整合素β-1对实体瘤细胞耐药的影响研究

目的：初步探讨附分子β－1整合素对肿瘤耐药的影响。方法：采用人肺腺癌细胞株A549，分别以不同浓度阿霉素诱导建立耐药细胞株，采用MTT法检测肿瘤细胞结合纤维粘连蛋白（FN）及阻断β－1整合素后对肿瘤细胞耐药的影响。结果：经致死剂量的阿霉素作用，MTT法检测药物敏感的肿瘤细胞抑制率为97．1％，耐药细胞株为45．2％，与纤维粘连蛋白结合后，药物敏感细胞株抑制率为68．5％，耐药细胞株为56．4％，阻断β－1整合素后与纤维粘连蛋白结合，药物敏感细胞株抑制率达到94％，耐药细胞株为49．4％，与纤维粘连蛋白结合后，肿瘤细胞抑制率明显下降（P＜0．05）；阻断β－1整合素功能后，肿瘤细胞抑制率显著上升，结论：肿瘤细胞与细胞外基质作用是造成肿瘤耐药的原因之一，阻断肿瘤细胞与细胞外基质的作用可以逆转肿瘤耐药。     

小鼠胚泡体外着床行为的研究

目的：用对比的方法观察纤粘连蛋白包被和与人蜕膜细胞共培养对小鼠胚泡体外着床的影响。方法：在FN包被组和共培养组分别移入胚泡观察并统计粘附率和铺展率。结果：FN包被组胚泡的粘附率(77．42％)与共培养组(93．33％)相比．差异无显著性(P＞0．05)，而共培养组的铺展率(80．00％)明显高于FN包被组(38．71％)．差异有圾显著性(P＜0．01)。结论：小鼠胚泡与人蜕膜细胞共培养是一个比较理想的体外着床馍型，可用来观察胚泡的粘附和铺展情况。     

低氧对大鼠骨髓间质干细胞的影响

目的 探讨低氧培养对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、粘附及分泌的影响.方法 通过细胞增殖实验、细胞粘附实验及Western-blotting,分别观察大鼠MSCs在低氧(6%O2)和常氧(21%O2)的增殖、粘附,及纤连蛋白(FN)和玻璃粘连蛋白(VN)的表达.结果 低氧组10d内培养即可扩增到(1.3±0.12)×105细胞/孔,明显高于常氧组((0.68±0.06)×105)细胞/孔(P＜0.05);低氧组24h细胞粘附率((89.14±2.4)%)高于常氧组((62.13±2.6)%)(P＜0.05),同时FN和VN的蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 低氧作为体外的一种可控制因素,调节MSCs的增殖及粘附功能,对于MSCs的组织工程的应用具有一定的意义.     

乙醛对大鼠肝星状细胞株HSC-T6激活、增殖及转分化的影响

目的:观察乙醛对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)激活、增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响.方法:HSC-T6细胞常规培养及乙醛处理;VG染色法形态学及MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白(TIMP Ⅰ)、纤维粘连素(FN)的表达;Western blotting检测细胞内效应蛋白α-SMA的表达.结果:VG...     

Ⅰ型胶原蛋白酶及纤维粘连蛋白抗体对牙骨质基质提取物活性的影响

目的探讨牙骨质基质提取物同Ⅰ型胶原蛋白及纤维粘连蛋白(FN)的关系. 方法制取牙骨质基质胍提取物,分别以含Ⅰ型胶原蛋白酶及FN多克隆抗体预处理后的牙骨质基质提取物浓度为10 mg*L-1的DMEM培养液为实验组,以同浓度牙骨质基质提取物的DMEM培养液为阳性对照组,以不含牙骨质基质提取物DMEM培养液为阴性对照组,测牙龈成纤维细胞和成骨细胞在上述4组培养液中培养作用30,60,90和120 min后的细胞贴壁率. 结果Ⅰ型胶原蛋白酶组在作用90 min后,同阳性对照组相比,牙龈成纤维细胞的贴壁率下降了15%(P<0.05),成骨细胞的贴壁率下降了11%(P<0.05). FN-多克隆抗体组同阳性对照组相比,在30,60,90和120 min各时间点两组牙龈成纤维细胞和成骨细胞贴壁率的变化无显著差异(P>0.05). 结论胶原蛋白存在于牙骨质基质提取物中,但不是其主要活性成分;牙骨质基质提取物内的活性蛋白是不同于成纤维FN的其他粘附蛋白.     

