牡荆素对CVB3病毒性心肌炎心肌细胞损伤的影响及机制

目的:研究牡荆素对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎心肌细胞凋亡和炎症的影响及其可能作用机制.方法:体外培养人心肌细胞AC-16,将细胞分为5组:正常组、病毒组、牡荆素低剂量组(10 mg/kg)、牡荆素中剂量组(30 mg/kg)和牡荆素高剂量组(50 mg/kg),正常组常规培养,病毒组和牡荆素组经CVB...     

穿孔素在柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠心肌浸润细胞中的表达

穿孔素在柯萨奇Ｂ３病毒性心肌炎小鼠心肌浸润细胞中的表达熊丁丁杨英珍李延文宿燕岗陈灏珠我们检测了病毒性心肌炎小鼠心肌浸润细胞中穿孔素（Ｐｅｒｆｏｒｉｎ，ＰＦＰ）表达，初步探讨了ＰＦＰ在病毒性心肌炎发病中的作用。一、材料与方法１．材料：４０只雄性４周龄Ｂ...     

细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法 :采用光镜、电镜、原位末端标记法 (TUNEL)观察病毒性心肌炎 (viralmyocarditis ,VM)鼠不同时期病理改变及细胞凋亡情况。结果 :小鼠感染后 7d即见炎性细胞浸润及心肌坏死 ,10～ 14d病变最严重 ,2 1d以后心肌炎性细胞浸润及心肌坏死逐渐减轻 ,代之心肌纤维化 ,对照组无病变。实验组 7、10、14、2 1、2 8d均可见到凋亡细胞 ,且感染后 7～ 14d细胞凋亡数明显高于 2 1～ 2 8d(P <0 .0 5 ) ,对照组未见凋亡细胞。结论 :细胞凋亡在病毒性心肌炎中起着重要作用 ,它参与了病毒性心肌炎的发生、发展。     

柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌及骨骼肌细胞线粒体损伤的对比研究

目的:以CVB3感染小鼠为模型,研究病毒性心肌炎病程不同时期心肌及骨骼肌细胞线粒体损伤程度及其与心功能变化的关系。方法:50只雄性BALB/C小鼠随机分为正常组(n=10,0.1mL Ea-gle腹腔注射);病毒感染组(n=40,0.1mL TCID50为108 CVB3腹腔注射)。病毒感染组小鼠分别于第3,11,24天随机取10只以及正常组的10只于24d颈总动脉插管测量心率、左室压(LVP)及左室内压最大变速率(±dp/dt)。透射电镜观察心肌、骨骼肌细胞超微结构改变及线粒体膜磷脂脱失程度,PCR测定线粒体DNA3867片段(mtDNA3867)缺失情况。结果:病毒感染11d、24dLVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax明显低于正常组(P<0.05)。病毒感染后心肌、骨骼肌细胞均存在不同程度的超微结构改变。感染组心肌、骨骼肌细胞线粒体膜磷脂定位与对照组比较,11d较正常组出现明显改变(P<0.01),24d稍有好转。正常组心肌、骨骼肌细胞均未检出mtDNA3867缺失,而感染组心肌及骨骼肌细胞均存在mtDNA3867缺失,并随病程发展,有所增加。结论:线粒体损伤在病毒性心肌炎病程早期即出现,且随病程发展不断加重。心肌及骨骼肌线粒体膜磷脂缺失及mtDNA缺失变化趋势相同。骨骼肌有望成为研究心肌细胞线粒体损伤的良好模型。     

定量PCR比较病毒性心肌炎血和心肌肠道病毒RNA含量及其与心肌病变的关系

目的 研究小鼠柯萨奇病毒性心肌炎模型血,心肌柯萨奇病毒ＲＮＡ含量的关系;外周血中肠道病毒ＲＮＡ含量与心肌病理积分的关系。方法 利用定量ＰＣＲ方法检测病毒性心肌炎小鼠模型急性期外周血,心肌肠道病毒ＲＮＡ含量。结果 ＣＶＢ３感染所致心肌炎小鼠外周血,心肌中肠道病毒ＲＮＡ含量显著正相关。     

