PTP4A1在舌鳞癌组织及TCA8113细胞中的表达及意义

目的：检测PTP4A1基因在舌鳞癌组织及舌鳞癌细胞系TCA8113中的表达,并探讨其表达水平与舌鳞癌临床病理参数的关系。方法：应用免疫组化SP法检测30例舌鳞癌和15例正常舌组织石蜡包埋组织中PTP4A1的表达;对15例新鲜舌鳞癌组织进行real-time PCR,检测PTP4A1在舌鳞癌组织、癌旁组织、正常舌组织的表达,此外对TCA8113细胞中PTP4A1的表达水平也进行了检测。结果：免疫组化结果显示,PTP4A1表达于舌鳞癌组织的细胞质和细胞核,在舌鳞癌组织中呈阳性和强阳性表达,而在正常舌组织中呈阴性和弱阳性表达;PTP4A1在舌鳞癌的阳性表达率为83%,显著高于其在正常舌组织中的表达率33.3%;PTP4A1在舌鳞癌组织和正常舌组织的表达差异有统计学意义（P=0.001<0.05）;而且PTP4A1的表达水平与肿瘤的淋巴转移相关（P=0.014<0.05）,而与病人的性别、年龄、肿瘤的大小、肿瘤的分期分级无明显相关。Real-time PCR实验结果显示舌鳞癌组织及舌鳞癌细胞系TCA8113细胞中的PTP4A1的mRNA表达水平高于其在癌旁和正常舌组织的表达,癌旁组织的表达高于正常舌组织的表达（P=0.000<0.05）。结论：PTP4A1基因mRNA水平和蛋白水平表达在舌鳞癌组织中表达均较癌旁和正常舌组织高,可能在舌鳞癌的发生发展过程中起着一定作用。     

Bmi1基因沉默对人舌鳞癌细胞生物学功能的影响

目的:检测Bmi1(B lymphoma Mo-MLV insertion region 1)在舌鳞癌细胞与正常舌黏膜中的表达差异,探讨Bmi1基因沉默后对口腔舌鳞癌细胞生物学功能的影响?方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测Bmi1蛋白和mRNA在舌鳞癌细胞系和正常舌黏膜组织中的表达情况;采用免疫荧光染色检测Bmi1在舌鳞癌细胞中的分布情况;通过短发夹shRNA有效抑制Bmi1表达后,MTT实验检测其对舌鳞癌细胞增殖能力的影响;划痕实验检测其对舌鳞癌细胞迁移能力的影响;Transwell实验检测其对舌鳞癌细胞侵袭的影响;克隆形成实验检测其对舌鳞癌细胞克隆形成率的影响;构建移植瘤实验观察其对移植瘤生长的影响?结果:Bmi1在舌鳞癌细胞中高表达,而在正常舌黏膜中低表达(P < 0.05);Bmi1基因沉默后显著抑制舌鳞癌细胞的增殖?侵袭?迁移能力以及抑制体内移植瘤的生长(P < 0.05),这与Bmi1对下游靶基因P16?P14和E-cadherin的调控有关?结论:Bmi1与舌鳞癌多种恶性生物学功能的调控密切相关,可能是舌鳞癌潜在的治疗靶点?     

siRNA 沉默PACE4基因对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的作用

目的研究siRNA沉默PACE4基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移以及细胞周期的影响。方法利用人工合成的siRNA特异性抑制PACE4在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,瞬时转染24h和36h后分别利用real-timePCR和Westernblot的方法检测沉默效率;MTT、细胞划痕和流式细胞术等方法测定干扰PACEd表达后对细胞的增殖、迁移和细胞周期的影响。结果转染特异性siRNA-PACE4后,与对照组相比,在36h时,mRNA水平和蛋白水平抑制效果最明显（P〈0．01,P〈0．05）;MCF-7细胞的生长受到抑制（P〈0．05）,且细胞的迁移力（P〈0．05）也明显下降,但是对细胞周期的影响不明显。结论PACE4在乳腺癌细胞的异常增殖和迁移中发挥一定作用,为进一步探讨乳腺癌的发病机制奠定了基础。     

