二价锰对不同月龄大鼠线粒体膜电位影响的体外研究

研究二价锰离子对不同月龄大鼠线粒体膜电位的影响。将不同月龄 (4个月和 1 8个月 )Wistar大鼠 ,提取脑线粒体后分为 5组 (5 0、1 0 0、2 0 0、40 0 μmol/L和空白对照 )体外染毒 ,用荧光光度法连续观察 3min内样品荧光值的变化。结果显示 ,各染毒组和对照组间差异均有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;不同月龄大鼠各染毒组间差异也有显著性(P <0 .0 5 )。随着大鼠年龄和染毒剂量的增加 ,线粒体膜功能衰退 ,耐受性降低。     

不同价态锰对神经细胞的毒性比较以及硒的保护作用

目的研究不同价态锰化合物对神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)DNA损伤作用、细胞凋亡和细胞周期的影响,以及抗氧化剂硒的保护作用,从而探讨锰的神经毒作用机制。方法将培养的SH-SY5Y细胞随机分为染毒的二价锰和三价锰化合物(0.5 mmol/L)组、空白对照组、硒干预组。培养24 h后应用单细胞凝胶电泳检测细胞DNA链断裂情况。48 h后用流式细胞仪测定细胞凋亡率、细胞周期分布。结果三价锰组DNA损伤程度比二价锰组严重。二价锰和三价锰组均出现亚二倍体的凋亡峰;细胞周期分布也发生改变,与对照组相比S期细胞明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);三价锰比二价锰更易引起细胞凋亡(P<0.01)和细胞周期变化(P<0.05)。硒可降低锰化合物引起的细胞DNA损伤、凋亡率和细胞周期中S期细胞数。结论不同价态锰对神经细胞均有损伤作用,且三价锰大于二价锰。硒对锰致细胞DNA损伤、凋亡和细胞周期改变有一定的保护作用,提示氧化应激可能参与了锰的毒作用。     

硒对不同价态锰诱导的SH-SY5Y神经细胞脂质过氧化的影响

为研究硒对不同价态锰诱导的人神经母细胞瘤细胞 (SH SY5Y细胞 )脂质过氧化的影响 ,把SH SY5Y细胞分为空白对照组、二价锰损伤组、硒二价锰保护组、三价锰损伤组、硒三价锰保护组。空白组为对照 ,硒保护组用硒预处理 4h ,然后与锰损伤各组分别加入相应二价锰和三价锰 ,使二价锰和三价锰的终浓度为 0 .5mmol/L ,共同培养2 4h。测定细胞中的过氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽过氧化氢酶 (GSH Px)的活性及计算抗氧化指数 (GSH Px/MDA)。结果显示 ,硒二价锰保护组、硒三价锰保护组的SOD、GSH Px酶的活性及抗氧化指数与相应的二价锰损伤组、三价锰损伤组相比均有不同程度的升高 (P <0 .0 5 ) ,而MDA的质量摩尔浓度则均有所下降。提示 :硒对不同价态锰诱导神经细胞产生的脂质过氧化有抑制作用。     

过氧化氢对肠上皮细胞线粒体功能及细胞凋亡的影响

目的 :探讨活性氧在体外对肠上皮细胞线粒体功能和膜电位 (ΔΨmt)的影响及其与细胞凋亡的关系。方法 :肠上皮细胞株 (SW - 4 80 ) ,采用活性氧 (reactiveoxygenspecies,ROS)的代表物 -过氧化氢 (H2 O2 )损伤模型 ,用 5 0 μmmol/L ,10 0 μmmol/L ,2 0 0 μmmol/L ,4 0 0 μmmol/L和 4mmol/L作用 1,3,6 ,12及 2 4h。线粒体功能采用噻唑蓝法 (MTT法 ) ;用罗丹明 (Rhodamme- 12 3)荧光探针检查活细胞线粒体膜电位变化 ;用Annexin -V荧光探针 ,流式细胞仪检测早期凋亡细胞。结果 :H2 O2 在低浓度 (5 0 μmmol/L ,10 0 μmmol/L ,2 0 0 μmmol/L)时线粒体功能未见明显改变 ,在高浓度 (40 0 μmmol/L ,4mmol/L)时可导致线粒体功能下降 ,同时使线粒体膜电位显著降低 ,细胞凋亡率显著增加。结论 :线粒体参与了H2 O2 诱导肠上皮细胞的早期程序性死亡及随后的细胞死亡 ,这种损伤作用与线粒体功能和膜电位下降密切相关。     

