蓝氧片对邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯致小鼠睾丸超微形态结构损害的保护作用

目的 观察塑化剂邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)对小鼠睾丸超微形态结构的影响,并研究蓝氧片(专利药用组合Y523)对小鼠睾丸生精细胞和支持细胞的保护和修复作用及其机制。方法 55只成年♂小鼠随机分为DEHP组、Y523组和对照组。DEHP组以大豆油为溶剂,剂量分别为：0,10,20,50,和100 mg·kg^-1·d^-1,连续30 d灌胃染毒;Y523组以等量大豆油混合1 000 mg蓝氧片原料粉剂连续30 d灌胃给药后重复DEHP组的灌胃染毒过程;对照组以标准饲料同期喂养。采用透射电镜观察小鼠睾丸超微结构的改变。结果 与对照组相比,随着DEHP灌胃染毒剂量的递增,DEHP组小鼠睾丸生精细胞出现胞膜塌陷,核质疏松,小细胞器消失,空泡形成,甚至整个生精细胞层消失;支持细胞胞膜皱缩,核质浓缩,胞质内空泡形成和凋亡小体样结构。与DEHP组相比,蓝氧片组小鼠睾丸生精细胞和支持细胞的超微形态结构改变与对应剂量DEHP灌胃染毒的DEHP组小鼠基本类似,但胞质内线粒体、溶酶体等小细胞器的数量明显增多。结论 DEHP灌胃染毒可致小鼠睾丸生精细胞空泡样变性退化,细胞胀亡和凋亡。蓝氧片对DEHP所致的睾丸损害有一定的保护作用,其机制可能与小鼠睾丸支持细胞内线粒体和溶酶体等细胞器数量的增加有关。     

细胞凋亡的线粒体途径机制研究

细胞凋亡是细胞有机体为调控机体发育,维护内环境稳定而主动采取的、由基因决定的、自动结束细胞生命的过程。线粒体在细胞凋亡中发挥着重要的作用。线粒体通透性转变孔（MPTP）开放导致线粒体内释放出包括细胞色素C（cyt-c、Smac／DIABLO和AIF等线粒体凋亡因子在内的各种蛋白,从而启动细胞凋亡程序引起细胞凋亡。Cyt—c释放到细胞浆后,Cyt—c、dATP、Aapf-1和procaspase-9组成聚合体,称为凋亡体。凋亡体可激活其下游的procaspase-3,从而导致细胞死亡。在凋亡诱导因素的刺激下,AIF可从线粒体转位进入胞核,直接引起染色质浓缩及DNA的断裂。AIF的转位足以介导体外细胞凋亡的发生。     

过量饮酒对鼠生精细胞caspase-3表达的影响

目的 研究过量饮酒对曲精小管内生精细胞caspase-3表达的影响.方法 给成年小鼠喂食白酒,剂量为4g·kg-1 ·d-1,连用5d或10 d.原位杂交测试睾丸曲精小管内生精细胞caspase-3的活性.结果 对照组小鼠生精小管内只有少量caspase-3阳性反应细胞,而饮用酒精5d的小鼠生精小管内则见较多caspase-3阳性反应细胞,饮用酒精10 d的小鼠caspase-3阳性反应细胞数最多.结论 乙醇可以诱发生精细胞的凋亡.     

红景天苷对百草枯所致PC12细胞凋亡的抑制作用及相关机制

目的探讨红景天苷(salidroside)的神经保护作用及其可能的作用机制。方法采用百草枯(PQ)诱导的具有多巴胺神经元特性的PC12细胞凋亡作为帕金森病的体外模型。实验分对照组、PQ诱导组和红景天苷3个浓度(终浓度10,20和30μmol.L-1)预处理组。用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术和Hoechst33258染色法测定细胞凋亡,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,免疫组化法检测细胞色素c(Cytc)的释放和Bcl-2蛋白的表达。结果PQ(800μmol.L-1)作用于PC12细胞24h后,与正常对照组比较,细胞存活率降低,细胞染色质固缩,细胞核呈致密浓染,细胞凋亡百分率升高;红景天苷3个浓度预处理后,细胞存活率增加,细胞核凝聚明显减少,细胞凋亡率降低,且具有量-效关系。另外,PQ可使PC12细胞caspase-3活性增强,Cytc的释放增加,Bcl-2的表达代偿性升高;红景天苷预处理后,PC12细胞增高的caspase-3活性和Cytc的释放明显降低,Bcl-2的表达进一步升高。结论红景天苷对PQ诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能是促进Bcl-2的表达,抑制Cytc的释放和caspase-3的激活,提示红景天苷可能具有神经保护作用。     

