体内外实验研究青蒿琥酯联合热疗对A549细胞生物学特性影响

[目的]了解青蒿琥酯联合热疗对肺腺癌A549细胞生物学特性的体内外影响. [方法]150μmol/L青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗(43℃,1 h)作用A549细胞24h,吉姆萨染色、、Y啶橙/溴化乙啶双染、损伤修复实验、平板集落形成实验、观察A549细胞形态及生物学特性改变.BALB/C-nu/nu品系裸鼠24只接种A549细胞107/只,7-10d肿瘤长出后随机分为4组:青蒿琥酯组(青蒿琥酯60mg/kg,腹腔注射);青蒿琥酯联合热疗组(青蒿琥酯60mg/kg,腹腔注射,联合43℃加热1h);同时设对照组和热疗组,每周处理2次,3周后处死裸鼠取出瘤结节称重并计算抑瘤率.[结果]青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗作用24h后,A549细胞失去正常长梭形或多角形形态,细胞变圆、胞体变小、部分细胞见胞核破碎和凋亡小体.细胞损伤修复能力和集落形成能力下降,以青蒿琥酯联合热疗作用效果明显.抑制A549细胞裸鼠移植瘤体内生长,青蒿琥酯联合热疗瘤结节重量低于单用青蒿琥酯、单用热疗和对照组,差异有统计学意义(P<0.05).青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗组抑瘤率为22.86%和27.86%. [结论]青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗改变肺腺癌A549细胞形态,降低细胞损伤修复能力和集落形成能力,体内抑制A549细胞裸鼠移植瘤生长. 合热疗作用24h后,A549细胞失去正常长梭形或多角形形态,细胞变圆、胞体变小、部分细胞见胞核破碎和凋亡小体.细胞损伤修复能力和集落形成能力下降,以青蒿琥酯联合热疗作用效果明显.抑制A549细胞裸鼠移植瘤体内生长,青蒿琥酯联合热疗瘤结节重量低于单用青蒿琥酯、单用热疗和对照组,差异有统计学意义(P<0.05).青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗组抑瘤率为22.86%和27.86%. [结论]青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗改变肺腺癌 549细胞形态,降低细胞损伤修复能力和集落形成能力,体内抑制A549细胞裸鼠移植瘤生长. 合热疗作用24h后,A549细胞失去正常长梭形或多角形形态,细胞变圆、胞体变小、部分细胞见胞核破碎和凋亡小体.细胞损伤修复能力和集落形成能力下降,以青蒿琥酯联合热疗作用效果明显.抑制A549细胞裸鼠移植瘤体内生长,青蒿琥酯联合热疗瘤结节重量低于单用青蒿琥酯、单用热疗和对照组,差异有     

青蒿琥酯对高温复合内毒素致细胞凋亡保护作用

目的 探讨高温复合内毒素(LPS)作用下,青蒿琥酯(AR)对RAW264.7细胞热休克蛋白70(HSP70)合成及细胞凋亡的影响。方法 采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞,分为空白对照组、高温复合内毒素组、AR组(又分为4个亚组),于40℃、95%O₂、5%CO₂条件下共同孵育24h。用RT-PCR技术检测细胞内HSP70mRNA及其蛋白的表达量,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 空白组和高温复合内毒素组HSP70m RNA的表达率分别为10%,23%,而AR组可显著提高HSP70mRNA的表达率,为54%,并与高温内毒素组差异有统计学意义(P<0.05)。HSP70蛋白的表达情况与HSP70mRNA一致,而细胞凋亡率的变化则呈相反趋势。结论 AR进一步诱导高温复合内毒素作用下RAW264.7细胞HSP70m RNA和HSP70蛋白的表达,且可明显降低细胞的凋亡率,可能是其抗损伤保护作用的机制之一。     

Orai1和STIM1在姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡中的作用

目的探讨不同浓度姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡中Orai1和STIM1mRNA水平的改变。方法 A549细胞分别暴露于5、10、15、20、25和30μmol/L姜黄素12、24和48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力;将不同浓度姜黄素孵育A549细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;real-time PCR确定25μmol/L姜黄素处理24 h后,Orai1和STIM1mRNA表达水平。结果姜黄素对A549细胞的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性,不同浓度姜黄素处理A549细胞24 h细胞存活率分别为96.5%、95.0%、77.4%、63.9%、57%、39.6%,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。姜黄素处理后,流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P0.05或P0.01)。经姜黄素处理后A549细胞Orai1和STIM1mRNA表达量均明显低于对照组(P0.01)。结论姜黄素可能引起A549细胞Orai1和STIM1 mRNA表达水平发生改变,通过下调Orai1和STIM1mRNA表达量引起细胞凋亡。     

