PRMT1通过促进RRM2表达抑制鼻咽癌细胞凋亡

目的 探讨PRMT1能否通过促进RRM2抑制鼻咽癌细胞凋亡。方法 免疫组化和Western blot共同检测鼻咽癌和癌旁组织中PRMT1及RRM2的相对表达量;以人正常鼻黏膜上皮细胞系（HNEpC）作为对照,Western blot实验检测不同鼻咽癌细胞系中PRMT1和RRM2蛋白的相对表达量;对CNE-2细胞中PRMT1分别进行过表达和下调,过表达实验设阴性对照组（oe NC:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达PRMT1组（oe PRMT1:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 PRMT1质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC:CNE-2细胞中转染NC无关序列）及PRMT1小干涉RNA组（si-PRMT1:CNE-2细胞中转染PRMT1小干涉RNA）,对CNE-2细胞中RRM2分别进行过表达和下调,过表达实验设阴性对照组（oe NC:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达RRM2组（oe RRM2:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 RRM2质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC:CNE-2细胞中转染NC无关序列）及RRM2小干涉RNA组（si-RR...     

VP3对鼻咽癌细胞CNE-2细胞株的体外杀伤效应

目的：体外实验观察VP3对鼻咽癌CNE-2细胞株的杀伤效应。方法：构建质粒表达载体pcDNA3．1（-）CMV．V3-His,KpnI／EcoR I酶切鉴定,测序分析VP3基因序列。脂质体法将pcDNA3．1（-）CMV．VP3-His和pcDNA3．1（-）-His分别瞬时转染鼻咽癌细胞CNE-2细胞株,Western印迹鉴定VP3基因的表达。四甲基偶氮唑盐（methylthiazoletetrazolium,MTT）法检测VP3对鼻咽癌细胞株CNE-2的杀伤效应。结果：酶切和测序分析证实重组质粒中包含完整的忡,基因的编码序列,Western印迹在转染细胞总蛋白中检测到该基因表达的16．03kD的蛋白。表达VP3基因的CNE-2细胞生长受到抑制,而不表达忡;基因的CNE-2细胞生长未受到抑制。结论：VP3可杀伤鼻咽癌细胞CNE-2细胞株。     

调控RECK基因表达对早孕绒毛外滋养细胞MMP-2活化及细胞侵袭力的影响

目的观察RECK基因过表达对人早孕绒毛外滋养细胞系TEV-1的MMP-2活化比例及细胞侵袭力的影响。方法以脂质体Lipofectamine^TM 2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入TEV-1细胞，以获得稳定转染目的基因的TEV-1细胞株。RT-PCR、流式细胞术检测目的基因的表达；明胶酶谱法、Transwell侵袭小室实验分别检测TEV-1细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和细胞生长曲线法观察质粒DNA转染的细胞毒性情况。结果目的基因RECK在TEV-1细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达；明胶酶谱显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组活化的MMP-2比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.05），Transwell侵袭实验显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.01）；MTT法测重组质粒pcDNA3-RECK转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异。结论RECK过表达可显著减少绒毛外滋养细胞的MMP-2活化及其侵袭能力，可能参与了早孕绒毛外滋养细胞侵蚀机制。     

下调TSP1表达抑制宫颈腺癌HeLa细胞生长及促血管生成能力的研究

目的 研究调控血小板反应蛋白1 (TSP1)的表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、凋亡、侵袭及促进内皮细胞成血管能力的影响。方法 构建表达TSP1基因的真核表达载体pcDNA3.1-TSP1及siRNA-TSP1,转染宫颈癌HeLa细胞,实验共分为TSP1基因过表达组(pcDNA3.1-TSP1转染组)、TSP1基因低表达组(siRNA-TSP1转染组)和未转染组(阴性对照组)。Real-time PCR、Western blot检测各组细胞TSP1的表达,CCK-8、划痕实验、流式细胞术、Transwell检测各组细胞生长情况,体外血管形成实验检测各组细胞促血管生成能力。结果 与阴性对照组比较,pcDNA3.1-TSP1组细胞TSP1 mRNA及蛋白表达上调,siRNA-TSP1组细胞TSP1 mRNA及蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);pcDNA3.1-TSP1组HeLa细胞的增殖、迁移、侵袭及体外促内皮细胞血管形成能力明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05),但凋亡比例比较差异无统计学意义(P>0.05),而siRNA-TSP1组HeLa细胞...     

