模拟失重对成骨细胞细胞周期影响的实验研究

目的失重条件下骨质脱钙的机理,从目前飞行及地面实验结果看,倾向于认为骨形成受到抑制是其主要原因,特别是成骨细胞数目的减少和活性的降低。本实验旨在探讨成骨细胞增殖及细胞周期的变化,以进一步阐明空间骨丢失的机理。方法利用回转器模拟失重,观察成骨细胞增殖周期受模拟失重的影响以及三花接骨散对抗这种影响的效果。结果模拟失重作用２４ｈ后,成骨细胞增殖即已明显受到抑制;模拟失重作用下,Ｇ１期细胞显著增多,Ｓ与Ｇ２＋Ｍ期细胞显著减少;模拟失重作用１２ｈ后,经１２ｈ以上正常生长,细胞周期可恢复至对照水平;三花接骨散促进Ｇ１期细胞减少,Ｓ与Ｇ２＋Ｍ期细胞增多,具有对抗失重效应的功能。结论成骨细胞在失重环境中,Ｇ１期向Ｓ期的转化过程受到抑制,从而导致Ｇ１期细胞增多,Ｓ期与Ｍ期细胞减少,使成骨细胞的增殖受到抑制。同时细胞周期具有一定的恢复能力;而三花接骨散具有对抗失重效应,促进成成细胞Ｇ１期向Ｓ期的转化过程,促进成骨细胞增殖的功效。     

不同剂量X射线对同步化HeLaS3细胞周期的影响

目的　研究不同剂量Ｘ射线对同步化ＨｅＬａＳ３ 细胞周期的影响,为进一步探讨其分子调控机理和临床肿瘤放疗提供基础资料。方法　采用胸苷（ＴｄＲ） 双阻断法和流式细胞术（ＦＣＭ） 检测了ＨｅＬａＳ３ 细胞同步化后分别于其细胞周期各时相进行７５ ｍ Ｇｙ 和２－０ Ｇｙ Ｘ 射线照射以及于Ｇ２＋ Ｍ 期进行０－０２５～２－０ Ｇｙ 照射后其细胞周期进程的变化。结果　２－０ Ｇｙ 照射时细胞无论处于Ｇ０／Ｇ１ 、Ｓ期还是Ｇ２ ＋ Ｍ 期,从释放点后９～１５ 小时内均发生明显的Ｓ期延迟和Ｇ２ 阻滞,但其中以Ｇ２ 期照射者阻滞最显著;于Ｇ０／Ｇ１ 和Ｇ２ ＋ Ｍ 期进行７５ ｍ Ｇｙ 照射,分别在９ 和１２ ｈ 时发生一过性的明显的Ｇ２ 阻滞,至１１ 和１５ｈ 时完全从这一阻滞中脱离,甚至促进了其细胞周期的进程;而在Ｓ期进行７５ ｍ Ｇｙ 照射时,并没有发生这种阻滞,反而加速了其细胞周期由Ｇ２ ＋ Ｍ→Ｇ０／Ｇ１ 的移行,其中尤以９ｈ 时最为显著。剂量效应关系研究表明,于Ｇ２ ＋ Ｍ 期进行０－０２５ ～２－０ Ｇｙ 照射后,在释放点后１１ ｈ 时均发生Ｇ０／Ｇ１ 期细胞数减少,Ｇ２ 阻滞,且有剂量依赖性,而Ｓ期细胞数的变化在０－０２５ ～０－１ Ｇｙ 和０－５ ～２－０ Ｇｙ     

p21在电离辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中的作用

目的 探讨ｐ２１在电离辐射诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞中的作用。方法 采用Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｐ２１ＷＡＦ１ ｍＲＮＡ水平的变化;采用流式细胞术检测ｐ ２１蛋白表达及细胞周期的变化。结果 ４．０ＧｙＸ射线照射后１２ｈ、２４ｈ、４８ｈＧ１期ＥＬ－４细胞百分数明显高于假照射组：ｐ２１ＷＡＦ１ｍＲＮＡ水平从照射后１ｈ开始升高,４ｈ达峰值,持续至照后１２ｈ;ｐ２１ｘ蛋白表达在照射后２～４８ｈ明显增高。结论 ４．０ＧｙＸ射线照射可诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞,ｐ２１在电离辐射诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞中起重要作用。     

