HIF-2α及ABCG2在人乳腺癌细胞微球体裸鼠移植瘤组织中的表达及其意义

目的： 研究缺氧诱导因子2α（HIF-2α）及三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在原代无血清悬浮培养人乳腺癌细胞微球体（MSs）裸鼠移植瘤组织中的表达,并探讨MSs具有高动物成瘤性的可能机制。方法： 原代乳腺癌组织无血清悬浮培养法获得MSs,将其植入裸鼠体内观察成瘤情况,同时采用人乳腺癌MCF-7细胞悬液种植于同一裸鼠的右侧背部作为实验对照。免疫组织化学法观察移植瘤组织中HIF-2α及ABCG2的表达,Western blotting及RT-PCR技术检测HIF-2α及ABCG2蛋白及mRNA在移植瘤组织中的表达水平。结果： 原代MSs具有较强的动物成瘤性。免疫组织化学法,在移植瘤组织中HIF-2α与ABCG2均有表达。Western blotting及RT-PCR,HIF-2α及ABCG2蛋白在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤及瘤旁组织中的表达量（P<0.05）;HIF-2α mRNA及ABCG2 mRNA在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤组织及瘤旁组织中的表达量（P<0.05）。结论： HIF-2α与ABCG2在MSs裸鼠移植瘤中高表达,推测其为导致MSs具有高动物成瘤性的可能机制。     

ABCG2过表达对乳腺癌细胞上皮间质化能力的影响

目的 探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)过表达对乳腺癌细胞上皮间质转化(EMT)能力的影响.方法 构建ABCG2稳定过表达乳腺癌细胞株,检测ABCG2稳定过表达前后MCF-7乳腺癌细胞中E-cadherin蛋白和N-cadherin蛋白的表达情况.结果 E-cadherin蛋白表达在ABCG2过表达MCF-7乳腺癌细胞中明显低于常规MCF-7细胞(P＜0.05),而N-cadherin蛋白表这在ABCG2过表达MCF-7乳腺癌细胞中明显高于常规MCF-7细胞(P＜0.05).结论 ABCG2过表达可以通过调控EMT相关蛋白的表达进而增强乳腺癌细胞的EMT能力,可能与乳腺癌的转移密切相关.     

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因在食管癌中的表达及意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporer G2,ABCG2)基因在食管癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测44例原发性食管癌患者的癌组织、癌旁组织(距离癌2cm)及食管切缘正常黏膜(距离癌5cm以上)ABCG2的mRNA表达。结果ABCG2在食管癌原发灶组织中有较高程度的表达,其表达量为0.77±0.11,而正常食管黏膜中的表达量为0.66±0.12;其在食管癌中的表达显著高于正常黏膜(P<0.01)。ABCG2在低分化鳞癌中的表达显著高于中-高分化鳞癌(P<0.05)。食管癌中ABCG2在年龄和性别间表达无显著性差异(P>0.05)。结论ABCG2在食管癌组织中高表达可能在某种程度上参与了食管癌原发性耐药及化疗中多药耐药的形成。其可作为一种新的引起多药耐药的分子,指导临床上食管癌的化疗。     

青蒿琥酯与阿霉素联用对人食管癌细胞生长及凋亡的影响

目的 探讨青蒿琥酯(AS)与阿霉素(ADM)联合应用对人食管癌细胞Ec9706生长及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 应用流式细胞仪检测AS与ADM联合应用前后人食管癌细胞Ec9706凋亡率及细胞内ADM的含量;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测AS作用前后细胞三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)mRNA的表达.结果 ADM单独作用24 h后,Ec9706细胞的凋亡率同对照组比较显著性增高(P<0.05).AS与不同浓度的ADM联合作用后,Ec9706细胞的凋亡率及细胞内ADM的含量同单独应用ADM组比较显著增高(P<0.01).RT-PCR检测发现AS作用24 h后Ec9706细胞ABCG2 mRNA表达显著降低(P<0.05).结论 ADM对人食管癌细胞Ec9706具有生长抑制和诱导凋亡的作用,AS可以使其作用明显增强,其发生机制可能是通过AS下调ABCG2 mRNA表达,增加细胞内ADM的含量而实现的.     