齿科合金活化线粒体途径诱导L929细胞凋亡的观察

目的：探讨齿科合金通过线粒体途径诱导L929细胞凋亡的作用机制。方法：选用临床常用齿科合金和中科院金属研究所研发的三种低镍合金的浸提液处理小鼠L929细胞,用MTT法检测细胞增殖：用荧光染料罗丹明123检测细胞线粒体跨膜电位;Western-Blot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的表达。结果：齿科合金作用L929细胞48h后,细胞线粒体跨膜电位降低,伴有细胞色素C从线粒体到胞浆的释放。结论：齿科合金通过活化线粒体信号转导途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是合金诱导L929细胞凋亡途径之一。     

细胞色素C、线粒体与凋亡

线粒体细胞色素C释放在细胞凋亡过程中起重要作用。细胞色素C释放到胞质后可引发caspase活化级联 ,导致细胞死亡。细胞色素C的释放是线粒体外膜通透性增高的结果。Bcl 2蛋白家族具有调控细胞色素C释放的功能。除细胞色素C外 ,线粒体膜间隙的凋亡诱导因子 (AIF)在凋亡过程中也释放至胞质 ,这两种途径充分保证了细胞死亡程序的有效执行。轻中度暂时性脑缺血后细胞色素C释放至胞质 ,早于DNA片段化     

线粒体与细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡 (apoptosis)是一种普遍的生理现象 ,是指在一定的生理或病理条件下 ,按程序进行的细胞死亡过程 ,亦称程序性细胞死亡 (programmedcelldeath ,PCD) ,对于维持多细胞机体的完整性和自身稳态具有重要作用。线粒体是所有真核细胞内腺苷三磷酸(ATP)产生中心 ,对维持细胞能量代谢和正常功能活动起重要作用。新近研究发现 ,线粒体内包含一些与细胞凋亡有密切关系的物质 ,如细胞色素C(CytC、凋亡诱导因子 (AIF)、Ca2 + 和活性氧自由基 (ROS)等。在凋亡信号的刺激下 ,线粒体膜通透性增加 ,由此产生一系列关键性变化 ,包括CytC的释放…     

电压依赖性阴离子通道在线粒体依赖性细胞凋亡中作用的研究进展

电压依赖性阴离子通道(VDAC)是线粒体外膜上含量极为丰富的孔状蛋白,是细胞内代谢物分子进出线粒体的必经通道,VDAC的功能状态与线粒体的代谢和功能关系十分密切。VDAC的异常通常会引发线粒体功能紊乱,导致ATP水平或转膜电位下降、细胞色素c释放等凋亡程序的启动。VDAC可与许多物质相互作用而发挥诱导细胞凋亡或抑制细胞凋亡的效应,从而在线粒体依赖性细胞凋亡途径中有着十分重要的作用。VDAC对细胞凋亡的影响机制可应用于药物治疗靶点、外源化学物毒性机制的研究,因此,VDAC的作用是近年来外源化学物所致细胞凋亡机制研究领域中的热点问题。     

乌贼墨对小鼠NK细胞杀伤活性的影响和抑瘤作用的研究

研究乌贼墨对小鼠脾细胞NK细胞杀伤活性的诱生作用及NK细胞杀伤性的持续时间，并探讨乌贼墨对荷瘤鼠脾细胞NK细胞杀伤活性的影响及抑制肿瘤生长的作用。用5％的乌贼墨给小鼠灌胃，连续5d后取不同时间的小鼠脾细胞，应用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性，结果表明，口服乌贼墨后可使小鼠NK细胞杀伤活性增强，实验组与对照组比较有显著性差异（P＜0．01），诱生后24h杀伤活性明显增强，2周左右恢复正常水平，乌贼墨可使荷瘤鼠NK细胞杀伤活性增强，瘤体明显小于阴性对照组，病理学分析证明小鼠瘤组织出血坏死及炎细胞浸润程度明显高于对照组，阳性对照组小鼠免疫功能损伤严重。     

