p53、bcl-2、bax基因蛋白参与其调节，而HPV16、18型E6 DNA感染与其未呈现直接的相关性。     

脑膜瘤细胞凋亡及凋亡相关基因bcl—2、p53蛋白的表达

目的 探讨脑膜瘤自发性细胞凋亡相关基因bcl-2、p53蛋白在脑膜瘤中的表达及其意义。方法 采用TUNEL法和免疫组化S－P法检测40例脑膜瘤中细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2,p53蛋白的表达。结果 恶性和非典型脑膜瘤中的细胞凋亡指数（AI）明显高于良性脑膜瘤（P＜0．05）,良性脑膜瘤不同亚型之间bcl-2,p53表达无显著性差异（P＞0．05）;p53蛋白表达随脑膜瘤恶性程度增高而增强,具有显著性差异（P＜0．05）,p53阳性与阴性的脑膜瘤中的细胞凋亡指数无显著性差异;bcl-2蛋白表达与脑膜瘤细胞凋亡呈负相关。结论 恶性及非典型脑膜瘤中自发性细胞凋亡增多;凋亡是脑膜瘤恶性或不典型的1个重要的生物学行为;p53基因在脑膜瘤的恶变过程中发生重要作用,与脑膜瘤的恶性进展密切相关;bcl-2基因在脑膜瘤中可抑制细胞凋亡。     

Bcl—2和p53基因蛋白在阴茎癌中的表达

为了研究Ｂｃｌ－２和ｐ５３基因蛋白与阴茎癌的关系，应用ＰＡＰ免疫组化法对４６例阴茎癌组织中Ｂｃｌ－２和ｐ５３基因蛋白进行检测。结果显示，正常鳞状上皮基底细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达阳性，４６例阴茎癌中有３８例（８２．６％）Ｂｃｌ－２蛋白表达阳性，有１１例（２３．９％）ｐ５３蛋白表达阳性。提示两种癌基因蛋白的过度表达参与了阴茎癌的发生发展过程。     

安吖啶诱导白血病细胞程序化死亡及bcl—2表达的研究

目的探讨安吖啶诱导不同分化阶段的人急性粒白血病细胞株ＨＬ－６０（ＡＭＬ２）及ＮＢ４细胞（ＡＭＬ３）程序化死亡的作用。方法应用光镜、ＤＮＡ电泳及流式细胞术检测程序化死亡细胞,应用免疫组化法检测ｂｃｌ－２基因表达。结果１～２０μｇ／ｍｌ的安吖啶作用６～１２小时后,ＮＢ４细胞的形态学改变较ＨＬ－６０细胞更明显;ＮＢ４细胞的ＤＮＡ梯带较ＨＬ－６０细胞明显;流式细胞术检测ＮＢ４程序化死亡细胞数较ＨＬ－６０细胞多;ＨＬ－６０细胞ｂｃｌ－２蛋白的平均水平明显高于ＮＢ４细胞。结论ＨＬ－６０细胞对安吖啶诱导程序化死亡作用的敏感性较低,可能与ｂｃｌ－２基因高表达有关。     

P53-mdm2相互作用与肿瘤治疗策略

mdm2是P53肿瘤抑制功能的主要调节者,两者之间存在自动调节的负反馈环,mdm2可通过与P53结合促进其降解.由诸多因素造成的mdm2-p53相互关系失衡所带来的直接后果就是导致p53的失活而引起肿瘤的发生.已证明有3种翻译后修饰:磷酸化、寡聚化及与其它蛋白的结合影响着mdm2、P53蛋白复合物的形成.干扰两者的结合,使P53发挥转录活性是抗肿瘤的关键.mdm2和P53蛋白相互作用抑制剂的研究是抗肿瘤治疗的一个新靶点,有广阔的应用前景.     