氯化钴后处理对新生鼠缺氧缺血性脑损伤学习记忆的作用

目的探讨氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)后处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠空间学习记忆的作用。方法生后7日龄SD大鼠66只,分为假手术组(n=16)、缺氧缺血组(HI组,n=18)、CoCl2即刻干预组(C1组,n=14)、CoCl2术后1 d干预组(C2组,n=18)。Western blot检测术后1、2、7 d脑组织HIF-1α蛋白的表达。大鼠生后7周行水迷宫观察CoCl2对大鼠空间学习记忆的影响。结果 HI组和C1组HIF-1α蛋白在术后第1、2天增多,第7天则不能检测到HIF-1α蛋白。而C2组第7天仍能检测到HIF-1α蛋白表达。水迷宫实验显示C2组较HI组3～5 d时平均潜伏时间明显缩短,穿越原平台区域的时间增加,空间学习记忆能力部分恢复(P<0.05)。结论在新生鼠缺氧缺血性脑损伤时,CoCl2促进HIF-1α蛋白的持续表达,术后1 d干预可有效恢复大鼠的空间学习记忆能力。     

缺氧诱导因子1α对乳腺癌生物学行为的影响

目的 探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）在乳腺癌组织中的表达状态以及其与临床病理因素之间的关系。方法 对行乳腺癌根治术后甲醛固定的石蜡包埋组织进行连续切片和HIF-1α免疫组化染色。结果 45例乳腺癌的HIF-1α阳性率为82．22％；HIF-1α表达与乳腺癌的组织类型、PR标志、ER标志、TNM分期、癌性坏死之间无相关性，但与淋巴结是否转移、炎症反应程度及病程长短之间有一定关系。结论 HIF-1α过表达与乳腺癌不良生物学行为有一定关系。     

维拉帕米对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的观察维拉帕米对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致损伤的作用及其机制。方法制作心肌细胞H/R损伤模型。倒置显微镜和透射电子显微镜下观察心肌细胞形态和结构的变化;双抗体夹心光化学法检测心肌细胞培养上清液中肌钙蛋白(cardiac troponin I,cTnI)的浓度;ELISA方法检测上清液中TNF-α的含量;Western-blot及Northern-blot方法分别检测培养心肌细胞中早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)基因和蛋白的表达水平。结果缺氧及复氧过程中给予维拉帕米能改善H/R所致心肌细胞形态结构的损伤,减轻H/R所致cTnI和TNF-α的漏出或分泌,抑制H/R所致的心肌细胞Egr-1基因和蛋白过量表达。结论维拉帕米对培养心肌细胞H/R损伤具有多重保护作用,其机制与其抑制Egr-1基因及蛋白过量表达有关。     

缺氧诱导因子1α对直肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的:探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）对直肠癌细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法:野生型直肠癌细胞系HT-29（Wt-HT-29）及转染HIF-1α特异性小干扰RNA（siRNA）的转染型HT-29细胞系（Si-HT-29）分别在常氧及缺氧状态下培养,通过Western blotting方法检测各组细胞在常氧及缺氧状态下HIF-1α和己糖激酶Ⅱ（HK-Ⅱ）的表达情况,采用MTT法检测各组细胞的生存率,采用ATP试剂盒检测细胞ATP生成量。结果:Western blotting结果,缺氧状态下野生型HT-29细胞中HIF-1α和HK-Ⅱ表达量高于转染型细胞。以常氧状态下野生型HT-29细胞的ATP生成量及细胞数量分别作为ATP及MTT数据的100%,将常氧状态下转染型HT-29细胞、缺氧状态下野生型及转染型HT-29细胞的ATP生成量及细胞数量与常氧状态下野生型HT-29细胞比值的百分数作为各组的ATP生成量及细胞生存率。常氧状态下转染型HT-29细胞的ATP生成量及细胞生存率分别为93.6%和92.0%,与野生型HT-29细胞比较差异无统计学意义（P>0.05）。在缺氧状态下野生型及转染型HT-29细胞的生存率分别为85.0%和61.3%,二者比较差异有统计学意义（P<0.05）;同时在缺氧状态下野生型及转染型HT-29细胞ATP生成量分别为81.2%和42.9%,二者比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论:HIF-1α能诱导直肠癌细胞表达HK-Ⅱ,增加ATP生成,从而发挥促增殖作用,HIF-1α可能成为直肠癌新的治疗靶点。     