circRNA-ITCH通过TET1基因抑制Wnt/β-catenin 信号通路对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察环状RNA(circRNA)-ITCH在鼻咽癌组织和细胞系中的表达,探讨circRNA-ITCH对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法 qPCR分别检测circRNA-ITCH在49例鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达。选取circRNA-ITCH表达最低的细胞系,分别转染阴性质粒或过表达circRNA-ITCH的质粒,定义为对照组和实验组。CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测过表达circRNA-ITCH对细胞增殖和侵袭能力的影响。qPCR和Western blot法分别检测过表达circRNA-ITCH对10-11转位酶1(ten-eleven translocation1,TET1)基因和Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。结果 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)。circRNA-ITCH在鼻咽癌细胞系中表达水平明显低于人永生化鼻咽上皮细胞(P<0.05),在CNE-2Z细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组CNE-2Z细胞中TET1在mRNA和蛋白水平的表达明显增加(P<0.01),Wnt1、PLC、PKC和β-catenin蛋白表达明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被抑制。结论 circRNA-ITCH在鼻咽癌组织及细胞系中表达降低,过表达circRNA-ITCH可明显抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和侵袭能力,其分子机制可能是促进TET1基因的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路。     

miR-150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-150是否通过靶向调控程序性细胞死亡因子4（PDCD4）促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭,进一步揭示miR-150在鼻咽癌中的癌基因作用。方法 2014年3-6月,培养鼻咽癌细胞株CNE-2,取生长良好的CNE-2用于实验。设计合成PDCD4野生型引物序列以及突变型引物序列,连接到含有荧光素酶载体质粒上,检测荧光素酶活性。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,48 h后采用Western blotting法检测PDCD4表达水平。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,分别于培养24、48、72、96 h后测定其吸光度（OD）值,反映其增殖能力。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,采用Transwell侵袭实验检测CNE-2侵袭能力。结果 无miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为（0.975±0.112）,miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为（0.588±0.042）,差异有统计学意义（t=7.853,P=0.018）。无miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为（0.992±0.135）,miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为（0.875±0.095）,差异无统计学意义（t=1.461,P=0.281）。转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平分别为（0.655±0.058）、（1.147±0.152）、（0.704±0.068）、（0.313±0.036）,差异有统计学意义（F=43.410,P＜0.001）;其中,转染Vector、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平均低于转染pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2,差异有统计学意义（P＜0.05）。转染物和时间对CNE-2增殖能力存在交互作用,转染物和时间对CNE-2增殖能力均存在主效应（P＜0.001）。转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2穿膜细胞数分别为（56.6±7.5）、（26.5±3.7）、（30.5±4.7）、（55.2±6.9）个,差异有统计学意义（F=18.550,P=0.014）;其中,转染pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors的CNE-2穿膜细胞数少于转染Vector、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 miR-150通过抑制PDCD4的表达,继而增强鼻咽癌细胞的增殖能力和侵袭能力。     

pcDNA3.1-Annexin A1真核表达载体对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨Annexin A1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法构建重组质粒pcDNA3.1-AnnexinA1,转染至结直肠癌细胞株SW480中,G418筛选稳定表达株,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测转染前后Annexin A1mR-NA及蛋白表达;以空载体转染组及未转染SW480细胞作为对照,通过划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验对转染前后细胞的迁移和侵袭能力进行比较观察和分析。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Annexin A1载体;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测结果均显示,重组体pcDNA3.1-Annexin A1稳定转染细胞株中Annexin A1mRNA及蛋白表达均明显高于空载体转染及未转染组细胞(P<0.01),而后两者间比较差异无统计学意义(P>0.05);重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组SW480细胞的迁移率(0.415±0.002)明显高于空载体转染组(0.267±0.003)及未转染组细胞(0.271±0.002),差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者间差异无统计学意义(P>0.05);与空载体转染组(162.80±12.07)及未...     

艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移

目的 探讨艾地骨化醇(eldecalcitol, ED-71)对骨肉瘤细胞增殖、转移和富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)表达的影响。方法 首先，使用Lipofectamine 2000将CYR61过表达重组pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-CYR61组)及阴性对照pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-NC组)转染到人骨肉瘤细胞系(U2OS)中，通过RT-PCR和Western blot验证转染效率。然后，将U2OS细胞分为对照组、ED-71组、ED-71+pcDNA3.1-NC组和ED-71+pcDNA3.1-CYR61组，对照组和ED-71组细胞未进行转染，ED-71+pcDNA3.1-NC组细胞转染pcDNA3.1-NC,ED-71+pcDNA3.1-CYR61组细胞转染pcDNA3.1-CYR61。转染后，对照组细胞不做药物处理，其余3组细胞用含有5 nmol/L艾地骨化醇的1640培养基培养24 h。CCK-8法和集落形成实验测定U2OS细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，RT-PCR检测细胞中CYR61 mRNA水平，We...     

过表达连接蛋白32对人肝癌细胞株MHCC-97H体外侵袭能力的影响

目的 探讨过表达连接蛋白32(Cx32)对人肝癌细胞株MHCC-97H体外侵袭能力的影响.方法 应用Lipofectamine 2000将pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒转染至MHCC-97H细胞,G418稳定筛选.采用Western blot法检测Cx32蛋白表达,划痕标记荧光传输实验显示细胞通讯功能的变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力的改变.结果 转染pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒使得MHCC-97H细胞过表达Cx32蛋白.与正常对照组和转染空质粒组细胞相比,转染pcDNA 3.1(-)/Cx32重组质粒并过表达Cx32的细胞胞间通讯功能增强,细胞侵袭能力减弱.结论 Cx32在人原发性肝癌的侵袭过程中可能起抑制作用.     

nm23-H1基因转染对膀胱癌T-24细胞转移能力及化疗敏感性的影响

目的 探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞侵袭转移能力及化疗敏感性的影响.方法 将nm23-H1真核表达质粒通过电击穿孔转染技术导入人膀胱癌细胞株T-24, G418筛选阳性克隆,免疫组织化学方法检测nm23-H1基因的表达情况.Transwell小室和冲刷实验观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化.MTT法检测T-24细胞转染前后对化疗药物敏感性的变化.结果 以电穿孔技术将nm23-H1基因转入T-24细胞后,获得稳定表达;免疫组织化学结果显示T-24细胞株在nm23-H1基因转染前后其表达水平有明显差异;转染后T-24细胞侵袭、粘附、趋化运动能力有明显的降低.转染后T-24细胞对顺铂(CDDP)明显增敏.结论 nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用.nm23-H1基因能增强T24细胞对顺铂的化疗敏感性.     

乌司他丁对单肺通气肺叶切除术患者动脉血TNF-α、IL-6和IL-8的影响

目的：观察乌司他丁对单肺通气（OLV）肺叶切除术时患者动脉血中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）的影响。方法：OLV麻醉行肺叶切除术患者20例,分乌司他丁治疗组（W组,10例）和对照组（A组,10例）。W组在OLV开始后,静脉泵注乌司他丁10000IU/kg,1h内注完;A组则予同体积的0.9%氯化钠注射液。两组分别于麻醉前（T0）、机械通气后30min（T1）、1h（T2）、2h（T3）、胸内操作结束后1h（T4）、2h（T5）、术后24h（T6）、48h（T7）采血测定TNF-α、IL-6、IL-8。结果：①TNF-α：A组在T3时开始上升,T7达峰值;W组T4开始上升,T7达峰值;A组T6、T7上升幅度明显大于W组（P〈0.05）;②IL-6：两组均在T3时开始上升（P〈0.01）,T7仍未恢复到麻醉前水平（P〈0.05）,组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;③IL-8：A组在T2时开始上升（P〈0.01）,T5达高峰,T6回降,T7仍未恢复到麻醉前水平（P〈0.05）;组间比较,A组在T4、T5、T6显著高于A组（P〈0.01）。结论：乌司他丁10000IU/kg可抑制OLV引起的TNF-α、IL-8升高;但不能抑制OLV引起的IL-6上升。     

