中药复方药物血清对CDKN2A和RPS3a基因在人卵巢癌细胞株SKOV3中表达的影响

目的研究CDKN2A（细胞周期依赖性激酶抑制基因）和RPS3a基因（核糖体蛋白质S3a）在中药复方理冲生髓饮诱导人卵巢癌细胞株人卵巢浆液性乳头状囊腺癌（SKOV3）细胞凋亡中的作用。方法将20只Wistar大鼠随机分为理冲生髓饮组和生理盐水组,灌胃给药,采血制备含药血清。提取生理盐水组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与人细胞凋亡寡核苷酸微阵列芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因。结果共筛选出显著差异表达基因66个,其中20个基因表达水平上调,46个基因表达水平下调。结论理冲生髓饮可能通过上调CDKN2A基因和下调RPS3a基因,达到诱导卵巢癌细胞凋亡的目的。诱导细胞周期停滞,阻碍肿瘤细胞蛋白质合成,影响细胞正常代谢等,可能是其诱导细胞凋亡的作用机制。     

艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞作用的研究

目的 探讨艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞的抗肿瘤作用.方法 应用MTT法和RT-PCR 法、ELISA方法分别检测艾迪注射液对SKOV3细胞增殖及SKOV3细胞中VEGF mRNA、VEGF蛋白含量的影响.结果 艾迪组SKOV3人卵巢癌细胞增殖受到抑制,48 h达高峰,抑制率59.51%;SKOV3细胞中VEGF mRNA含量艾迪组较对照组减少,差异有显著性(P＜0.01).结论 艾迪能抑制SKOV3人卵巢癌细胞的增殖,在mRNA、蛋白水平抑制VEGF的表达,进而实现其抗肿瘤作用.     

热疗联合三代铂类药物对卵巢癌细胞株SKOV3的影响

目的 探讨热疗分别联合三代铂类药物即顺铂（DDP）、卡铂（CBP）、奥沙利铂（OXA）对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及其可能机制。方法 SKOV3细胞采用热疗（42 ℃）或常温（37 ℃）联合不同浓度的DDP（终浓度分别为0、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL）、CBP及OXA（终浓度均为0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μg/mL）处理, MTT法检测对SKOV3细胞增殖的影响,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测SKOV3细胞经相应处理后核苷酸切除修复交叉互补组基因(excision repair cross-complementing group 1, ERCC1)、凋亡抑制基因（Survivin）的表达变化。结果 DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株SKOV3的增殖呈抑制作用,并呈剂量依赖性（P<0.05）,42 ℃热疗能增强铂类药物对SKOV3细胞株的增殖抑制作用; DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株增殖的半数抑制浓度（IC50）分别为（7.271±0.096） μg/mL、（37.609±0.779）μg/mL、（28.328±0.698） μg/mL,42 ℃热疗联合上述铂类药物后IC50分别为（2.075±0.244） μg/mL、（19.591±0.453） μg/mL、（19.089±0.424） μg/mL,增敏倍数分别为2.075±0.244、1.92±0.044、1.484±0.039（P<0.05）,其中对DDP的增敏效果最显著;在三代铂类药物中,热疗均能下调ERCC1 mRNA的表达（P<0.05）,且CBP下调最显著;热疗联合CBP、OXA作用于SKOV3时均能下调Survivin mRNA的表达（P<0.05）,其中OXA组更显著,但DDP联合热疗对Survivin mRNA表达的影响差异无统计学意义（P>0.05）。结论 热疗联合三代铂类药物能增强铂类药物对SKOV3细胞的增殖抑制作用,增加肿瘤细胞对铂类药物的敏感性,其增敏机制可能与下调ERCC1 mRNA和Survivin mRNA表达有关。     