VEGF-siRNA对人舌癌TCA8113细胞体内及体外生长影响的初步研究

目的探讨针对血管内皮生长因子(VEGF)的小分子RNA干扰(siRNA)对舌癌TCA8113细胞体内和体外生长的影响。方法将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体,以空载体组做实验对照组,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以未转染舌癌细胞作空白对照组,MTT检测转染后各组细胞增殖情况;将稳定转染的各组细胞接种裸鼠,接种后7 d开始,每4 d测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较各时间段肿瘤生长,接种后47 d处死,比较瘤体积和瘤重。结果与实验对照组和空白对照组相比较,两个实验组细胞生长速度降低,细胞抑制率均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),裸鼠接种肿瘤生长缓慢,处死后测量到瘤体体积小、重量轻(P<0.05),而实验对照组和空白对照组细胞抑制率、瘤体体积、瘤重等差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF-siRNA在体内和体外能有效的抑制人舌癌细胞的生长。     

siRNA沉默CXCR4基因对食管鳞癌细胞EC9706体外侵袭能力的影响

目的:探讨siRNA沉默CXCR4基因对食管鳞癌EC9706细胞系体外侵袭能力的影响.方法:化学合成两对针对CXCR4基因的干扰序列siRNA1和siRNA2和一对荧光标记的阴性对照siRNA,转染人食管鳞癌EC9706细胞.荧光显微镜下观察转染效率,于转染后48 h采用半定量RT-PCR和Western Blot法检测各组细胞CXCR4 mRNA和蛋白表达水平的变化,Boyden侵袭小室检测各组细胞体外侵袭能力的变化.结果:与未转染组和转染阴性对照siRNA组相比,EC9706细胞转染两对CXCR4 siRNA48 h后,CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05),转染siRNA1组CXCR4 mRNA和蛋白下降尤为明显,未转染组和转染阴性对照siRNA组之间无明显差异(P>0.05).Boyden侵袭小室结果显示,转染CXCR4siRNA1和CXCR4 siRNA2组细胞穿膜数与未转染组和转染阴性对照siRNA组相比明显下降(P<0.05),未转染组和单纯转染脂质体转染试剂组之间无明显差异(P>0.05).结论:siRNA沉默CXCR4基因降低EC9706细胞CXCR4的表达和侵袭能力,为...     

沉默PARP-1对卵巢癌上皮细胞耐药性及肿瘤相关生物学行为的影响

目的 研究探讨沉默聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)后,卵巢癌上皮细胞对顺铂药物的敏感性及相关生物学行为的变化。 方法 以人卵巢癌细胞株A2780为研究对象,采用小RNA干扰技术,沉默PARP-1的表达后,采用Western blot实验、RT-PCR实验、MTT实验等观察PARP-1蛋白、mRNA的表达及细胞存活率的变化趋势,采用方差分析进行比较。 结果 PARP1小RNA干扰序列(PARP1-siRNA)转染组PARP-1 mRNA表达量明显低于A2780组和阴性对照组接种转染组(NC-siRNA),3组PARP-1 mRNA表达量分别为(45.22±3.99)%、(24.13±5.24)%、(46.28±6.19)%(P＜0.05);PARP1-siRNA转染组PARP-1蛋白表达IOD值明显低于A2780组和NC-siRNA转染组(P＜0.05);与0 μmol/L相比,5 μmol/L和10 μmol/L组的PARP-1蛋白表达IOD值明显降低(P＜0.05);随着顺铂浓度的增高,PARP1-siRNA转染组的细胞存活率下降的速度最快。 结论 PARP1-siRNA转染明显下调人卵巢癌细胞株A2780的PARP-1表达后,该细胞对顺铂药物的敏感性增强,细胞的存活率明显下降。      

siRNA沉默CEACAM1基因对人胶质瘤SHG44细胞生物学行为的作用

目的 探讨CEACAM1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胶质瘤SHG44细胞增殖、体外迁移和侵袭能力的影响. 方法 设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA,脂质体法瞬时转染SHG44细胞.Western blot检测转染后细胞中CEACAM1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平变化.CCK-8法检测转染后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化.通过Transwell小室迁移和侵袭实验,观察下调CEACAM1对SHG44细胞体外迁移和侵袭能力的影响.结果 三组特异性siRNA转染48 h后,Western blot的结果显示,3个siRNA转染组CEACAM1蛋白水平均低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.01),以CEACAM1-siRNA3干扰效果最为明显.后续实验表明,与两个对照组相比较,CEACAM1-siRNA组的细胞增殖减慢,β-catenin和Cyclin D1表达水平明显减少(P＜0.05).Transwell小室迁移和侵袭实验表明CEACAM1下调后的SHG44细胞迁移和侵袭能力较正常对照组及阴性对照组明显降低(P＜0.05). 结论 CEACAM 1-siRNA能有效抑制人胶质瘤SHG44细胞CEACAM1蛋白的表达,并抑制细胞增殖,降低细胞的体外迁移及侵袭能力.     