I型胶原蛋白酶及纤维粘连蛋白抗体对牙骨质基质提取物活性的影响

目的　探讨牙骨质基质提取物同 型胶原蛋白及纤维粘连蛋白 (FN )的关系 .方法　制取牙骨质基质胍提取物 ,分别以含 型胶原蛋白酶及 FN多克隆抗体预处理后的牙骨质基质提取物浓度为 10 mg· L- 1的 DMEM培养液为实验组 ,以同浓度牙骨质基质提取物的 DMEM培养液为阳性对照组 ,以不含牙骨质基质提取物 DMEM培养液为阴性对照组 ,测牙龈成纤维细胞和成骨细胞在上述 4组培养液中培养作用 30 ,6 0 ,90和 12 0 min后的细胞贴壁率 .结果　 型胶原蛋白酶组在作用 90 min后 ,同阳性对照组相比 ,牙龈成纤维细胞的贴壁率下降了 15 % (P<0 .0 5 ) ,成骨细胞的贴壁率下降了 11% (P<0 .0 5 ) .FN-多克隆抗体组同阳性对照组相比 ,在 30 ,6 0 ,90和 12 0 min各时间点两组牙龈成纤维细胞和成骨细胞贴壁率的变化无显著差异 (P>0 .0 5 ) .结论　胶原蛋白存在于牙骨质基质提取物中 ,但不是其主要活性成分 ;牙骨质基质提取物内的活性蛋白是不同于成纤维 FN的其他粘附蛋白 .     

用Wang树脂固相法合成YIGSR

在肿瘤侵袭过程中,肿瘤细胞通过膜表面受体与基底膜、基质的层粘连蛋白(Laminin,LN)、纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)和胶原蛋白(Collagen)等成分粘附.研究表明,YIGSR(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg)是LN和FN中与肿瘤细胞粘附相关的短肽序列[1,2].Yudok等[3]发现,LN使高转移(RCT )肉瘤细胞的Ⅳ型胶原酶分泌增加,体外迁移能力增强,YIGSR能抑制RCT( )细胞与LN的粘附以及LN在瘤细胞中的迁移.本文以Fmoc保护氨基酸为原料,用Wang树脂固相法合成了YIGSR.     

卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞相互作用对腹膜粘附和侵袭的影响

目的:探讨卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞(HPMC)相互作用对腹膜粘附和侵袭的影响。方法:用卵巢癌细胞SKOV3条件培养液(SKOV3-CM)或SKOV3-CM加转化生长因子β1(TGF-β1)中和抗体培育HPMC12h,用粘附实验和Boyden小室侵袭实验检测癌细胞对HPMC的粘附和侵袭,并采用ELISA检测各组HPMC上清中纤维粘连蛋白(FN)及透明质酸(HA)蛋白水平。结果:SKOV3-CM培育HPMC后,癌细胞的粘附率为(48.7±3.7)%,侵袭的细胞数为118.2±10.7,HPMCFN及HA蛋白分别为(475.69±9.54)ng/ml,(368.92±16.15)ng/ml,均高于空白对照组(P<0.01)。SKOV3-CM中加入TGF-β1中和抗体培育HPMC后,癌细胞的粘附率为(36.3±2.8)%,侵袭的细胞数为73.4±6.5,HPMCFN及HA蛋白分别为(287.17±10.07)ng/ml,(219.64±12.56)ng/ml,与SKOV3-CM组相比,均明显降低(P<0.01)。结论:卵巢癌细胞分泌TGF-β1,可以促进癌细胞与HPMC的粘附,有利于癌细胞的腹膜转移,促进HPMCFN及HA的表达可能是其作用的分子机制之一。     