香菇多糖对卵巢癌细胞株SKOV3增殖及其裸鼠移植瘤生长抑制作用的研究

目的:研究香菇多糖(LNT)对卵巢癌细胞株SKOV3增殖及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法:LNT与卵巢癌细胞株SKOV3共同体外培养,绘制细胞生长曲线,观察LNT对卵巢癌细胞株SKOV3生长的影响;建立卵巢癌皮下移植瘤动物模型,采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色,观察LNT对移植瘤的生长抑制作用,并利用新生血管计数实验检测LNT对卵巢癌组织血管生成的影响.结果:LNT对卵巢癌细胞株SKOV3生长具有显著抑制作用,并呈现量效关系;在卵巢癌皮下移植瘤动物模型中.注射香菇多试验组瘤重及瘤体积明显低于对照组,PCNA的表达随着LNT的浓度增加而降低;LNT组肿瘤周围的血管数明显少于对照组.结论:LNT可明显抑制体外培养卵巢癌细胞株SKOV3及卵巢癌皮下移植瘤的生长.     

二氧化碳气腹对人卵巢癌细胞株SKOV3VEGF和MMP9表达的影响

目的探讨腹腔镜二氧化碳(CO2)气腹对恶性卵巢肿瘤细胞侵袭能力的影响.方法体外培养人卵巢浆液性乳头状腺癌SKOV3细胞株,以CO2处理2 h,应用细胞爬片免疫组织化学法和半定量RT-PCR方法检测不同时相中血管内皮生长因子VEGF和MMP9表达水平.结果CO2处理后12 h SKOV3细胞VEGF和MMP9蛋白和mRNA表达显著增加,VEGF在CO2处理后24h表达达到高峰,MMP9在48 h达到高峰.结论CO2可以增强卵巢癌细胞SKOV3的侵袭能力.     

ACAP1在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及其意义

目的检测ACAP1在卵巢浆液性囊腺癌中的表达情况,明确其与卵巢浆液性囊腺癌发生发展的关系。方法通过Oncomine网站分析ACAP1 mRNA表达水平与卵巢癌发生的相关性,通过c Bioportal网站分析卵巢癌组织中ACAP1基因突变的类型,通过GeneMANIA网站分析ACAP1相关信号通路以及相互作用的蛋白。采用免疫组化方法检测ACAP1在卵巢浆液性囊腺癌中的表达情况。结果 ACAP1 mRNA在卵巢癌组织中的表达水平高于正常卵巢组织;ACAP家族在卵巢癌组织中存在多种基因突变。应用GeneMANIA网站构建ACAP家族基因互作网络,其中与ACAP家族关系最密切的5个基因为GULP1、ARF6、RAB11FIP3、SLC2A4、VAMP3; ACAP1在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达水平高于正常卵巢组织(P <0.001); ACAP1在卵巢癌原发灶中的高表达与患者的不良预后相关(P=0.037); ACAP1在卵巢癌转移灶中的表达高于卵巢癌原发灶(P <0.001)。结论 ACAP1在卵巢浆液性囊腺癌中高表达,在卵巢癌转移灶中的表达高于原发灶。ACAP1在原发灶中的高...     

Caveolin-1在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨基因蛋白Caveolin-1的表达在卵巢癌侵袭和转移中的作用。方法选取2011年1月~2014年1月廊坊市人民医院手术切除卵巢组织存档蜡块89例,其中卵巢浆液性囊腺瘤58例和卵巢浆液性囊腺癌31例,另取10例因其他良性卵巢病变手术切除的正常卵巢组织作为对照。应用流式细胞免疫法检测99例卵巢组织中Caveolin-1的定量表达,分析Caveolin-1与卵巢癌侵袭和转移的关系。结果卵巢浆液性囊腺癌中Caveolin-1的平均荧光指数(FI)为(0.66±0.27),明显低于正常卵巢组织(1.00±0.16)和卵巢浆液性囊腺瘤(1.69±0.34),差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。有淋巴转移的卵巢浆液性癌Caveolin-1蛋白平均FI值为(0.57±0.29),明显低于无淋巴转移的卵巢液性癌(0.94±0.31),差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ期的卵巢浆液性癌Caveolin-1蛋白FI值为(0.51±0.23),明显低于Ⅰ~Ⅱ期的卵巢浆液性癌(0.92±0.24),差异有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢浆液性囊腺癌组织中Caveolin-1的低表达促进了其侵袭和转移,提示Caveolin-1可作为卵巢浆液性囊腺癌诊断和判断预后的指标。     

佛波酯对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞体外生长的影响

[目的]探讨佛波酯（TPA）对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖、形态、细胞周期的影响.[方法]试验设试剂对照组、肿瘤细胞阴性对照组及5种不同浓度的促癌剂实验组.用四甲基偶氮唑蓝（MTT）快速比色法分析TPA不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用;光镜下观测细胞形态学的改变;透射电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期的变化率.[结果]TPA具有抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖性.细胞周期发生G1→S期阻滞.[结论]TPA能抑制SKOV3细胞增殖,显著地抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外生长.     