长期低剂量锰染毒对子代大鼠睾丸生精细胞线粒体状态和细胞凋亡的影响

目的 探讨长期低剂量氯化锰染毒对子代大鼠睾丸生精细胞线粒体形态和凋亡的影响.方法 健康雌性SD大鼠32只分为对照组、低、中、高剂量组.腹腔注射2、4和8 mg/kg MnCl2·4H2O或生理盐水,1次/天,5天/周,共8周,并在妊娠期和哺乳期继续染毒.每组8只12周龄子代大鼠断头处死后,观察睾丸生精小管结构和生精细胞线粒体形态、视神经萎缩蛋白1(Opa1)、动力相关蛋白1(Drp1)、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)表达和细胞凋亡情况.结果 随锰染毒剂量增加,生精细胞层数逐渐减少,细胞排列紊乱、数量减少;中、高剂量组可见线粒体分离、肿胀等表现;中、高剂量组Opa1显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Drp1、Caspase9则随锰染毒剂量增加而递增(P＜0.05,P＜0.01);锰染毒组生精细胞凋亡指数随锰染毒剂量增加而上升(P＜0.05).结论 长期低剂量锰染毒可调节Opa1/Drp1基因表达而影响线粒体功能,导致子代大鼠生精细胞凋亡.     

鱼藤酮对PC12细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响

目的观察鱼藤酮对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma, PC12细胞)线粒体膜电位及细胞周期的影响,探讨鱼藤酮对多巴胺神经元的损伤机制.方法用流式细胞仪检测PC12细胞线粒体膜电位及细胞周期.结果 5.0 μmol/L鱼藤酮作用于PC12细胞12 h及24 h后,G0/G1期及S期细胞所占比例逐渐下降(P<0.01),而G2/M期细胞比例逐渐升高(P<0.01).单纯鱼藤酮中毒12 h线粒体膜电位即降低.结论大剂量(5.0 μmol/L)鱼藤酮引起线粒体膜电位降低及细胞周期改变,可能导致PC12细胞生长障碍.     

锰对大鼠肝脏线粒体氧化损伤的作用机制

目的:观察不同剂量的锰对大鼠肝脏线粒体的氧化损伤作用,探讨其相关机制。方法:将24只雄性SD大鼠随机均分为对照组和MnCl₂低、中、高剂量组,分别腹腔注射生理盐水和2、8、32 g/kg MnCl₂溶液,每天1次,连续30 d后取大鼠肝组织测定线粒体PT孔、线粒体膜肿胀度、线粒体膜电位、琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素C、羟自由基(OH·)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)。结果:各组间肝线粒体PT孔差异均有统计学意义(P<0.01);MnCl₂高剂量组线粒体膜肿胀度小于对照组和MnCl₂低剂量组(P<0.05);MnCl₂高剂量组线粒体膜电位光密度均低于其他3组(P<0.05~P<0.01)。与对照组和MnCl₂低剂量组相比,MnCl₂中、高剂量组肝线粒体SDH均下降(P<0.01),且MnCl₂中、高剂量组间差异亦有统计学意义(P<;与对照组和MnCl₂低剂量组相比,MnCl₂高剂量组肝线粒体细胞色素C上升(P<0.05)。MnCl₂高剂量组肝线粒体OH·显著高于其他3组(P<0.01);与对照组比较,MnCl₂低、中、高剂量组大鼠肝线粒体GSH-PX显著降低(P<0.05)。结论:锰可导致线粒体氧化损伤,引起大鼠肝线粒体PT孔开放、膜电位下降,SDH、GSH-PX降低,细胞色素C、OH·显著升高,对机体产生毒性作用。     

检测线粒体通透性转换孔道评价胰岛β细胞线粒体功能

目的 评价高糖高脂作用下胰岛β细胞线粒体功能损害情况.方法 分别于5.6 mmol/L和25 mmol/L葡萄糖中加入0.4 mmol/L软脂酸,培养胰岛β细胞株INS-1细胞24 h,通过荧光染色,利用流式细胞技术和荧光显微镜检测线粒体通透性转换孔道(mPTP)、线粒体膜电位和活性氧(ROS)的改变,了解β细胞线粒体...     