JSH-23对人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响

目的 探讨JSH-23阻断NF-κB信号通路后人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的情况及NF-κB信号通路相关凋亡抑制基因Bcl-2的表达变化,进而为临床舌鳞癌的干预和治疗寻找新的药物提供实验依据.方法 采用体外培养人舌癌Tca8113细胞的方法,经不同浓度JSH-23作用不同时间后,用MTT法、RT-PCR及Western blot等方法检测JSH-23对Tca8113细胞增殖、凋亡的影响.采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验.结果 Tca8113细胞经JSH-23作用后,增殖受到明显抑制,20 μmol/L JSH-23作用48 h时,抑制作用最为显著,细胞生长抑制率达到60.45％.同时,Bcl-2凋亡抑制基因表达减少,与对照组相比,JSH-23作用48 h后,Bcl-2表达显著减少47.85％,差异有统计学意义（P＜0.05）;Bcl-2蛋白含量也明显减少,作用48 h后,Bcl-2蛋白表达相对光密度值分别下降50.93％ （P ＜0.01）.结论 JSH-23作为NF-κB信号通路抑制剂,可以明显抑制人舌鳞癌细胞的增殖,同时显著下调Bcl-2基因及蛋白的表达.     

siRNA沉默Wip1基因对人肺腺癌细胞的影响

目的向肺腺癌A549细胞中导入靶向Wip1的siRNA,研究其对肺腺癌细胞生物学活性的影响。方法设计并合成Wip1基因特异性的siRNA,通过脂质体介导将siRNA瞬时转染肺腺癌A549细胞,用荧光定量PCR检测转染后细胞内Wip1基因的表达水平,流式细胞学检测A549细胞凋亡、增殖以及用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁徙的情况。结果特异转染组中Wip1 mRNA表达明显降低,并且处于G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低,侵袭细胞数及迁移率均明显低于非特异转染组,细胞凋亡未见差异性改变。结论靶向Wip1基因的siRNA能有效降低目的基因mRNA的表达水平,抑制A549细胞的生长并引起细胞侵袭力及迁移力下降。     

siRNA沉默GPNMB对人胶质母细胞瘤细胞系生物学特性的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）干扰非转移性黑色素瘤糖蛋白B（GPNMB）表达对人胶质母细胞瘤细胞系生物学特性的影响。方法将GPNMB siRNA片段通过脂质体转染人胶质母细胞瘤细胞系U251和SHG44,Western blot检测GPNMB蛋白表达水平;Annexin V/PI双染法检测GPNMB-siRNA对细胞凋亡的影响;MTT法检GPNMB-siRNA对细胞增殖的影响;Transwell法检测GPNMB-siRNA对细胞侵袭性的影响。结果 GPNMBsiRNA能有效抑制人胶质母细胞瘤细胞系U251和SHG44中GPNMB的表达,与空白对照组比较,GPNMB的缺失对细胞凋亡影响不大,可显著抑制细胞的增殖和侵袭（P〈0.05）。结论 GPNMB基因敲除对人胶质母细胞瘤细胞系U251和SHG44的凋亡无显著影响,但可显著抑制其增殖力和侵袭力,表明GPNMB在人胶质母细胞瘤的发生、发展中起着重要作用,提示GPNMB可以作为治疗人胶质母细胞瘤的潜在靶点。     

siRNA抑制DJ-1基因表达对肺鳞癌SK-MES-1细胞生物学行为的影响

目的:采用RNA 干扰技术下调DJ-1 基因在肺鳞癌细胞SK-MES-1 中的表达, 探讨DJ-1 表达下调对SKMES-1 细胞生物学行为的影响, 以期探讨DJ-1 基因的功能。方法:构建靶向DJ-1 基因siRNA 慢病毒载体( 重组慢病毒中有绿色荧光蛋白真核表达框), 感染SK-MES-1 细胞(DJ-1 siRNA 组), 并设立慢病毒载体对照组(Control-siRNA 组)及空白对照组。荧光显微镜下观察并计算感染效率, Western 印迹检测各组细胞中DJ-1 蛋白表达水平, MTT法检测细胞增殖能力, 流式细胞术测定细胞周期, Transwell 小室实验检测细胞体外迁移侵袭能力。结果:与Control-siRNA组及空白对照组比较, DJ-1 siRNA 组的DJ-1 蛋白表达受到抑制、细胞增殖能力明显减弱(P<0.01)、G1/G2 期细胞数增多和S 期细胞数减少表明细胞周期受阻、细胞体外迁移和侵袭能力显著减弱(P<0.01)。结论:DJ-1 基因具有促进肺鳞癌细胞SK-MES-1 细胞的增殖和体外迁移侵袭的作用。     