粘着斑激酶活性对气道上皮细胞粘附迁移的影响

目的 研究粘着斑激酶(FAK)磷酸化对细胞外基质成份诱导的气道上皮细胞粘附、迁移的影响，探讨FAK活化对气道上皮细胞损伤后修复的影响机制。方法 通过纤维连接蛋白(FN)诱导培养的气道上皮细胞，以计数法测定细胞粘附率，以损伤实验测定细胞迁移速度，以Western blot和免疫共沉淀检测FAK表达水平及其酪氨酸磷酸化程度；以反义FAK寡核苷酸(ODNs)经脂质体转染细胞，观察其对FAK表达和磷酸化、细胞粘附和迁移的影响。结果 FN诱导的气道上皮细胞粘附率和迁移速度明显增高，同时FAK表达水平及其酪氨酸磷酸化程度显著增高；经脂质体转染了反义FAK寡核苷酸的气道上皮细胞粘附率和迁移速度明显降低，同时FAK表达水平及其酪氨酸磷酸化程度降低，且与气道上皮细胞粘附率和迁移速度的降低成显著正相关。结论 FAK是细胞外基质诱导气道上皮细胞粘附、迁移的重要信号分子，其活化促进气道上皮细胞的粘附和迁移，在气道上皮细胞损伤后修复过程中起重要作用。     

层粘蛋白、纤维连接蛋白对兔晶体上皮细胞粘附和移行的影响

目的　探讨层粘蛋白 (laninin ,LN)、纤维连接蛋白 (fibronectin ,FN)对兔晶体上皮细胞 (RLECs)粘附性和移行性的影响。方法　观察外源性FN、LN对兔晶体上皮细胞粘附、移行及其细胞骨架的影响。结果　随着FN、LN浓度升高 ,RLECs在相应的细胞外基质上粘附和移行能力增强 ,低浓度时增加幅度较大 ;加入相应抗FN、LN抗体 ,RLECs在相应基质上的移行产生不同程度的抑制作用 ,细胞骨架也不能充分铺展 ,并且这一变化与细胞粘附性和移行性呈正相关。结论　FN、LN可诱导RLECs移行、粘附 ,因而可能在后囊膜混浊的形成中起重要的作用     

纤粘连蛋白诱导Hela细胞黏附及MMP-2基因表达

目的 观察纤粘连蛋白(fibronectin,FN)诱导的Hela细胞的黏附及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)基因的表达,探讨恶性肿瘤细胞侵袭、转移发生的机制。方法 无血清培养Hela细胞,以FN作为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分,用MTT法检测Hela细胞的黏附率及光镜下计数Hela细胞的铺展率并观察Hela细胞形态的变化;用明胶酶谱法检测MMPs的活性。结果 无FN作用的Hela细胞不发生黏附及铺展,亦无明显MMPs基因表达;当纤粘连蛋白浓度为5—10μg/ml时,黏附率及铺展率最大;黏附的Hela细胞启动MMP-12基因的表达,纤粘连蛋白浓度为5～10μg/ml时,MMP-2活性最大。结论 FN可诱导Hela细胞黏附,进而引发一系列细胞内信号转导机制,启动MMP-2基因表达,促进肿瘤细胞的侵袭与转移。     

层粘连蛋白对腺样囊性癌细胞侵袭和转移的影响

目的研究层粘连蛋白(laminin,LN)与人涎腺腺样囊性癌(adenoidcysticcarcinoma,Acc)转移的关系。方法应用免疫组织化学染色,Boyden小室体外移动试验和体外粘附试验,对人涎腺腺样囊性癌细胞系Acc-2和从其克隆出的肺高转移细胞株Acc-M进行比较研究。结果发现LN和层粘连蛋白受体(lamininreceptor,LNR)在Acc-M表达明显高于Acc-2。在加入外源性LN后,Acc-2体外移动性、粘附率均明显提高,而Acc-M无明显变化。结论层粘连蛋白在Acc转移和转移过程中起重要的调节作用。     