莫达非尼抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡

目的:研究莫达非尼(modafinil)对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用,并对其机制进行探讨.方法:以噻唑兰(MTT)法测定PC12细胞存活率;用流式细胞术检测PC12细胞凋亡的百分率;测定细胞内罗丹明123(Rhodamine123)的荧光强度,反映细胞线粒体膜电位的改变.结果:莫达非尼能抑制过氧化氢(200 μmol/L)、硝普钠(500μmol/L)和连二亚硫酸钠(2 mmol/L)对PC12细胞的损伤.过氧化氢(200 μmol/L)24h可以诱导PC12细胞凋亡(凋亡率为32.65%).莫达非尼(15,7.5 μmol/L)显著降低凋亡细胞的百分率(凋亡百分率分别为7.95%、15.46%).并且莫达非尼可以抑制过氧化氢引起的线粒体膜电位降低.结论:莫达非尼对PC12细胞有保护作用.能抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡,这一作用可能与其抑制过氧化氢引起的线粒体膜电位降低有关.     

线粒体凋亡途径在H_2O_2诱导耐阿霉素人乳腺癌细胞凋亡中的作用

目的 探索耐阿霉素的乳腺癌细胞株MCF-7/Adr凋亡的可能途径.方法 采用耐药株MCF-7/Adr和野生株MCF-7/wt2种细胞株进行对比,以噻唑蓝分析(MTT)法探索H2O2导致其线粒体功能下降的浓度,观察细胞形态学和线粒体超微结构的改变.应用DNA凝胶电泳、Annexin Ⅴ和PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡发生,Rh123共聚焦显微镜检测线粒体膜电位和P-gP功能,Western blot检测细胞色素C(Cyto C)的释放状况.结果 4 mmol/L H2O2引起MCF-7/Adr线粒体整体功能不可逆的进行性下降,线粒体空化,嵴肿胀.MCF-7/Adr凋亡率(96.52%)显著高于MCF-7/wt(18.57%,P<0.01).凋亡DNA电泳仅见800、1 600 bp 2个分子片段.MCF-7/Adr线粒体数量较MCF-7/wt减少,McF-7/Adr膜电位下降.4 mmol/L H2O2处理使MCF-7/Adr线粒体Cyto C释放至细胞质,McF-7/wt仅少量Cyto C释放.结论 P-gp阳性细胞因其线粒体的结构和功能改变的特点,较其野生株细胞更易经线粒体途径凋亡.提示以线粒体为靶点的药物有助于克服与P-gp表达有关的多药耐药.     

叠氮钠对SH—SY5Y人神经母细胞瘤细胞线粒体跨膜电位 …

目的 观察线粒体呼吸链复合体ＩＶ（即细胞色素Ｃ氧化酶）抑制剂叠氮钠（ＮａＮ３）对人神经母细胞瘤细胞能量代身的影响,探讨线粒体缺陷在神经退行性疾病发病中的作用。方法 将叠氮钠与培养的人神经母细胞瘤细胞系ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞共同孵育,用微测量法测定线粒体复合体ＩＶ活性,噻唑兰（ＭＴＴ）法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测线粒体跨膜电位变化。结果 １６￣６４ｍｍｏｌ／Ｌ叠氮钠与培养的ＳＨ－Ｓ     

2型糖尿病患者餐后高脂血症与颈动脉粥样硬化病变及纤溶活性关系的研究

目的：观察2型糖尿病患者餐后甘油三酯水平对动脉粥样硬化形成的影响。方法：2型糖尿病患者90例,按空腹甘油三酯（TG）和脂肪餐后4h TG水平分为空腹高脂组、餐后正常组、餐后增高组,所有患者均测空腹血糖（FBG）、餐后2h血糖（PBG2h）、空腹胰岛素（FINS）、 糖化血红蛋白（HbA1C）、总胆固醇（TC）、TG、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、体重指数（BMI）、腰臀比（ WHR）、全血粘度、纤维蛋白原、血浆粘度、血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物-1(PAI-1)活性、D-二聚体(D-D)水平、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α) ,并行颈动脉彩色多普勒检查。结果：餐后增高组、空腹高脂组颈动脉内膜中层厚度（IMT）、颈动脉斑块发生率、大血管病变发生率、颈动脉斑块总积分均明显高于餐后正常组（P＜0.01),而餐后增高组与空腹高脂组颈动脉IMT无明显差异;餐后增高组、空腹高脂组患者全血的高切粘度、中切粘度、低切粘度,血浆粘度,红细胞压积,纤维蛋白原,血沉均显著高于餐后正常组（P＜0.01),餐后增高组与空腹高脂组比较无统计学意义;CRP与TNF-α水平按餐后正常组、餐后增高组与空腹高脂组的顺序依次增高（P＜0.05);餐后增高组、空腹高脂组患者血浆PAI 1、D D水平活性明显高于餐后正常组（P＜0.05),血浆t-PA活性明显低于餐后正常组（P＜0.01),餐后增高组与空腹高脂组比较,差异无统计学意义。结论：空腹TG正常伴餐后TG增高者与空腹TG增高对动脉粥样硬化有同样的危害性,对促进糖尿病大血管病变的发生有相同的危险性。     