青蒿琥酯体外抗柯萨奇病毒A16型作用研究

目的 研究青蒿琥酯(AS)对柯萨奇病毒A16型(CVA16)的体外抑制作用。方法 采用CCK8法检测不同浓度的青蒿琥酯对非洲绿猴肾上皮细胞(Vero细胞)的毒性作用,以确定后续药效学实验的浓度范围。以利巴韦林(RBV)为药物对照,比较青蒿琥酯对CVA16感染Vero细胞的阻断病毒吸附、直接灭活病毒和抑制病毒复制作用,采用SPSS24.0软件对数据进行分析。结果 根据细胞毒性试验确定后续实验的AS药物浓度为100μmol/L、75μmol/L、50μmol/L、25μmol/L和12.5μmol/L。青蒿琥酯不能阻断病毒吸附,也未表现出明显的直接灭活效果。青蒿琥酯在高于25μmol/L的浓度下能抑制病毒复制,100μmol/L青蒿琥酯与相同浓度的利巴韦林抑制病毒复制能力差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 青蒿琥酯可抑制CVA16在Vero细胞内的复制以实现抗病毒作用,具有潜在的预防和治疗CVA16感染的效应。     

玉米紫色植株色素体外诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的初步研究

[目的]研究玉米紫色植株色素(PMPP)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响。[方法]MTT法比较不同浓度的PMPP对体外培养的肺癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,同时应用倒置显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。[结果]不同浓度PMPP溶液对A549细胞的增殖均有抑制作用,浓度为50mg/ml时的抑制率最大,约为85.35%。形态学表现为单位视野内细胞数量明显减少,细胞间隙增大,细胞体积明显缩小,细胞失去原有的形态,胞体皱缩变圆,出现膜发泡现象。流式细胞术结果表明,当PMPP浓度为40mg/ml时,处于S期的肿瘤细胞增多,凋亡率为41.52%。[结论]玉米紫色植株色素可通过诱导部分细胞凋亡抑制人肺腺癌A549细胞增殖。     

热应激作用下人肺腺癌A549细胞中HSP70B’的动态表达

[目的]探讨热休克蛋白70B’（HSP70B’）的产生条件，分析HSP70B’在人肺腺癌A549细胞中的表达特征。[方法]采用Western-blot方法检测正常培养细胞（37℃）和不同温度（38、39、40、41、42、43、44、45℃）下热应激1h；选择HSP70B’表达最高的温度42℃，应激1h后恢复培养（37℃，5％CO2）不同时间（0、3、6、9、12、15、18、24h）；在42℃应激不同时间（0、20、40、60、80、100、120、140、180min）恢复培养6h的肺腺癌A549细胞中HSP70B’蛋白的表达水平。[结果]HSP70B’在正常状态的A549细胞中不表达；在不同应激温度作用下，HSP70B’在39℃开始表达，在42℃时表达量达到最高水平；细胞维持42℃应激后恢复培养不同时间作用下，HSP70B’表达在恢复培养6h后达最高，恢复培养24h后降到最低水平；在42℃应激不同时间后均恢复培养6h作用下，热应激60min时HSP70B’表达最高。[结论]肺腺癌细胞株A549细胞中HSP70B’产生的最优条件是42℃应激60min后37℃恢复培养6h。HSP70B’在热应激后的A549细胞中迅速表达，其在细胞热应激中的作用及意义有待进一步研究。     

青蒿琥酯对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

[目的]观察青蒿琥酯（Art）对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,GMCs）增殖的影响并探讨其作用机制。[方法]用不同浓度的青蒿琥酯刺激大鼠肾小球系膜细胞,4-甲基偶氮四唑蓝（tetrazolium salt,MTT）法观察其增殖情况。[结果]与正常对照组相比,LPS具有明显诱导GMC增殖的作用（P﹤0.05或P﹤0.01）;青蒿琥酯作用24、48、72 h,GMC增殖水平均可受到抑制（P﹤0.05或P﹤0.01）,且随药物浓度增大、作用时间延长,抑制作用增强,高浓度组（60 mg/L）72 h抑制率可达51.18%。[结论]青蒿琥酯能够抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖。     

