脂肪来源干细胞体外成骨和成脂及成神经的诱导分化研究

目的 探讨脂肪组织来源干细胞 (adipose stem cell,ADSC) 的表面表型及向成骨、成脂和成神经多向分化的生物学特性.方法 取SD大鼠的腹股沟、附睾垫和腹膜后脂肪,Ⅰ型胶原酶消化、分离培养ADSC,检测第3代ADSC的CD29、CD44和CD45的表达情况.将ADSC加入成骨诱导剂,通过茜素红S染色鉴定成骨细胞;成脂诱导剂利用油红O染色鉴定脂肪细胞;神经干培养基诱导,免疫荧光染色鉴定诱导的神经元.结果 ADSC表达CD29(99.07±0.12)%、CD44(95.82±0.68)%和CD45(0.11±0.12)%.其经成骨诱导4周,茜素红S染色显示聚集的细胞团中央形成红色钙化结节,碱性磷酸酶染色可见到细胞的胞质内有紫红色颗粒;成脂诱导1周,油红O染色可见细胞质内有橙红色脂滴;经过神经干培养基诱导6 d后,免疫荧光染色显示诱导的细胞Nestin、NF-200及GFAP阳性表达.结论 ADSC表达间质干细胞的表面表型,体外经诱导培养后可向成骨细胞、脂肪细胞和神经元多向分化,表明 ADSC具有干细胞的多向分化潜能.     

大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞的研究

目的研究大鼠脂肪干细胞的基本生物学特性及其向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化潜能。方法取6周龄SD大鼠腹股沟处脂肪组织,胶原酶消化法分离出脂肪干细胞,体外培养。取第3代细胞,免疫细胞化学测定其CD44、CD34抗原表达,分别用成脂和成骨诱导培养液诱导其向脂肪细胞及成骨细胞分化。油红染色、碱性磷酸酶染色和vonKossa染色鉴定其分化能力。结果大鼠脂肪干细胞生长能力旺盛,表达CD44,而不表达CD34;定向诱导后,油红染色、碱性磷酸酶染色和vonKossa染色阳性。结论大鼠脂肪组织可分离培养出脂肪干细胞,能向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化,有可能成为组织工程理想的种子细胞来源之一。     

人胎盘底蜕膜间充质干细胞的分离培养及其多向分化潜能的实验研究

目的探讨人胎盘底蜕膜间充质干细胞(MSCs)体外生物学特性,并验证其多向分化潜能。方法通过酶消化和密度梯度离心法从人足月胎盘底蜕膜中获取MSCs,倒置显微镜下观察其形态变化和生长特点;CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期及表面抗原(CD29、CD44、CD73、CD90、CD34、CD45、CD14)的表达;在特定诱导条件下,使其向成骨、成脂、成软骨方向分化,鉴定其多向分化潜能。结果人足月胎盘底蜕膜中分离的MSCs呈克隆样生长,形态类似于骨髓MSCs,传代后细胞增殖迅速,细胞倍增时间为(2.21±0.21)d;大于70%的细胞处于静止期(G0/G1期),阳性表达CD29、CD44、CD73、CD90,不表达CD34、CD45、CD14;经诱导后茜素红染色、油红O染色和Alcian blue染色均呈阳性表现。结论胎盘底蜕膜中含有丰富的MSCs,易于体外分离培养,且具有多向分化潜能,有希望成为另一新颖的干细胞来源。     

大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养与鉴定

目的：体外培养大鼠骨髓间质干细胞（BMSCs）,并进行形态学观察、表面分子标记和多向分化能力的检测鉴定。方法采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,显微镜下进行形态学观察,流式细胞仪检测细胞表面标记物CD29、CD44、CD45,并诱导大鼠BMSCs向成骨和成脂分化。结果分离培养的细胞以梭形细胞为主,呈漩涡状生长。 CD29、CD44均呈阳性表达,而CD45呈阴性。成脂成骨诱导后,油红O和茜素红S染色均呈阳性。结论全骨髓贴壁培养法分离培养的细胞具有间质干细胞的生物学特性,具有多向分化潜能。     

人骨髓基质干细胞体外培养和生物学特性鉴定

目的 体外分离、纯化培养人骨髓基质干细胞(hBMSCs),对其表面标志物、多向分化特性进行鉴定,为骨组织工程提供理想的种子细胞来源.方法 抽取健康成人骨髓,采用全骨髓培养法,多次消化以纯化hBMSCs;应用流式细胞仪对细胞表面标志物进行检测;采用成骨、成软骨和成脂培养基进行三向诱导分化.结果 培养的第3代细胞表面抗原检测显示:表达CD106、CD166和CD29,不表达造血和内皮标志CD34、CD45和CD145在体外分别诱导出其向成骨、成软骨和成脂肪细胞分化.结论 hMSCs体外经分离传代培养后细胞成分较为单一,具有多向分化潜能,符合间充质干细胞的基本功能特征.     