14株肿瘤细胞P53基因突变的检测

目的：检测14株肿瘤细胞P53基因的突变情况。方法：根据P53基因5～8外显子之间的内含子序列设计引物,分别对人肺癌、脑胶质瘤、肝癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、脉络膜恶性黑素瘤、视网膜成细胞瘤等9种肿瘤14株细胞的P53基因5、6、7、8的外显子进行PCR扩增反应。琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物;DNA测序,并与正常的DNA序列比较;抽提肿瘤细胞蛋白进行Western blotting检测P53蛋白的表达。结果：14株肿瘤细胞P53基因热变区5、6、7、8外显子的扩增产物经电泳鉴定与预期相同。DNA测序结果表明,14株肿瘤细胞中8株存在P53基因5～8外显子的突变,其中肺癌细胞H1299、肝癌细胞Hep3B、肝癌细胞SMMC7721、脉络膜恶性黑素瘤细胞OCM-1检测到以前未报道过的突变;突变主要发生在外显子的编码序列,多数为单个碱基替换导致的错义突变,也有部分表现为同义突变;2株正常细胞未检测到突变。Western blotting检测显示,有基因突变的8株肿瘤细胞中仅6株有P53蛋白表达;所有P53基因未突变的肿瘤细胞株和正常细胞株均未检测到P53蛋白。结论：检测的14株肿瘤细胞中有8株细胞P53基因热变区存在突变,其中4株检测到以前未报道过的突变;2株正常细胞未发现P53基因突变。     

Survivin、P53、Bcl-2蛋白与非小细胞肺癌临床病理因素的关系

目的探讨survivin、p53、Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及与临床病理因素的关系。方法应用免疫组织化学法(SP)检测80例NSCLC肿瘤组织、20例肺良性病变组织中survivin、p53、Bcl-2蛋白表达情况。结果survivin、p53、Bcl-2蛋白在肺癌组织中的阳性表达率分别为61.3%(49/80)、55.0%(44/80)和50.0%(40/80),高于肺良性病变组织中的表达水平(P<0.05)。survivin蛋白的表达在不同的TNM分期之间有显著性差异,但与肺癌组织的细胞类型、分化程度及淋巴结转移无明显关系;P53蛋白的表达在不同的淋巴结转移情况之间以及在不同的TNM分期之间有显著性差异;Bcl-2蛋白的表达在不同的细胞类型之间有显著性差异(P<0.05)。肺癌组织中p53,Bcl-2蛋白与survivin蛋白表达显著相关(P<0.05)。结论survivin、P53、Bcl-2蛋白与肺癌的发生和发展密切相关,并可能起协同作用,其综合检测对肺癌的病情判断和预后评价具有一定价值。     

Predictive value of p53, Bcl2 and bax in the radiotherapy of head and neck cancer

Radiation is known to induce DNA damage resulting in the onset of apoptosis. The apoptosis is modulated by p53, Bcl2 and Bax proteins. High level of wild type p53 is required for radiation induced apoptosis. The p53 status, therefore, may be a crucial determinant of radiosensitivity of tumor cells. Overexpression of Bcl2, however, inhibits apoptosis via hetero- and homodimeric interaction. Bax might function as a cell death effector molecule that is neutralized by Bcl2. The aim of the present study is to investigate the correlation between p53, Bcl2, Bax and c-myc levels and the clinical response of head and neck cancer patients to radiation. The base line and 30 GY gamma radiation induced values of p53, Bcl2, Bax and c-myc were estimated by Western blot in 40 biopsies of head and neck cancers. We found that the radiosensitivity of head and neck cancer patients depends on the ratio of p53, Bcl2 and Bax protein levels. High Bcl2 levels resulted in radioresistance of cancer patients. Overexpression of Bax and c-myc may ensure the radiosensitivity of head and neck cancer patients. Our studies indicate that prediction of radiation sensitivity of tumors could be based on the simultaneous evaluation of p53, Bax and Bcl2 levels.     

Apoptosis in transitional cell carcinoma of bladder and its relation to proliferation and expression of P53 and Bcl-2

Transitional cell carcinoma of bladder (TCC) is a relatively common cancer among men. Tumor progression is associated with expression or modulation of several gene products that control apoptosis and proliferation. Apoptosis is a negative growth regulatory mechanism in tumors. The aim of this study is to examine apoptosis and related regulatory molecular markers in a group of patients with TCC. Paraffinembedded tissues from 49 patients with TCC were examined for the expression of bcl-2, p53 and Ki-67 by immunohistochemistry. Apoptosis was detected by TUNEL method. Correlation between apoptotic index (AI), proliferation index (PI) and bcl-2 and p53 expression with each other and with pathological grade was determined. Apoptosis was observed in 28.1% of TCC cases. The mean AI of all cases was 13.7+/-24. No correlation was found between apoptosis and differentiation status of carcinoma. Bcl-2 expression was weakly detected in only one sample. P53 expression was detected in 26 of cases with mean staining index of 102+/-96. A significant correlation between p53 and Ki-67 staining indices was observed (r=0.521, p=0.001). Both p53 and Ki-67 expression showed a good association with the pathological grade (p=0.0001 and p=0.004, respectively). None of the markers showed significant correlation with AI and no correlation was found between the ratio of AI to PI and other parameters either. In conclusion, the frequency of apoptosis in TCC of bladder appears not to be associated with tumor grade, and with bcl-2, p53 and Ki-67 expression.     

