脂肪基质细胞分泌的细胞因子对内皮细胞的作用

目的:分离培养脂肪基质细胞(ASCs),探讨其分泌的细胞因子及其生物活性作用。方法:人脂肪组织用胶原蛋白酶Ⅰ消化后培养获得ASCs,流式细胞术鉴定其表型,ELISA法测定其分泌的血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)等,RT-PCR测定相应mRNA表达。ASCs培养液培养人脐静脉内皮细胞,细胞计数测定内皮细胞的增殖,AnexinⅤ/PI双染色法测定内皮细胞的凋亡情况。结果:培养获得ASCs,表型为CD34 、CD105 、CD31-、CD45-,VEGF、HGF、SDF-1α的含量分别为(75±16)、(637±157)、(482±113)ng/L,能促进内皮细胞的增殖(P<0·05),降低其凋亡(P<0·05),并能上调其bcl-2的基因表达(P<0·05)。结论:ASCs能分泌细胞因子,且对内皮细胞的增殖与凋亡有明显作用。     

Klotho蛋白促进内皮祖细胞旁分泌和分化的作用及机制研究

目的探讨Klotho蛋白促进内皮祖细胞(EPC)旁分泌和分化的作用及机制。方法选取健康人外周血分离培养EPC,分为对照组、Klotho组、AKT阻断组及ERK阻断组(n=6)。采用流式细胞术检测其表型;ELISA方法检测血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子(SDF1)和碱性成纤维生长因子(bFGF)水平;MTT检测内皮细胞增殖率;划痕实验检测内皮细胞的迁移;流式细胞术检测EPC向CD31阳性内皮细胞的分化。结果 EPC培养到第7天后,CD34的阳性率为93.6%,VEGF受体2的阳性率为94.9%。与对照组比较,Klotho组、AKT阻断组及ERK阻断组内皮细胞增殖率、内皮细胞划痕区域闭合率、CD31阳性细胞比例更高(P0.05,P0.01);AKT阻断组VEGF、SDF1、bFGF表达明显低于Klotho组和ERK阻断组[(46.44±4.62)ng/ml vs(70.29±5.87)ng/ml和(65.21±4.69)ng/ml;(16.56±2.03)ng/ml vs(37.84±3.53)ng/ml和(34.29±3.72)ng/ml;(5.09±1.40)ng/ml vs(7.52±2.61)ng/ml和(7.36±2.18)ng/ml,P0.05]。与Klotho组比较,AKT阻断组内皮细胞增殖率、划痕区域闭合率及CD31阳性细胞比例显著降低[(29.81±2.55)%vs(43.37±4.29)%,(29.41±3.46)%vs(56.56±6.42)%,(7.08±1.11)%vs(23.91±3.69)%,P0.01]。结论 Klotho蛋白能够通过AKT信号通路,促进EPC旁分泌和分化,进而促进血管生成。     

类风湿关节炎患者外周血肿瘤坏死因子受体相关因子1表达研究

目的检测类风湿关节炎(RA)患者血清肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)水平,并分析其与RA疾病活动性关系,探讨其与CD40在RA发病机制中的共同作用。方法采集2015年7月至2015年12月苏州大学附属第一医院门诊及住院部70例初诊RA患者和50名健康体检者外周血,记录RA患者临床及实验室指标,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TRAF1、CD40,并分析两者相关性。结果 RA患者TRAF1、CD40分别为(35.88±51.22)ng/L,(72.70±70.56)ng/L,与健康对照组[TRAF1和CD40分别为(12.51±8.59)ng/L和(31.54±27.11)ng/L]相比差异均有统计学意义(P0.05)。根据DAS28评分,将RA患者分为高、中、低活动期组,3组TRAF1分别为(13.05±4.29)ng/L、(29.84±42.48)ng/L和(58.84±66.90)ng/L,差异有统计学意义(F=6.382,P=0.003),且TRAF1与DAS28评分呈正相关(r=0.419,P0.001)。RA患者血清TRAF1与自身抗体RF、GPI呈正相关(r=0.365,P=0.001;r=0.767,P0.001)。RA患者血清TRAF1表达与CD40呈正相关(r=0.465,P0.001)。结论 TRAF1在RA患者明显增高,与RA疾病活动性、自身抗体和CD40呈正相关。     