曲古菌素A逆转人肺癌细胞顺铂耐药性的研究

目的探讨曲古菌素A(Trichostation A,TSA)对人肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的逆转作用。方法 MTT法分析TSA单用以及联合顺铂对A549/DDP细胞增殖的影响,流式细胞术检测TSA和顺铂联合诱导细胞凋亡和对细胞周期的影响。结果 TSA对A549/DDP细胞的增殖有明显的抑制作用,其IC50为193 nmol/L。无细胞毒作用的低剂量TSA可显著增强A549/DDP对顺铂的敏感性。细胞周期结果显示,TSA联合顺铂可引起G2/M期细胞明显增加,细胞周期受阻。结论 TSA能抑制人肺癌耐顺铂细胞的增殖,且能明显提高A549/DDP对顺铂的敏感性,其作用机制与阻滞细胞周期有关。     

N-myc分化相关基因1与癌症的关系

N-myc分化相关基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)在许多细胞的生理功能中起着重要作用,细胞生长、分化和多种应激的情况都可以影响NDRG1蛋白的表达水平,NDRG1的缺乏可能导致多种疾病。在多种癌细胞系中,NDRG1的转录和翻译与肿瘤的分化和转移有关。在缺氧环境中,NDRG1的表达水平上调,而在许多肿瘤细胞中都存在缺氧的现象,这使得NDRG1与缺氧和癌症之间存在着复杂的关系。NDRG1与癌症的关系使NDRG1可能作为癌症进展的标识和癌症诊断的辅助工具。     

脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义

[目的]探讨多药耐药相关基因如缺氧诱导因子1d（HIF-1α）、多药耐药基因（MDR1）及多药耐药相关蛋白（MRP1）在脊索瘤细胞系CM－319中的表达及临床意义。[方法]用RT—PCR检测HIF－1α、MDR1、MRP1基因表达,间接免疫荧光及免疫细胞化学Envision法检测HIF－1α、MRPl蛋白在CM－319中的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。[结果]常氧条件下,在脊索瘤细胞系中能检测到HIF～1α及MRP1 mRNA的表达,但未检测到MDR1 mRNA的表达（P〈0．01）,间接免疫荧光及免疫细胞化学可以检测到HIF-1α表达在细胞浆及核中,而MRP1主要表达在细胞浆中。[结论]HIF-1α与MRP1的过度表达在脊索瘤的放化疗抵抗中可能具有重要作用,而MDR1表达未被检测到,提示脊索瘤的放化疗抵抗主要与HIF－1α和MRP1相关。     

缺氧诱导鼻咽癌细胞株CNE2化疗耐药及其机制

目的：探讨缺氧环境下人鼻咽癌多药耐药相关基因和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达和意义,从而部分阐明鼻咽癌发生多药耐药的机制,为逆转鼻咽癌耐药提供新的分子靶点.方法：将人鼻咽癌细胞系CNE2分别行不同时间低氧培养,MTT法检测CNE2对紫杉醇、顺铂及5-氟尿嘧啶的耐药倍数;流式细胞仪检测缺氧与常氧下细胞的凋亡情况.应用RT-PCR和Western Blot分别检测每组CNE2细胞中多药耐药相关基因（mdr1）、多药耐药相关蛋白1（MRP1）和HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达.结果：缺氧培养48 h,CNE2对紫杉醇、顺铂和5-氟尿嘧啶的耐药倍数较常氧分别提高2.14,1.86,1.43倍,且药物引起的凋亡减少.在缺氧组,随着缺氧时间的延长,CNE2细胞中多药耐药相关基因mdr1,MRP1的表达均逐渐增高,而且这些多药耐药相关基因的表达与HIF-1α的表达呈同步化改变.结论：缺氧可上调鼻咽癌细胞内的核转录因子HIF-1α以及多药耐药相关基因的表达,从而诱导鼻咽癌产生多药耐药性.核转录因子HIF-1α和这些多药耐药相关基因可能成为逆转鼻咽癌耐药的新的分子靶点.     