P53、C-erbB-2在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的:为了探讨C-erbB-2和P53在上皮性卵巢癌中的表达和意义及二者表达之间的关系,方法:应用免疫组织化学的方法回顾性研究了70例上皮性卵巢癌石蜡切片中这两个基因的蛋白表达情况,并对病人进行了生存期随访。结果:(1)70例上皮性卵巢癌中P53表达的阳性率为34.3％,P53在浆液性卵巢癌及粘液性卵巢癌间表达差异显著(P<0.05)。(2)C-erbB-2阳性率为31.47％。阳性细胞在瘤体局部具有“团块状”的特点。Ⅲ、Ⅳ期上皮性卵巢癌较Ⅰ、Ⅱ期显著为高(P<0.05)。(3)C-erbB-2和P53表达间无显著相关关系(P>0.05)。(4)Kaplan—Meier法研究表明,CerbB-2阳性患者生存期缩短(P<0.01),P53阳性者与阴性者无显著差异。Cox s比例风险回归模型研究表明,C-erbB-2表达状态、FIGO分期、残存瘤大小是三个对上皮性卵巢癌患者预后具有显著影响的变量。结论:C-erbB-2表达与上皮性卵巢癌的恶性程度关系密切。对其预后影响显著;而P53表达与其亚型有关。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bcl-2表达及凋亡的影响

背景与目的：本实验研究缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonueleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响，进一步探讨HIF-1α在缺氧诱导肿瘤细胞凋亡的过程中的作用机制。方法：设计针对HIF-1α RNA亚基的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynueleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相（8、16、24h）5μmol／L的HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α、P53和Bcl-2 mRNA的转录水平，免疫组化（SP法）和免疫印迹（Western Blot）检测HIF-1α、P53和Bcl-2蛋白表达情况。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：HIF-1α转录水平（8～24h）单纯缺氧组（22．0％～22．6％）及SODN缺氧组（22．0％～22．8％）与常氧组（20．2％～20．9％）比较未见明显改变，而在ASODN缺氧组（16．8％～18．5％）显著降低（P〈0．01）。其蛋白表达单纯缺氧组（33．1％～88．9％）、SODN缺氧组（32．5％～88．7％）随缺氧时间延长明显升高；而P53、Bel-2 mRNA水平单纯缺氧组、SODN缺氧组较常氧组均显著增强（3．4～7．5倍不等）（P〈0．05）。其蛋白的表达这二组也较常氧组均显著增强（2～大于37倍不等）（P〈0．05）。然而在ASODN缺氧组P53、Bel-2 mRNA活性明显减弱（11．5％～13．9％）（P〈0．05），蛋白表达水平也显著降低（13．6％～35．4％）（P〈0．05）：细胞凋亡率其他三组未见明显变化，但ASODN缺氧组显著增加（P〈0．05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型P53的突变使HIF-1α和Bcl-2的过表达，从而抑制肿瘤细胞的凋亡。而HIF-1α反义寡核苷酸抑制HIF-1α活性后，可以抑制野生型P53的突变，降低Bcl-2的表达，导致细胞凋亡的增加。     

miR-204通过下调Bcl-2表达抑制人视网膜母细胞瘤细胞生长

目的:探讨miR-204在人视网膜母细胞瘤中的表达、临床意义及其分子机制。方法:实时定量PCR检测miR-204在视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中的表达并分析其与临床病理特征的关系。检测miR-204在视网膜母细胞瘤细胞系中的表达,并用miR-204模拟物转染Y79细胞,MTT及流式细胞仪检测Y79细胞的增殖、凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测Bcl-2 mRNA、蛋白的表达。结果:miR-204在视网膜母细胞瘤组织中的表达水平显著低于对应瘤旁组织。miR-204低表达与神经浸润、分化程度密切相关。miR-204可显著抑制Y79细胞的增殖并促进其凋亡,下调Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平。结论:miR-204在人视网膜母细胞瘤组织中表达下调,并与临床病理相关,miR-204抑制Y79细胞增殖、促进凋亡的作用可能与下调Bcl-2有关。