转染金属蛋白酶抑制剂2基因对损伤血管平滑肌细胞核因子-κB和蛋白激酶C的影响

目的　探讨血管平滑肌细胞 (VSMC)损伤后金属蛋白酶 (MMPs)和蛋白激酶C(PKC)、核因子 -κB(NF -κB)表达的变化。　方法　采用脂质体对VSMC转染金属蛋白酶抑制剂 2 (TIMP- 2 )基因进行基因转染 ,并用Westernblot加以鉴定 ,分别用酶谱分析法、凝胶电泳迁移率分析技术(EMSA)、逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)和免疫细胞化学检测该细胞克隆MMPs、NF -κB的活性变化和PKCαmRNA、蛋白的表达水平。　结果　体外损伤的VSMC金属蛋白酶显著增加。PKCα、NF -κB在正常VSMC中很少表达 ,但在损伤的VSMC中这种表达非常显著 ,对兔VSMC进行TIMP - 2转染后 ,损伤的VSMCMMP - 2 ,9活性受抑制 ,并且PKCα、NF -κB的表达下调 (P <0 .0 5 )。结论　PKCα和NF -κB在MMPs合成及损伤VSMC迁移中有重要价值 ,TIMP - 2能通过抑制平滑肌细胞PKCα、NF -κB信号途径来防止血管再狭窄。     

洛伐他汀对兔血管平滑肌细胞转录因子活性的影响

目的 观察洛伐他汀对兔血管平滑肌细胞转录因子AP-1和NF-κB结合活性及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 用[γ—^32P]—ATF标记寡聚核苷酸，采用电泳迁移率变动分析(EMSA)法测AP-1和NF—κB结合活性，用酶谱分析法检测MMP-9表达水平。结果 洛伐他汀抑制血管平滑肌细胞MMP-9的生成且呈剂量—效应依赖关系，该抑制作用可被甲羟戊酸和焦磷酸二香叶酯而非角鲨烯所逆转；洛伐他汀减低AP-1和NF—κB的结合活性。结论 洛伐他汀可抑制血管平滑肌细胞AP-1和NF—κB结合活性，减少MMP-9的生成。     

创伤性脑损伤后脑组织核因子-κB和基质金属蛋白酶-9的表达

目的 研究创伤性脑损伤（TBI）后损伤区脑组织核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达,探讨其在继发性脑损害中的作用机制。方法 采用自由落体撞击法造成大鼠右侧顶叶脑挫裂伤,Wistar大鼠随机分为对照组、伤后3、12、24、72小时和7天组。采用EMSA测定NF-κB的活性,免疫组化测定MMP-9的表达。结果 TBI后NF-κB的活性和MMP-9的表达逐渐增强,至伤后72小时达高峰,伤后7大仍保持任较高水平。NF-κB和MMP-9任表达时相和强度上呈正相关关系。MMP-9表达阳性细胞包括血管内皮细胞、神经胶质细胞和少数神经元细胞及侵入的中性粒细胞。结论 TBI可引起损伤区脑组织NF-κB活性和MMP-9的表达明显增强,可能在脑组织的继发性损害中起重要作用。     

核因子NF-κB对气道平滑肌细胞增殖的影响

目的：研究核因子-κB（NF-κB）对大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖活性的影响。方法：体外培养ASMCs，采用EMSA法直接检测ASMC中NF-κB的活性，MTT法、细胞周期检测及细胞核增殖抗原（PCNA）的免疫细胞化学染色法观察细胞增殖情况。结果：血小板活化因子刺激后ASMC中NF-κB明显活化，各细胞增殖指标均显著增高（P〈0．05），NAC可显著抑制上述效应（P〈0．05）。结论：NF-κB的活化能直接参与ASMC的增殖。     

血管成形术后平滑肌细胞的迁移与基质金属蛋白酶

平滑肌细胞 (ＶＳＭＣ)的迁移是血管成形术后血管再狭窄形成机制中的重要环节之一 ,细胞外基质(ＥＣＭ )的降解是ＶＳＭＣ迁移的前提条件。血管成形术后的ＶＳＭＣ的迁移 ,涉及到细胞外基质的破坏和再修复 ,即结缔组织修复维持细胞外基质的完整性。此过程中蛋白质的合成及缺失依赖于蛋白激酶及其抑制因子作用的程度。实验提示血管壁上存在两个系统 ,相互作用达到内环境的稳定 ,即纤溶酶原系统和基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)系统。在ＶＳＭＣ的迁移中作为主要角色———ＭＭＰｓ受到重点关注。本文将对血管成形术后 ,平滑肌细胞的迁移与ＭＭＰ…     