病毒性心肌炎细胞感染模型的建立

目的 建立病毒性心肌炎细胞感染模型。方法 以柯萨奇Ｂ３ｍ病毒感染新生ＳＤ大鼠的培养心肌细胞,观察感染后细胞病变、搏动情况及超微结构的变化,检测培养液中心肌酶的改变,测定ＤＮＡ含量。结果 培养的ＳＤ大鼠搏动心肌细胞感染柯萨奇Ｂ３ｍ病毒后,逐步出现细胞病变,细胞停止搏动,电镜下可国胞线粒体肿胀,肌原纤维紊乱,Ｚ线模糊,髓质体增多,细胞周期分析显示细胞受阻于Ｇ１期。结论 该模型可作为体外研究病毒性心肌炎     

细胞凋亡在小鼠病毒性心肌炎中的作用

目的 :探讨柯萨奇病毒 B3(CVB3)所致小鼠病毒性心肌炎 (VM)心肌细胞损伤的变化 ,观察细胞凋亡在心肌损伤中的作用。方法 :采用 CVB3制备小鼠病毒性心肌炎动物模型 ,分别于腹腔接种 CVB3后第 5、7、10、14、2 1、2 8d,取心肌组织切片 HE染色了解心肌损伤 (坏死 )情况 ;电镜和流式细胞仪检测 ,观察心肌中的细胞凋亡。结果 :心肌坏死方面 :光镜观察见对照组小鼠心肌组织无异常改变 ,实验组病鼠可见心肌细胞坏死和单核、淋巴细胞浸润 ,后期可见纤维化 ;心肌细胞凋亡方面 :电镜观察对照组心肌中未检出凋亡细胞 ,而病鼠心肌凋亡细胞检出率较高 5 8.33% (7/12例 ) ,且细胞凋亡多存在于炎症病灶周围的心肌细胞及病灶处炎性浸润细胞 ;各期病鼠心肌组织中的细胞凋亡比率较对照组明显增加 ,流式细胞仪检测平均心肌细胞凋亡百分率为 2 6 .74± 15 .2 2 % ,感染后第 7～ 14 d心肌细胞凋亡百分率明显高于其余时间 (P<0 .0 0 1)。结论 :小鼠病毒性心肌炎中心肌损伤坏死与凋亡共存 ,其中异常的心肌细胞凋亡与病毒性心肌炎的发病过程有关     

昆布多糖对新生小鼠病毒性心肌炎的影响

目的:研究昆布多糖(laminarin,LA)对柯萨奇病毒B3(coxsackievirus group B type3,CVB3)诱导的新生小鼠病毒性心肌炎的调节作用.方法:将100只BALB/c新生小鼠随机分为对照组(n = 20)、LA组(n = 20)、CVB3组(n = 30)和CVB3+LA组(n =30)...     