免疫学

060332促排卵周期PCOS妇女子宫内膜纤维粘连蛋白及层粘连蛋白的表达/王颖…∥生殖与避孕.—2005,25(12).—724～731为了解促排卵药物氯米酚(CC)、hMG及GnRH-a对黄体中期子宫内膜纤维粘连蛋白(FN)及层粘连蛋白(LN)表达的影响。用单克隆抗体、免疫组织化学检测50例正常妇女自然周期以及50例正常妇女,45例多囊卵巢综合征(PCOS)妇女应用CC/hCG,CC/hMG/hCG及GnRH-a/hMG/hCG方案促排卵治疗后黄体中期子宫内膜FN和LN的表达。结果:子宫内膜FN和LN表达在正常妇女自然周期着床窗口时呈现强阳性;而CC、hMG抑制FN和LN的表达,使其阳…     

纤维粘连蛋白和层粘连蛋白在宫颈癌的表达变化

用免疫组化SABC法分析了11例正常宫颈组织、11例上皮内瘤样病变（CINⅡ-Ⅲ）级和29例宫颈浸润性鳞状细胞癌的细胞外基质和上皮细胞／癌细胞中纤维粘连蛋白（FN）和层粘连蛋白（LN）的表达变化。结果发现：CIN和宫颈癌细胞外基质中FN和LN均有明显减损。FN和CIN和宫颈癌细胞外基质中减损率分别为36．4％、75．9％;LN在CIN和宫颈癌细胞外基质中减损率分别为54．5％、96．8％。差异均有显著意义。正常宫颈上皮细胞无FN和LN的表达。提示细胞外基质中FN和LN的减损对宫颈癌的发生和发展具有重要意义。     

纤维连接蛋白及整合素β1与人脑胶质瘤生物学行为的相关性研究

目的　探讨内源性和外源性纤维连接蛋白 (fibronectin ,FN)及整合素 β1(β1integrin)在人脑胶质瘤侵袭行为和恶性进展中的作用及相互关系。方法　用细胞粘附实验和细胞迁移实验检测外源性FN和整合素 β1对U2 5 1人恶性胶质瘤细胞株粘附及迁移能力的影响。用原位杂交法检测 18例中低度恶性胶质瘤、 15例高度恶性胶质瘤及 7例正常脑组织中内源性FN和整合素 β1mRNA的表达情况。结果　①U2 5 1细胞在外源性FN上的粘附能力呈浓度依赖性 ,尤其在中低浓度时 (<5 μg/ml)差异显著 (P <0 0 1) ;抗FN抗体及抗整合素 β1抗体均能完全阻断U2 5 1细胞在FN上的粘附。②随外源性FN浓度升高 ,U2 5 1细胞在所观察的不同时间段的迁移距离均显著增加 (P <0 0 1) ;抗FN抗体几乎完全阻断FN对细胞迁移的促进作用 ,抗整合素 β1抗体只能部分阻断FN对细胞迁移的促进作用。③细胞内FN和整合素β1mRNA在正常脑组织不表达或仅少量表达 ,而在胶质瘤中两者阳性表达率均随肿瘤恶性程度增加而增高 (P <0 0 5 ) ,且FN和整合素 β1mRNA表达呈明显正相关 (r =0 85 5 ,P <0 0 1)。结论　①胶质瘤细胞通过其表面整合素 β1受体与外源性FN成分相互作用 ,促进其在颅内的浸润侵袭。②整合素 β1诱导的内源性FN合成增加与胶质瘤的恶性程度     

纤维粘连蛋白和层粘连蛋白在宫颈癌的表达变化

用免疫组化SABC法分析了11例正常宫颈组织、11例上皮内瘤样病变(CINⅡ～Ⅲ)级和29例宫颈浸润性鳞状细胞癌的细胞外基质和上皮细胞/癌细胞中纤维粘连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)的表达变化.结果发现CIN和宫颈癌细胞外基质中FN和LN均有明显减损.FN在CIN和宫颈癌细胞外基质中减损率分别为36.4%、75.9%;LN在CIN和宫颈癌细胞外基质中减损率分别为54.5%、96.8%.差异均有显著意义.正常宫颈上皮细胞无FN和LN的表达.提示细胞外基质中FN和LN的减损对宫颈癌的发生和发展具有重要意义.     

