P-糖蛋白介导的多药耐药与肺癌

肺癌是常见的恶性肿瘤之一 ,已成为目前人类癌症死亡的主要原因 ,多数患者发现时已属晚期而失去手术机会 ,故化疗在肺癌的治疗中仍占有相当重要的地位 ,但由于对化疗药物的原发耐药及获得耐药的产生阻碍了它的发展。肺癌的耐药是一个非常复杂的过程 ,其机制随着药物及其生物种类或细胞的组织来源不同而异 ,往往是多种机制参与的结果 ,其中 MDR1基因的过度表达是导致肿瘤细胞对疏水性天然药物产生多药耐药的主要机制之一 [1 ]。1　多药耐药的概念肿瘤细胞耐药性可分为原发耐药和继发耐药。在化疗开始时对化疗药物即有抗药性 ,称为原发耐药 …     

阿霉素诱导人卵巢癌细胞耐药株的建立及多药耐药表型测定

[目的]探讨卵巢癌细胞多药耐药的发生机制,寻找克服及逆转卵巢癌多药耐药的方法。[方法]采用阿霉素较大剂量间歇诱导和浓度梯度递增培养法,建立人卵巢癌耐药细胞株（SK—OV-3／adr）。运用MTT法检测药物敏感性和细胞生长规律变化,流式细胞仪检测细胞周期分布,荧光显微镜观察耐药株细胞内药物含量变化。[结果]建立的SK—OV-3／adr对阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱、紫杉醇、足叶乙甙有明显的交叉耐药,耐药指数分别为5．6（296．7／53．4ng·mL^-1）、6．3（12008．4／1921．6ng·mL^-1）、4．6（1176．2／254．3ng·mL^-1）、12．5（4269．6／342．0ng·mL^-1）、〉10．9（〉20000／1830．1ng·mL^-1）。与卵巢癌细胞敏感株（SK—OV-3）相比,半数细胞抑制剂量IC50明显增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。给予P-糖蛋白抑制剂（盐酸维拉帕米）时,交叉耐药性减弱。与SK—OV-3相比,SK—OV-3／adr细胞内阿霉素荧光强度明显变弱。[结论]建立了具有多药耐药表型的SK—OV-3／adr细胞株。     

P-糖蛋白的融合表达研究

目的：对P－糖蛋白胞外段基因进行表达研究。方法：根据P－糖蛋白抗原性分布曲线及mdrl基因结构，设计了一对引物，PCR扩增产物插入到pGEM-T中，经测序正确后，再克隆入表达载体pGEX-2T，构建高效表达载体pGEX-Pgp，转化大肠杆菌DH5α，进行表达、鉴定及纯化。结果：经IPTG诱导4h，蛋白表达即达高峰，SDS－PAGE分析，表达出约30kD大小的蛋白。结论：该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体或筛选其特异性结合肽，进行靶向治疗等工作奠定了基础。     