青蒿琥酯抗菌增敏作用及机制研究进展

<正>抗生素的发现、生产以及大规模应用是医学界乃至全人类的巨大进步。但近年来,抗生素在临床治疗和畜牧养殖业中不合理应用甚至滥用的情况加剧了细菌耐药性的产生[1],并使之逐渐成为严重威胁公众健康的全球性公共卫生问题之一。多重耐药性（multidrug-resistant,MDR）细菌和超级耐药细菌的出现凸显了对制定新策略来对抗细菌感染的迫切需要。青蒿琥酯（artesunate,AS）是具有抗疟作用的新型倍半萜内酯青蒿素的衍生物之一,     

中国维和二级医院青蒿琥酯联合小柴胡颗粒抗疟治疗临床观察

目的探讨青蒿琥酯与小柴胡颗粒联合抗疟治疗的临床效果。方法 2016年9月至2017年9月,中国维和二级医院收治的87例疟疾患者随机分为观察组(46例)和对照组(41例)。观察组采用青蒿琥酯与小柴胡颗粒联合治疗,对照组给予青蒿琥酯常规治疗。对比两组患者退热时间、症状消失时间、疟原虫转阴时间及住院时间。随访四周后,对比评价疗效。结果观察组平均退热时间、平均症状消失时间、平均住院时间均明显短于对照组(P0.05);两组患者平均疟原虫转阴时间无明显差异(P0.05)。随访四周,观察组总有效率为95.7%,对照组为87.8%,两组差异显著(P0.05)。结论青蒿琥酯与小柴胡颗粒联合疟疾治疗方案可以取得更好的疗效,值得临床推广。     

沙利度胺联合顺铂对A549肺腺癌细胞株的体外实验

目的观察沙利度胺与顺铂（DDP）联合应用对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响,观察沙利度胺对肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的影响。方法采用PI单染法流式细胞检测细胞凋亡率;采用免疫细胞化学方法检测沙利度胺处理后肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的变化。结果在一定浓度范围内,沙利度胺联合DDP处理组细胞凋亡率明显高于单药组;沙利度胺（7.5mg/L）作用于人肺腺癌A549细胞后,处理组的VEGF、BFGF蛋白表达与未加药组比较差异显著。结论沙利度胺DDP联合,可增加A549人肺腺癌细胞的凋亡率;沙利度胺可抑制A549人肺腺癌细胞VEGF、BFGF的蛋白表达。     

青石棉诱导A549细胞表达IL-8的研究

目的　研究青石棉纤维作用于A5 4 9细胞后IL 8蛋白和基因表达水平及酪氨酸激酶抑制剂PD980 5 9对IL 8表达的影响。方法　用定量RT PCR法测定青石棉诱导A5 4 9细胞后的IL 8mRNA水平 ;用免疫反应法测定A5 4 9细胞培养上清中IL 8蛋白水平。结果　不同浓度青石棉刺激A5 4 9细胞后 ,培养上清中IL- 8释放量明显增加 ,细胞中A5 4 9IL- 8mRNA表达显著上升 ,使用酪氨酸激酶抑制剂PD980 5 9可明显抑制IL- 8的蛋白及mRNA表达水平。结论　青石棉可诱导IL- 8的高表达 ,而这种表达可为PD980 5 9所抑制 ,提示IL -8的表达源于胞浆中MAPKs信号通路。     

青石棉诱导A549细胞ERK1／2及E1k1激活的研究

目的　研究细胞外信号调节蛋白在青石棉致肺部疾病的作用。方法　用Western免疫印迹、免疫沉淀等对石棉刺激A5 4 9细胞后细胞外信号调节蛋白及其下游Elk1蛋白磷酸化等进行了研究。结果　石棉刺激细胞后 ,磷酸化ERK1 2、Elk1等高表达 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　ERK1 2、Elk1磷酸化可能参与青石棉的致病过程     

青石棉诱导A549细胞ERK1/2及Elk1激活的研究

目的　研究细胞外信号调节蛋白在青石棉致肺部疾病的作用。方法　用Western免疫印迹、免疫沉淀等对石棉刺激A5 4 9细胞后细胞外信号调节蛋白及其下游Elk1蛋白磷酸化等进行了研究。结果　石棉刺激细胞后 ,磷酸化ERK1 2、Elk1等高表达 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　ERK1 2、Elk1磷酸化可能参与青石棉的致病过程     