GDP对大鼠脑线粒体呼吸氧耗的抑制作用及其对膜电位的影响

目的 通过观察二磷酸鸟苷(guanosine diphosphate, GDP)对大鼠脑线粒体呼吸氧耗作用的量-效关系及对膜电位的影响,探讨脱偶联蛋白(uncoupling proteins, UCPS)活性改变与线粒体呼吸氧耗和膜电位的关系.方法 应用差速离心法提取大鼠脑线粒体,分别在不同浓度GDP干预下采用Clark氧电极法测定线粒体呼吸氧耗并计算Ⅲ态呼吸(state 3 respiration, ST3)、Ⅳ态呼吸(state 4 respiration, ST4)、呼吸控制率(respiratory control rate, RCR)、氧化磷酸化效率(oxidative phosphorylation, OPR)和采用Rhodamine123法测定线粒体膜电位(MMP).结果 大鼠脑线粒体ST3、ST4、RCR、OPR随GDP的浓度改变而改变;当GDP的浓度为0～1.4 mmol/L时,呈剂量依赖关系;当GDP达到1 mmol/L时抑制作用最明显,抑制率达51.3%;大于或小于1 mmol/L时其抑制率均降低;在GDP对呼吸氧耗抑制率最高时MMP最高.结论 UCPS的抑制剂(GDP)可直接抑制分离的大鼠脑线粒体呼吸氧耗和MMP,并呈一定的量-效关系,提示UCPS活性改变可影响线粒体呼吸氧耗和MMP.     

舒芬太尼用于胸部肿瘤患者术后硬膜外自控镇痛的临床研究

目的以芬太尼为对照,比较不同剂量舒芬太尼复合布比卡因用于胸部肿瘤手术后硬膜外自控镇痛的临床效果和安全性。方法60例择期开胸行食管、肺叶肿瘤切除术后病人,随机双盲分为4组,每组15例,术后硬膜外镇痛分别使用舒芬太尼0·25μg/ml(Ⅰ组)、0·5μg/ml(Ⅱ组)、0·75μg/ml(Ⅲ组)及芬太尼5μg/ml(Ⅳ组)。记录术后第4、8、12、24、48小时的镇痛效果、镇静程度,各组可能出现的皮肤瘙痒、恶心呕吐等不良反应。结果与Ⅰ组对应值比较,Ⅱ、Ⅲ组VAS、VAFS评分降低,差异有显著性(p<0·05或p<0·01);与Ⅱ组对应值比较,Ⅲ组VAS、VAFS评分降低,差异有显著性(p<0·05)。各时点Ramsay镇静评分:Ⅰ组术后8-24小时评分低于其他各组对应值,差异有显著性(p<0·05)。结论舒芬太尼复合低浓度布比卡因用于胸部肿瘤手术后硬膜外自控镇痛临床效果好,副作用小,舒芬太尼推荐浓度以0·75ug/ml为宜。     

体外鼠肝灌注时胆酸对胆汁、谷氨酸脱氢酶和线粒体膜稳定性的影响（英文）

目的：探讨熊脱氧胆酸（UDCA）和鹅脱胆酸（CDCA）对胆汁分泌，谷氨酸脱氢酶（GLDH）和线粒体膜结构的作用。以及UDCA的线粒体膜保护作用。方法：应用离体大鼠肝灌注技术，0．1－0．5mmol/L胆酸灌注鼠肝，测定胆汁分泌及GLDH释放，分离鼠肝线粒体，自旋标记物插入线粒体膜，研究膜结构变化。结果：CDCA（0.1,0.3,0.5mmol/L)可使胆汁分泌分别减少12％，77．25％，78．98％，明显增加GLDH释放达3，9和12倍，并增加线粒体膜的流动性，UDCA在0.3,0.5mmol/L时可增加胆汁分泌达1．8倍和1．9倍，不影响GLDH和线粒体膜结构，预灌注UDCA可部分缓解CDCA引起的GLDH释放和胆汁分泌减少，稳定线粒体膜结构，结论：CDCA破坏线粒体膜和引起肝功能减退，UDCA可改善胆汁分泌，部分阻止CDCA对线粒体的损害，低浓度CDCA不损害肝功能。     