淋巴细胞活化基因3促进大鼠颈动脉球囊损伤后再内皮化的研究

目的:探讨淋巴细胞活化基因3(LAG-3)促进大鼠颈动脉球囊损伤后再内皮化的研究。方法:构建大鼠颈动脉球囊损伤模型,造模成功后随机分为对照组(注射相同体积的PBS)、VEGF组(腹腔注射VEGF)和LAG-3组(腹腔注射LAG-3)。流式细胞术检测三组外周血CD34+VEGFR-2+内皮祖细胞(EPC)比例;HE染色和CD31免疫组化检测三组内皮化情况;分离培养大鼠外周血的EPC;ELISA检测EPC培养上清中VEGF和SDF-1的浓度;流式细胞术检测EPC分化为CD31+内皮细胞比例。结果:LAG-3组EPC比例显著高于对照组[(0.1417±0.02358)%vs.(0.06333±0.009898)%,t=3.063,P=0.0120],差异有统计学意义。HE染色和免疫组化结果显示LAG-3组50%的血管被内皮细胞覆盖。LAG-3组VEGF、SDF-1水平显著高于对照组[(44.67±6.037)vs.(18.17±3.936)μg/L、(5.100±0.8896)vs(0.6167±0.1493)μg/L,t=3.677,P=0.0043;t=4.970,P=0.0006],差异均具有显著的统计学意义。LAG-3组内皮细胞比例显著高于对照组[(69.08±6.393)vs.(43.03±4.326)%,t=3.375,P=0.0071],差异有统计学意义。结论:LAG-3通过促进EPC的动员、旁分泌和分化,诱导球囊损伤颈动脉的快速内皮化。     

CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞对肝星状细胞增殖及功能的影响

目的 了解CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞在体外对肝星状细胞(HSC)增殖以及功能的影响,初步探讨调节性T淋巴细胞促肝纤维化的机制。方法传代培养HSC LX-2,将免疫磁珠细胞分选(MASC)法分离所得慢性乙型肝炎患者调节性T淋巴细胞与HSC LX-2按不同方式共培养5d,以单独培养的HSC作为对照,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测共培养HSC增殖情况,ELISA法检测上清液中转化生长因子(TGF)β1含量,放射免疫法检测HSC分泌HA、PCⅢ水平。统计学处理采用LSD-t检验。结果 5例调节性T淋巴细胞与HSC比例为1.5∶1时HSC增殖最为明显,10例直接接触共培养与使用Transwell系统共培养调节性T淋巴细胞与HSC吸光度值分别为(0.713±0.032)、(0.735±0.028) cpm,均较对照组的（0.677±0.029）cpm增殖明显(t=5.4003,8.7878;均P＜0.01)。10例直接接触共培养与Transwell组细胞上清液中TGFβ1浓度分别为(781.59±76.45)、（813.53±60.62）pg/mL,显著高于对照组的(722.51±59.66) pg/mL（t=4.0014,6.1653;均P＜0.01）;HA浓度分别为（433.57±27.90）、（445.40±23.73）ng/mL,显著高于对照组的（415.83±19.44）ng/mL（t=3.3124,5.5231;均P＜0.01）;PCⅢ浓度分别为(21.93±1.71)、(23.12±1.87) ng/mL,显著高于对照组的（20.10±1.49）ng/mL(f=4.8082,7.9436;均P＜0.01)。且Transwell组各项结果均显著高于直接接触组(t=3.3875,2.1639,2.2107,3.1354;均P＜0.05)。结论CD4+ CD25+ CD127dim调节性T淋巴细胞可促进共培养的HSC增殖及其HA、PCⅢ的分泌。体外实验证明,CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞具有促进肝纤维化的重要作用。     

血红素氧化酶-1基因修饰的自体骨髓间充质干细胞移植治疗猪急性心肌梗死

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSC)经血红素氧化酶-1(HO-1)基因修饰后移植对急性心肌梗死的治疗作用.方法细胞分为3组,未转染质粒组(MSC组)、转染空载质粒组(LaeZ-MSC组)、转染pcDNA3.1-hHO-1组(HO-1-MSC组),体外实验予缺氧诱导观察HO-1基因转染后MSC的抗凋亡情况,同时收集上清液检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达.体内实验建立猪的急性心肌梗死模型,梗死1 h再灌注1 h后分为3组,即生理盐水组、单纯干细胞治疗组(MSC组)及HO-1基因转染干细胞治疗组(HO-1-MSC组).治疗组分别予MSC及HO-1-MSC移植治疗,对照组则注入等量生理盐水.细胞移植后1周及3个月行磁共振检测.3个月后处死动物,取心脏标本行相关检查.结果(1)体外缺氧诱导实验中HO-1-MSC组凋亡率(30.30±7.64)%低于MSC组(56.93±4.68)%(P＜0.001)和LacZ-MSC组(55.88±4.38)%(P＜0.001).同时上清液中VEGF的分泌HO-1-MSC组(768.44±78.38)pg/ml高于MSC组(555.27±67.67)pg/ml(P＜0.001)和LacZ-MSC 组(522.97±71.45)pg/ml(P＜0.001).(2)细胞移植3个月后HO-1-MSC组LVEF(53.50±2.09)%明显高于MSC组(49.54±2.74)%(P=0.017).梗死周边区毛细血管密度(血管数/HPF)HO-1-MSC组14.59±2.39亦大于MSC组11.78±2.48(P=0.033).结论 HO-1基因转染MSC较单纯MSC移植治疗急性心肌梗死疗效明显.     