选择性线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制

【摘要】目的 检测选择性线粒体分裂抑制剂-1（Mdivi-1）对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后神经细胞线粒体中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、细胞色素C（Cyt-C）及神经细胞凋亡的影响。方法成年雌性SD大鼠36只,体质量 250~300g,随机分为假手术组（Sham组）、单纯脊髓损伤组（SCI组）、Mdivi-1预处理组（1.20mg/kg,Mdivi-1组）,各12 只。Sham组只暴露脊髓,不打击。SCI组和Mdivi-1组采用Allen’s方法制备脊髓损伤模型。Mdivi-1组在脊髓打击之前15min尾静脉给予Mdivi-1,而SCI组给予等量二甲基亚砜（DMSO）。Sham组在暴露脊髓8h后立即处死,SCI组和Mdivi-1组均于脊髓损伤后8h处死;然后取出脊髓节段T9~T11,用分光光度计检测各组脊髓组织线粒体中MDA 和GSH的含量,Western Blot法检测线粒体及胞浆内Cyt-C表达情况,荧光TUNEL法观察神经细胞凋亡情况。结果与Sham组相比,SCI组线粒体中Cyt-C和GSH明显减少,但线粒体中的MDA,胞浆中Cyt-C及神经细胞凋亡数目明显增多（P<0.01）;与SCI组相比,Mdivi-1组线粒体中Cyt-C和GSH明显增多,但线粒体中MDA,胞浆中Cyt-C以及神经细胞凋亡数目明显减少（P<0.01）。结论Mdivi-1具有减轻ASCI后神经细胞线粒体氧化损伤,抑制线粒体中Cyt-C 的释放及神经细胞凋亡的作用,促进了脊髓功能恢复。     

镍染毒大鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫酸镍诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的类型及其对生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和雌二醇水平的影响。方法健康性成熟Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组,正常对照组,硫酸镍1.25、2.5、5.0 mg/kg 3个剂量组。腹腔注射染毒,1次/d,连续30 d。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化SABC法检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达;放射免疫法检测血清雌二醇(E2)水平。结果与对照组比较,各剂量组大鼠睾丸生精细胞凋亡增多(P<0.05),且凋亡细胞主要是生精早期和晚期阶段的精原细胞和精母细胞。各剂量组大鼠生精细胞Bcl-2阳性表达减少而Bax阳性表达增多,且血清E2水平降低(P<0.05)。结论硫酸镍可诱导大鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡,其机制可能与生精细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调以及雌二醇水平降低有关。     

西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐诱导肿瘤细胞凋亡作用及机理研究

目的：探讨西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐体内、体外抗肿瘤作用，并初步探讨作用机理。结果：在体内研究中，实验以S180和H22小鼠为研究对象。实验结果表明，GS对S180／小鼠具有抑瘤作用，其中，以中、高剂量组效果最好，与阴性对照组相比具有显著性差异（P〈0.01），抑瘤率呈现一定量效关系（45.45％、57.58％、63.64％）；在生存时间方面，GS能延长H22小鼠的生存时间，其中以高剂量的生存时间延长显著（P〈0．05）。GS还能升高S180小鼠胸腺指数和脾指数，与阴性组比较有显著性差异（P〈0．05，P〈0.01），说明GS对荷瘤小鼠两大免疫器官具有良好的保护作用。在体内抗肿瘤研究中。GS可提高S180和H22小鼠红细胞中SOD、CAT和全血中GSH的活性，并降低全血中红细胞MDA含量。GS的抗肿瘤作用可能是通过提高SOD、CAT、GSH活性，和降低自由基水平来实现的。在体外研究中GS对SGC-7901和HepG2细胞的凋亡过程及其可能机理。从SRB实验结果可看出，1、10、100和1000μg／mL的GS作用于SGC-7901和HepG2细胞72h后，均可抑制肿瘤细胞的增殖，采用荧光倒置显微镜观察GS作用于SGC-7901和HepG2细胞18h后，细胞均出现早期凋亡细胞的形态；通过流式细胞仪检测得300、600、1200μg／mL的GS作用于SGC-7901和HepG2细胞18h后，SGC-7901细胞凋亡率分别为14．544％、10．110％、34．117％，对细胞周期作用显著；HepG2细胞凋亡率分别为2．159％、16．538％和54．455％。可见GS具有一定程度诱导肿瘤细胞凋亡的作用。在GS诱导肿瘤细胞凋亡机理实验中，300、600、1200％μg／mL的GS作用于SGC-7901和HepG2细胞18h后，肿瘤细胞内的Ca^2＋。浓度剂量升高，此作用可能是GS诱导肿瘤细胞凋亡的作用机理之一。线粒体是细胞凋亡的调控中心。所以，通过流式细胞仪检测300、600、1200μg／mL的GS作用于SGC-7901和HepG2细胞18h后，肿瘤细胞内活性氧均增加，线粒体跨膜电位均降低。GS诱导肿瘤细胞凋亡可能是Ca^2＋、活性氧和线粒体之间相互作用的结果，这也许是GS诱导肿瘤细胞凋亡的机理之一。结论：GS无论在体内还是在体外研究中均表现出良好的肿瘤抑制作用，具有一定的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