NF-κB在放射性损伤中的表达改变及作用机制的研究进展

随着肿瘤发病率的升高,需要接受放射治疗的人数也越来越多;而且由于放射治疗技术的不断发展,患者的长期生存期也在不断延长。因此,在长期生存的患者中防止放射性损伤的发生就尤为重要。NF-κB在各种基因转录的过程中承担着重要作用,并与放射性损伤的发生有着密切关系。笔者就NF-κB的结构、激活、功能作一介绍,并对放射性脑损伤及放射性肺损伤中NF-κB的表达变化、调节机制,以及NF-κB抑制剂的研究进展作一综述。     

全身放射损伤对伤口早期局部组织核转录因子NF-κB活性的影响

炎症反应在创伤修复过程中最早发生 ,对启动整个修复过程至为重要。以往研究观察到 ,大剂量60 Ｃｏγ射线一次性照射后 ,伤口局部炎症细胞明显减少 ,中性粒细胞凋亡增加 ,巨噬细胞膜受体和ＴＧＦ β、ＰＤＧＦ等细胞因子分泌减少 ,成纤维细胞增殖受抑制 ,愈合过程显著延迟[1 3 ] ,提示大剂量电离辐射后 ,在修复过程的早期启动阶段即发生了障碍 ,但对于伤后这种修复启动延迟的分子机理尚缺乏深入研究。ＮＦ κＢ是调节多种即早基因的转录因子 ,对多种炎症因子如ＴＮＦ α、ＩＬ 1、ＩＬ 6等起重要调控作用 ,同时还调节与细胞增殖、运动和凋…     

蛋白激酶C激动剂和抑制剂对溶血磷脂酰胆碱引起脑微血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）激动剂与抑制剂对溶血磷脂酰胆碱（LPC）引起脑微血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：在建立了LPC引起牛脑微血管平滑肌细胞（BCMSMC）增殖模型基础上，以结晶紫染色法测定PKC激动剂phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)和抑制剂1－（5－isoquninoline sulfonyl)-2-methylpiperatione hydrochloric(H7)对平滑肌细胞增殖的影响。结果：PMA时间依赖性和剂量依赖性地使LPC引起BCMSMC增殖率显增高，H7非常显地降低了LPC引起的BCMSMC增殖率，亦呈时间依赖性和剂量依赖性。结论：LCP对BCMSMC增殖作用与PKC信号转导系统有相关性。     

核转录因子-κB信号途径与急性脊髓损伤继发伤的研究进展

脊髓损伤是一种严重威胁人类健康的常见外伤,分原发性和继发性。脊髓损伤后继发伤往往是患者的主要损害。近年来发现核转录因子（NF-kB）信号转导途径在脊髓损伤后炎症细胞、神经元和内皮细胞中的活化,活化的NF-kB主要通过调控靶基因转录生成的产物（如细胞因子、黏附分子和诱生型一氧化氮合酶等）来参与继发损伤的过程。本文就NF-kB信号转导途径与急性脊髓损伤继发伤作一综述。     

白细胞介素-10和地塞米松对人外周血单个核细胞核因子-κB活化及肿瘤坏死因子产生的影响

为观察白细胞介素－１０（ＩＬ－１０）和地塞米松（Ｄｅｘ）对核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）的活化及α肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）释放的影响,采用分离培养的人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,分为正常对照组、脂多糖（ＬＰＳ）刺激组、ＩＬ－１０ 和Ｄｅｘ 干预组。用凝胶电泳迁移率改变分析法（ＥＭＳＡ）检测ＰＢＭＣ核提取物中ＮＦ－κＢ的活性,ＥＬＩＳＡ法检测培养上清中ＴＮＦα的含量。结果发现,ＬＰＳ刺激后１ｈ ＮＦ－κＢ活性显著高于正常对照组（Ｐ＜ ０．０１）,ＴＮＦα的释放显著增加（Ｐ＜ ０．０１）;ＩＬ－１０、Ｄｅｘ 显著抑制ＮＦ－κＢ活性（Ｐ＜ ０．０１） ,也显著抑制ＴＮＦα的释放。提示抑制ＮＦ－κＢ激活和ＴＮＦα的产生可能是ＩＬ－１０ 和Ｄｅｘ 发挥抗炎作用的重要机制之一     

携载人基质金属蛋白酶组织抑制剂-2基因重组腺病毒载体的构建

目的　构建携载人基质金属蛋白酶组织抑制剂 2 (hTIMP 2 )基因的重组腺病毒载体 ,为基因治疗提供实验基础。方法　利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒 pAdEasy 1以及线性化的重组穿梭质粒 pTrack CMV hTIMP 2共转化BJ5 183受体菌并在其中发生同源重组 ,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子 ,重组腺病毒质粒AdhTIMP 2经过 2 93细胞的包装 ,扩增和纯化后 ,测定病毒滴度。一步法提取细胞总RNA ,RT PCR检测hTIMP 2的mRNA。收集细胞上清 ,进行Western杂交检测TIMP 2蛋白。结果　得到了携带hTIMP 2基因的重组腺病毒 ,纯化后滴度为 4× 10 11pfu/ml,应用RT PCR和Westernblot方法 ,在转染 2 93细胞后 2 4h即可检测到hTIMP 2的表达。结论　成功地构建了携带hTIMP 2的重组腺病毒载体 ,为下一步的基因治疗提供了基础。     