青蒿琥酯对胃癌耐药细胞SGC7901/mdr1阿霉素耐药性的影响

目的以胃癌细胞SGC7901为对照,观察青蒿琥酯(Art)对胃癌耐药细胞SGC7901/mdr1的阿霉素耐药性的影响。方法四甲基偶氮唑蓝法检测Art耐药逆转性,将培养的SGC7901和SGC7901/mdr1细胞加入不同浓度的Art,确定Art逆转SGC7901/mdr1细胞阿霉素耐药性的浓度;加入不同终浓度的阿霉素并不断调整,直至对SGC7901/mdr1和SGC7901细胞的抑制范围均涵盖50%的抑制率,确定阿霉素的实验浓度;2种细胞均加入确定好的不同浓度阿霉素,SGC7901细胞设为亲本对照组,SGC7901/mdr1细胞分为2组,加入确定耐药逆转Art浓度的设为实验组,不加Art的设为Art阴性对照组,判断Art对耐药细胞SGC7901/mdr1的耐药逆转效果。结果 Art对SGC7901和SGC7901/mdr1细胞均有生长抑制作用,不同浓度Art之间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);Art对SGC7901/mdr1的50%抑制浓度高于SGC7901细胞(P<0.05);Art对SGC7901/mdr1和SGC7901细胞20%抑制浓度的差异无统计学意义(P>0.05),取二者的平均值110 mg·L-1作为Art对SGC7901/mdr1细胞的耐药逆转浓度。涵盖SGC7901/mdr1和SGC7901细胞50%抑制率的阿霉素质量浓度为3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L-1。SGC7901/mdr1细胞实验组、Art阴性对照组和亲本对照组的细胞生长抑制率随阿霉素浓度的不断增加而增高,不同浓度阿霉素之间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);阿霉素对实验组细胞的50%抑制浓度低于Art阴性对照组(P<0.05),与亲本对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Art对耐药细胞SGC7901/mdr1的耐药逆转倍数约为2.31倍,相对逆转率约为83.00%。结论 Art对SGC7901/mdr1有生长抑制作用;Art可以逆转耐药细胞SGC7901/mdr1对阿霉素的耐药性。     

P-170糖蛋白在多药耐药(MDR)K562/ADM细胞中的定位研究

目的：确定P-170糖蛋白在多药耐药（MDR）K562/ADM细胞中表达的位置，方法：通过免疫反应并利用流式细胞仪（FCM）检测表达P-170糖蛋白细胞的百分含量；用免疫电镜技术检测P-170糖蛋白在细胞中的位置及其表达水平。结果：敏感株K562细胞与耐药株K562/ADM细胞对P-170糖蛋白的表达有非常明显的差异；不同的K562/ADM细胞表达P-170糖蛋白的量差别较大；少量的K562细胞也有极少的P-170糖蛋白的表达，细胞表达的P-170糖蛋白位于细胞膜上，结论：多药耐药K562/ADM细胞表达的P-170糖蛋白最终被镶嵌在细胞膜上；在该蛋白质从被表达，修饰和转运到细胞膜上的过程中，该蛋白质不具有成熟P-170糖蛋白的特异构象。     

SMMC—7721细胞诱导耐药培养中P—糖蛋白变化

目的 研究ＳＭＭＣ－７７２１细胞诱导耐药培养中Ｐ－糖蛋白变化。方法 用ＭＴＴ法检测常用化疗药物对ＳＭＭＣ－７７２１和ＳＭＭＣ－７７２１／ＡＤＭ细胞的毒性;用流式细胞仪检测ＳＭＭＣ－７７２１／ＡＤＭ细胞Ｐ－糖蛋白表达及细胞内柔红霉素的浓度。结果 随着培养液中阿霉素浓度的递增,ＳＭＭＣ－７７２１／ＡＤＭ细胞内柔红霉素的积聚减少,Ｐ－糖蛋白表达有逐步增加的趋势。结论 Ｐ－糖蛋白的过度表达可能是形成ＳＭＭＣ－７７２１细胞多药耐药的重要原因。     

P-糖蛋白抑制剂的研究进展

肿瘤细胞多药耐药的发生是肿瘤化疗失败的主要原因之一。细胞膜上P-糖蛋白（P-gp）的过度表达是多药耐药的最主要发生机制，有效抑制P-gp的表达可逆转肿瘤的多药耐药性，延长患者的生存时间。P-gp抑制剂是目前研究的热点之一，本文就P-gp抑制剂的研究进展进行综述。     

多药耐药蛋白P170在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

目的探讨上皮性卵巢癌组织多药耐药蛋白P170的表达及意义.方法采用流式细胞术检测42例上皮性卵巢癌组织P170的表达情况.结果上皮性卵巢癌组织P170表达率与正常卵巢组织间比较有显著性差异(P<0.01),上皮性卵巢癌组织P170表达率与患者年龄、组织学类型、病理分级和分期之间差异无统计学意义(P>0.05).结论卵巢癌细胞可以原发表达多药耐药蛋白P170,通过流式细胞术检测P170蛋白对于评价多药耐药水平,选择化疗药物和预后判断具有一定的临床指导意义.     