柯萨奇B3病毒感染对HL-1心肌细胞及间充质干细胞的影响研究

背景　扩张型心肌病（DCM）是一种以心腔扩大及心肌收缩功能减退,伴或不伴充血性心力衰竭的心肌病。病毒性心肌炎是形成DCM的重要病因,而引起心肌炎的病毒以柯萨奇B组病毒（CVB）最为常见。间充质干细胞（MSC）已广泛应用于急性心肌梗死及慢性心力衰竭的实验研究中,但其应用于心肌炎的研究较少。目的　比较柯萨奇B3病毒（CVB3）感染对HL-1心肌细胞及MSC的影响,以期寻找一种新的心肌炎的治疗措施。方法　2015年6月-2017年6月,分别培养HL-1心肌细胞、MSC,生长至80%汇合状态待用。分别将HL-1心肌细胞、MSC分为未感染组、感染后4 h组、感染后12 h组、感染后24 h组,其中感染后4 h组、感染后12 h组、感染后24 h组分别用CVB3感染4、12、24 h,未感染组仅用无血清培养基培养1 h,采用实时荧光定量PCR法检测CVB3基因拷贝数。分别将HL-1心肌细胞、MSC分为未感染组、感染组,其中感染组用CVB3感染,未感染组仅用无血清培养基培养1 h,分别于感染后4、12、24 h采用MTS法检测细胞活性。用CVB3分别感染HL-1心肌细胞（HL-1心肌细胞组）、MSC（MSC组）,采用病毒空斑实验检测病毒滴度。结果　HL-1心肌细胞未感染组、感染后4 h组、感染后12 h组、感染后24 h组CVB3基因拷贝数比较,差异有统计学意义（P<0.05）。MSC未感染组、感染后4 h组、感染后12 h组、感染后24 h组CVB3基因拷贝数比较,差异有统计学意义（P<0.05）。HL-1心肌细胞感染组感染后4、12、24 h细胞活性小于HL-1心肌细胞未感染组（P<0.05）。HL-1心肌细胞未感染组不同时间点细胞活性比较,差异无统计学意义（P>0.05）;HL-1心肌细胞感染组不同时间点细胞活性比较,差异有统计学意义（P<0.05）。MSC未感染组与MSC感染组感染后4、12、24 h细胞活性比较,差异无统计学意义（P>0.05）。MSC未感染组、感染组不同时间点细胞活性比较,差异有统计学意义（P<0.05）。HL-1心肌细胞组病毒滴度大于MSC组（P<0.05）。结论　CVB3能够在HL-1心肌细胞中复制,感染CVB3后HL-1心肌细胞活性降低;但CVB3不能在MSC中复制,且感染CVB3后MSC细胞活性并未明显改变。     

早期戒烟大鼠肺病理及炎性介质变化

目的 观察早期戒烟后大鼠肺组织病理及炎性介质表达变化规律.方法 选用Wistar雄性大鼠80只,随机分为对照组及早期戒烟后0天、1周、2周、4周、6周、8周、12周组.采用酶联免疫吸附方法测定各组大鼠血清中IL-8的蛋白质含量,S-P免疫组化学方法检测肺组织NF-KB p65的表达,并光镜下观察HE染色切片、对大鼠气道炎症进行病理学评分.结果 早期戒烟组大鼠可见气道上皮细胞纤毛发生粘连、倒伏,上皮细胞空泡变形、坏死、增生,炎症细胞浸润;其血清IL-8浓度、肺组织NF-KB的表达及气道炎症病理评分在戒烟后各时相点较未吸烟对照组明显升高,有统计学意义(P＜0.05).早期戒烟组大鼠血清IL-8的浓度、肺组织NF-kB的表达及肺组织病理炎症评分在戒烟后略有上升、且在戒烟后8周达到高峰,但随后在戒烟12周时可见IL-8的浓度有下降趋势,肺组织病理炎症反应有所减轻.结论 早期戒烟大鼠在戒烟早期虽可见炎症反应略有加重,但随戒烟时间延长,仍可见炎症反应有所减轻.因此,提倡及早且坚持戒烟.     

腹腔镜胆囊切除术患者围术期疼痛介质及炎性介质的变化研究

目的:研究腹腔镜胆囊切除术患者围术期疼痛介质及炎性介质指标变化情况.方法:将我院2014年4月至2015年6月进行胆囊切除术治疗的100例患者根据随机数字表法分为对照组和观察组,每组各50例,对照组进行常规的开腹手术治疗,观察组则进行腹腔镜手术治疗,然后将两组患者术前与术后3d、7d的疼痛介质及炎性介质指标进行检测与比较.结果:两组患者的炎症介质均在术后第3天呈上升的趋势,且对照组的血清表达水平明显高于观察组同时间的检测水平(P＜0.05).术后第7天,患者体内的炎症介质已经开始下降,但对照组仍然高于术前水平,观察组则开始趋于正常,明显低于术前水平(P＜0.05).术前两组的血清总抗氧化能力(TAC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧簇(ROS)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)无明显差异(P＞0.05);术后3d与7d观察组TAC、SOD、CAT及GSH-Px表达水平均高于对照组同时间的检测水平,ROS低于对照组同时间的检测水平(P＜0.05).结论:腹腔镜胆囊切除术可有效降低患者的疼痛及炎性应激程度,对患者术后舒适度及炎症状态的控制发挥着积极的临床作用.     