基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1与子宫内膜异位症的相关性研究

目的研究基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其组织抑制物-1（TIMP-1）是否与子宫内膜异位症（EMs）有关。方法将11例EMs轻度和32例重度患者分别作为观察组1和2,41例卵巢畸胎瘤患者作为对照组。通过ELISA法测定腹水中MMP-9及TIMP-1值,比较各组两者及其比值的差异。结果与对照组比较,EMs轻度组MMP-9、TIMP-1差异无统计学意义（P〉0.05）,EMs重度组MMP-9、TIMP-1差异有统计学意义（P〈0.05）;3组的MMP-9/TIMP-1差异均有统计学意义（P〈0.05）;EMs轻度组与重度组相比较,MMP-9差异有统计学意义（P〈0.05）,TIMP-1差异无统计学意义（P〉0.05）。结论随着疾病的加重,MMP-9升高、TIMP-1降低、MMP-9/TIMP-1比值升高,MMP-9、TIMP-1与子宫内膜异位症发生、发展有相关性,特别是两者的比值,具有重要诊断价值。     

LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞内NF-κB的影响

目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)核因子kB(NF-κ B)的影响.方法100ng/ml LPS刺激PMVEC 0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h或10ngg/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激1h,凝胶电泳迁移率试验检测NF-κ B的活化,免疫细胞化学观察其亚基p50、p65的核转位.并通过加入活化阻断剂TPCK观察对诱导的NF-κ B活化的影响.结果LPS的刺激迅速诱导p50、p65亚基核转位,活化NF-κ B,1h达到高峰,且呈剂量依赖关系,后逐渐下降.PDTC能显著抑制其活化,P＜0.01.结论LPS的直接刺激诱导NF-κ B的活化,这可能是IPS诱导炎症反应的一个重要环节.     

Tumor detection using 18F-labeled matrix metalloproteinase-2 inhibitor

Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) is a key enzyme involved in tumor invasiveness. (2R)-2- [4-(6-[(18)F]Fluorohex-1-ynyl)-benzenesulfonylamino]-3-methylbutyric acid ([(18)F]SAV03), a new fluorine-18 labeled MMP-2 inhibitor developed for tumor imaging with PET, was biologically evaluated using in vivo tumor model. Enzymatic MMP-2 assay of SAV03 yielded an IC(50) value of 1.9 microM. Biodistribution study of [(18)F]SAV03 using Ehrlich tumor bearing mice showed that the uptake in tumor was higher than in other organs, except for the liver, small intestine, and bone. When [(18)F]SAV03M, a methyl ester of [(18)F]SAV03, was used as a prodrug, the uptake in liver at 30 min after injection decreased by half and that in tumor increased by 2.4 times, compared with [(18)F]SAV03. Radio-thin-layer chromatographic analysis of [(18)F]SAV03M metabolites revealed that administered [(18)F]SAV03M was easily converted to the parent drug in vivo and accumulated in tumor tissue. Thus, [(18)F]SAV03M is suitable as the prodrug of [(18)F]SAV03 with potent efficacy. Whole body autoradiography using [(18)F]SAV03M also indicated tumor-specific accumulation of radioactivity, while higher accumulations in bone and intestinal contents were observed. Our results suggest that [(18)F]SAV03M could be potentially suitable for tumor imaging with PET.     

复元胶囊对膝骨关节炎患者血清MMP-3和TIMP-1表达变化的影响

目的观察复元胶囊治疗膝骨关节炎（KOA）患者血清基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3,MMP-3）和基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase - 1, TIMP - 1）的表达变化。方法将60例辨证为肝。肾不足、筋脉瘀滞证的KOA患者随机分为两组,治疗组口服复元胶囊,对照组口服仙灵骨葆胶囊,4W为1疗程,共服用3疗程。另将30例健康查体者纳入健康组。治疗前后收集血清,采用酶联免疫吸附试验检测MMP-3和TIMP-1的表达,观察药物不良反应。结果治疗前治疗组、对照组血清MMP-3、TIMP-1水平较健康组明显增高（P〈0．05）;治疗后治疗组和对照组血清MMP-3、TIMP-1水平较治疗前明显降低（P〈0．05）,未见明显的毒副作用。结论复元胶囊通过调节MMP-3和TIMP—1表达变化发挥治疗KOA的作用。     

