慢性牙周炎患者龈下菌斑中伴放线放线杆菌基因型的分析

目的：建立龈下菌斑标本中伴放线放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans，Aa）PCR检测方法，了解慢性牙周炎患者不同牙位的龈下菌斑中Aα 的感染率及其优势基因型。方法：61例慢性牙周炎患者每例采取2个不同牙位共122份龈下菌斑标本，采用培养法分离Aα菌株，以PCR或多重PCR检测16SrDNA基因、lktA基因和fap基因，部分扩增产物克隆后测序。结果：在11例患者的11份龈下菌斑标本中分离到Aα菌株。122份龈下菌斑中Aα16SrDNA、lktA、和fap检测阳性率分别为84.4%、75.4%、和50.0%。38.8%的患者（19/49）不同牙位龈下菌斑中检出的Aα基因型不一致。Aα有4种基因型，其优势基因型是16SrDNA^ /lktA^ /fap^ ，其次为16SrDNA^ /lktA^ /fap^-。部分标本上述3种基因的扩增片段与文献报道核苷酸序列的同源性为93.75%-100%。结论：建立的PCR或多重PCR有较高的敏感性和特异性，适用于龈下菌斑标本中Aα的快速检测。慢性牙周炎患者Aα感染率较高，并存在优势基因型，部分患者可被不同基因型的菌株同时感染。     

应用PCR检测慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卜啉单胞菌及感染菌株基因型的分析

目的 建立慢性牙周炎（CP）龈下标本中牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg)的PCR检测方法，了解不同患牙龈下菌斑中Pg基因型的差异。方法 采用培养法分离不同患牙龈下菌斑中Pg，同时采用PCR进行Pg 16S rDNA基因、prtC基因和fimA基因的检测。部分扩增产物T－A克隆后测定核苷酸序列。结果 61例患者122个龈下菌斑标本中，Pg 16S rDNA、prtc和fimA分别扩增的阳性率依次为90．6％、81．9％和78．0％，联合扩增的阳性率高达98．4％，培养法阳性率仅为31．1％。30．0％（18／60）患者不同牙位龈下菌斑中的Pg基因型不一致。Pg 16S rDNA、prtC和fimA扩增片段与文献报道的核苷酸序列比较，同源性98．62％－100％。结论 所建Pg PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性，可用于慢性牙周炎龈下标本中Pg的快速临床诊断。部分CP患者可被不同基因型的Pg菌株同时感染。     

应用PCR检测慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌及感染菌株基因型的分析

目的建立慢性牙周炎(CP)龈下标本中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, Pg)的PCR检测方法,了解不同患牙龈下菌斑中Pg基因型的差异. 方法采用培养法分离不同患牙龈下菌斑中Pg,同时采用 PCR进行Pg 16S rDNA基因、prtC基因和fimA基因的检测.部分扩增产物T-A克隆后测定核苷酸序列. 结果 61例患者122个龈下菌斑标本中,Pg 16S rDNA、prtC和fimA分别扩增的阳性率依次为 90.6%、81.9%和78.0%,联合扩增的阳性率高达98.4%,培养法阳性率仅为 31.1%.30.0%(18/60)患者不同牙位龈下菌斑中的Pg基因型不一致.Pg 16S rDNA、prtC和fimA扩增片段与文献报道的核苷酸序列比较,同源性为98.62%～100%. 结论所建Pg PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于慢性牙周炎龈下标本中Pg的快速临床诊断.部分CP患者可被不同基因型的Pg菌株同时感染.     