高良姜素对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和凋亡影响的机制研究

目的 探讨高良姜素(Galangin, GLA)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。方法 用不同浓度的GLA(0μmol/mL、10μmol/mL、20μmol/mL、40μmol/mL)处理卵巢癌SKOV3细胞24 h,通过CCK8法和划痕实验来检测GLA对SKOV3细胞增殖和迁移的影响;通过TUNEL实验和流式细胞术检测GLA对SKOV3细胞凋亡的影响;通过Western Blot实验检测B细胞淋巴瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2-Associated X蛋白(Bcl-2-Associated X,Bax)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化蛋白激酶B(phosphor-protein kinase B,p-AKT)蛋白表达水平。结果 CCK8和划痕实验的结果显示,GLA能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和迁移能力(P<0.05),且呈剂量依赖性;TUNEL实验和流式细胞术检测结果显示,GLA以剂量依赖的方式诱导了卵巢癌细胞的凋亡(P<0.05);Western Blot实验结果显示GL...     

PAI-1对卵巢癌上皮细胞SKOV3生物学行为的影响

目的 探讨PAI-1基因在体外实验中对卵巢癌细胞SKOV3生物学行为的影响.方法 将PAI-1基因转到入人卵巢癌细胞SKOV3中,通过细胞生长曲线、细胞克隆形成实验、流式细胞仪检测细胞周期,测定细胞侵袭迁移黏附能力,研究PAI-1基因在卵巢癌上皮细胞SKOV3中的功能.结果 PAI-1基因被转入靶细胞中并稳定表达,We...     

Rap1蛋白在卵巢浆液性癌组织中的表达及抑制细胞增殖的研究

目的 探讨卵巢浆液性癌组织中Rap1蛋白表达及其在浆液性癌细胞增殖中的作用.方法 Western blot检测并比较Rap1在浆液性卵巢癌组织、卵巢良性组织和正常卵巢组织中的表达;应用RNA干扰技术构建3个Rapl shRNA真核表达载体,将3个重组质粒、空质粒、阴性质粒分别转染进卵巢癌细胞株SKOV3,通过Western blot对重组质粒进行有效性筛选,G418筛选建立SKOV3-Rap1-RNAi稳定转染细胞株;MTT法检测Rap1表达缺失的SKOV3细胞增殖能力的变化.结果 与卵巢良性组织和正常卵巢组织相比,浆液性卵巢癌组织中Rap1呈现高表达(P＜0.05).经双酶切和DNA测序证实成功构建了3个重组质粒pSUPER.retro.neo/GFP-Rap1i-#1,-Rap1i-#2及-Rap1i-#3;瞬时转染提示上述3个质粒的Rap1抑制效率分别是50％、66％、19％,遂最终采用pSUPER.retro.neo/GFP-Rap1i-#2转染并用G418筛选出单克隆细胞Rap1i-1和Rap1i-2,其Rap1蛋白抑制率分别为70％和48％,选取Rap1i-1细胞进一步检测Rap1表达缺失的SKOV3细胞增殖能力的变化,发现其增殖能力较对照组更强(P＜0.05).结论 Rap1蛋白在卵巢浆液性癌组织中呈高表达并抑制细胞增殖.     