川芎嗪对隐睾固定术大鼠生精细胞影响的实验研究

目的：观察睾丸固定术前使用盐酸川芎嗪（Ligustrazine Hydrochloride）是否对大鼠隐睾所致的生精细胞凋亡有协同保护作用。方法：22日龄雄性SD大鼠40只，随机分成4组，假手术组（A组）、隐睾组（B组）、睾丸固定术组（C组）、固定术＋川芎嗪组（D组），制作大鼠隐睾模型，D组注射盐酸川芎嗪。14d后，C组和D组行睾丸下降固定术。28d后测定睾丸组织中超氧化物歧化酶（sod）、丙二醛（MDA）的含量，TUNEL法测定生精细胞的凋亡指数。结果：固定术＋川芎嗪组隐睾睾丸内SOD活性增强，MDA含量明显下降，生精细胞凋亡指数进一步减低。结论：睾丸下降固定术能够减轻大鼠睾丸生精细胞的凋亡，而固定术前使用川芎嗪对隐睾所致的睾丸生精细胞凋亡有协同保护作用。     

大蒜水提取物对萘诱导的小鼠氧化应激的抑制作用

线粒体中的活性氧（ROS）对在病理和生理条件下的细胞凋亡起重要作用。有研究表明漆树Rhus verniciflua Stokes乙醇提取物具抗氧化、抗细胞凋亡、抑制人肿瘤细胞增殖等作用。作者研究了该植物中糖蛋白的抗氧化活性以及是否具有调节抗氧化酶、线粒体型细胞凋亡信号、NO产生，抑制葡萄糖／葡萄糖氧化酶（G／GO）诱导的BNLCL．2细胞凋亡等作用。     

小鼠肾集合管发育中的细胞凋亡与整合素α2的表达

目的观察小鼠肾集合管发育过程中细胞凋亡与整合素α2的表达,探讨小鼠集合管发育过程中整合素α2及细胞凋亡的作用。方法应用免疫组织化学及灰度值测量、TUNEL染色及细胞凋亡指数检测方法对胚龄(E)17、18d及生后日龄(P)1、3、7、14、21、40d的小鼠肾集合管中整合素α2的表达和细胞凋亡情况进行观察分析。结果整合素α2于E17d的集合管开始出现,至P7d达到高峰,之后无明显含量的变化。TUNEL染色显示细胞凋亡最早出现于P1d的集合管,P7d达到最高峰,之后无明显变化。结论整合素α2及细胞凋亡对集合管的发育过程起一定的作用,整合素α2对细胞凋亡有一定的影响作用。     