RNAi技术沉默VEGF-C基因对小鼠4T1细胞生物学行为的影响

目的体外观察siRNA靶向干扰VEGF-C基因对4T1小鼠乳腺癌细胞的生物学行为影响。方法选用HifectinII真核转染试剂将化学修饰的针对小鼠VEGF-C基因的siRNA转染4T1小鼠乳腺癌细胞株,设立空白对照组(只加培养基),脂质体组(每孔加培养基与0.5μL Hifectin II真核转染试剂),SCR组(100 nM),siRNA组(100 nM)。蛋白印迹试验检测转染前后细胞中VEGF-C的蛋白水平表达的变化;半定量RT-PCR检测VEGF-C、Survivin、BCL-2、BAX的mRNA水平表达的变化;MTT比色法检测细胞的增殖;Transwell小室方法检测肿瘤细胞的侵袭性改变;Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡。结果转染VEGF-C siRNA 48 h后4T1细胞的VEGF-C基因的mRNA和蛋白水平表达明显降低,空白对照组、脂质体组和siRNA SCR组各指标差异无显著性(P>0.05);4T1细胞生长受到抑制,Transwell小室方法检测肿瘤细胞的侵袭性降低,Hoechst 33258荧光染色显示细胞内可见凋亡小体。结论化学修饰siRNA介导的RNA干扰能下调靶基因VEGF-C的表达并能够促进4T1细胞的凋亡,抑制4T1细胞的增殖与侵袭性。     

RNA干扰HO-1表达对肺腺癌A549细胞生物学行为的影响研究

目的应用RNA干扰技术特异性抑制血红蛋白加氧酶-1（HO-1）的表达,观察HO-1对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法将体外构建的HO-1小分子RNA（siRNA）转染入肺腺癌A549细胞,分为空白对照组（blank组）、脂质体组（mock组）、阴性对照组（NC组）、HO-1siRNA组;应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测HO-1mRNA和蛋白表达水平;分别以CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖能力和凋亡率,用Transwell试验检测细胞迁移能力。结果细胞培养48、72h后,与blank组、mock组、NC组比较,HO-1siRNA组细胞存活率均降低（均P＜0.05）,细胞凋亡率均增高（均P＜0.05）,G0期/G1期细胞比例均增高（均P＜0.05）,Transwell试验中穿膜细胞数均减少（均P＜0.05）。结论RNA干扰HO-1基因表达后能有效调控肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为,抑制肺腺癌A549细胞的增殖,促进凋亡,降低细胞的侵袭能力。     

Effect of siRNA Targeting Survivin Gene on the Biological Behavior of Hepatocellular Carcinoma

To study the influence of siRNA targeting survivin gene on the biological behavior of hepatocellular carcinoma (HCC), one pair of 21bp reverse repeated motifs of survivin target sequence with 9 spacers were synthesized and inserted into plasmid psilencer2.1 to generate siRNA eukaryotic expression vector. After stable transfection into HepG2 cells, the biological behaviors of the survivin siRNA transfected HCC cells were observed. After the recombinant plasmid Psilence( )-survivin was successfully constructed, survivin mRNA and protein expression inhibition ratio reached 73% and 75% respectively compared to control groups. Transfected cells with survivin siRNA demonstrated significantly inhibited cell growth and increased apoptosis. Subsequent study in nude mouse model demonstrated lower succeeding rate in cells transfected with survivin siRNA and slow growth rate. The results elucidated the siRNA targeting survivin gene could specially suppress its expression in HepG2 cells and inhibit tumor cells growth both in vivo and in vitro. This provides a theoretical basis to turn the drug resistance in tumor cells.     

慢病毒介导的猪CD4启动子在白血病Jurkat细胞中的启动作用

目的:研究异种基因启动子在Jurkat细胞中调节外源基因表达的作用,为人类白血病动物模型的建立提供理论依据。方法：利用生物信息学手段预测并克隆出猪CD4基因启动子,然后利用克隆的猪CD4基因启动子构建和包装慢病毒载体。包装的病毒经过滴度检测和侵染293T细胞及Jurkat细胞后进行绿色荧光蛋白检测,比较猪CD4基因启动子与EF-1α启动子启动的外源基因表达情况。结果:成功预测出猪CD4基因启动子,成功构建慢病毒载体并包装出病毒。经过病毒滴度测定及侵染293T细胞和Jurkat细胞表明,2种启动子在细胞中的启动绿色荧光蛋白的效果相近。结论：猪CD4基因启动子在白血病 Jurkat 细胞中没有特异性启动外源基因,猪CD4基因启动子可以作为一种在Jurkat细胞中启动外源基因的不同选择。     

siRNA沉默S100A4基因表达抑制甲状腺癌细胞侵袭的研究

目的 探讨S100A4基因对甲状腺癌细胞侵袭的影响和可能机制.方法 采用S100A4基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染处理人甲状腺癌ARO细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测S100A4基因和基质金属蛋白酶-2mRNA和蛋白水平;分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力.结果 siRNA转染组S100A4基因mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性（P＜0.000 1）.siRNA转染组软琼脂集落形成数和穿过滤膜的细胞数均明显下降,且呈浓度依赖性（P＜0.005;P＜0.005）.S100A4转染组MMP-2基因mRNA和蛋白水平明显下调.结论 采用S100A4 siRNA转染可抑制甲状腺癌细胞侵袭转移,其机制可能与下调MMP-2表达有关.