C3G在卵巢癌组织中的表达及其在SKOV3细胞增殖中的作用

目的 探讨鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine nucleotide-releasing factor)在卵巢癌组织中的表达及在卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用.方法 采用Western blot检测比较40例卵巢癌、8例卵巢良性肿瘤及4例正常卵巢组织中C3G的表达水平.应用特异性siRNA下调SKOV3细胞中C3G的表达,通过MTT法和平板克隆实验检测细胞增殖,建立裸鼠皮下种植瘤模型观察移植瘤生长情况.结果 卵巢癌组织中C3G的表达显著高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,其在卵巢癌、卵巢良性肿瘤分别是正常卵巢组织中的(1.832±0.200) (P＜0.05)、(0.893±0.147)倍.siRNA干扰可使SKOV3细胞中内源性C3G的表达下调79.2％;与野生型细胞组、阴性对照组及空载体对照组相比,C3G干扰组细胞增殖变慢(P＜0.05),克隆形成率下降(P＜ 0.05),移植瘤的平均体积和质量显著下降(P＜0.05).结论 鸟=苷酸交换因子C3G在大多数上皮性卵巢癌中过表达,并促进卵巢癌细胞增殖.     

蝎毒多肽提取物对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子、凝血酶敏感蛋白表达的影响

目的 观察蝎毒多肽提取物（简称蝎毒多肽）对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）、凝血酶敏感蛋白（TSP-1）表达的影响,进一步探讨蝎毒多肽的抗肿瘤作用机制。方法 MTT法检测蝎毒多肽对SKOV3细胞增殖的影响;免疫细胞化学法及Western boltting测定蝎毒多肽对SKOV3细胞VEGF、TSP-1蛋白表达的影响。结果 蝎毒多肽12.5～200 μg/mL对SKOV3细胞增殖有抑制作用,且呈明显的质量浓度相关性,质量浓度大于50 μg/mL时细胞增殖抑制作用显著（P＜0.01）。随着蝎毒多肽质量浓度的增加,SKOV3细胞TSP-1蛋白表达增加,VEGF蛋白表达下降（P＜0.01）。结论 蝎毒多肽能显著抑制VEGF的表达,促进TSP-1的表达,其抗肿瘤作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、影响肿瘤细胞血管生成过程中关键因子的表达来实现的。     

异甘草素诱导人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及自噬的研究

目的：观察异甘草素（ISL）对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察ISL对SKOV3细胞生长的抑制作用;吖啶橙／溴化乙锭双荧光染色后观察细胞形态变化;流式细胞术AnnexinⅤ‐FITC／PI双染检测ISL对细胞凋亡的影响;Westernblot检测凋亡相关蛋白Bcl‐2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果ISL能够抑制SKOV3细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性;荧光染色后可见细胞核变圆,碎裂,染色质浓缩;流式细胞仪检测ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后,凋亡率明显高于ISL0μg／mL组,差异具有统计学意义（P＜0．05）;Westernblot结果显示ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后Bcl‐2蛋白的表达下调,Bax、Beclin1、LC3蛋白的表达上调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论ISL对人卵巢癌SKOV3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗体外肿瘤机制可能与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

Survivin反义核酸对SKOV3细胞生长及Survivin基因表达的影响

目的 :观察Survivin反义核酸对人卵巢癌细胞系SKOV3的生长及Survivin基因表达的影响。方法 :应用基因重组技术 ,将在真核细胞中能稳定表达反义Survivin的pcDNA3 SVVas经脂质体LipofectamineTM2 0 0 0 介导转染人卵巢癌细胞株SKOV3,经G4 1 8筛选得到抗性克隆 (SKOV3/SVVas) ,同时以空载体pcDNA3转染SKOV3作为对照(SKOV3/neo) ;绘制细胞生长曲线 ;采用免疫组化、RT PCR和流式细胞仪检测SKOV3、SKOV3/neo及SKOV3/SVVas细胞的内源性SurvivinmRNA及蛋白的表达和凋亡细胞。结果 :与SKOV3及SKOV3/neo细胞比较 ,SKOV3/SVVas细胞增殖和代谢能力均明显降低 ,Survivin蛋白阳性表达率及mRNA相对表达量明显降低 (P <0 .0 1 ) ,细胞凋亡率显著增加 (P <0 .0 1 )。结论 :稳定表达的反义Survivin能够有效抑制SKOV3细胞内源性Survivin蛋白的表达 ,诱导SKOV3细胞凋亡。     