ω-3多不饱和脂肪酸廿烷五烯酸单剂以及联合卡铂对人肺腺癌A-549细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察廿烷五烯酸（EPA）单剂以及与卡铂联合应用对人肺腺癌A-549细胞系增殖和凋亡的影响。方法分别用100μg／ml卡铂、80μg／mlEPA以及100μg／ml卡铂联合80μg／mlEPA孵育A-549细胞48h后,采用MTr法检测药物对h-549细胞增殖的抑制率,HE染色观察细胞形态学,流式细胞术定量分析细胞凋亡率。结果100μg／ml卡铂联合80μg／mlEPA对A-549细胞系的增殖抑制率为85．20％±5．00％,显著高于80μg／mlEPA（32．85％±3．00％,P=0．0001）或100μg／ml卡铂（53．25％±3．00％,P=0．0013）单独的作用。HE染色显示：药物干预后部分A-549细胞出现凋亡形态学改变。卡铂联合EPA组A-549细胞凋亡率为17．05％4-4．00％,显著高于单用卡铂组（9．49％±1．00％,P20．0252）。结论EPA可能具有增强卡铂抑制人肺腺癌A-549细胞系增殖、促进A-549细胞系凋亡的作用。     

植酸通过线粒体途径诱导人肝癌细胞凋亡

目的 探讨植酸（IP₆）如何通过线粒体途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,为研究IP₆的抗肿瘤作用提供理论依据。方法 应用Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞仪Annexin-FITC/PI双染法观察不同浓度IP₆作用HepG2细胞后的凋亡情况;流式细胞仪检测IP₆作用HepG₂细胞后线粒体膜电位（ΔΨm）的变化;RT-PCR法检测HepG2细胞内caspase-3mRNA的表达变化;Western blot法检测IP₆作用HepG2细胞后Cyt-c的表达变化。结果 荧光显微镜下可观察到IP₆作用后细胞出现明显的凋亡形态;与对照组相比,IP₆可升高细胞凋亡率（F=342.15,q=2.9～28.53,P<0.05）,且随着浓度增加,凋亡率逐渐升高（P<0.05）;IP₆可降低线粒体膜电位（F=14802.610,q=101.531～209.237,P<0.05）,且随着浓度增加,膜电位逐渐降低（P<0.05）;IP₆可增加caspase-3 mRNA的表达（F=30.474,q=3.406～9.103,P<0.05）,且随着浓度增加,表达逐渐增加（P<0.05）;IP₆可上调细胞色素C（Cyt-c）的表达（F=87.194,q=5.246～15.218,P<0.05）,且随着浓度增加,表达逐渐上调（P<0.05）。结论 IP₆可通过降低线粒体膜电位,上调细胞色素C水平,激活caspase-3途径,促进人肝癌HepG2细胞发生凋亡。     

香烟烟雾对A549与A549-R细胞的氧化损伤

目的探讨hOGG1基因低表达对香烟烟雾作用下细胞氧化损伤效应的影响。方法不同浓度香烟烟雾暴露A549细胞和hOGG1基因低表达的A549-R细胞,MTT实验检测两种细胞存活率,彗星实验观察两种细胞DNA损伤,荧光法测定两种细胞内活性氧(ROS)含量,高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)检测细胞基因组DNA中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。结果随着香烟烟雾暴露浓度的增加,两种细胞的存活率均下降,且A549-R细胞IC50显著小于A549细胞,差异有统计学意义(P<0.05);两种细胞ROS生成量与香烟烟雾浓度呈剂量-效应关系,当香烟烟雾浓度≥1.25支/升时,A549-R细胞ROS含量显著高于A549细胞(P<0.05);不同香烟烟雾浓度下,A549-R细胞拖尾率、尾长、OTM值均大于A549细胞,差异有统计学意义(P<0.05);A549细胞与A549-R细胞基因组DNA8-OHdG含量随香烟烟雾浓度的增加而升高,当香烟烟雾浓度为2.5支/升和5支/升时,A549-R细胞8-OHdG含量显著高于A549细胞(P<0.05)。结论香烟烟雾可导致A549细胞与A549-R细胞的氧化损伤,hOGG1基因低表达可增加A549-R细胞对香烟烟雾引起的氧化损伤的敏感性。     

共济失调毛细血管扩张基因和Rad3相关基因介导电离辐射诱导的A549细胞早衰作用研究

目的:研究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)基因和ATM-Rad3相关基因(ATR)对早衰相关的p53蛋白及p16蛋白的促进作用.方法:通过阐明ATM、ATR在电离辐射诱导的A549细胞早衰中是否发挥作用,对ATM、ATR与A549细胞早衰的关系做进一步验证.将采用ATM、ATR抑制剂处理的A549细胞定义为实验组,将...