卵巢癌中P—糖蛋白的表达与预后的关系研究

目的：探讨卵巢癌多药耐药基因产物Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）的表达与上皮性卵巢癌患者预后的关系。方法：用免疫组织化学方法（ＳＰ法）对用福尔马林固定、石蜡包埋的３０例正常卵巢组织及７４例卵巢癌组织进行了Ｐ－ｇｐ检测。结果：３０例正常卵巢组织中,Ｐ－ｇｐ无１例阳性,而卵巢癌组织中Ｐ－ｇｐ阳性率为１８．９％（１４／７４）。对６２例卵巢癌患者随访资料进行Ｋａｐｌａｎ－ｍｅｉｅｒ曲线分析,发现Ｐ－ｇｐ阳性组的存活     

抗肿瘤药物与维拉帕米联合对KBV200细胞P-糖蛋白表达的影响研究

目的：探讨6种常用抗肿瘤药物长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、5-Fu、环磷酰胺与维拉帕米联合对KBV200细胞P-糖蛋白表达的影响.方法：以喉癌KBV200细胞株为研究对象,通过流式细胞术检测6种抗肿瘤药物作用KBV200细胞的P-糖蛋白表达以及联合维拉帕米对P-糖蛋白表达的影响.结果：维拉帕米分别与长春新碱、阿霉素、平阳霉素、环磷酰胺联合作用,使KBV200细胞的P-糖蛋白表达下降80.17%、89.69%、19.19%及53.48%.其中维拉帕米与长春新碱、阿霉素作用较强.结论：维拉帕米分别与长春新碱、阿霉素、平阳霉素、环磷酰胺联合作用后,P-糖蛋白的表达水平明显下降,对KBV200细胞耐药性的逆转有一定作用.     

米非司酮调控卵巢癌细胞表达葡萄糖神经酰氨合成酶并逆转其多药耐药性

目的 观察米非司酮体外逆转COC1/DDP细胞对顺铂的多药耐药性(MDR)以及对细胞葡萄糖神经酰氨合成酶(GCS)表达的影响,初步探讨其增敏机制.方法 以米非司酮为MDR修饰剂,MTT法检测米非司酮对COC1/DDP的增敏效应.RT-PCR技术分析耐药株COC1/DDP的MDR逆转前后以及亲本株COC1细胞的GCS在mRNA水平的表达.结果 米非司酮增强COC1/DDP细胞对DDP敏感性;与COC1相比,COC1/DDP细胞的GCS在mRNA水平的表达增强;米非司酮使GCS表达降低,效应呈剂量依赖关系.结论 无毒性剂量米非司酮可以在体外增加卵巢癌COC1/DDP细胞对DDP的敏感性.作用机制与抑制GCSmRNA表达有关.     

bcl-2基因的表达在卵巢恶性肿瘤多药耐药中的意义

目的探讨bcl-2基因与卵巢恶性肿瘤细胞多药耐药的关系。方法采用体外药敏实验(MTT法)检测药物敏感性,免疫组织化学方法检测45例卵巢恶性肿瘤组织bcl-2蛋白的表达,并对相关的临床病理因素进行分析。结果卵巢恶性肿瘤组织中bcl-2蛋白表达阳性率为55.6%,且不同病理类型、临床分期和术后残留病灶大小与卵巢恶性肿瘤组织中bcl-2蛋白的表达无关(P>0.05),bcl-2的表达与卵巢恶性肿瘤的耐药性呈显著的正相关(P<0.05)。结论bcl-2基因可能参与了卵巢恶性肿瘤组织的化疗耐药性,bcl-2蛋白表达的检测可以预测卵巢恶性肿瘤化疗敏感性。     

Reversal of multidrug resistance and inhibition of phosphorylation of AKT in human ovarian cancer cell line by wild-type PTEN gene