槐果碱体外抗柯萨奇病毒B3m的作用

目的以HeLa细胞为模型,观察从苦参中提取的槐果碱在体外抗柯萨奇病毒B3m(CVB3m)的作用。方法①用微量细胞培养法观察槐果碱对HeLa细胞的毒性。②用细胞病变效应(CPE)抑制法观察槐果碱体外抗CVB3m作用。③用MTT法和结晶紫染色法观察槐果碱对CVB3m感染的HeLa细胞的保护作用:在96孔板上种植HeLa细胞并予CVB3m吸附1h,加入不同浓度的槐果碱,并设立病毒、细胞、槐果碱对照,培养15h后以MTT法和结晶紫染色法测定比较各组细胞能量代谢率和细胞存活数。结果①槐果碱稀释到<391μg/mL,对HeLa细胞无毒性;≥783μg/mL引起HeLa细胞CPE。②槐果碱6.25~50μg/mL有直接抗病毒作用,减轻CPE;>100μg/mL反而会加重、加快CPE。③槐果碱1.56~25μg/mL对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用,用MTT法和结晶紫染色法测得细胞能量合成代谢、细胞存活数较病毒对照组增加(P<0.05);槐果碱在50、100μg/mL时反而加重病毒对细胞的抑制,使细胞存活数、细胞代谢率较病毒对照组下降(P<0.05)。结论一定浓度的槐果碱在体外有抗CVB3m作用,对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用。     

缺氧复氧对乳鼠心肌细胞的损伤及其时间变化的研究

 目的 观察乳鼠心肌细胞的缺氧损伤以及缺氧复氧条件下不同复氧时间对乳鼠心肌细胞损伤的变化。方法 用MTT法检测缺氧损伤及不同复氧时间对乳鼠心肌细胞存活率的影响;LDH、T-SOD/GSH/GSSG试剂盒检测缺氧损伤及不同复氧时间下细胞损伤程度。结果 MTT及LDH、T-SOD/GSH/GSSG可检测到缺氧损伤及复氧损伤,且损伤于复氧1 h后趋于稳定。结论 乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤于复氧1 h后趋于稳定。     

葛根素对重度烧伤后心肌组织损伤和炎性反应影响的研究

目的 研究葛根素（Puerarin）对大鼠重度烧伤后心肌组织损伤和炎性反应的抑制作用及机制。方法通过92℃水浴18s复制30% TBSA Ⅲ度烧伤模型大鼠;设假烧伤组、模型对照组和葛根素（50、100、200、400mg/kg）组;观察心肌组织形态结构变化,测定血清中心肌酶和肌钙蛋白T （cTnT）含量、心肌组织中抗氧化酶活性和丙二醛（MDA）含量;检测心肌细胞凋亡状况及凋亡相关蛋白表达;检测血清中炎性细胞因子含量水平。结果 与模型对照组比较,葛根素组大鼠心肌组织形态结构病理性改变明显改善,以200mg/kg组效果最为显著;葛根素（100、200、400mg/kg）组心肌酶AST、CPK、LDH含量和cTnT含量均显著降低,SOD、CAT、MPO活性显著升高且MDA含量显著降低,心肌细胞凋亡状况明显改善,凋亡指数（AI）显著降低,cleaved caspase-3、Bax蛋白表达显著下调、Bcl-2显著上调,Bcl-2/Bax显著升高,炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8含量显著降低,200mg/kg组IL-1含量显著降低、IL-10含量显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 葛根素对重度烧伤后心肌组织损伤和炎性反应均具有一定的抑制作用,其机制可能与葛根素能够改善抗氧化酶活性、调节凋亡相关蛋白表达以及影响炎性细胞因子含量有关。     