HeLa细胞中细胞周期蛋白B不降解也能完成有丝分裂中后期转变

目的：在用细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｂ１作为ＨｅＬａ细胞周期Ｇ１期时相的阴性标志物时，发现呈阳性结果，为此，对细胞周期蛋白Ｂ在细胞的Ｍ期向Ｇ１期过渡中的作用做进一步探讨。方法：分别用诺考达唑（ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）和离心淘洗的方法同步化ＨｅＬａ细胞，用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法检测细胞周期蛋白Ｂ的存在。结果：用诺考达唑阻断细胞于Ｍ期，然后释放４ｈ所得的Ｇ１期细胞中有细胞周期蛋白Ｂ，而离心淘洗的方法所得Ｇ１期细胞中没有细胞周期蛋白Ｂ。结论：（１）诺考达唑阻断细胞于Ｍ期后，可影响细胞周期蛋白Ｂ１在Ｍ期后期的降解；（２）细胞周期蛋白Ｂ１的降解对于ＨｅＬａ细胞由Ｍ期向Ｇ１期过渡并不是必需的，可能还有别的蛋白质参与；（３）采用药物阻断的方法同步化细胞，对细胞的生理、生化活动有潜在的影响。     

0.075Gy射线诱导EL—4细胞凋及细胞周期的适应性反应

目的 观察低剂量Ｘ射线照射能否诱导ＥＬ－４细胞凋亡及细胞周期的适应性反应。方法 采用流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋恨及细胞周期。结果 单纯２ＧｙＸ射线照射后１２小时ＥＬ－４细胞凋亡显著增多，并伴有明显Ｇ１阻滞；０．０７５Ｇｙ预照射可明显减轻间隔６小时后２Ｇｙ攻击剂量照射所致的细胞凋亡和Ｇ１阻滞。结论０．０７５Ｇｙ射线离照射可诱导ＥＬ－４细胞凋亡及Ｇ１阻滞的适应性反应。     

0.075 Gy X射线诱导EL-4细胞凋亡及细胞周期的适应性反应

观察低剂量Ｘ射线照射能否诱导ＥＬ－４细胞凋亡及细胞周期的适应性反应。方法采用流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡及细胞周期。结果单纯２ＧｙＸ射线照射后１２小时ＥＬ－４细胞凋亡显著增多，并伴有明显Ｇ１阻滞；０．０７５Ｇｙ预照射可明显减轻间隔６小时后２Ｇｙ攻击剂量照射所致的细胞凋亡和Ｇ１阻滞。结论０．０７５ＧｙＸ射线离体照射可诱导ＥＬ－４细胞凋亡及Ｇ１阻滞的适应性反应     

模拟失重对胃粘膜上皮细胞增殖和周期的影响

目的 探讨模拟失重对胃粘膜上皮HFE-145细胞增殖和周期的影响.方法 采用回转器模拟失重,用免疫组化法观察HFE-145细胞PCNA表达的变化,用流式细胞仪测定细胞周期.结果 回转器模拟失重后,与正常对照组相比,回转组HFE-145细胞24、36、48及72 h的PCNA抗体阳性细胞比率无明显差异,12 h回转组阳性细胞比率明显减少（P〈0.05）.24、36、48、72 h回转组HFE-145细胞的细胞周期分布与对照组无明显差异,12 h回转组G0＋G1期细胞比例明显增多（P〈0.05）,S＋G2＋M期细胞之和显著减少（P〈0.05）.结论 回转器模拟失重使胃粘膜上皮HFE-145细胞在12 h时出现了细胞周期阻滞和增殖抑制.     