二氯化钴所致缺氧对A549细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:探讨CoCl2作用不同时间所致缺氧对体外培养的人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常氧和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTT法检测CoCl2作用不同时间所致缺氧对A549细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法测定缺氧不同时间HIF-1αmRNA表达水平的变化。AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测CoCl2作用不同时间缺氧肿瘤细胞凋亡情况。结果:CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间依赖性抑制作用。常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1αmRNA的表达,随着CoCl2作用时间的延长,HIF-1αmRNA水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、CoCl2作用4、12、24、48 h组细胞凋亡率分别为(0.60±0.10)%、(1.10±0.10)%、(8.63±0.75)%、(12.80±0.85)%和(19.33±0.80)%。结论:CoCl2对A549细胞具有上调HIF-1αmRNA表达作用,可抑制细胞的增殖和一定的凋亡诱导作用,这些说明HIF-1α可能在肺癌的发展中扮演着重要的作用。     

Effects of Hypoxia on Expression of P-gp and Mutltidrug Resistance Protein in Human Lung Adenocarcinoma A549 Cell Line

Chemotherapy is one of alternatives for trea-ting cancers , but a major obstacle in the develop-ment of effective cancer chemotherapy is MDRphenotype . Overexpression of P-gp and multidrugsresistance-associated protein ( MRP) are generallybelieved to be the mechanismresponsible for MDRof tumor cells . Hypoxia is a common feature ofmany malignant tumors . The physiology and bio-chemistry of tumor cells changes in hypoxia . Hy-poxia inducible factor 1α( HIF-1α) plays a pivotalrole inthe …     

乳腺浸润性导管癌耐药基因蛋白表达与化疗方案的相关性研究

目的：了解乳腺浸润性导管癌对不同化疗方案的敏感性及与耐药基因蛋白表达的关系。方法：用免疫组化法检测同一乳腺癌病例新辅助化疗前后耐药基因蛋白谷胱甘肽-S转移酶（GST-π）、拓扑异构酶Ⅱ（ToPoⅡ）、热休克蛋白（HSP）和P-糖蛋白（P—gp）的表达情况,并与3种化疗方案,即环磷酰胺＋阿霉素＋5-氟尿嘧啶（CAF）、环磷酰胺＋氨甲喋呤＋5-氟尿嘧啶（CMF）、紫杉醇＋阿霉素（TA）方案作相关性分析。结果：CAF方案对乳腺浸润性导管癌耐药表型影响最大,该组28例中11例GST-π由阴性转为阳性表达,7例化疗后ToPoⅡ表达转阴,化疗前后差异显著（P〈0．05）：CMF方案31例中,GST-π5例由阴性转为阳性表达,5例化疗后ToPoⅡ表达转阴;TA方案对乳腺癌耐药表型影响最小,但该方案24例有8例经化疗后P-gp由阳性转为阴性表达。结论：乳腺浸润性导管癌耐药基因表达受不同化疗方案的影响。     

缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子在婴幼儿血管瘤的表达及意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)在婴幼儿血管瘤和婴幼儿正常皮肤的表达情况。方法:采用免疫组织化学S-P染色法,检测HIF-1α、VEGF在婴幼儿血管瘤及正常皮肤的表达。结果:HIF-1α、VEGF表达水平在血管瘤与正常皮肤之间差异有统计学意义(P<0.05)。血管瘤中HIF-1α与VEGF表达呈正相关。结论:HIF-1α与VEGF在血管瘤中呈阳性表达,可能参与促进血管瘤血管生成。     

miRNA-138-5p靶向抑制HIF-1α表达对乳腺癌MCF-7细胞顺铂耐药的逆转作用及其机制

目的:探讨miRNA-138-5p过表达对人乳腺癌MCF-7细胞顺铂(DDP)耐药的影响,并阐明其可能机制.方法:采用浓度梯度递增法诱导MCF-7细胞,建立DDP耐药细胞株MCF-7/DDP,再将miR-138-5p mimics或HIF-1α过表达质粒分别或同时转染至MCF-7/DDP细胞中.将细胞分为阴性对照组(N...     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组.分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达.结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P〉0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P〈0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%.流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间-剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P〈0.05或P〈0.01）.EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P〈0.05或P〈0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P〉0.05）.结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关.     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组。分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达。结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P>0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P<0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%。流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间—剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P<0.05或P<0.01）。EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P<0.05或P<0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P>0.05）。结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关。