Summary The reversing effect of wild-type PTEN gene on resistance of C13K cells to cisplatin and its inhibitory effect on the phosphorylation of protein kinase B (AKT) were studied. The expression of PTEN mRNA and protein in OV2008 cells and C13K cells were semi-quantitatively detected by using RT-PCR and Western blotting. Recombinant eukaryotic expression plasmid containing human wild-type PTEN gene was transfected into C13K cells by lipofectamine2000. The expression of PTEN mRNA was monitored by RT-PCR and the expression of PTEN, Akt, p-Akt protein were analyzed by Western blotting in PTEN-transfected and non-transfected C13K cells. Proliferation and chemosensitivity of cells to DDP were measured by MTT, and cell apoptosis was detected by flow cytometry after treatment with cisplatin. The expression of PTEN mRNA and protein in OV2008 cells were significantly higher than those in C13K cells. After transfection with PTEN gene for 48 h, the expression of PTEN mRNA and protein in C13K cells were 2.04 ± 0.10, 0.94 ± 0.04 respectively and the expression of p-Akt protein (0.94 ± 0.07) was lower than those in control groups (1.68 ± 0.14, 1.66 ± 0.10) (P < 0.05). The IC₅₀ of DDP to C13K cells transfected with PTEN (7.2 ± 0.3 μmol/L) was obviously lower than those of empty-vector transfected cells and non-transfected cells (12.7 ± 0.4 μmol/l, 13.0 ± 0.3 μmol/L) (P<0.05). The apopototis ratio of wild-type PTEN-transfected, empty vector transfected and non-transfected C13K cells were (41.65 ± 0.87)%, (18.61 ± 0.70)% and (15.28 ± 0.80)% respectively, and the difference was statistically significant (P<0.05). PTEN gene plays an important role in ovarian cancer multidrug resistance. Transfection of PTEN could increase the expression of PTEN and restore drug sensitivity to cisplatin in human ovarian cancer cell line C13K with multidrug-resistance by decreasing the expression of p-Akt. This project was supported by a grant from the National Natural Sciences Foundation of China (No. 30571950) and National Key Basic Research Program Foundation (NO.2002CB513107).     

Reversal of Multidrug Resistance and Inhibition of Phosphorylation of AKT in Human Ovarian Cancer Cell Line by Wild-type PTEN Gene

The reversing effect of wild-type PTEN gene on resistance of C13K cells to cisplatin and its inhibitory effect on the phosphorylation of protein kinase B (AKT) were studied. The expression of PTEN mRNA and protein in OV2008 cells and C13K cells were semi-quantitatively detected by using RT-PCR and Western blotting. Recombinant eukaryotic expression plasmid containing human wild-type PTEN gene was transfected into C13K cells by lipofectamine2000. The expression of PTEN mRNA was monitored by RT-PCR and the expression of PTEN, Akt, p-Akt protein were ana- lyzed by Western blotting in PTEN-transfected and non-transfected C13K cells. Proliferation and chemosensitivity of cells to DDP were measured by MTT, and cell apoptosis was detected by flow cytometry after treatment with cisplatin. The expression of PTEN mRNA and protein in OV2008 cells were significantly higher than those in C13K cells. After transfection with PTEN gene for 48 h, the expression of PTEN mRNA and protein in C13K cells were 2.04±0.10, 0.94±0.04 respectively and the expression of p-Akt protein ( 0.94±0.07) was lower than those in control groups (1.68±0.14, 1.66±0.10) (P< 0.05). The IC50 of DDP to C13K cells transfected with PTEN (7.2±0.3 μmol/L) was obviously lower than those of empty-vector transfected cells and non-transfected cells (12.7±0.4 μmol/l, 13.0±0.3 μmol/L) (P<0.05). The apopototis ratio of wild-type PTEN-transfected, empty vector transfected and non-transfected C13K cells were (41.65±0.87)%, (18.61±0.70)% and (15.28 ±0.80)% respectively, and the difference was statistically significant (P<0.05). PTEN gene plays an important role in ovarian cancer multidrug resistance. Transfection of PTEN could increase the ex- pression of PTEN and restore drug sensitivity to cisplatin in human ovarian cancer cell line C13K with multidrug-resistance by decreasing the expression of p-Akt.     