巢式PCR检测龈下菌斑中HCMV、EBV、HSV-1与慢性牙周炎活动性的关系

目的　建立临床检测龈下菌斑标本中人巨细胞病毒 (HCMV)、Epstein Barr病毒 (EBV)、单纯疱疹病毒 1型 (HSV 1 )巢式PCR方法 ,研究这 3种病毒与慢性牙周炎活动性的关系。方法　收集6 2例慢性牙周炎患者 (男性 2 7例、女性 35例 ,平均年龄 5 3岁 )的牙周炎活动部位、牙周炎静止部位的龈下菌斑 ,提取DNA后使用巢式PCR检测HCMV、EBV、HSV 1 ,比较分析其在同一病人不同部位的检出率。结果　牙周炎活动部位的HCMV检出率为 38.7%,EBV的检出率为 5 8%,HSV 1的检出率为30 .6 %,两种以上病毒合并感染的检出率为 4 0 .3%;牙周炎静止部位的HCMV检出率为 1 4 .5 %,EBV为 2 2 .6 %,HSV 1为 1 1 .3%,两种以上病毒合并感染的检出率为 1 1 .3%。这 3种病毒及其合并感染在牙周炎活动部位的检出率均高于牙周炎静止部位 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论　提示HC MV、EBV、HSV 1与慢性牙周炎的活动性相关。     

慢性牙周炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌胶原酶水平与牙周病变程度的关系

目的 检测慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）胶原酶基因prtC及其产物PrtC，了解PrtC水平与牙周病变程度的关系，确定PrtC诱导细胞分泌炎性细胞因子的作用。方法 采用SDS-PAGE检测原核表达系统重组PnC（rPrtC）表达和Ni-NTA亲和层析法提取的rPrtC纯度。rPrtC免疫家兔获得抗血清。建立多重PCR检测56例CP患者209牙位的龈下菌斑标本中Pg 16S rDNA和prtC基因。建立ELISA检测上述标本中的PrtC，并分析PrtC水平与牙周病变程度的关系。采用ELISA检测rPrtC诱导人脐静脉内皮细胞EVC-304分泌IL-1α、IL-8和TNF-α的作用。结果 rPrtC表达产量约占细菌总蛋白的50％。提纯的rPrtC SDS-PAGE后仅见单一的蛋白条带。96．1％（201／209）和92．3％（1931209）的龈下菌斑标本分别Pg 16S rDNA和prtC基因PCR阳性，91．4％的龈下菌斑标本（191／209）PrtC ELISA阳性。重度CP龈下菌斑标本中PrtC含量明显高于轻度和中度CP标本（P〈0．05），但轻度和中度、中度和重度四标本之间PrtC含量差异无统计学意义（P〉0．05）。1μg的rPrtC作用EVC-304细胞24h后，5和10μg的rPrtC作用EVC-304细胞12h后均可使EVC-304细胞分泌的IL-1α、IL-8和TNF-α水平明显增高（P〈0．05）。结论 Pg有很高的prtC基因携带率和表达率。CP牙周病变程度与龈下PrtC水平密切相关。rPrtC有直接诱导细胞合成并分泌IL-1α、IL-8和TNF-α的活性。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型感染的PCR检测与自然流产的关系

目的：通过对５０例自然流产组及人工汉产或引产组５０例的胚胎组织及宫颈粘液检查ＨＳＶ－Ⅱ型,对ＨＳＶ－Ⅱ和自然流产的关系进行了分析。方法：自然流产组１０例胚胎组织,人工流产（引产）５０例取部分胚胎组织,既往自然流产组４０例取宫颈粘液。应用ＰＣＲ法检测引物长度２０ｍｒｅ扩增片段为２３９ｂｐ。结果：自然流产组ＨＳＶ－Ⅱ型阳性率为４６％,对照组为１２％,两组比较,差异有显著性（Ｐ〈０．０１）。结论：ＨＳＶ     

HCV RNA的PCR检测研究与分析

应用ＰＣＲ技术检测ＨＣＶ ＲＮＡ，输血后肝炎且抗－Ｃ１００－３阳性者阳性率为９５％（１９／２０）；输血后肝炎而抗－Ｃ１００－３阴性者阳性率为８６．７％（１３／１５）；非输血后肝炎而抗－Ｃ１００－３阳性者阳性率仅２０％（１／５）；非输血后肝炎而抗－Ｃ１００－３阴性者阳性率仅１８．２％（２／１１）。对克隆的５＇－ＮＣ端片段的核苷酸序列分析显示，中国株与已公布的美、日、台湾等序列的同源性都很高，可达９８     