模拟失重对MG-63细胞形态、增殖及周期的影响

目的 探讨模拟失重对人骨肉瘤成骨样细胞(MG-63)细胞面积、增殖、周期的影响. 方法 采用回转器模拟失重,用图像处理分析软件( Image J )测量分析模拟失重后细胞面积的改变,用细胞计数法测定细胞的生长曲线,用流式细胞仪测定细胞周期. 结果 回转器模拟失重后,回转组MG-63细胞24 h、36 h和48 h时间段的细胞面积较对照组缩小(P《0.05),回转组24 h、36 h、48 h 3个时间段与12 h时间段比较细胞面积缩小(P《0.05),而对照组各时间段之间无明显差异.细胞生长曲线显示模拟失重后细胞增殖明显受抑制.12 h、36 h、48 h回转组MG-63细胞的细胞周期与对照组相比无明显差异,24 h回转后G0 G1期细胞显著减少 (P《0.05),S期细胞则显著增多 (P《0.05). 结论 回转器模拟失重使MG-63细胞在24 h、36 h和48 h细胞面积缩小,12 h、24 h、36 h和48 h增殖生长受到抑制,24 h时出现细胞周期阻滞.     

HeLa细胞中细胞周期蛋白B不降解也能完成有丝分裂？…

目的：在用细胞周期蛋白Ｂ１作为ＨｅＬａ细胞周期Ｇ１期时相的阴性标志物时，发现呈阳性结果，为此，对细胞周期蛋白Ｂ在细胞的Ｍ期向Ｇ１期过渡中的作用做进一步探讨。方法：分别用诺考达唑和离心淘洗的方法同步化ＨｅＬａ细胞，用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法检测细胞周期蛋白Ｂ的存在。结果：用诺考达唑阻断细胞于Ｍ期，然后释放４ｈ所得的Ｇ１期细胞中有细胞周期蛋白Ｂ，而离心淘洗的方法所得Ｇ１期细胞中没有细胞周期蛋白Ｂ。结论：     

间断性站立位对抗尾部悬吊大鼠脑动脉血管反应性变化 …

目的 探讨模拟间断性人工重力刺激对抗模拟失重下大鼠脑基底动脉血管反应性改变的效果。方法 雄性ＳＤ大鼠３５只,按体重随机分为５组,即：①同步对照组;②模拟失重组（３周尾部悬吊）;③模拟失重＋站立位４ｈ组;④模拟失重＋站立位２ｈ组;⑤模拟失重＋站立位１ｈ组。每组７只,每日分别给予站立组大鼠不同持续时间（１ｈ,２ｈ或４ｈ）的站立位（ＳＴＤ）,测定大鼠离体基底动脉血管环对ＫＣＩ的收缩反应性。结果 悬吊大鼠     

回转器模拟失重对人胃黏膜HFE-145细胞形态和生物学特征的影响

目的探讨模拟失重对人胃黏膜上皮HFE-145细胞形态、增殖、周期和凋亡的影响.方法采用回转器模拟失重,用图像分析系统软件分析HE染色后人胃黏膜上皮HFE-145细胞形态的改变,用免疫组化法观察增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化,用流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡.结果回转组HFE-145细胞在模拟失重12 h时的面积较对照组增大（P＜0.01）,其余时间段细胞的面积与对照组无明显差异;其长短径之比在各时间段与对照组均无明显差异.与正常对照组相比,回转组HFE-145细胞24 h、36 h、48 h及72 h的PCNA抗体阳性细胞的比率无明显差异,12 h回转组PCNA抗体阳性细胞比率明显减少（P＜0.05）.24 h、36 h、48 h和72 h回转组HFE-145细胞的细胞周期分布与对照组相比无明显差异,12 h回转组G0＋G1期细胞比例较对照组明显增多（P＜0.05）,S＋G2＋M期细胞之和较对照组显著减少（P＜0.05）.24 h、36h、48 h和72 h回转组HFE-145细胞凋亡的比例与对照组相比无明显差异,12 h回转组细胞凋亡比例较对照组明显增多（P＜0.05）.结论回转器模拟失重使胃黏膜上皮HFE-145细胞在12 h时形态发生了变化,出现细胞周期阻滞、增殖抑制和凋亡增加.     