乙酰水杨酸增强多胺衍生物ANISpm抗肝癌作用及其机制研究

探讨乙酰水杨酸增强多胺衍生物ANISpm抗肝癌作用及其作用机制。采用MTT法检测细胞毒性;应用高内涵活细胞成像系统检测细胞内ANISpm含量的变化及对细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;采用Western blotting方法检测细胞色素c,精脒/精胺乙酰转移酶,Caspase-3、-8、-9等蛋白表达的变化;应用高效液相色谱法检测细胞内多胺含量的变化。应用H22肿瘤移植模型评价对实体瘤生长的影响。实验结果显示,乙酰水杨酸体内外均具有增强ANISpm抗肝癌的作用,其机制为乙酰水杨酸通过上调肝癌细胞内精脒/精胺乙酰转移酶的活性,降低细胞内多胺含量从而增加了ANISpm的摄取,并通过ANISpm诱导肝癌细胞凋亡。该凋亡作用与ANISpm诱导细胞线粒体膜电位降低,促进细胞色素c释放以及活化Caspase-3、-8、-9等有关。     

锰超氧化物岐化酶模拟化合物诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制。方法以人白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;Annexin V/PI双标记和细胞形态学法检测细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2和bax基因mRNA的表达水平;流式细胞术(FCM)测定Bcl-2和Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm)、细胞色素C(Cyt C)释放和Caspase-3活性变化。结果0.5~10mg·mL-1MnSODm明显抑制K562细胞增殖(P<0.01),Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;bcl-2基因mRNA和蛋白表达下调,bax基因mRNA和蛋白表达上调,线粒体Δψm降低,Cyt C释放增多,Caspase-3活性增强。结论MnSODm调控Bax/Bcl-2表达,通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

凋亡诱导因子的研究进展

在细胞正常生理状态下,凋亡诱导因子定位在线粒体内膜上,与呼吸链复合体Ⅰ互相作用,催化电子从泛醌到细胞色素C的传递。当细胞受到凋亡信号刺激后,凋亡诱导因子变成可溶性蛋白,从线粒体释放到细胞浆中,再通过其核定位信号序列进入细胞核内,和其他因子一起作用于染色体,使染色体凝聚和DNA呈大片段断裂(约50kb),最终诱导细胞凋亡。凋亡诱导因子受p53、Bcl-2家族、Hsp70等多种因子的调节。     

氧化应激在TRAIL诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的 探讨氧化应激在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用.方法 40μg·L-1 TRAIL处理细胞后,用MTT法检测TRAIL对细胞增殖的抑制作用;用分光光度法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测胞浆内的活性氧(ROS)水平;激光共聚焦测定细胞线粒体膜电位(△Ψm);蛋白质印迹法检测Bcl-2、Cyt C、DR 4、DR 5蛋白量.结果 40 μg·L-1 TRAIL对Hela细胞的生长具有显著的抑制作用;使抗氧化因子GSH含量明显下降,氧化应激产物ROS、MDA含量明显增多;到6h时△Ψm不断降低,能明显下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,引起线粒体Cyt C向细胞质的释放;同时上调死亡受体DR 5的表达.而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能抑制TRAIL引起的这些变化.结论 氧化应激在TRAIL诱导的Hela细胞凋亡中起着重要作用,可能与ROS激活线粒体途径和上调DR 5的表达密切相关.     

益肾生精方对肾阳虚大鼠生精细胞Survivin蛋白表达及对生精细胞凋亡的调控研究

目的 研究益肾生精方对腺嘌呤诱导的肾阳虚大鼠生精细胞凋亡抑制蛋白Survivin的凋控及对生精细胞凋亡的影响.方法 SD大鼠40只随机分为3组：空白对照组、模型（腺嘌呤）组和中药治疗（益肾生精方）组,比较各组生精细胞Survivin蛋白表达率和PC-3细胞凋亡.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠体重减轻（P＜0.01）,睾丸生精细胞的Survivin阳性表达率降低（P＜0.01）,凋亡率显著增高（P＜0.01）,喂饲益肾生精方的中药治疗组的大鼠体重介于二者之间,但明显重于模型组,显著上调生精细胞Survivin基因的表达,抑制大鼠生精细胞凋亡,与模型组比较有统计学意义（P＜0.01）.结论 益肾生精方能够显著改善大鼠肾阳虚症状,抑制生精细胞凋亡,提高生精功能,其作用可能与上调细胞凋亡抑制蛋白Survivin在睾丸组织内的表达有关.