COPD患者MMP-9和TIMP-1水平变化及其与IL-8和IL-2相关性研究

目的：观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重期患者血清基质金属蛋白酶9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）、IL-2和IL-8含量变化。同时观察COPD患者血清MMP-9、TIMP-1与IL-2及IL-8含量的相关性。方法：选取AECOPD患者42例,健康对照者15例,采用双抗夹心ELISA法测定血清MMP-9、TIMP-1、IL-2及IL-8含量。结果：AECOPD患者血清MMP-9、TIMP-1及IL-8水平明显高于健康对照者,IL-2水平低于健康对照者,差异有统计学意义（P〈0.05）,AECOPD患者血清MMP-9、TIMP-1含量均与IL-8呈正相关,与IL-2呈负相关。结论：COPD患者血清MMP-9/TIMP-1失衡,导致肺组织降解与沉积紊乱,参与了肺气肿的发生发展。     

模拟高原缺氧对慢性牙周炎大鼠牙龈组织中基质金属蛋白酶-2活性的影响

目的 观察常氧与缺氧条件下慢性牙周炎大鼠牙龈组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的活性变化,探讨MMP-2在高原牙周病发生发展中的作用.方法 健康成年SD大鼠32只,随机分为正常对照组(N组)、常氧牙周炎组(P1组)、缺氧对照组(H组)、缺氧牙周炎组(P2组),每组8只.P1、P2组分别在常氧与模拟海拔5000m缺氧条件下建立常氧与缺氧牙周炎模型,N、H组作为对照.采用明胶酶活性分析方法检测各组大鼠牙龈组织中活化形式MMP-2的表达水平.结果 N、P1、H、P2组牙龈组织中活化形式MMP-2灰度值分别为13.72±6.22,37.23±4.40、14.45±6.51、45.44±4.79,其中N组与N组(P<0.05)、P2组与P1组(P<0.05)、P1组与N组(P<0.01)、P2组与H组(P<0.01)比较差异均有统计学意义,以P2组牙龈组织中活化形式MMP-2灰度值最高.结论 模拟高原缺氧环境可提高慢性牙周炎大鼠牙龈组织中活化形式IMMP-2含量,进而促进牙周病的发生、发展.     

抑制核因子-κB活性对糖尿病大鼠肾组织一氧化氮水平的影响

目的:研究抑制核因子κB(NFκB)活性对实验性糖尿病大鼠肾组织一氧化氮(NO)水平的影响。方法:雄性Wistar大鼠分为3组,A组(11只)为正常对照组,B组(11只)为糖尿病未干预组,C组(9只)为糖尿病大鼠吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC,NFκB活性抑制剂)干预组。以链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型。大鼠饲养18周后取出肾脏以电泳迁移率变动分析技术检测NFκB活性,RT PCR技术检测诱导型NO合成酶(iNOS)mRNA表达并检测肾组织NO水平,同时电镜检测大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度(系膜基质面积/系膜面积)。采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒检测24h尿白蛋白排泄(UAE)。结果:肾组织iNOSmRNA表达在B组大鼠(0.30±0.12)显著高于A组(0.12±0.04,P<0.01)和C组(0.16±0.08,P<0.01)。肾组织NO水平在B组大鼠(0.56±0.20μmol/mg肾组织)显著低于A组(1.05±0.25μmol/mg肾组织,P<0.01)和C组(1.45±0.61μmol/mg肾组织,P<0.01)。基底膜厚度在B组大鼠(531.6±107.6nm)显著高于A组(312.4±25.4nm,P<0.05)和C组(315.8±21.4nm,P<0.05)。系膜基质密度在B组大鼠(56.41±6.78)显著高于A组(33.95±5.22,P<0.05)和C组(37.97±7.37,P<0.05)。结论:在实验糖尿病大鼠,肾组织iNOSmRNA表达明显增加,但NO水平明显降低;抑制NFκB活性不但能延     

LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞内NF-κB的影响

目的：探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)核因子κB(NF—κB)的影响。方法：100ng/ml LPS刺激PMVEC 0h、0．5h、1h、2h、4h、6h、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml LPS刺激1h，凝胶电泳迁移率试验检测NF—κB的活化，免疫细胞化学观察其亚基p50、p65的核转位。并通过加入活化阻断剂TPCK观察对诱导的NF—κB活化的最响。结果：LPS的刺激迅速诱导p50、p65亚基核转位，活化NF—κB，1h达到简蜂，且呈剂量依赖关系，后逐渐下降。PDIC能显著抑制其活化，P＜0．01。结论：LPS的直接刺激诱导NF—κB的活化，这可能是LPS诱导炎症反应的一个重要环节。