PCR配合Dig－AMPPD探针检测和分析钩端螺旋体基因

作者以１４份早期钩体病人血清进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），并以地高辛－硷性磷酸酶发光体（Ｄｉｇ－ＡＭＰＰＤ）同源探针行分子杂交，全部血清样品均获得阳性结果。此法敏感、特异、易行，可明显提高钩体病诊断水平。以扩增的基因片段与１６株Ｙａｓｕｄａ基因组钩体ＤＮＡ限制性谱行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，与其中６株存在同源单拷贝序列，它们皆为我国主要流行和致病的优势菌型。用电脑核苷酸测定仪分析该基因的核苷酸序列、限制性位点和ＯＲＦ等并取得了重要资料。     

应用PCR检测406例HBV—DNA与HBVM关系的初步观察

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了４６例患者血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，并同时检测乙肝标志物（ＨＢＶＭ），结果表明，急性乙型肝炎和慢性活动性肝炎患者的血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率较高。２８名乙肝标志物均为阴性的患者中有２名ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性；也性率占７．１４％，表明ＰＣＲ技术比ＨＢＶＭ更为敏感、特异。血清ＨＢＶ－ＤＮＡ的检测有助于发现ＨＢｓＡｇ阴性的乙肝患者，这对于筛选献血员，保证血源质量及肝病的早期     

Specific and sensitive diagnosis of syphilis using a real-time PCR for Treponema pallidum

A real-time PCR assay with a Taqman probe was developed that targeted the polA gene of Treponema pallidum. The test was validated using an analytical panel (n = 140) and a clinical panel of genital samples (n = 112) from patients attending a sexually transmitted infections clinic. High sensitivities and specificities of 94-100% were achieved using two real-time PCR platforms, the Rotor-Gene and the iCycler. The assay can be completed within 2 h, enabling reporting in <8 h. This fast and robust assay is suitable for implementation in routine laboratories for diagnosing primary syphilis.     

Identification of a Treponema denticola OppA homologue that binds host proteins present in the subgingival environment

Proteins secreted or exported by Treponema denticola have been implicated as mediators of specific interactions between the spirochete and subgingival tissues in periodontal diseases. However, limited information is available on the ability of this peptidolytic organism to bind or transport soluble peptides present in the subgingival environment. A prominent 70-kDa protein was isolated from surface extracts of T. denticola ATCC 35405. A clone expressing a portion of the protein was identified in an Escherichia coli expression library of T. denticola DNA. DNA sequence analysis showed that the cloned gene encoded a peptide homologous to OppA, the solute binding protein of an ATP-binding cassette-type peptide transporter involved in peptide uptake and environmental signaling in a wide range of bacteria. Genes encoding OppB, -C, -D, and -F were identified directly downstream of oppA in T. denticola. OppA was present in representative strains of T. denticola and in Treponema vincentii but was not detected in Treponema pectinovorum or Treponema socranskii. Immunogold electron microscopy suggested that OppA was accessible to proteins at the surface of the spirochete. Native OppA bound soluble plasminogen and fibronectin but did not bind to immobilized substrates or epithelial cells. A T. denticola oppA mutant bound reduced amounts of soluble plasminogen, and plasminogen binding to the parent strain was inhibited by the lysine analog epsilon-aminocaproic acid. Binding of soluble host proteins by OppA may be important both for spirochete-host interactions in the subgingival environment and for uptake of peptide nutrients.     

梅毒螺旋体抗原基因的克隆、表达及其在临床检验中的应用

目的　克隆、表达并纯化梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 抗原 ,并检测梅毒患者的血清标本。方法　应用基因扩增技术分离此蛋白的全长基因 ,采用基因工程的方法 ,应用融合表达载体pGEX 2T ,重组、克隆得到带有梅毒螺旋体 47× 10 3 特异性抗原基因的重组菌株 ,经大肠杆菌表达系统获得重组融合蛋白。再经亲和层析获得纯品 ,并联合应用ELISA检测梅毒患者的血清标本 30份 ,同时检测非梅毒患者的血清标本 30份。结果　纯化后获得了梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 的特异性抗原。ELISA检测梅毒患者血清结果均阳性。非梅毒患者血清均阴性 ,无非特异性交叉反应。结论　此项方法具有操作简便、准确的特点 ,为临床检测梅毒开辟了新的领域     