当归对大鼠缺血再灌注心肌HSP70和NF-κB的影响

目的 :观察当归注射液对缺血再灌注 (I/R)过程心肌热休克蛋白 70 (HSP70 )和核转录因子κB(NF κB)表达的影响 ,探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤的可能作用机理。方法 :4 5只SD大鼠随机分成 3组 (每组n =15 ) :假手术组 (Ⅰ组 ) ,缺血再灌注组 (Ⅱ组 ) ,当归治疗组 (Ⅲ组 ) ,建立在体心肌缺血再灌注动物模型。每组 5只动物再灌注 4 0min用化学扩增法测定SOD活性 ,TBA法测定MDA含量 ;10只动物再灌注 12 0min测定HSP70免疫组化SP法观察心肌细胞HSP70蛋白表达 ,用ESMA法观察NF κB的变化 ,在电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果 :再灌注前注射当归注射液显著降低了再灌注心肌MDA水平 (P <0 .0 1) ,增强了SOD活性 (P <0 .0 1)和HSP70的表达 (P <0 .0 1) ,减低NF κB的活性 ,同时减轻了心肌的超微结构损伤。结论 :当归注射液可通过抗氧化作用、增加HSP70的表达和减低NF κB的活性发挥抗心肌缺血再灌注损伤 ,对心肌有明显的保护作用。     

柯萨奇B3病毒抗体与心肌细胞结合的发病作用

目的 研究柯萨奇B3病毒单克隆抗体（CVB3－mAb0与心肌细胞结合，以探讨CVB3－mAb对心肌细胞的致病作用。方法 采用细胞副合技术制备CVB3-mAb，并应用各细胞株分泌的mAb与人、牛、大鼠心肌细胞进行免疫组化分析,比较各株分泌的CVB3－mAb与不同种动物心肌细胞间结合的差异。结果 利用细胞融合技术制备出26种CVB3-mAb。其部分CVB3－mAb可与心肌细胞膜或心肌细胞内的肌原纤维结合，呈棕黄色环状重叠或横纹，CVB3－mAb 2A4，2D4，1G6，1H9，1H10，1H11与人、牛、大鼠心肌细胞均呈阳性反应；CVB3－mAb 2A2仅与人的心肌细胞结合；CVB3－mAb 2B2，2H4，1C10，1G4与人及大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2A3与牛和大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2G12仅与大鼠心肌细胞结合；CVB3-mAb 1E8仅与牛的心肌细胞结合，且CVB3－mAb 2D4与人心肌的结合为心肌细胞膜，而与牛及大鼠心肌的结合为心肌细胞内的肌原纤维。结论 各CVB3－mAb与不同动物心肌细胞间的结合及结合形式不同；且同一动物的心肌细胞与CVB3－mAb结合有差异。部分柯萨奇B3病毒抗体与动物心肌细胞结合，可引起心肌炎。     

菘蓝的4种单体成分抗柯萨奇病毒作用的研究

目的 :了解菘蓝 4种有效单体 (6 ,7,8,9号 )抗柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3 )的活性。方法 :通过观察细胞病变效应 (CPE) ,噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性 ,用半定量RT PCR检测不同药物浓度下病毒核酸含量 ,以确定有效单体抗CVB3 的作用。结果 :菘蓝的 4种单体成分对CVB3 生物合成均有抑制作用 ,且强于阳性对照药物病毒唑。表现在随着药物浓度的增加 ,CPE程度逐渐减弱 ,病毒核酸的含量逐渐下降。结论 :菘蓝的 4种单体能在体外通过抑制生物合成发挥抗CVB3 作用。