鼻咽癌中P糖蛋白和多药耐药相关蛋白-1的研究现状及其应用

进一步提高晚期鼻咽癌( nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者生存率的主要障碍是较高的远处转移率,出现远处转移的主要原因之一是由P糖蛋白( P-glycoprotein,Pgp)和多药耐药相关蛋白-1(multidrug resistance associated protein 1,MRP1)...     

维拉帕米逆转肿瘤多药耐药性的研究进展

肿瘤细胞对化疗药物产生的多药耐药(MDR)已成为当前影响肿瘤化学治疗疗效的主要障碍,寻找低毒有效的MDR逆转剂是提高化疗疗效的关键。MDR产生机制复杂,由mdrl基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein P-gp)的过表达是产生MDR的主要原因。维拉帕米是应用最早的MDR逆转剂之一，但其毒副作用大大限制了临床应用。从维拉帕米分离出的光学异构体R-型维拉帕米，在逆转肿瘤MDR时，更加高效安全，具有良好的临床应用前景。     

耐药蛋白表达对NSCLC患者预后的影响

目的探讨P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MRP1）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测66例临床资料完整的NSCLC患者肿瘤组织中3种耐药蛋白的表达情况,分析耐药蛋白表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果P-gp、MRP1和BCRP在NSCLC组织中总阳性表达率分别为40.91%、72.73%和43.94%,P-gp的表达分别与性别、年龄、吸烟史、病理类型相关;MRP1的表达与病理类型相关;BCRP的表达与年龄相关。患者整体生存时间与TNM分期和P-gp、MRP1共同表达有关;腺癌组患者生存时间与TNM分期和P-gp表达有关。结论P-gp和MRP1可以作为预测NSCLC患者预后的指标,BCRP的表达和预后无关。     

索拉非尼逆转肝癌细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨索拉非尼体外对人肝癌细胞(BEL-7402/FU)多药耐药性的逆转作用及可能机制.方法 以MTT比色法测定索拉非尼对肝癌细胞的剂量效应曲线,并以流式细胞仪检测索拉非尼对肝癌细胞内罗丹明123 (Rho123)浓度的影响,根据上述实验结果选取合适的索拉非尼实验剂量.以MTT法测定索拉非尼对抗癌药物细胞毒性的影响,用流式细胞仪检测细胞膜转运蛋白(P-gp)的表达,RT-PCR法检测mdr1基因的表达.结果 索拉非尼浓度在4μmol/L时逆转效率较高且毒副作用较小,4 μmol/L的索拉非尼能部分逆转BEL-7402/FU细胞的耐药性,对ADM、5-FU、GEM、DDP的逆转倍数分别为2.98、7.16、1.99、10.08倍,并可部分下调BEL-7402/FU细胞P-gp的表达,使mdrl基因表达与对照组相比下降了27.3%.结论 索拉非尼具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调mdr1基因表达、增加细胞内化疗药物的蓄积有关.     

多药耐药基因在肺癌患者外周血中的表达及意义

目的：探讨肺癌患者外周血中多药耐药基因（MDR1）的表达水平及其与临床病理因素、化疗的关系。方法：经病理证实为肺癌的患者40例（病理组），鳞状细胞癌13例，腺癌14例，小细胞未分化癌13例。应用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术，动态监测化疗前后MDR1 mRNA的表达，并与30例健康者（对照组）的检测结果进行比较分析。结果：病理组化疗前MDR1mRNA的检出率明显高于健康对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）；各种类型的肺癌患者随着化疗次数的增多MDR1mRNA的表达增强；化疗前后肺鳞状细胞癌和肺腺癌MDR1mRNA的表达明显高于小细胞肺癌，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：化疗可诱导各种病理类型肺癌MDR1mRNA表达增加；肺腺癌和肺鳞癌可能为原发性MDR，小细胞肺癌可能为获得性MDR；肺癌患者MDR1mRNA表达程度可作为指导化疗用药及预测预后的指标。