地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌血管内皮细胞生长因子的影响

目的 探讨地黄低聚糖(RGO)对分离、培养的人脂肪组织源性间充质干细胞(ADMSCs)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响。方法 人脂肪组织用2.5 g/L胶原蛋白酶Ⅰ消化、分离ADMSCs。取沉淀的细胞进行培养,用免疫细胞化学染色法鉴定其表面CD44、CD105、CD45和CD34分子的表达。以IMDM培养基作为空白对照,加入RGO配成不同浓度（0、1、10、100及400 mg/L）的IMDM分别培养ADMSCs,用MTT比色法检测ADMSCs的增殖。培养72 h后,用ELISA法测定不同培养基中VEGF的含量。结果 免疫细胞化学染色显示,分离培养的细胞表面CD44+、CD105+、CD34-、CD45-。MTT比色法的结果显示,与空白对照组相比,1和10 mg/L组无明显差别,100及400mg/L组明显升高（均P<0.01）,且100mg/L组明显高于400mg/L组(P<0.05)。0、1、10、100、400mg/L5个组VEGF的含量,分别为(627.88±33.86)、(655.50±40.29)、(666.50±43.20)、（843.50±53.05）和（722.88±51.34）ng/L。结论 RGO对ADMSCs 的增殖有促进作用,且呈一定的浓度依赖性,并导致其分泌VEGF的作用增强。     

老年肺癌患者血清P53抗体、VEGF、TGF-β1水平

目的探讨老年肺癌患者血清P53抗体、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)-β1水平对肺癌诊断的价值。方法采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺癌患者血清P53抗体、VEGF、TGF-β1水平。结果老年肺癌患者血清P53抗体(17.84±8.73)ng/L、VEGF(416.7±162.8)ng/L、TGF-β1(68.74±17.91)ng/L水平分别比正常对照组(5.43±1.90)ng/L、(34.3±12.4)ng/L、(20.44±6.58)ng/L显著升高(均P<0.001)。老年肺癌患者血清P53抗体水平、VEGF水平、TGF-β1水平与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期有关。结论老年肺癌患者血清P53抗体、VEGF、TGF-β1水平明显高于正常对照组,测定血清P53抗体、VEGF、TGF-β1水平对肺癌的早期诊断、分期、治疗和预后可提供重要的临床依据。     

观察不稳定性心绞痛患者外周血血管内皮生长因子水平及相关因素分析

目的观察不稳定性心绞痛(UAP)患者外周静脉血血管内皮生长因子(VEGF)水平及相关影响因素分析。方法筛选确诊的UAP患者86例为UAP组,冠状动脉造影正常的胸痛患者32例为对照组。入院48h内检测反应性充血指数(RHI),评估其外周动脉张力;用ELISA法检测外周血VEGF水平;用Gensini评分评估冠状动脉的病变程度;用多重线性逐步回归分析。结果 UAP组VEGF水平高于对照组[(105.36±11.57)ng/Lvs(76.35±9.13)ng/L,P=0.001],RHI显著低于对照组(1.29±0.21 vs 1.73±0.10,P=0.001)。多重线性逐步回归分析显示,UAP组VEGF水平与RHI呈负相关(β=-51.071,P=0.012),与Gensini评分呈正相关(β=2.545,P=0.005)。结论 UAP患者VEGF水平升高,与RHI、Gensini评分相关,VEGF有望成为评估UAP病变程度指标。     

姜黄素诱导血红素氧合酶-1表达抗大鼠主动脉平滑肌细胞增殖作用的研究

目的:探讨姜黄素诱导大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)血红素氧合酶-1(HO-1)表达效果及其抗细胞增殖的作用.方法:RASMC株经复苏、传代培养后分组实验,分别加用不同浓度的姜黄素或姜黄素 ZnPPⅨ孵育,用Western blot法检测HO-1表达效果;用四唑氮法及3H-Td掺入法检测RASMC增殖情况;同时还观察了姜黄素的细胞毒性作用.结果:姜黄素能呈剂量依赖性诱导RASMC高表达HO-1蛋白并显著抑制血清刺激的RASMC增殖(P＜0.05或P＜0.01),加入ZnPPⅨ共同孵育能使姜黄素诱导HO-1表达明显降低并消除其对RASMC增殖的抑制作用(均P＜0.01),实验浓度的姜黄素无明显细胞毒性作用(P＞0.05).结论:姜黄素能显著诱导RASMC表达HO-1蛋白并以此有效抑制RASMC增殖.