茶多酚对卵巢癌SKOV3细胞自噬水平的影响及相关机制研究

目的研究茶多酚(EGCG)对人卵巢癌SKOV3细胞自噬水平的影响及相关机制。方法用EGCG处理SKOV3细胞,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II及蛋白激酶B(PKB)信号通路相应蛋白表达变化。结果 EGCG处理SKOV3细胞后,自噬相关蛋白LC3-II表达上调,并呈一定的时间浓度依赖性。EGCG处理SKOV3细胞后,AKT的磷酸化水平下调,AKT激活剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)预处理后,自噬相关蛋白LC3-II高表达被抑制。结论 EGCG通过AKT介导的信号通路诱导SKOV3细胞自噬水平升高。     

人腹膜间皮细胞对卵巢癌SKOV3细胞黏附、迁移和侵袭力的影响

目的：探讨人腹膜间皮细胞（HPMC）对卵巢癌SK-OV3细胞黏附、迁移、侵袭力的影响及可能机制.方法：建立HPMC原代培养的方法;采用免疫细胞组织化学法鉴定原代HPMC;验证HPMC中部分细胞因子的表达;采用黏附、迁移及侵袭实验观察HPMC与卵巢癌SKOV3细胞相互作用时对SKOV3细胞转移力的影响,及其作用机制是否与CXCL12-CXCR4轴有关.结果：成功培养出了HPMC.鉴定分离出的细胞符合间皮细胞的特征.HPMC中表达CXCL12、间皮素,不表达CXCR4.SKOV3与HPMC共同培养组的吸光度、迁移和侵袭细胞数显著高于单独SKOV3培养组,差异有统计学意义（P〈0.05）.稳定高表达CXCR4的SKOV3细胞（SKOV3-CX-CR4-cDNA）与HPMC共同培养组的吸光度、迁移和侵袭的细胞数目显著高于其余3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论：HPMC与SKOV3细胞相互作用时,增强了SKOV3细胞黏附、迁移和侵袭力,其作用机制与CXCL12-CXCR4轴有关.     

沉默信息调节因子3对白藜芦醇诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响

目的：检测沉默信息调节因子3（Sirt3）对白藜芦醇（Res）诱导的人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,探讨其促进凋亡的机制。方法：人卵巢癌SKOV3细胞加入不同浓度（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 mg·L^-1）Res培养24h,MTT法检测细胞存活率。将细胞随机分为对照组、Sirt3抑制剂3-（1H-1,2,3-三唑-4-基）吡啶（3-TYP）组、Res组和3-TYP+Res组,培养24h后,MTT法检各组细胞增殖抑制率;采用Hoechst 33342进行细胞核染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态;采用活性氧（ROS）探针检测细胞中ROS水平;Western blotting法检测各组细胞中Sirt3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleavedcaspase-3）蛋白表达水平。结果：MTT实验,随着Res浓度的增加,细胞存活率明显降低,Res的半数抑制浓度（IC₅₀）为42.73 mg·L^-1。与对照组比较,Res组和3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）;与Res组比较,3-TYP+Res组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）。与对照组比较,3-TYP+Res组细胞核出现固缩、染色增强、核碎裂增多。与对照组比较,3-TYP组细胞红色荧光无明显变化,Res组和3-TYP+Res组细胞红色荧光明显减少。Western blotting法检测,与对照组比较,3-TYP组细胞中Sirt3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,Res组细胞中Sirt3和Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与Res组比较,3-TYP+Res组细胞中Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Bcl-2和Sirt3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：Res可以诱导SKOV3细胞的凋亡,3-TYP通过抑制Sirt3表达可增强Res的作用。     

固体脂质纳米姜黄素联合顺铂对卵巢癌SKOV3的增殖及Bax/Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的:研究固体脂质纳米姜黄素(Curcumin-loaded solid lipid nanoparticles,SLN-Cur)与顺铂(Cisplatin,DDP)联用对人卵巢癌SKOV3细胞株生长的影响及促凋亡作用.方法:姜黄素(Curcumin,Cur)制备成SLN-Cur新型给药系统,分别检测DDP、Cur、S...