回转器模拟失重对人胃癌SGC-7901细胞形态和生物学特征的影响

目的 探讨模拟失重对人胃癌SGC-7901细胞形态、增殖、周期和凋亡的影响.方法采用回转器模拟失重,用图像分析系统软件分析HE染色后SGC-7901细胞形态的改变,用免疫组化法观察细胞增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化,用流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡.结果 回转器模拟失重后,回转组SGC-7901细胞12 h、24 h、36 h、48 h及72 h各时间段的细胞面积均较对照组缩小（P＜0.01）;在36 h时,其长短径之比较对照组增大（P＜0.01）,其余时间段无明显差异.12 h、24 h和36 h回转组SGC-7901细胞PCNA抗体阳性细胞比率与对照组相比无明显差异,48 h、72 h回转组的PCNA抗体阳性细胞明显减少（P＜0.05或P＜0.01）.12 h、24 h和36 h回转组SGC-7901细胞的细胞周期与对照组相比无明显差异,48 h、72 h回转后G0＋G1期细胞显著增多（P＜0.01或P＜0.05）,S＋G2＋M期细胞则显著减少（P＜0.01或P＜0.05）.12 h、24 h、36 h和48 h回转组SGC-7901细胞凋亡比例与对照组相比无明显差异,72h回转组细胞凋亡比例较对照组明显增多（P＜0.01）.结论 回转器模拟失重使胃癌SGC-7901细胞的形态发生了变化,48 h、72 h时出现细胞周期阻滞、增殖抑制,72 h时凋亡增加.     

模拟失重条件下骨形态发生蛋白-2对大鼠骨肉瘤成骨样细胞基因表达的影响

目的观察回转器模拟失重条件下骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )对大鼠骨肉瘤成骨样细胞 (ROS1 7/ 2 .8)基因表达的影响。方法在 1G和回转器模拟失重条件下对ROS1 7/ 2 .8细胞进行培养 ,培养液中含5 0 0ng/ml的BMP 2。在实验的 2 4、48和 72h提取细胞总RNA ,进行反转录PCR ,检测Ⅰ型胶原α1链(COL Ⅰα1 )及碱性磷酸酶 (ALP)mRNA的表达 ,并计算与内参照 β -肌动蛋白 ( β actin)mRNA水平的比值。结果BMP 2诱导组的COL Ⅰα1mRNA表达在 2 4h和 48h显著高于无BMP 2组 (P <0 .0 1 ) ,ALPmRNA水平在 48h和 72h显著高于无BMP 2组 (分别为P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 ) ;BMP 2诱导 48h后模拟失重组的COL Ⅰα1mRNA水平显著低于 1G对照组 (P <0 .0 1 ) ,模拟失重 48h和 72h后ALPmRNA表达显著低于 1G对照组 (P <0 .0 1 )。结论BMP 2可促进大鼠骨肉瘤成骨样细胞的分化相关基因的表达 ,在模拟失重条件下细胞对BMP 2的促分化作用的反应性下降。     

回转器模拟失重对ROS17/2.8细胞分化基因表达的作用

目的 观察回转器模拟失重对ROSl7／2．8(大鼠骨肉瘤)细胞分化相关基因表达的影响。方法 对培养的ROSl7／2．8细胞采用回转器模拟失重24、48及72h，并设1G对照组。提取细胞总RNA，进行反转录PCR，检测I型肢原αl链和碱性磷酸酶mRNA的表达量，计算与内参照物β—actin的比值。结果 模拟失重72h后，失重组细胞内COL—Iα1及alkline phosphatase(ALP)的基因表达量明显低于对照组(P＜0．01)。结论 回转器模拟失重72h使大鼠骨肉瘤细胞的分化功能降低。     