白细胞介素-8在肿瘤中的作用研究现状

白细胞介素-8（Interleukin-8,IL-8）是一个多种细胞来源的趋化性细胞因子,在炎症反应、免疫应答及创伤愈合等过程中具有重要作用。近年的研究表明IL-8在多种恶性肿瘤组织中高表达,可能与肿瘤的血管生成、生长转移、复发等密切相关。本文就IL-8与肿瘤关系的最新研究成果加以综述。     

人类补体C8结构与功能研究进展

人类补体C8是组成膜攻击复合物(MAC)的五种成分之一。C8α、C8β与C6、C7、C9具有较强的同源性,而C8γ则属于分泌性蛋白家族成员,具有与小的疏水性配体结合的能力。形成膜攻击复合物的其他补体成分与C8的结合位点大多位于α、β的MACPF结构域。目前,大多数关于补体成分的研究主要集中于补体C3,鉴于补体C8在形成MAC中的重要性,在此就C8的结构与功能予以综述。     

大鼠大脑皮质胆囊收缩素受体的体外结合分析法研究

用Ｂｏｌｔｏｎ－Ｈｕｎｔｅｒ试剂联结法标记胆囊收缩素（ＣＣＫ８）,得１２５Ｉ－ＢＨ－ＣＣＫ８,其比放射性为３．４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ,放射化学纯度大于９６％。取其与自制的大鼠大脑皮质细胞膜进行受体放射分析,发现标记配体与大鼠大脑皮质ＣＣＫ受体的结合具有温度和时间依赖性,可饱和性,可逆性及特异性。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析获大鼠大脑皮质细胞膜ＣＣＫ受体Ｋｄ值为１．０９８ｎｍｏｌ／Ｌ,Ｂｍａｘ为１９７．５ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白。     

强直性脊柱炎患者血清与关节滑膜液IL-8、IP-10及RANTES水平测定及其临床意义

目的探讨IL-8、γ干扰素诱生蛋白10(IP-10)及活化正常T细胞表达和分泌的调节物(RANTES)与强直性脊柱炎(AS)患者病情的关系。方法采用ELISA法检测31例活动期AS患者(观察组)血清、30名健康者(对照组)血清。观察组又按临床症状分为周围型AS(13例)和中轴型AS(18例),检测周围型AS患者关节液IL-8、IP-10和RANTES的水平。结果观察组血清IL-8、IP-10和RANTES水平均高于对照组(均P<0.05)。AS患者关节滑膜液中IL-8和IP-10水平高于血清水平(P<0.05);而RANTES水平低于血清水平(P<0.05)。周围型AS患者血清IL-8水平较中轴型AS患者显著增高(P<0.01)。血清RANTES水平与Bath强直性脊柱炎活动指标(BASDAI)呈正相关(r=0.575,P<0.05)。结论IL-8血清水平可能与AS患者发病形式有关,RANTES可作为病情活动性指标。     

IL-8和解脲脲原体感染与早产关系的研究

目的测定早产产妇宫颈分泌物中IL-8的表达水平及胎盘解脲脲原体（Uu）的感染情况,探讨这些因素与早产的关系。方法ELISA法检测39例早产产妇宫颈分泌物中IL-8的表达水平,并获取胎盘标本,进行Uu分离培养,同时以47例足月产产妇作为对照组。结果早产产妇宫颈分泌物中IL-8水平显著高于正常对照组,23例产妇Uu培养阳性,而对照组仅11例阳性（P〈0.05）。结论宫颈分泌物中IL-8的高表达以及Uu感染可能与早产有关。     