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养和鉴定

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外分离培养方法及其生物学特性。方法采用全骨髓贴壁培养法获得大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代骨髓间充质干细胞,通过成骨、成脂肪诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记（CD29、CD34、CD45、CD90）等鉴定BMSCs特征。结果全骨髓贴壁培养法获得的BMSCs,原代和传代培养具有活跃的增殖能力;BMSCs经诱导后可分别向成骨、成脂转化;流式分析表面标志分子高表达CD90（96.5%）、CD29（92.3%）,低表达CD34（0.89%）、CD45（1.41%）。结论全骨髓贴壁培养法可有效地分离和扩增BMSCs,分离培养的BMSCs具有潜在的多向分化能力。     

人牙周膜干细胞的分离培养及鉴定

目的:探讨人牙周膜干细胞的多向分化潜能。方法:体外分离培养人牙周膜细胞,光镜下及HE染色鉴定细胞形态学特征。免疫组化法检测波形蛋白、角蛋白、CD44的表达。成骨诱导法培养人牙周膜干细胞向成骨细胞分化。结果:体外成功分离培养人牙周膜干细胞。角蛋白阴性表达,波形蛋白阳性表达,CD44阳性表达。诱导成骨结果显示人牙周膜干细胞具有潜在的多向分化潜能。结论:人牙周膜干细胞在体外可以诱导分化为成骨样细胞,具有多向分化的潜能。     

大鼠骨髓间质干细胞多向分化研究

目的:分离和培养大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs),并进行多向分化研究。方法:体外分离培养大鼠骨髓单个核细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD44、CD90、CD45)的表达。传至第3代后,分别进行成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞及成肝细胞的诱导。结果:通过流式细胞仪器检测表明培养的细胞为大鼠BMSCs。BMSCs经诱导后分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞及肝细胞。结论:大鼠BMSCs具有多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞。     

人羊水源性间充质干细胞的分离培养及鉴定

目的 体外分离培养人羊水间充质干细胞(HAFMSCs),观察生物学特性,并鉴定其多向分化能力.方法 采用改良两步法分离培养HAFMSCs,用MTT法观察细胞增殖能力.FACS检测表面抗原CD29,CD34,CD44,CD45,CD73,CD90,HLA-ABC,HLA-DR等的表达.RT-PCR法分析细胞中OCT-4,Nanog mRNA水平的表达.用成脂、成骨、内皮细胞培养基对HAFMSCs进行诱导,并分别采用油红O,Yon Kossa染色及细胞免疫荧光染色检测其分化能力.结果 羊水细胞于2-3d开始贴壁,10-15d形成细胞集落.传至第3代HAFMSCs呈旋涡状排列,生长曲线呈S形.FACS检测显示CD29,CD44,CD73,CD90,HLA-ABC表达阳性,CD34,CD45,HLA-DR表达阴性,RT-PCR法检测显示HAFMSCs中OCT-4、Nanog mRNA的表达阳性.成脂、成骨诱导21d后油红O、Von Kossa染色阳性,成内皮细胞诱导4周后细胞免疫荧光染色检测vWF抗体表达阳性.结论 成功分离培养出HAFMSCs,细胞具有干细胞特征,具有多向分化潜能.     

大鼠关节软骨干细胞的分离培养及其特性的鉴定

目的分离培养大鼠关节软骨干细胞(ACSCs)并鉴定其特性。方法运用纤连蛋白黏附法从大鼠关节软骨细胞中分选出ACSCs,流式细胞技术分别鉴定干细胞阳性表面抗原(阳性标志物CD90与CD44)和阴性表面抗原(阴性标志物CD45、CD31与CD34)在ACSCs中的表达水平,单克隆形成实验鉴定ACSCs的单克隆形成能力,成骨、成脂及成软骨诱导鉴定ACSCs的多向分化潜能。结果纤连蛋白可以特异性地分选出ACSCs。ACSCs高表达CD90与CD44,几乎不表达CD45、CD31与CD34。经过7d培养,单个ACSC可以形成大于32个细胞的单克隆细胞团。ACSCs具备很强的成骨、成脂和成软骨分化能力。结论大鼠关节软骨内存在ACSCs,ACSCs具有比较典型的干细胞特征。     