模拟失重和辐照对鼠心肌细胞和成骨细胞的影响

为观察观察失重和辐射对细胞和功能的影响，用回转器模拟失重，＾６０Ｃｏ－γ射线辐照体外培养的心肌和成骨细胞 。     

右归丸对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期和凋亡的影响

目的观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓细胞周期和凋亡的影响,探讨其可能造血调控作用机制。方法用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法和流式细胞术（FCM）分别检测右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数以及骨髓细胞周期和调亡的影响。结果右归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、骨髓有核细胞（BMC）数,右归丸高剂量对血小板（PLT）和白细胞（WBC）有明显升高作用。右归丸低、高剂量组均能促进骨髓GO／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化,从而导致G2／M期细胞比例明显升高,增殖指数（PI）也明显升高。中、低剂量组右归丸的骨髓细胞凋亡比例显著下降。结论右归丸可能通过促进骨髓细胞修复受损的DNA,加速通过GI／S和S期监测点,进行增殖和分化;抑制造血细胞的凋亡;调节造血细胞增殖与凋亡之间的平衡等机制,从而促进损伤骨髓造血功能恢复。     

1 G和模拟微重力下前列腺癌细胞PC-3对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1增殖和活性的影响

目的　探讨1 G和模拟微重力条件下前列腺癌细胞分泌物对成骨细胞增殖和活性的影响,以期今后用于对抗微重力导致的骨质丢失以及常人的骨质疏松。　方法　1 G条件下,将小鼠成骨样细胞MC3T3 E1与人前列腺癌细胞PC 3分别接种在混合培养板的外室和内室中培养48 h, 用MTT法检测MC3T3 E1的增殖、用PNPP法检测MC3T3 E1 的碱性磷酸酶(ALP)活性。回转器模拟微重力条件下,将培养过PC 3的培养液加入到培养24 h的MC3T3 E1培养瓶中,培养瓶固定于回转器,转速20 r/min 下继续培养48 h 后,用MTT 法检测MC3T3 E1 的增殖、用PNPP 法检测MC3T3 E1的ALP活性。　结果　1 G条件下,与PC 3混合培养后,MC3T3 E1的增殖和ALP活性均较对照组有显著增加(P<0 05)。回转模拟微重力条件下MC3T3 E1 的增殖和ALP活性比静止对照组有显著下降(P<0 05),与微重力可导致骨质丢失的现象相一致。回转培养、加PC 3 培养液的MC3T3 E1的增殖和ALP活性比回转对照组有增加趋势,但不具统计学意义(P>0 05)。　结论　前列腺癌细胞确实分泌了某种因子可刺激成骨细胞的增殖和活性,模拟微重力条件的实验结果没有1 G条件的显著,这可能是实验方法不同所导致,有待进一步深入研究。     

模拟失重条件下骨形态发生蛋白-2诱导的成骨细胞蛋白激酶MEK1活性的变化

目的观察模拟失重条件下由骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导的大鼠骨肉瘤成骨样细胞（ROS17／2．8）中丝裂原激活的蛋白激酶／细胞外信号调节激酶的激酶1（MAPK／ERK kinase1，MEK1）活性的变化。方法在地面1G和回转器模拟失重条件下培养ROS17／2．8细胞，培养时间分别为24h、48h和72h。培养结束前1h加入BMP-2（500ng／ml），1h后提取细胞蛋白，应用Western Blotting法检测细胞中的总细胞外信号调节激酶1／2（总ERK1／2）和磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK1／2）的含量。另设一空白对照组，即1G条件下不加BMP-2的培养组。结果7个实验组细胞的总ERK1／2蛋白表达量无明显差异；空白对照组p-ERK1／2的表达量极低，明显低于其他6组（P〈0．01）；各时间点模拟失重组p-ERK1／2表达量均低于1G对照组（P〈0．01）；随着失重时间延长p-ERK1／2表达量呈逐渐降低的趋势（P〈0．01）。结论模拟失重条件下BMP-2诱导的成骨细胞MAPK信号通路中蛋白激酶MEK1的活性下降。