High-volume culture and quantitative real-time PCR for the detection of Aspergillus in sputum

ObjectivesSputum culture is an insensitive method for the diagnosis of pulmonary aspergillosis. Growth of the organism allows identification of the causative species and susceptibility testing, both of which can inform treatment choices. The current practice is to culture an aliquot of diluted sputum. We assessed the value of culturing large volumes of unprocessed sputum, a method that we have termed high-volume culture (HVC).MethodsSpecimens were processed by conventional culture (using an aliquot of homogenized, diluted sputum on Sabouraud agar at 37°C and 45°C for up to 5 days) and HVC (using undiluted sputum on Sabouraud agar at 30°C for up to 14 days). A separate specimen was tested by quantitative real-time PCR. Antifungal susceptibility testing was performed by the EUCAST standard.ResultsWe obtained sputum specimens from 229 individuals with the following conditions: chronic pulmonary aspergillosis (66.8%, 153/229), allergic bronchopulmonary aspergillosis (25.3%, 58/229) and Aspergillus bronchitis (7.9%, 18/229). Individuals with invasive pulmonary aspergillosis were not included. The positivity rate of conventional culture was 15.7% (36/229, 95% CI 11.6%–21.0%) and that of HVC was 54.2% (124/229, 95% CI 47.7%–60.5%) (p < 0.001). The higher positivity rate of HVC was demonstrated regardless of administration of antifungal treatment. Quantitive real-time PCR had an overall positivity rate of 49.2% (65/132, 95% CI 40.9%–57.7%), comparable to that of HVC.ConclusionDetection of Aspergillus spp. in sputum is greatly enhanced by HVC. HVC allows for detection of azole-resistant isolates that would have been missed by conventional culture. This method can be performed in any microbiology laboratory without the need for additional equipment.     

荧光定量 PCR与半定量PCR检测HBV DNA的对比分析

目的：对照分析荧光定量PCR与半定量PCR检测血清HBV DNA的载量，为临床基因检测实验室提供方法学选择依据。 方法： 取164份临床检测标本各用荧光定量PCR与半定量PCR检测，结果作统计学分析。 结果: 两种检测方法的灵敏度和特异度没有显著差异（χ2 =1.75，P>0.05）。 结论: 临床基因检测实验室可用半定量PCR法替代荧光定量 PCR法检测血清HBV DNA的载量。     

荧光定量PCR检测病理组织中结核分枝杆菌的临床价值

目的探讨应用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术在病理组织中检测结核分枝杆菌DNA（TB-DNA）的临床应用价值。方法对196例临床诊断结核的穿刺病理活检标本进行石蜡包埋切片,采用实时荧光定量PCR技术检测TB．DNA,并行抗酸染色及组织病理学检查,对三种检测与临床诊断符合率进行比较。结果在196例临床诊断结核的石蜡包埋组织中,荧光定量PCR检测阳性136例,阳性率为69．39％,抗酸染色检测阳性69例,阳性率为35．20％,组织病理学检查阳性102例,阳性率为52．04％,荧光定量PCR检测阳性率最高。结论荧光定量PCR技术简便、快捷,敏感性强、特异性高,可作为结核病分子病理诊断的重要检测方法,具有较高的临床应用价值。     

超声龈下刮治在慢性牙周炎患者中的应用

目的:探讨超声龈下刮治在慢性牙周炎患者中的应用效果,为慢性牙周炎的治疗提供参考.方法:回顾性分析2017年9月-2020年8月在我院行龈下刮治的80例慢性牙周炎患者临床资料,根据治疗方式不同,将行手工龈下刮治的患者纳入对照组(n=39),将行超声龈下刮治的患者纳入观察组(n=41).比较两组治疗前、治疗2个月后的牙面清...