细胞外基质对内皮细胞粘附功能的影响及意义

目的：促进内皮细胞在聚氨酯材料上粘附，为实现人工心血管内皮细胞化探索条件和方法。方法：用荧光法观察细胞外基质成分对内皮细胞在聚氨酯材料上粘附的影响。结果：用胶原Ｉ，胶原Ⅳ，纤维粘连蛋白（ＦＮ）玻璃粘连蛋白（ＶＮ）等细胞外基质成分及对照组牛血清白蛋白（ＢＳＡ）分别预衬聚氨酯５０ｍｇ／Ｌ浓度组，内皮细胞与材料接触１５ｍｉｎ后，粘附率分别为３２．３１％，５４．４３％，４２．３４％，６３．７７％和２７．７     

纤维连接蛋白基因EDA片段在腺样囊性癌细胞中的表达

目的通过纤维连接蛋白(FN)基因EDA片段在不同转移潜能腺样囊性癌(SACC)细胞中的表达,研究EDA片段与SACC细胞生物学特性的关系。方法应用免疫组织化学及半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,分别从蛋白水平及mRNA水平对高、低转移SACC细胞株中FN基因EDA片断进行检测。结果高转移SACC细胞株(SACC-LM)中FN基因EDA片段蛋白及mRNA的表达高于低转移细胞株(SACC-83)。结论FN基因EDA片段的表达程度与SACC细胞不同转移潜能密切相关。     

硝苯地平对过氧化氢引起的心肌纤维化的抑制作用及机制

目的研究硝苯地平(nifedipine)对过氧化氢(H2O2)引起的心肌纤维化的影响及机制。方法原代培养大鼠心脏成纤维细胞(CFs),用100μmol/L H2O2刺激,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测硝苯地平(10μmol/L)以及对照药维拉帕米(verapamil,10μmol/L)对H2O2诱导的结缔组织生长因子(CTGF)、纤维粘连蛋白(FN)的蛋白表达以及信号蛋白MAPK磷酸化的影响;利用fluo-4/AM钙荧光探针法测定硝苯地平对H2O2刺激引起CFs内钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。结果 (1)硝苯地平能够显著抑制H2O2诱导的CTGF、FN蛋白表达上调以及细胞外信号调控蛋白激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun N端激酶(JNK)磷酸化,而对p38MAPK磷酸化没有影响,维拉帕米对以上蛋白表达均无抑制作用;(2)硝苯地平对H2O2刺激引起的CFs中的[Ca2+]i增加没有影响;(3)ERK信号通路抑制剂PD98059(10μmol/L)可抑制H2O2诱导的CTGF、FN的蛋白表达上调。结论硝苯地平可抑制H2O2刺激引起的CTGF、FN蛋白表达上调,而对[Ca2+]i变化没有影响,其抗纤维化的作用不依赖于经典的钙离子阻断作用,可能与抑制ERK1/2磷酸化有关。     

肝肾宝对5/6肾切除大鼠肾组织细胞外基质影响的实验研究

目的研究肝肾宝对5/6肾切除大鼠肾组织细胞外基质(ECM)如纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白及其基因表达的影响.方法采用免疫组化、原位杂交方法检测肾组织FN、LN、ColⅣ及相应mRNA表达,使用TN-8502多功能图像分析系统对结果进行处理,采用SPSS统计软件统计.结果显示正常对照组、假手术组,均未见FN、LN、ColⅣ蛋白及其mRNA阳性反应物.5/6NT组,肾小球细胞细胞浆、肾小管细胞浆见FN、LN、ColⅣ蛋白及其mRNA强阳性黄色反应物.缬沙坦组FN、LN、ColⅣ蛋白及其mRNA阳性反应物减少,与5/6NT组比较,P<0.05;肝肾宝组FN、LN、ColⅣ蛋白及其mRNA阳性反应物明显减少,与5/6NT组比较,P<0.01.结论肝肾宝下调肾组织FN 、LN、ColⅣ蛋白及其基因表达,是防治肾纤维化作用机制之一.