腓骨肌腱修复跟腱断裂24例的临床分析

目的分析腓骨长肌腱用于修复跟腱断裂的手术方法和经验。方法将腓骨长肌腱在远端处切断,经皮下隧道移位修复跟腱断裂24例。结果根据Arner-Lindholm评定标准,24例中优14例,良10例。未发生跟腱再次断裂。2例出现伤口感染,1例出现皮肤与跟腱粘连。结论对疑有跟腱断裂的患者未进行认真的体检是导致跟腱断裂误诊的重要原因。避免误诊、尽早手术及循序渐进的术后康复锻炼是提高疗效的有效措施。用腓骨长肌腱重建陈旧性和某些急性跟腱断裂是一种安全可行、疗效满意的手术方法。     

自体腘绳肌腱与部分腓骨长肌腱重建前交叉韧带疗效比较

目的比较采用自体腘绳肌腱（HT）与部分腓骨长肌腱（PLT）进行前交叉韧带（ACL）单束重建的疗效。方法选取采用HT与部分PLT进行ACL重建手术的患者127例,根据移植物不同,分为HT组79例和部分PLT组48例。术前及术后6、12个月门诊复诊时采用疼痛视觉模拟评分（VAS）评估患者疼痛情况,采用Lysholm评分和Tegner评分评估患者膝关节运动功能,并测量膝关节活动度,进行组间比较。结果两组患者术后6、12个月VAS评分均明显低于术前,Lysholm评分和Tegner评分均明显高于术前,膝关节活动度均较术前明显改善,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。术后6个月部分PLT组Lysholm评分优于HT组,差异有统计学意义（P＜0.05）;其余各指标不同时点两组的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论采用部分PLT重建ACL疗效较为确切,术后患者疼痛状况、膝关节功能及活动度改善情况与临床常用的自体HT相仿,是值得尝试的一种ACL重建移植物。     

腓肠肌肌腱皮瓣修复术治疗陈旧性跟腱断裂

目的：探讨腓肠肌肌腱皮瓣修复术治疗陈旧性跟腱断裂的临床疗效。方法：2001年1月-2007年1月我院采用腓肠肌肌腱皮瓣修复术治疗陈旧性跟腱断裂15例,术后6周去长腿石膏后托进行功能康复训练,术后随访1年,采用Arner-Lindholm疗效评定标准评估。结果：13例患者伤口均为一期愈合,无感染、生硬和跟腱再次断裂等发生;2例肌皮瓣皮肤发生部分坏死,行植皮术后延期愈合。Arner-Lindholm疗效评定,优9例,良4例,差2例,优良率为86.67%。结论：采用腓肠肌肌腱皮瓣修复术治疗陈旧性跟腱断裂能较好地恢复跟腱的功能,近、远期疗效满意。     

腓骨长肌腱移位修复陈旧性闭合性跟腱断裂的临床应用

目的：探讨腓骨长肌腱移位修复陈旧性闭合性跟腱断裂的手术方法。方法：设计腓骨长肌腱移位重建跟腱的术式,并在临床应用于20例陈旧性闭合性跟腱断裂的患者,其中,男14例,女6例。跳跃伤12例,砸伤4例,踏空伤及自发伤各2例。均为陈旧伤,受伤至手术时间21天～3个月。全部患者均为闭合性跟腱断裂,其中完全性断裂4例,不完全性断裂16例。结果：临床应用20例患者切口均Ⅰ期愈合,均获随访18～24个月,无再断裂发生,无皮肤坏死等手术并发症。按照Amer-Lindholm评定标准：优14例,良6例,优良率100%,跟腱功能恢复良好。结论：腓骨长肌腱移位修复跟腱对于陈旧性闭合性跟腱断裂,是一种方法简便,疗效满意的手术方法。     

Modified arthroscopic transfer of the long head of the biceps tendon to the conjoint tendon

The long head of the biceps tendon （LHBT） pathology has been implicated as a common source of shoulder pain. The patients may be more resistant to conservative treatment than those with isolated subacromial impingement. Even though, the surgical options of this disease remain controversial. It has been reported that tenotomy and tenodesis of the biceps tendon were usually utilized. However, persistent pain, deformity, and muscle cramping were frequently observed. Transfer of the LHBT to the conjoint tendon was originally described by Post and Benca in 1982.4 Verma et all has performed the transfer under arthroscopy since 2004. Eighty percent of their patients reported good results with a minimum 2 years of follow-up. However, there was a steep learning curve to become proficient in their technique. We devised a more convenient transfer compared with O＇Brien＇s technique. Six patients received our modified arthroscopic transfers from May 2006 to May 2007. All of them obtained good results.     