中国人Ⅱb型高脂蛋白血症apoE基因多态性的研究

目的　探讨中国人 b型高脂蛋白血症患者载脂蛋白 E(apo E)基因多态性及其与血脂和载脂蛋白水平的关系。方法　采用聚合酶链反应 -限制性酶切片段长度多态性法 (PCR- RFL P) ,分别对 74例 b型高脂血症患者及 2 30例血脂正常者的 apo E基因型、空腹血脂及载脂蛋白 A 、A 、B10 0、C 、C 、E进行了全面分析。结果　 b型高脂血症患者的体重指数 (BMI) ,血清甘油三酯 (TG) ,总胆固醇 (TC) ,低密度脂蛋白胆固醇(L DL C) ,非高密度脂蛋白胆固醇 (n HDL C) ,载脂蛋白 A 、B10 0、C 、C 、E水平及 TG/ HDL C比值均较对照组显著升高 (P<0 .0 0 1) ;血清高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)水平及 apo E/ apo C 比值显著降低 (P<0 .0 5 )。 b型高脂血症组与对照组 apo E基因型及等位基因频率分布均以 E3/ 3和 ε3最高 , b型高脂血症组的 ε2 等位基因有增高的趋势 ,而 ε4等位基因有降低的趋势 (P>0 .0 5 )。携带 ε2 等位基因组血清 TG、apo C 、apo E水平及 apo E/ apo C 比值较 E3/ 3基因型组显著升高 ,而携带 ε4等位基因组血清 TC、n HDL C及 apo E水平较 E3/ 3基因型组显著升高(P<0 .0 0 1) )。结论　 ε2 及 ε4等位基因与 b型高脂蛋白血症患者的血清 TG、TC、n HDL C、apo C 及 apo E水平升高有关。     

钙介导As2O3诱导的线粒体通透性转变孔道开放

目的研究Ca^2＋在AS2O3介导的PTP开放中的作用,探讨AS2O3诱导粒体通透性转变孔道（PTP）开放的机制。方法提取大鼠肝线粒体,通过紫外分光光度仪检测Res作用下线粒体的膨胀,借此测定线粒体PTP的开放状态;借助荧光探针Rh123检测线粒体膜电位的变化。结果用10μmol／L,加10μmol／LCa^2＋处理线粒体,PTP开放。单独使用10μmol／LAS2O3处理,或先用0．5mmol／LEGTA螯合C矿,然后用10 mol／LAS2O3加10μmol／LCa^2＋处理,线粒体D540不下降。分别用0、5、10和20μmol／LAS2O3,处理线粒体,D540变化可分别被50、20、10和5μmol／LCa^2＋介导。结论C矿能介导AS2O3,诱导的PTP开放;AS2O3,诱导细胞凋亡通过降低诱发PTP开放所需的Ca^2＋阈值促使PTP开放,有可能通过调节细胞内的Ca^2＋来调控线粒体PTP开放进而调控细胞凋亡。     

胰岛素输注方案对内科重症监护病房患者血糖控制的作用

目的 探讨胰岛素输注方案对内科重症监护病房(MICU)患者血糖控制的作用.方法 选择2007年8～10月MICU中需要进行血糖控制的患者分3个阶段进行研究,每个阶段为1个月.3个阶段分别为:①根据医牛经验进行血糖控制而无目标血糖值;②根据医牛经验进行目标血糖控制(4.5～7.5mmol/L);③根据计算机辅助的胰岛素输...     

丹参酮ⅡA对前列腺成纤维细胞增殖及胶原表达的影响

目的研究丹参酮ⅡA对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的前列腺成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,初步探讨丹参酮ⅡA是否具有治疗前列腺组织纤维化的潜力。方法通过消化法原代培养和差速贴壁法纯化获得PrF,分别用5 ng/mL的TGF-β1和不同质量浓度的丹参酮ⅡA(25、2.5、0.25mg/L)对其进行处理,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性,半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达。结果 5 ng/mL TGF-β1可明显诱导PrF的增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达(P<0.01)。25、2.5、0.25 mg/L质量浓度的丹参酮ⅡA均能显著抑制TGFβ1诱导的细胞异常增殖(P<0.05或P<0.01),且呈良好的量效关系。25 mg/L的丹参酮ⅡA对Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达有抑制作用(P<0.01)。结论丹参酮ⅡA可抑制TGF-β1诱导的PrF异常增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达,具有抗前列腺纤维化的潜力。