Toll样受体-2对角质形成细胞分泌IL-8的影响

目的:观察白念珠菌刺激人角质形成细胞后IL-8的变化以及Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR-2)对IL-8分泌的影响,探讨角质形成细胞在皮肤免疫系统中的作用。方法:白念珠菌分别与抗TLR-2抗体预处理前后的角质形成细胞孵育,ELISA方法检测不同时间培养上清液IL-8的水平。结果:白念珠菌可引起IL-8明显升高(P<0.01),3h开始,至24h达到高峰;中和TLR-2受体后,虽然引起IL-8升高,但无统计学意义(P>0.05)。结论:白念珠菌可以刺激角质形成细胞分泌IL-8,TLR-2在角质形成细胞IL-8表达中的作用尚难确定。     

慢性非细菌性前列腺炎患者前列腺液TNF-α、IL-8的检测及临床意义

目的：探讨前列腺按摩液（EPS）中细胞因子白细胞介素-8（IL-8）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在Ⅲ型前列腺炎[慢性非细菌性前列腺炎／慢性盆底疼痛综合征（CAP／CPPS）]诊断、分型中的意义。方法：ELISA法检测50例临床诊断为Ⅲ型前列腺炎患者EPS中IL-8及TNF-α水平。结果：慢性非细菌性前列腺炎EPS中ⅢA型组TNF-α水平与ⅢB型组、对照组比较,有显著性差异（P〈0．05）;ⅢB型组TNF-α水平与对照组比较,无显著性差异（P〉0．05）。ⅢA型组IL-8水平与ⅢB型组、对照组比较,有非常显著性差异（P〈0．01）;IUB型组与对照组比较,有非常显著性差异（P〈0．01）。所有患者EPS中TNF-α【水平与WBC计数无明显相关性（r=-0．167。P〉O．05）,IL-8水平与WBC计数的相关性分析显示呈正相关（r=0．836,P〈0．01）。结论：检测Ⅲ型前列腺炎患者EPS中IL-8及TNF-α水平可能有助于Ⅲ型前列腺炎的分型诊断,并口『作为了解病情和评价治疗效果的一个有价值的指标。     

小剂量MIP-1α联合IL-8体外对人骨髓造血细胞集落形成的影响

目的 了解小剂量巨噬细胞炎症蛋白－1α(Macrophage inflammatory protein-α MIP-1α）联合白细胞介素－8（Interleukin-8,IL-8）对人骨髓造血细胞集落形成的影响。方法 取人骨髓，根据随机单位组方差分析设计，将每例标本分为空白组（不加MIP－1α和IL－8）；10ng/ml联合组（加入10ng/ml的MIP－1α和IL－18）。建立半固体培养体系，一定时间后，观察集落粒单细胞集落形成单位（CFU－GM）、红细胞集落形成单位（CFU－E）和混合信集落（CFU－E）和混合集落（CFU－Mix）的形成情况。结果 1ng/ml的浓度下，相同浓度的MIP－1α与IL－8联合使用对人骨髓造血细胞集落的形成没有明显的抑制作用；而在10ng/ml的浓度下，两者联合使用则能明显地抑制人骨髓造血细胞集落的形成。两种因子单独使用，未见明显的集落形成抑制作用。结论 10ng/mlMIP-1α与IL－8能相互协同抑制人骨髓造血细胞集落的形成。     

川芎嗪抑制IL-8诱导人卵巢癌SKOV3细胞的迁移作用

目的:观察外源白介素-8(Interleukin-8,IL-8)对人卵巢癌SKOV3细胞迁移的影响,及川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对它的干预作用,初步研究其可能机制.方法:TMP处理SKOV3细胞后,MTF法确定药物浓度;细胞划痕实验观察外源IL-8对SKOV3细胞迁移能力的影响,采用Tra...