掌长肌腱移植修复拇长伸肌腱V区再断裂

目的探讨掌长肌腱移植对拇长伸肌腱V区再断裂的治疗效果。方法2003年8月-2011年8月,我院共收治拇长伸肌腱V区再断裂患者66例中,本组采用掌长肌腱移植术36例,对照组采用食指固有伸肌腱移位修复术30例。结果根据TAM评价标准,本组27例（75％）治疗效果优,6例（16．7％）良,3例（8．3％）中;对照组疗效优15例（50％）,良4例（13．3％）,中11例（3617％）,差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论选择掌长肌腱移植修复拇长伸肌腱V区再断裂疗效满意。     

脂肪干细胞在肌腱组织工程中的研究进展

严重的肌腱缺损带来严重的社会及经济负担，传统治疗方法效果欠佳。肌腱组织工程为治疗严重的肌腱
缺损提供了新的方向。脂肪干细胞较骨髓干细胞有来源广泛，分离过程简单、安全等优点，具有向多种细胞分化的
潜能及强大的自我增殖能力。脂肪干细胞在生长因子、周期性张力及氧分压等适宜刺激下可分化为肌腱细胞，分泌
肌腱细胞外基质，形成组织化工程肌腱以修复严重缺损的肌腱，改善因肌腱缺损导致的功能障碍。     

An experimental study of using “tendon bridge” or “tendon tunnel” as a conduit for nerve regeneration

In our experiments, a “tendon bridge” or a “tendon tunnel” was used as a conduit to repair the defect of a peripheral nerve in rabbits. A gap of about 1 cm was made on the deep peroneal nerve in each animal. In group 1, the tendon of anterior tibial muscle was isolated near the severed nerve, and a segment of half cross section of tendon was removed in ladder-shaped reversed fashion. The proximal and distal nerve stump were sutured respectively to the tendon by 11/0 atraumatic sutures under surgical microscope. In group 2, the nerve stumps were sutured to the tendon of anterior tibial muscle without cutting the tendon, but the tendon was dissected free and turned to form a tunnel wrapping the gap in between the nerve stumps. The results showed that a gap of 1 cm of the deep peroneal nerve might be repaired by both methods, but the results of using “tendon tunnel” in group 2 were much better than those of using “tendon bridge” in group 1.     

人发角蛋白人工腱诱导自体腱形成中胶原原纤维的形态学变化

目的观察人发角蛋白(HHK)人工腱诱导自体腱形成过程中胶原原纤维形成的形态学变化。方法制备肌腱损伤动物模型,植入HHK人工腱,于术后3、6、9、12、16周取出,进行光镜及电镜观察。结果自体腱形成过程中,先后有一级、二级和三级胶原原纤维形成。结论HHK人工腱诱导自体腱形成过程中,人工腱植入区肌腱断端和腱膜下的腱细胞去分化,分泌大量的胶原蛋白,并在细胞外生成一级胶原原纤维,再逐级融合形成二级和三级胶原原纤维,最终多数腱细胞胶原化而消失。     

半腱肌腱股薄肌腱在重建前交叉韧带中的运用

目的:探讨用无内固定物的半腱肌腱股薄肌腱重建前交叉韧带的临床运用和效果。方法:南京医科大学第一附属医院自2002年12月至2004年6月对33例前交叉韧带损伤的患者进行了无内固定物的半腱肌腱股薄肌腱重建前交叉韧带术,其中13例移植肌腱采用二股半腱肌腱和二股股薄肌腱,另20例仅为二股半腱肌腱,术前和术后进行Lachman试验评估膝关节的稳定性,用Lysholm评分方法评定膝关节功能。结果:术前Lachman试验均为阳性,术后29例为阴性,4例为阳性。术前Lysholm评分为36￣57分,术后Lysholm评分为71￣96分。结论:无内固定物的半腱肌腱股薄肌腱重建前交叉韧带为生物固定,固定可靠,费用少,短期效果好,中长期效果有待观察。